Аттестация отраслевого стандартного образца сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для реакции агглютинации Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

э

^Октябрь-Декабрь 2014

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 615.373.34:615.076.7

5 Аттестация отраслевого стандартного

£ образца сыворотки бруцеллезной

£ диагностической поливалентной

для реакции агглютинации

¡S Л.В. Саяпина1, А.В. Комратов1, М.В. Храмов3, М.И. Торопчин2, О.В. Фадейкина1, Р.А. Волкова1,

CÇ Д.В. Русанова3, Т.И. Немировская1, Г.И. Лямкин4

т

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств ^ медицинского применения» Минстерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

2Федеральное государственное унитарное предприятие «Государственный научный центр Q прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты

прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации, Оболенск 3Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва

4Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации, Ставрополь

Certification of branch reference material serum sample for brucellosis diagnostic polyvalent agglutination

L.V. Sayapina1, A.V. Komratov1, M.V. Hramov3, M.I. Toropchin2, O.V.Fadeykina1, R.A. Volkova1, D.V. Rusanova3, T.I. Nemirovskaya1, G.I. Lyamkin4

1Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre on Expert Evaluation of Medical Application Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

2Federal State Institution of Science «State Center for Applied Microbiology and Biotechnology» of Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Obolensk 3The State Education Institution of Higher Professional Training «The First Sechenov Moscow State Medical University» under Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow

4Federal Governmental Institution «Stavropol Research Institute for Plague Control» of Federal Service

for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Stavropol /---

В работе представлены данные по аттестации новой серии отраслевого стандартного образца (ОСО) сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для реакции агглютинации (РА) по основным характеристикам (подлинность, специфическая активность, специфичность). Установлено, что сыворотка бруцеллезная агглютинирует штаммы бруцелл в S-форме в РА на стекле в разведении 1:25, в пробирочной РА - в разведении 1:800 и не агглютинирует штаммы бруцелл в R-форме и гетерологичных микроорганизмов, что соответствует установленным нормативной документации. Проведены исследования физико-химических свойств кандидата в ОСО, потери в массе при высушивании, определение средней массы и коэффициента вариации массы в ампулах, а также стабильности методом ускоренного теста. Результаты исследований, полученные в ходе аттестации сыворотки бруцеллезной поливалентной для РА показали, что новая серия ОСО соответствует требованиям, предъявляемым к стандартному образцу.

Ключевые слова: сыворотка бруцеллезная диагностическая поливалентная для РА; отраслевой стандартный образец; подлинность; специфическая активность; бруцеллезные штаммы.

Библиографическое описание: Саяпина ЛВ, Комратов АВ, Храмов МВ, Торопчин МИ, Фадейкина ОВ, Волкова РА, Русанова ДВ, Немировская ТИ, Лямкин ГИ. Аттестация отраслевогостандартного образца сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для реакции агглютинации. Биопрепараты 2014; (4): 42-7.

ПРЕПАРАТЫ

The paper presents data on the attestation on the main characteristics (authenticity, specific activity, specificity) of a new branch reference material (BRM) of brucellosis diagnostic polyvalent serum for agglutination test (AT). Found that serum agglutinates Brucella strains in the S-shape in AT on glass in 1:25 dilution , in the test tube AT -in 1:800 dilution and it is not agglutinate Brucella strains in the R-shape and heterologous microorganisms, this is meets the regulatory requirements. Researches of the physico-chemical properties of the candidate in the BRM, the mass loss on drying, determination of the average weight and the coefficient of variation of the mass in ampoules and accelerated stability test. Research results obtained during the attestation of the polyvalent serum brucellosis for AT have shown that a new series of BRM meets the requirements of the new branch reference material. Key words: brucellosis diagnostic polyvalent serum for agglutination test; branch reference material; authenticity; specific activity; specificity; Brucella strain.

Bibliographic description: Sayapina LV, KomratovAV, Hramov MV, Toropchin MI, Fadeykina OV, Volkova RA, Rusanova DV, Nemirovskaya TI, Lyamkin GI. Certification of branch reference material serum sample for brucellosis diagnostic polyvalent agglutination. Biopreparation (Biopharmaceuticals) 2014; 4(52): 42-7. \_>

В России ситуация по бруцеллезу остается напряженной, так как ежегодно регистрируется от 400 до 700 случаев впервые выявленных заболеваний бруцеллезом среди людей [1, 2]. Эффективность проведения противоэпидемических мероприятий во многом обусловлена использованием при мониторинге циркуляции возбудителя бруцеллеза стандартных диагностических препаратов [3-6].

В производстве иммунобиологических лекарственных препаратов для обеспечения единства требований к их качеству важное значение имеет использование стандартных образцов [7, 8], в том числе сыворотки бруцеллезной поливалентной для реакции агглютинации (РА), предназначенной для оценки правильности результатов при выпуске производственных серий бруцеллезной сыворотки поливалентной и бруцеллезного диагностикума для РА.

Впервые отраслевой стандартный образец ОСО 42-28-6-83П сыворотки бруцеллезной поливалентной был изготовлен в 1983 г (ГИСК им. Л.А. Тарасевич, НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи и Одесское предприятие по производству бакпрепаратов) из крови крупного рогатого скота, гипе-риммунизированного инактивированными нагреванием при температуре 100оС культурами вирулентных штаммов Brucella abortus, B. melitensis и B. suis в S-форме.

Предыдущая серия ОСО 42-28-6-01П сыворотки бруцеллезной была приготовлена и изучена в 2001 г в ГИСК им. Л.А. Тарасевича и НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Специфическая активность ОСО сохранялась на протяжении 10 лет (срок наблюдения), что подтверждено данными оценки качества производственных серий диагностикума бруцеллезного жидкого для РА.

В связи с возникшей необходимостью в изготовлении и аттестации нового стандартного образца в Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте изготовлен кандидат в ОСО сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для РА, полученный из крови кроликов, гипериммунизи-рованных культурами штаммов Brucella abortus 19 ВА, B. melitensis ReV 1 и B. suis 61, относящихся к III группе патогенности.

Цель работы - аттестация сыворотки диагностической бруцеллезной поливалентной для РА в качестве отраслевого стандартного образца.

Материалы и методы

Для исследований использовали штаммы Brucella abortus, B. melitensis, B. suis, и B. ovis, обладающие типичными культурально-морфологическими, биохимическими и серологическими свойствами, а также штаммы гетерологичных микроорганизмов Francisella tularensis 15 НИИЭГ, Escherichia coli 18, Yersinia pestis EV НИИЭГ, Y. enterocolitica О3 (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России и ГКПМ-Оболенск ФБУН «ГНЦ ПМБ» Роспотреб-надзора, Оболенск).

Аттестуемые характеристики (подлинность, специфическая активность) кандидата в ОСО оценивали в реакции агглютинации с бруцеллезными штаммами. Специфичность сыворотки изучали со штаммами B. ovis в R-форме и гетерологичных микроорганизмов. Учет результатов проводили по четырехкрестовой системе. За титр сыворотки принимали то наибольшее ее разведение, при котором наблюдается положительная реакция агглютинации (крупнозернистая или мелкозернистая агглютинация при полном просветлении жидкости или ее легкой опалесценции) со штаммами Brucella разных видов, оцениваемая не менее, чем на 3 креста.

Проведены исследования физико-химических свойств кандидата в ОСО, потери в массе, определения средней массы и коэффициента вариации массы в ампулах [9, 10].Стабильность препарата изучали ускоренным тестом в условиях нагревания образцов на водяной бане при температурах (56±1) и (65±1) °С в течение 1, 2, 3 и 4 ч [11].

В работе использованы стандартные методы вариационной статистики экспериментальных данных.

Результаты и обсуждение

На основании разработанной нами программы аттестации, изучены основные и дополнительные характеристики сыворотки бруцеллезной поливалентной - кандидата в ОСО. В процессе работы показано, что сыворотка бруцеллезная в ампуле представляет собой аморфную массу беловато-желтого цвета, при восстановлении

€

Таблица 1. Результаты определения специфической активности сыворотки бруцеллезной поливалентной для реакции агглютинации (кандидат в ОСО) в пробирочной реакции агглютинации

Наименование штамма Разв< гден ия с ыворот <и (т итр КС КАг

1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1000 1:1600. 1:2000 1:3200 1:6400

B. melitensis 16М 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ 2+ 1+ Про зрачная Гомогенная взвесь

B. melitensis Ether706 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -«- -«-

B. abortus 544 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 1+ 1+ 1+ 1+ -«- -«-

B. abortus 19 BA 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 1+ -«- -«-

B. suis 1330 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1 + 1 + -«- -«-

B. suis Thomsen 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 2+ 2+ 1+ -«- -«-

Примечания: (-) - отрицательный результат. КС - контроль сыворотки. КАг -контроль антигена.

раствора имеет вид слегка опалесцирующей жидкости светловато-кремого цвета. Величина рН раствора сыворотки бруцеллезной составляла 7,2. Средняя масса содержимого ампул равняется 92,52±1,63 мг, коэффициент вариации (CV) составляет 1,75%. Значение интервала для вероятности 95% находится в пределах от 90,89 мг до 94,15 мг, что соответствует требованиям, предъявляемым к аналогичным препаратам (не более 5%). В процессе высушивания исследуемых образцов в пределах температурного интервала от 100 до 105°С, установлено, что показатель «потеря в массе при высушивании» составил 1,4% (норма - не более 2%).

Аттестуемые характеристики (подлинность, специфическая активность) кандидата в ОСО оценивали в трех повторностях в пробирочной реакции агглютинации и на стекле с вакцинным штаммом B. abortus 19 ВА и вирулентными штаммами B. abortus 544, В. melitensis Ether 706, В. melitensis 16М, B. suis 1330 и B. suis Thomsen. В соответствии с установленными требованиями нормативной документации (НД) изучаемый кандидат в ОСО сыворотки бруцеллезной должен агглютинировать культуры бруцеллезных штаммов в S-форме в РА на стекле в разведении не менее, чем 1:25, в пробирочной РА - не менее, чем 1:800. Ввиду наличия у бруцелл в S-форме общих с антигенов с бруцеллами в R-форме и гетерологичными микроорганизмами [12], не должна наблюдаться пробирочная РА в разведении сыворотки более, чем 1/10. Результаты определения подлинности и специфической активности сыворотки бруцеллезной в пробирочной РА представлены в таблице 1.

В результате испытаний кандидата в ОСО по аттестуемым характеристикам (подлинность, специфическая активность, специфичность) установлено, что сыворотка бруцеллезная в разведениях от 1:25 до 1:800 в пробирочной реакции агглютинировала все взятые в исследование штаммы B. abortus, В. melitensis и B. suis на 3-4 креста (крупнозернистая или мелкозернистая агглютинация при полном просветлении жидкости или ее легкой опалесценции). В то же время, начиная с разведения

Таблица 2. Результаты специфичности в пробирочной РА кандидата в ОСО сыворотки бруцеллезной поливалентной для РА

№ образца Наименование штаммов Разведени я сыворотки б руцеллезной

1:40 1:80 1:160

1 F. tularensis 15 НИИЭГ - -

2 - - -

3 - - -

1 Y. pestis EV НИИЭГ - - -

2 - - -

3 - - -

1 Y. enterocolitica 03 - - -

2 - - -

3 - - -

1 E. coli 18 - - -

2 - - -

3 - - -

1 B. ovis 64/1 - - -

2 - - -

3 - - -

Примечание. (-) - отрицательный результат.

1:1000 до 1:6400, реакция агглютинации сыворотки с бруцеллезными штаммами, оценивалась или на 1-2 креста (мелкозернистая агглютинация на фоне мутной жидкости), или была отрицательной (равномерная мутная жидкость).

При изучении специфичности было выявлено (табл. 2), что сыворотка бруцеллезная не агглютинирует в пробирочной РА штаммы B. ovis 64/1 в R-форме, F. tularensis 15 НИИ-ЭГ, Y. pestis EV НИИЭГ, Y. enterocolitica О3 и E. coli 18 в разведении 1:40 и выше, что соответствует требованиям НД.

Одновременно поставленные контроли сыворотки и антигена (бруцеллезные и гетерологичные штаммы) в пробирочной и РА на стекле были отрицательными.

Учитывая, что за титр сыворотки принимают наибольшее ее разведение, при котором со штаммами Brucella в S-форме наблюдается положительная реакция агглютинации на 3-4 креста и отрицательная реакция с гетерологичными штаммами и B. ovis в R-форме, был установлен титр кандидата в ОСО в пробирочной РА, равный 1:800. В РА на стекле с бруцеллезными штаммами титром сыворотки составил 1:25, так как со штаммами B. abortus, В. melitensis Таблица 3. Результаты специфической активности и специфичности сыворотки бруцеллезной поливалентной для РА (кандидат в ОСО) в РА на стекле

№ образца Наименование штамма Разве сыворотки дения руцелле зной

1:12,5 1:25 1:50

1 B. abortus 19 ВА 4+ 4+ 3+

2 4+ 4+ 3+

3 4+ 4+ 3+

4 4+ 4+ 3+

5 4+ 4+ 3+

6 4+ 4+ 3+

7 4+ 4+ 3+

8 4+ 4+ 3+

9 4+ 4+ 3+

10 4+ 4+ 3+

11 F. tularensis 15 НИИЭГ н/о н/о

12 Y. pestis EV НИИЭГ н/о - н/о

13 Y. enterocolitica 03 н/о - н/о

14 E. coli 18 н/о - н/о

15 B. ovis 64/1 (R-форма) н/о - н/о

Примечания: н/о - не определяли. (-) - отрицательный результат.

ПРЕПАРАТЫ

Таблица 4. Результаты определения стабильности кандидата в СО сыворотки бруцеллезной поливалентной для РА

Название штамма Режим хранения образцов Разведения сыворотки бруцеллезной

1:25 1:50 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 1:3200

B. abortus 19 ВА 37°С 7сут 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 2+ -

37°С 14 сут 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

37°С 21 сут 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

37°С 28 сут 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 1ч 4+ 4+ 4+ 4+ 4+ 2+ -* -

56°С 2 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 3 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 4ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

65°С 1ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

65°С 2 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

65°С 3 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

65°С 4 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

B. melitensis Ether 706 37°С 7сут 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -

37°С 14 сут 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -

37°С 21 сут 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -

37°С 28 сут 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -

56°С 1ч 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ -

56°С 2 ч 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ -

56°С 3 ч 4+ 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ -

56°С 4ч 4+ 3+ 2+ 2+ 2+ 2+ -

65°С 1ч - - - - - - -

B. suis Thomsen 37°С 7сут 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

37°С 14 сут 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

37°С 21сут 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

37°С 28сут 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 1ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 2 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 3 ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

56°С 4ч 4+ 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ -

65°С 1ч - - - - - - -

Примечание. - отрицательный результат

и B. suis РА оценивалась на 3-4 креста и отсутствовала с гетерологичными штаммами (табл. 3).

Таким образом, в результате испытаний сыворотки бруцеллезной поливалентной, кандидата в ОСО, по аттестуемым характеристикам (подлинность, специфическая активность, специфичность) установлено, что сыворотка агглютинирует штаммы бруцелл и не агглютинирует гете-рологичные микроорганизмы в РА на стекле в разведении 1:25, в пробирочной РА - в разведении 1:800, что соответствует установленным требованиям.

Воспроизводимость полученных результатов с использованием кандидата в ОСО оценивали в положительной реакции агглютинации со штаммом B. abortus 19 ВА и отрицательной реакции агглютинации со штаммом F. tular-ensis 15 НИИЭГ - каждой в 10 повторностях при постановке анализа в разные дни. Во всех случаях выявлена положительная (3 креста) пробирочная РА сыворотки бруцеллезной со штаммом B. abortus 19 ВА в разведении 1:800 и отрицательная реакция (равномерная мутная жидкость) с туляремийном штаммом.

Для оценки стабильности кандидата в ОСО сыворотки бруцеллезной поливалентной применяли ускоренный тест, позволяющий прогнозировать специфическую активность препарата после хранения образцов при температуре (37±1) °С в течение 7, 14, 21 и 28 сут; а также с использованием водяной бани при температуре (56±1)°С - через 1, 2, 3 и 4 ч и при температуре (65±1 )°С - через 1, 2, 3 и 4 ч. Исследование проводили аналогично методике определения подлинности и специфической активности сыворотки бруцеллезной.

Согласно результатам, представленным в таблице 4, сыворотка бруцеллезная поливалентная, кандидат в ОСО, стабильно сохраняет свою специфическую активность в пробирочной РА с культурой штамма B. abortus 19 ВА в условиях хранения образцов при температуре 37°С в течение всего срока наблюдения (от 7 до 30 сут). Вместе с тем, в условиях нагревания образцов в течение промежутка времени от 1 до 4 ч при температурах (56±1) и (65±1)°С, активность сыворотки снижается в 2 раза.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о достаточной стабильности сыворотки бруцеллезной поливалентной для РА. Срок годности кандидата в ОСО - 3 года, установлен по паспортным данным.

На основании полученных результатов составлены и утверждены Паспорт и Инструкция на научно-техническую продукцию, определяющую порядок и условия применения ОСО 42-28-425-2012 сыворотки диагностической бруцеллезной поливалентной сухой для РА.

Выводы

1. Проведена аттестация сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для РА в качестве отраслевого стандартного образца.

2. Специфическая активность новой серии ОСО сыворотки бруцеллезной диагностической поливалентной для РА, по данным исследований в РА на стекле составила 1:25, в пробирочной РА - 1:800.

3. Полученными результатами подтверждена специфичность ОСО сыворотки бруцеллезной

поливалентной, не агглютинирующей штаммы B. ovis 64/1 в R-форме и гетерологичных микроорганизмов в разведении 1:40 и выше.

4. Физико-химические свойства препарата, потеря массы при высушивании, средняя масса и отклонение по средней массы в ампулах, а также его стабильность в ускоренном тесте, соответствуют требованиям нормативной документации.

5. ОСО сыворотки бруцеллезной поливалентной предназначен для использования при оценке правильности результатов определения подлинности, специфической активности и специфичности производственных серий бруцеллезной сыворотки поливалентной и бруцеллезного диагностикума для РА.

Литература:

1. Желудков ММ, Цирельсон ЛЕ, Хабарцев ОС, Горо-шенко ВВ, Кулаков ЮВ. Состояние заболеваемости бруцеллезом в Российской Федерации. Дезинфекционное дело 2009; (2): 38-40.

2. Лямкин ГИ, Тихенко НИ, Манин ЕА, Русанова ДВ, Головнева СИ, Вилинская СВ, Куличенко АН. Об эпидемиологической ситуации и заболеваемости бруцеллезом в Российской Федерации в 2011 и прогноз на 2012 г. Проблемы особо опасных инфекций 2012; 1(111): 26-9.

3. Малахаева АН, Саяпина ЛВ, Барулина ИС, Касина ИВ, Абдрашитова АС, Осина НА и др. Оценка нового набора реагентов «Амплисенс® Brucella spp.-fl» с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Проблемы особо опасных инфекций 2011, 3(109): 58-60.

4. Михайлов ЛМ, Калиновский АИ, Балахонов СВ, Андреевская НМ, Михайлова ВА, Шестопалов МЮ и др. Актуальные вопросы эпидемиологии и лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного L-формой возбудителя. Эпидемиология и вакци-нопрофилактика 2010; (2): 23-9.

5. Государственная фармакопея СССР. М.: Медицина; 1987.

6. Государственная фармакопея Российской Федерации. 12-е изд. Ч. 1. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения; 2007.

7. Бархалева ОА, Синюгина АА, Саркисян КА, Ладыженская ИП, Воробьева МС, Фадейкина ОВ и др. Аттестация новой серии отраслевого стандартного образца вакцины желтой лихорадки для контроля специфической активности. Биопрепараты 2013; 4(40): 41-7.

8. Борисевич ИВ, Петухов ВГ, Волкова РА, Устиннико-ва ОБ, Фадейкина ОВ, Малкова ВИ. Стандартные образцы как средство метрологического обеспечения аналитических методов контроля медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП). Биопрепараты 2010; 4(40): 8-10.

9. Melzer F, Schmoock G, Ehricht R, Elschner M. The use of new typing methods to investigate brucellosis outbreaks in outdoor pig farms in Germany V: International Research Conference (Including the 64th

Annual Brucellosis Research Conference) 2011, Sept. 21-23; Argentina; 2011.

10. Whatmore A, Dawson C, Perrett L, Koylass M, Groussaud P, Hunter G., et al. Molecular and phenotypic characterization of North American isolates of Brucella from marine mammals and comparison with European isolates. International Research Conference (Including the 64th Annual Brucellosis Research Conference) 2011, Sept. 21-23; Argentina; 2011.

11. Петухов ВГ. Определение срока годности стандартных образцов ускоренным методом. Биопрепараты 2006; 4(24): 5-8.

12. Марков ЕЮ. Поверхностные структуры и антигены холерного вибриона, бруцелл и туляремийного микроба: автореф. дис. ...д-ра биол. наук. Иркутск; 2000.

References

1. Zheludkov MM, Tsirelson LE, Habartsev OS, Goro-shenko VV, Kulakov YuV. Status of brucellosis in the Russian Federation. Dezinfektsionnoe delo 2009; (2): 38-40 (in Russian).

2. Lyamkin GI, Tihenko NI, Manin EA, Rusanova DV, Go-lovneva SI, Vilinskaya SV, Kulichenko AN. On the epidemiological situation and the cases of brucellosis in the Russian Federation in 2011 and Forecast for 2012. Problemy osobo opasnyh infektsiy 2012; 1(111): 26-9 (in Russian).

3. Malahaeva AN, Sayapina LV, Barulina IS, Kasina IV, Ab-drashitova AS, Osina NA, et al. Evaluation of a new reagent kit «AmpliSens® Brucella spp.-fl» with hybridization-fluorescence detection. Problemy osobo opasnyh infektsiy 2011, 3(109): 58-60 (in Russian).

4. Mihaylov LM, Kalinovskiy AI, Balahonov SV, Andreevs-kaya NM, Mihaylova VA, Shestopalov MYu et al. Actual questions of epidemiology and laboratory diagnosis of brucellosis caused by L-form of the pathogen. Epi-demiologiya i vaktsinoprofilaktika 2010; (2): 23-9 (in Russian).

5. The State Pharmacopoeia of USSR. Moscow: Medit-sina; 1987 (in Russian).

6. The State Pharmacopoeia of Russian Federation. 12th ed. V. 1. Moscow: Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation; 2007(in Russian).

7. Barhaleva OA, Sinyugina AA, Sarkisyan KA, Ladyzhen-skaya IP, Vorobieva MS, Fadeikina OV, et al. New batch of yellow fever vaccine reference standard qualification for the control of specific activity. Biopreparaty 2013; 4(40): 41-7 (in Russian).

8. Borisevich IV, Petuhov VG, Volkova RA, Ustin-nikova OB, Fadeikina OV, Malkova VI. Standard samples as a tool to provide metrology of analytical methods of immunobiological medicines (IM) monitoring. Biopreparaty 2010; 4(40): 8-10 (in Russian).

ПРЕПАРАТЫ

9. Melzer F, Schmoock G, Ehricht R, Elschner M. The use of new typing methods to investigate brucellosis outbreaks in outdoor pig farms in Germany V: International Research Conference (Including the 64th Annual Brucellosis Research Conference) 2011, Sept. 21-23; Argentina; 2011.

10. Whatmore A, Dawson C, Perrett L, Koylass M, Grous-saud P, Hunter G., et al. Molecular and phenotypic characterization of North American isolates of Brucella from marine mammals and comparison with European isolates. International Research Conference (Including the 64th Annual Brucellosis Research Conference) 2011, Sept. 21-23; Argentina; 2011.

11. Petuhov VG. Determination of shelf life of standard samples accelerated method. Biopreparaty 2006; 4(24): 5-8 (in Russian).

12. Markov EYu. Surface structures and antigens of Vibrio cholerae, Brucella and tularemia microbe. Dr.Biol.Sci [thesis]. Irkutsk; 2000 (in Russian).

Authors:

Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre on Expert Evaluation of Medical Application Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, 8 Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051, Russian Federation.

Sayapina LV. Chief expert of Office of expertise of antibacterial medical immunobiological preparations. Doctor of Medical Sciences.

Komratov AV. Head of Department of scientific and methodological support of expertise of medical immunobiological preparations and medicines. Candidate of Medical Sciences.

Fadeykina OV. Leading tehnolog of Laboratory of bacteriophages and preparations with a collection of normal flora of microorganisms.

Volkova RA. Head of the laboratory of molecular biology and genetic testing methods. Doctor of Biological Sciences.

Nemirovskaya TI. Head of Laboratory of bacterial vaccines. Candidate of Medical Sciences.

Federal State Institution of Science «State Center for Applied Microbiology and Biotechnology» of Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, Obolensk, 142279, Russian Federation.

HramovMV. Deputy Director of Quality and Development. Candidate of Medical Sciences.

Rusanova DV. Senior researcher of Department of collection cultures. Candidate of Medical Sciences.

The State Education Institution of Higher Professional Training «The First Sechenov Moscow State Medical University» under Ministry of Health of the Russian Federation 8/2 Trubetskaya Street, Moscow, 119991, Russian Federation.

Toropchin MI. Lecturer of Training and military center.

Federal Governmental Institution «Stavropol Research Institute for Plague Control» of Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, 13 Sovetskaya street, Stavropol, 355135, Russian Federation.

Lyamkin GI. Head of the Laboratory of brucellosis. Doctor of Medical Sciences.

Об авторах:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации. 127051, Москва, Петровский бульвар, 8.

Саяпина Лидия Васильевна. Главный эксперт управления экспертизы противобактериальных иммунобиологических препаратов, д-р мед. наук.

Комратов Алексей Владимирович. Начальник Отдела научно-методического обеспечения экспертизы медицинских иммунобиологических препаратов и лекарственных средств, канд. мед. наук.

Фадейкина Ольга Васильевна. Ведущий технолог лаборатории бактериофагов и препаратов нормофло-ры с коллекцией микроорганизмов.

Волкова Рауза Асхатовна. Начальник лаборатории молекулярно-биологических и генетических методов испытаний, д-р биол.наук.

Немировская Татьяна Ивановна. Начальник лаборатории противобактериальных вакцин, канд. мед. наук.

Федеральное государственное учреждение науки Государственный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации. 142279, Московская область, Серпуховской район, п. Оболенск.

Храмов Михаил Владимирович. Заместитель директора по качеству и развитию, канд. мед. наук.

Русанова Диана Владимировна. Старший научный сотрудник отдела коллекционных культур, канд. мед. наук.

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова. Российская Федерация, 119991, Москва, Трубецкая улица, 8, стр. 2.

Торопчин Максим Иванович. Преподаватель учебно-военного центра.

Федеральное казенное учреждение Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации. 355135, Ставрополь, ул. Советская, 13.

Лямкин Геннадий Иванович. Заведующий лабораторией бруцеллеза, д-р мед. наук.

Адрес для переписки: Саяпина Лидия Васильевна; [email protected]

Поступила 12.06. 2014 г.

Принята 07.11.2014 г

G