CC BY
14Author affiliation:
Lobova Tat'yana Petrovna, Ph. D. in Biology, Senior Researcher of the Department of Virology of the Federal State Budgetary Institution (FSBI) «Central Scientific and Methodical Veterinary Laboratory»; house. 23, Oranzhereinaya str., Moscow city, Russia, 111622; phone: +7 (495) 700-01-37; e-mail: science@cnmvl.ru
Mikhailova Vera Vladimirovna, Junior Researcher, Acting Head of the Department of Virology of the Federal State Budgetary Institution (FSBI) «Central Scientific and Methodical Veterinary Laboratory»; house 23, Oranzhereinaya str., Moscow city, Russia, 111622; phone: +7 (495) 700-01-37; e-mail: science@cnmvl.ru
Shishkina Maria Sergeevna, Junior Researcher of the Federal State Budgetary Institution (FSBI) «Central Scientific and Methodical Veterinary Laboratory»; house 23, Oranzhereinaya str., Moscow city, Russia, 111622; phone: +7 (495) 700-01-37; e-mail: science@cnmvl.ru
Skvortsova Anastasia Nikolaevna, Junior Researcher of the Federal State Budgetary Institution (FSBI) «Central Scientific and Methodical Veterinary Laboratory»; house 23, Oranzhereinaya str., Moscow city, Russia, 111622; phone: +7 (495) 700-01-37; e-mail: science@ cnmvl.ru
Varentsova Alisa Alekseevna, Ph. D. in Biology, Head of the Department for Coordination of Research Works of the Federal State Budgetary Institution (FSBI) «Central Scientific and Methodical Veterinary Laboratory»; house 23, Oranzhereinaya str., Moscow city, Russia, 111622; phone: +7 (495) 700-01-37; e-mail: science@cnmvl.ru
DOI: 10.25690AVETPAT.2021/73.67.003
УДК: 619:616.98:578.821.42:579.843.95:578.824.9:636.92:615.371
Куникова Е. Д., Мороз Н. В., Кулаков В. Ю., Долгова М. А.
АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ МИКСОМАТОЗА, ПАСТЕРЕЛЛЁЗА И ВИРУСНОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ КРОЛИКОВ 1 И 2 ТИПОВ
Ключевые слова: ассоциированная вакцина против миксоматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов, вирусная геморрагическая болезнь кроликов, миксоматоз кроликов, пастереллёз кроликов.
Резюме: Исследовали иммунобиологические свойства ассоциированной вакцины против мик-соматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов, которая состоит из двух компонентов. Жидкий компонент - антигены инактивированного вируса геморрагической болезни (ЯОПУЛ и -II) и антиген инактивированных бактерий пастереллёза (Р тиНоайа серотипа А), в виде смеси на растворе геля гидроокиси алюминия. Сухой компонент -аттенуированный вирус миксоматоза кроликов (штамм «Миксо/ВНИИЗЖ-18»). Перед использованием компоненты в заданных пропорциях смешивали и внутримышечно прививали кроликам. Оценивали реактогенное, антигенное и протективное действие комбинированного препарата. Установили: - реактогенный эффект препарата в виде местной воспалительной реакции может сохранятся до 12-ти суток после инъекции; - накопление сывороточных антител до устойчивого протективного уровня ко всем антигенным составляющим происходит через 14 суток после иммунизации; - через 28 суток после прививки препарат способен создавать: а) предельный уровень защиты по положительному контролю к вирусу геморрагической болезни типов I и II; Ь) полностью протективный уровень иммунитета к пастереллёзу; с) индекс защищен-
ности от миксоматоза, превышающий три порядка. Важным преимуществом ассоциированной вакцины перед известными коммерческими аналогами является возможность использования препарата в виде одной внутримышечной инъекции, не прибегая к многократной вакцинации животных против каждого заболевания, уменьшая трудозатраты и стресс животных.
Введение
Ведение эффективного кролиководческого хозяйства невозможно без своевременной профилактики особо опасных инфекционных заболеваний, которые требуют обязательного введения ограничительных мероприятий на фермах. Это - вирусная геморрагическая болезнь, миксоматоз и пастереллёз [1].
Возбудитель вирусной геморрагической болезни кроликов (ВГБК) -РНК-вирус семейства калицивирусов (Caliciviridae) рода лаговирус (Lagovirus) [2]. В настоящее время известно два типа вируса (RGDV-I и -II) между которыми нет перекрестной иммунной защиты [3]. Для специфической профилактики ВГБК используют инактивированные вакцины. На российском рынке представлены препараты на основе антигена RGDV-I [4-7]. По состоянию на 2020 г. на рынке ветеринарных препаратов РФ отечественные вакцины против RGDV-II не зарегистрированы.
Возбудителем миксоматоза является ДНК-содержащий вирус Myxomatosis cuniculorum, принадлежащий к роду ле-порипоксвирусов, семейство поксвирусов (Poxviridae) [8]. Специфическая профилактика миксоматоза основана на применении живых вакцин. В настоящее время в РФ используются моновакцины из аттенуиро-ванных штаммов вируса [9-11].
Возбудитель пастереллёза - бактерия Pasteurella multocida. Пастереллёз распространен по всему миру и является одним из наиболее экономически значительных бактериальных заболеваний кроликов [1214]. Против пастереллёза применяют инак-тивированные вакцины. В РФ официально не зарегистрировано препаратов против пастерёллеза кроликов.
Специфическая профилактика перечисленных болезней кроликов осуществляется и поливалентными препаратами. Известна инактивированная вакцина против ВГБК на основе двух антигенов RGDV -I и -II, [15], а также препарат, включающий как указанные антигены, так и вирус миксоматоза кроликов [16].
Очевидно, что увеличение числа антигенов в объеме одной прививной дозы существенно уменьшает время проведения и трудоемкость мероприятий специфической профилактики в кролиководческом
хозяйстве. В этой связи считали целесообразным провести разработку ассоциированного препарата, который включал бы в себя смесь иммуногенов миксоматоза, па-стереллёза и вирусной геморрагической болезни 1 и 2 типов.
Настоящая статья является изложением результатов изучения иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против миксоматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов.
Материалы и методы исследований
Ассоциированная вакцина. Препарат представляет собой смесь нескольких составляющих (разнотиповых антигенов), которую готовят ex tempore из жидкого и сухого компонентов.
Жидкий компонент вакцины (состав):
- антигены вируса RHD-1 штамма «ВГБК1/ВНИИЗЖ» и вируса RHD-2 - антигены вируса RHD-1 штамма «ВГБК1/ ВНИИЗЖ» и вируса RHD-2 штамма «ВГБК2/ВНИИЗЖ» в виде приготовленных на 0,9 % р-р NaCl и осветленных го-могенатов ткани печени кроликов, инфицированных указанными вирусами. Инактивацию вируса проводили добавлением 0,3 % аминоэтилэтиленимина. Концентрацию антигена выражали в гемагглютини-рующих единицах (ГАЕ);
- антиген бактерий Pasteurella multocida (Past. m.) серогруппы А штамма «1231» в виде суспензии в среде культивирования (триптического гидролизата по Хоттинге-ру). Бактерии инактивировали воздействием 0,2 % формалина. Концентрацию бактериальных клеток выражали в единицах в тестируемом объеме (кл/v);
- гель гидроокиси алюминия - 3 % по сухому веществу (ГОА).
Пропорции перечисленных ингредиентов в составе жидкого компонента приведены в тексте. Жидкий компонент вакцины проверяли на стерильность по ГОСТ 28085 [17].
Сухой компонент вакцины:
- аттенуированный вирус миксоматоза кроликов, штамм «Миксо/ВНИИЗЖ-18» (Mix. R), выращенный на перевиваемой культуре клеток RK-13. Инфекционную активность вируса определяли в указанной культуре. Расчет величины инфекционно-
го титра производили по Керберу [18] и выражали в ТЦД50. Вирусный материал ли-офилизировали. Сухой компонент вакцины, после восстановления 0,9 % раствором ЫаС1, проверяли на стерильность по ГОСТ 28085 [17].
Кролики. Для проведения исследований использовали кроликов породы «Советская шиншилла», полученных из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням, в возрасте 45 суток, живой массой 1,0-1,5 кг, не иммунных к антигенным составляющим ассоциированной вакцины. Животных содержали группами в изоляторах с автономными системами поения и кормления. Для эвтаназии животных использовали пары трихлорметана.
Вакцинация кроликов. Ассоциированную вакцину вводили внутримышечно в область бедра. Объем одной прививной дозы составлял 1 смь
Гемагглютинация. Реакцию гемагглю-тинации (РГА) проводили в и-образных микродилюционных лунках (200 мкл) с равными объемами разведений антигена [19].
Серологические исследования. В сыворотках крови подопытных кроликов выявляли и оценивали титры антител к антигенным составляющим ассоциированной вакцины. С этой целью применяли имму-ноферментный анализ (ИФА). Использовали следующие диагностические наборы: для выявления антител к вирусу ЯНЛ - набор «1^еБт RHDV 17. RHD. К1» («1пти-по^1а у genetica арНса!а», Испания); для
выявления антител к миксоматозу - набор «Ingesim Mixomatosis 17. MIX. K1» («Inmunologia y genetica aplicata», Испания); для выявления антител к Pasteurella multocida серогрупп A и D - набор производства ФГБУ «ВНИИЗЖ», Россия.
Результаты и обсуждение
Для испытаний готовили три варианта ассоциированной вакцины (I, II, III). Состав приготовленных вариантов препарата представлен в табл. 1.
Экспериментальную вакцину исследовали на безвредность, антигенность и про-тективную функцию.
Оценка безвредности. Для испытания на безвредность образовали две группы кроликов (А и В) по 12 голов. Внутри групп выделили по три подгруппы по четыре животных. В группе А препарат вводили в объеме одной прививной дозы (1 см3), в каждой подгруппе испытывали свой вариант препарата (I, II, и III). В группе В аналогичным образом испытывали удвоенный объем вакцины (2 см3).
За вакцинированными кроликами установили клинический контроль. В течение 14-ти суток проводили термометрию, определяли возможные изменения в общем клиническом состоянии (признаки угнетения, отказ от корма, присутствие диареи). Оценивали реактогенность препарата - присутствие воспалительных процессов в тканях на месте введения вакцины
Установили, что за период наблюдений каких-либо изменений в общем клиниче-
Таблица 1. Ассоциированная вакцина против миксоматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов. Испытанные варианты (I, II, III)
Составляющие Исходная концентрация активного вещества Объем составляющ1 соответственно вар комбинированного п] IX (СМ3) иантов эепарата
I II III
Антиген RHD -1* 128 ГАЕ/0,1 см3 0,625 1,250 1,500
Антиген RHD -2* 256 ГАЕ/0,1 смз 0,625 0,625 0,750
Past. m.** 10 млрд КЛ./1,0 см3 1,250 1,625 1,750
ГОА# 30 мг/1,0 смз до 5,00 до 5,00 до 5,00
Mix. R ## 5,301 ^ ТЦД50/5,0 смз - - -
Примечания:
* - осветленная суспензия ткани печени кролика, содержащая антиген вируса RHD,
приготовленная на физиологическом растворе; ** - суспензия инактивированных формалином бактерий Past. m.
# - гель гидроокиси алюминия (3 %) на водной основе;
## - суспензия вируса миксоматоза кроликов аттенуированного штамма «Миксо/ВНИИЗЖ-18», восстановленная из лиофилизированного препарата в 5 см3 жидкого компонента
ском состоянии кроликов отмечено не было. Температура животных в течение эксперимента находилась в границах диапазона (38,5-39,4) °С, что для кроликов соот-
* _
**
Из данных табл. 2 следует, что препарат обладал определенным реактоген-ным действием. Через сутки после введения препарата на месте инъекции во всех подгруппах наблюдали радиальное уплотнение тканей. Интенсивность воспаления зависела от объема инъекции. В группе А уплотнения имели диметр 10-13 мм, в группе В - от 15 до 20 мм. Наибольшее количество кроликов с поствакцинальной реакцией в обеих группах наблюдали на 2-е и 3-и сутки после инъекции. Далее интенсивность местных реакций во всех группах снижалась, и доля реагирующих животных уменьшалась. Через 12 суток ни в одной из подопытных групп место инъекции вакцины не идентифицировалось. Результаты диагностического вскрытия, проведенные через 14 суток после вакцинации, показали отсутствие каких-либо последствий местных воспалений (некрозов, инкапсуля-ций и т. п.).
Оценка антигенного действия. Исследования проводили на четырех группах кроликов численностью по 6 голов. Три группы считали опытными и одну - контрольной. В каждой опытной группе испытывали свой вариант препарата (I, II и III), который вводили внутримышечно в объеме 1 см1. В контрольной группе аналогичным образом и в том же объеме вводили
ветствовало физиологической норме. Проявление реактогенного действия вакцины в виде признаков местной воспалительной реакции отражено в табл. 2.
0,9 % р-р NaCl.
Через 7, 14, 21 и 28 суток после вакцинации у всех животных отбирали пробы крови для исследования сывороток в ИФА. Оценивали концентрацию сывороточных антител ко всем антигенным составляющим ассоциированный препарат. Для каждой группы получали выборку соответствующих оценок, на основании которых вычисляли средние величины и стандартные отклонения Полученные результаты представлены в табл. 3.
Из данных табл. 3 следует, что иммунный ответ кроликов на все антигены, начиная с 14 суток после прививки (п. в.), достоверно возрастал (P > 0,05). При этом соответствующие оценки отрицательного контроля подобной тенденции не демонстрировали. На 14-е сутки п. в. для всех антигенных составляющих иммунные ответы были выше позитивно-негативного порога. На 28-е сутки п. в. вариант III показывал несколько большие оценки титров ко всем антигенам. Данный вариант был рассмотрен как наиболее перспективный.
Через 28 суток после прививки животным III-го варианта вакцины провели острый опыт по испытанию протективно-го действия препарата. В соответствии с поставленными целями были образованы следующие группы кроликов:
Таблица 2. Реактогенность ассоциированной вакцины. Присутствие местной воспалительной реакции у кроликов соответственно объему введенного препарата (группы: А - 1 см3; В — 2 см3), составам жидкого
Группа П/группа Сутки
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
А I 2/4** 2/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4
II 3/4 3/4 2/4 2/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 0/4 0/4 0/4
III 2/4 3/4 3/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4
В I 3/4 4/4 4/4 2/4 2/4 2/4 2/4 2/4 2/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4
II 3/4 3/4 3/4 3/4 2/4 2/4 1/4 1/4 1/4 1/4 1/4 0/4 0/4 0/4
III 2/4 3/4 4/4 3/4 2/4 2/4 2/4 2/4 2/4 1/4 1/4 1/4 0/4 0/4
Примечания:
составы жидкого компонента ассоциированной вакцины приведены в таблице 1; в числителе указано количество особей с признаками местной воспалительной реакции, в знаменателе - общее число животных в данной подгруппе; цветом выделена продолжительность проявления поствакцинальной реакции.
Таблица 3. Антигенное действие ассоциированной вакцины. Показатели# концентрации антител, установленные в ИФА к составляющим антигенам соответственно испытанным вариантам
п репаратаi I, II, III)## и времени после вакцинации (сутки)
Антиген Вариант Сутки
препарата 7 14 21 28
I 0,210 ± 0,027* 0,408 ± 0,032 0,772 ± 0,056 0,983 ± 0,024
RHD II 0,260 ± 0,018 0,520 ± 0,022 0,840 ± 0,042 0,960 ± 0,048
III 0,230 ± 0,021 0,540 ± 0,036 0,810 ± 0,044 0,992 ± 0,052
контроль 0,119 ± 0,021 0,152 ± 0,031 0,148 ± 0,037 0,129 ± 0,029
I 0,157 ± 0,015** 0,443 ± 0,034 0,479 ± 0,043 0,527 ± 0,027
Past. m. II 0,112 ± 0,011 0,339 ± 0,027 0,457 ± 0,049 0,522 ± 0,034
III 0,132 ± 0,021 0,477 ± 0,045 0,509 ± 0,052 0,563 ± 0,039
контроль 0,160 ± 0,028 0,179 ± 0,024 0,137 ± 0,032 0,179 ± 0,024
I 179 ± 26*** 941 ± 52 1242 ± 56 1496± 62
Mix. R II 126 ± 32 908 ± 51 1309± 47 1502± 55
III 187 ± 26 1022±44 1322 ± 49 1560± 51
контроль 160 ± 11 182 ± 19 174 ± 12 178 ± 26
##
**
Примечания:
# - даны средние значения и стандартные отклонения выборок (n = 6);
составы испытанных вариантов ассоциированной вакцины приведены в таблице 1;
отношение оценок оптической плотности тестируемого образца и положительного контроля (S/P - показатель). Реакцию считают положительной, если 0,3 < S/P;
S/P - показатель. Реакцию считают положительной, если 0,2 < S/P; оценка титра антител (Т) по уравнению lg T = (lg S/P х 1,4) + 3,301. Реакцию считают положительной, если 679 < Т, при T < 523 реакцию считают отрицательной, промежуточный диапазон относят к сомнительной реакции.
«RHD-I» - включала 10 голов вакцинированных и 10 голов интактных животных (опыт и контроль). Всем кроликам была произведена внутримышечная инъекция 1 см3 суспензии, содержащей не менее 3,0 lg ТЦД50 инфекционного вируса RHD данного типа. В течение 10-ти суток у инфицированных животных регистрировали показатели летальности в контроле (L0) и в опыте (L1). На основании полученных данных определяли индекс защиты вида Pr = ((M1 - M0) / M1) x100, где: M0 = 1- L0 и M1 = 1- L1;
«RHD-II» - по структуре и задачам являлась аналогом группы «RHD-I» для проверки защищенности против вируса RHD-II;
«Past. m» - включала 10 голов вакцинированных и 10 голов интактных животных (опыт и контроль), которым была произведена внутримышечная инъекция 1 см3 суспензии, содержащей не менее 3,0 lg ЛД50 Past. m. У инфицированных животных по аналогии с предыдущими группами определяли Pr-индекс.
«Mix. R» - включала 4 головы вакцинированных и 4 головы интактных животных
(опыт и контроль). Испытание проводили в соответствии с ГОСТ 28086 [18]. Определяли величины инфекционных титров (Т, ИД50) в опыте (Т1) и контроле (Т0). Далее вычисляли индекс вида ^ I = ^ Т0 - ^ Т1, характеризующий защищенность.
Результаты испытания протективного действия Ш-го варианта ассоциированной вакцины соответственно иммуногенным составляющим, приведены в табл. 4.
Данные, представленные в табл. 4, позволяют сделать следующие выводы:
- ассоциированная вакцина способна оказывать протективный эффект против всех возбудителей, которые в виде им-муногенных компонентов вошли в состав препарата;
- индексы защиты (Рг) против инфекции вируса RHD типов I и II составили 70 и 80 % соответственно. При этом в обеих опытных группах после контрольного заражения все животные были защищены. Установленные значения Рг ф 100 % были обусловлены тем, что в соответствующих контрольных группах оценки летальности были не абсолютны (Ь0 ф 1);
Таблица 4. Результаты испытания протективного действия ассоциированной вакцины (вариант III)* соответственно иммуногенным составляющим через 28 суток после иммунизации
Индекс защиты (Рг, %) на основании показателей летальности (Ь), установленных вакцинированных (опыт) и интактных (контроль) кроликов после искусственного заражении вирусом ЯНО** типов 1 и II
Тип вируса RHD Опыт Контроль Pr = ((Mi - M0) / Mi) x 100
Li Mi = 1- Li L0 M0 = i- L0
-I 0/10 1,0 7/10 0,3 70,0
-II 0/10 i,0 8/10 0,2 80,0
Индекс защиты (Pr, %) на основании показателей летальности (L), установленных вакцинированных (опыт) и интактных (контроль) кроликов после искусственного заражении Past. m***.
Past. m Опыт Контроль Pr = ((Mi - M0) / Mi) x i00
Li Mi = i- Li L0 M0 = i- L0
0/10 i,0 10/10 0,0 i00,0
Индекс защиты (1§ I) на основании значений титров (Т, ИД5о)#, установленных на вакцинированных (опыт, Т1) и на интактных (контроль, 1§То) кроликах
Mix.R Опыт Контроль lg I = lg T0 - lg Ti
Lg Ti < 1 Lg T0 = 3,69 ± 0,i2 (3,69 ± 0,i2) < I
Примечания:
* - составы испытанных вариантов ассоциированной вакцины приведены в таблице 1;
** - внутримышечная инъекция 1 см3 суспензии, содержащей не менее 3,0 ^ ТЦД50 вируса RHD соответствующего типа
*** - внутримышечная инъекция 1 см3 суспензии, содержащей не менее 3,0 ЛД50 Рast. т
# - титр 50%-х инфекционных единиц вируса, обуславливающих образование локальных
поражений кожи - миксом. Приведено среднее значение и стандартное отклонение по данным четырех титрований (Т ± s; п = 4)
- защищенность иммунизированных кроликов против инфекции возбудителя Past. m была абсолютна, соответствующий индекс составил величину Pr = 100 %.
- показателем поствакцинальной иммунной реакции животных на вирус миксо-матоза был принят индекс защищенности (I), оценка которого составила среднюю логарифмическую величину lg I > (3,69 ± 0,12).
Использованная технология получения RGDV, соответствовала известным методам, приведенным в описаниях коммерческих вакцин [4-6]. Других систем культивирования данного возбудителя в настоящее время не разработано.
Содержание антигенов RGDV-I и II в прививной дозе (см1) предлагаемой вакцины составило не менее 384 ГАЕ. В соответствии с опубликованными документами [5, 16, 20], аналогичные препараты содержат от 128 до 1280 ГАЕ.
Концентрация антигена P. multocida се-ротипа А в прививной дозе эксперимен-
тальной вакцины составило 3,47Ч109 инак-тивированных микробных клеток. Иммунизирующие дозы указанного антигена, заявленные в препаратах известных брендов [21, 22], содержат микробных клеток от 3,00x10" до 5,12x10".
Одна прививная доза предлагаемой ассоциированной вакцины содержит не менее 4,6 ^ ТЦД50 аттенуированного вируса миксоматоза. Известные коммерческие препараты содержат инфекционного агента в размерности ^ ТЦД50 от 3 до 3,301 [9, 23], или, в размерности ^ ИД50, от 2,7 до 3 [10, 11]. 50
В качестве адъюванта в составе исследуемой ассоциированной вакцины использован гель ГОА. Многие из коммерческих вакцин для кроликов содержат ГОА [5, 6], некоторые - с добавлением сапонина [20]. Есть эмульсионная вакцина против пасте-реллёза [21]. Данных о сравнительном действии различных адъювантов в вакцинах для кроликов в доступной литературе не встречено.
В инструктивных документах по применению коммерческих вакцин для кроликов даны сведения о побочных действиях препаратов. Например, вакцины против геморрагической болезни могут в течение 1-2 суток обусловить у кроликов потерю аппетита [5, 6], при этом, в течение 7-ми суток на месте инъекции препарата может присутствовать воспалительная реакция [4]. При использовании инактивирован-ных противопастереллёзных вакцин местный воспалительный процесс может присутствовать до трех недель [21, 22]. Оценка реактогенности предлагаемой вакцины показала только присутствие местных воспалительных реакций, которые могли наблюдаться в течение 12-ти суток после инъекции.
Указано, что известные коммерческие вакцины индуцируют значимые накопления антител к вирусам миксоматоза и геморрагической болезни на 5-9 сутки после прививки [6, 11]. Антитела к возбудителю пастереллёза образуются через 14 дней после введения вакцины [21, 22, 24]. При использовании экспериментальной вакцины накопление сывороточных антител до устойчивого протективного уровня ко всем антигенным составляющим установлено через 14 суток после иммунизации.
На мировом рынке ветеринарных пре-
паратов специфической профилактики болезней кроликов известны ассоциированные вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов и миксоматоза [16, 23], которые в одном прививном объеме содержат указанные иммуногены. Однако препараты, содержащие более трех антигенных валентностей, в настоящее время не известны.
Заключение
Результаты испытания предлагаемой ассоциированной вакцины в остром опыте показали, что через 28 суток после прививки кроликов препарат способен создавать: а) предельный уровень защиты по положительному контролю к вирусу геморрагической болезни типов I и II; Ь) полностью протективный уровень иммунитета к пастереллёзу; с) индекс редукции миксом, превышающий три порядка, что по ГОСТ 28086 [18] соответствует протективному уровню иммунитета к миксоматозу.
Важным преимуществом ассоциированной вакцины является возможность использования препарата в виде одной внутримышечной инъекции, не прибегая к многократной вакцинации животных против каждого заболевания, уменьшая трудозатраты и стресс животных.
Библиографический список:
1. Приказ Минсельхоза РФ от 19 декабря 2011 г. №
476 «Об утверждении перечня заразных, в том числе особо опасных, болезней животных, по которым могут устанавливаться ограничительные мероприятия (карантин)» (с изменениями и дополнениями) [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://base.garant.ru/70139098/
2. Власов Н. А. Физико-химические свойства и анти-
генная структура вируса геморрагической болезни кроликов: автореф. дис. ... д-ра биол. наук (03.00.06 / Н. А. Власов. - Покров, 1998. - 46 с.
3. OIE. 2018. Terrestrial Manual. Chapter 3.6.2. Rabbit
haemorrhagic disease. - P. 1389-1406. [Электронный ресурс]: https://www.oie.int/fileadmin/Home/ eng/Health_standards/tahm/3.06.02_RHD.pdf
4. Инструкция по применению вакцины против ви-
русной геморрагической болезни кроликов тканевой инактивированной лиофилизированной (ФГБНУ ФИЦВиМ, Россия).
5. Инструкция по ветеринарному применению вак-
цины против вирусной геморрагической болезни кроликов тканевой инактивированной гидрооки-сьалюминиевой (ФГБНУ ФИЦВиМ, Россия).
6. Инструкция по применению вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов жидкой инактивированной (ОАО «Покровский завод биопрепаратов», Россия).
7. Product data sheet CUNIPRAVAC RHD Inactivated
vaccine against Haemorrhagic disease, in injectable emulsion («Laboratorios Hipra, S.A.», Spain).
8. Казаков А. А. Дифференциальная диагностика миксоматоза кроликов / А. А. Казаков // Ветеринарная Практика. - 2007. - № 3 (38). - С. 64-65.
9. Product data sheet MIXOHIPRA H Live homologous
vaccine against Myxomatosis, in injectable freeze-dried tablet («Laboratorios Hipra, S.A.», Spain).
10. Инструкция по применению вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культураль-ной из штамма В-82 (ФГБНУ ФИЦВиМ, Россия).
11. Инструкция по применению вакцины против миксоматоза кроликов культуральной из штамма «В-82» сухой (ОАО «Покровский завод биопрепаратов», Россия).
12. Sanches S. Pasteurellosis in Rabbits / S. Sanches, B. W. Ritchie, S. Mizan, M. D. Lee // Compendium. - 2000. - Vol. 22. - № 4. - P. 344-351.
13. Jaglic Z. Host response in rabbits to infection with Pasteurella multocida serogroup F strains originating from fowl cholera / Z. Jaglic, E. Jeklova, H. Christensen [et al.] // Canadian Journal of Comparative Medicine. - 2011. - 75 (3). - P. 200-208.
14. Циорина Н. Н. Щит против инфекций кроликов // Н. Н. Циорина // Ветеринария. - 2017. - № 4. - C. 34-36.
15. Filavac VHD K C+V Suspension for Injection for Rabbits [Электронный ресурс]: https://www.noahcompendium.co.uk/?id=-470032&template=template_printview
16. Лапимун Гемикс-3. Вакцина против геморрагической болезни и миксоматоза кроликов [Электронный ресурс]: https://www.biotestlab.ua/ products/lapimun-gemix-3/
17. ГОСТ28085-2013. Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности.
18. ГОСТ 28086-2013. Межгосударственный стандарт
вакцины против миксоматоза кроликов живые. Технические условия.
19. ГОСТ Р 55765-2013. Национальный стандарт Российской Федерации. Средства лекарственные для ветеринарного применения. Вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов тканевые инактивированные.
20. Pestorin suspension for injection for rabbit. Vaccine against rabbit haemorrhagic disease [Электронный ресурс]: https://www.bioveta.eu/en/products/ veterinary-products/pestorin-suspension-for-injection-for-rabbit.html
21. Pasorin Ol inj. ad us. vet. Rabbit pasteurellosis vaccine inactivated [Электронный ресурс]: https://
www.bioveta.eu/en/products/veterinary-products/ pasorin-ol-inj-ad-us-vet-3.html
22. Cunivac Past [Электронный ресурс]: https://www. vetpharm.uzh.ch/tak/00000000/00001707.VAK
23. Pestorin Mormyx lyophilisate and solvent for suspension for injection. Vaccine against rabbit haemorrhagic disease and myxomatosis [Электронный ресурс]: https://www.bioveta.eu/en/products/ veterinary-products/pestorin-mormyx-lyophilisate-and-solvent-for-suspension-for-injection.html
24. Раббивак-Р: Инструкция по применению [Электронный ресурс]: https://www.zoosite.com.ua/ veterinary_preparation_1053.html
References:
1. Prikaz Minselhoza RF ot 19 dekabrya 2011 g. # 476
«Ob utverzhdenii perechnya zaraznyih, v tom chisle osobo opasnyih, bolezney zhivotnyih, po kotoryim mogut ustanavlivatsya ogranichitelnyie meropriyatiya (karantin)» (s izmeneniyami i dopolneniyami) [Order of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation of December 19, 2011 № 476 "On approval of the list of infectious, including especially dangerous, animal diseases, for which restrictive measures (quarantine) can be established" (with amendments and additions)] [Elektronnyiy resurs]. Rezhim dostupa: https://base. garant.ru/70139098/
2. Vlasov N. A. Fiziko-himicheskie svoystva i antigennaya
struktura virusa gemorragicheskoy bolezni krolikov [Physicochemical properties and antigenic structure of rabbit haemorrhagic disease virus]: avtoref. dis. ... d-ra biol. nauk (03.00.06 / N. A. Vlasov. - Pokrov, 1998. - 46 s.
3. Vide supra.
4. Instruktsiya po primeneniyu vaktsinyi protiv virusnoy
gemorragicheskoy bolezni krolikov tkanevoy inaktivirovannoy liofilizirovannoy [Instruction for the use of a tissue inactivated lyophilized vaccine against viral haemorrhagic disease of rabbits] (FGBNU FITsViM, Rossiya).
5. Instruktsiya po veterinarnomu primeneniyu vaktsinyi
protiv virusnoy gemorragicheskoy bolezni krolikov tkanevoy inaktivirovannoy gidrookisalyuminievoy [Instructions for the veterinary use of tissue inactivated aluminum hydroxide vaccine against viral haemorrhagic disease of rabbits] (FGBNU FITsViM, Rossiya).
6. Instruktsiya po primeneniyu vaktsinyi protiv virusnoy
gemorragicheskoy bolezni krolikov zhidkoy inaktivirovannoy [Instructions for the use of inactivated liquid vaccine against viral haemorrhagic disease of rabbits] (OAO «Pokrovskiy zavod biopreparatov», Rossiya).
7. Vide supra.
8. Kazakov A. A. Differentsialnaya diagnostika miksomatoza krolikov [Differential diagnosis of myxomatosis in rabbits] / A. A. Kazakov // Veterinarnaya Praktika. - 2007. - # 3 (38). - S. 64-65.
9. Vide supra.
10. Instruktsiya po primeneniyu vaktsinyi protiv miksomatoza krolikov suhoy zhivoy kulturalnoy iz shtamma V-82 [Instructions for the use of a dry live cultural vaccine against myxomatosis of rabbits from strain B-82] (FGBNU FITsViM, Rossiya).
11. Instruktsiya po primeneniyu vaktsinyi protiv miksomatoza krolikov kulturalnoy iz shtamma «V-82» suhoy [Instructions for use of the dry vaccine against myxomatosis of rabbits cultural from the strain "B-82"] (OAO «Pokrovskiy zavod biopreparatov», Rossiya).
12-13. Vide supra.
14. Tsiorina N. N. Schit protiv infektsiy krolikov [Shield against rabbit infections] // N. N. Tsiorina // Veterinariya. - 2017. - # 4. - C. 34-36.
15. Vide supra.
16. Lapimun Gemiks-3. Vaktsina protiv gemorragicheskoy bolezni i miksomatoza krolikov [Lapimun Gemix-3. Vaccine against haemorrhagic disease and myxomatosis in rabbits] [Elektronnyiy resurs]: https://www.biotestlab.ua/products/lapimun-gemix-3/
17. GOST 28085-2013. Sredstva lekarstvennyie biologicheskie dlya veterinarnogo primeneniya. Metod bakteriologicheskogo kontrolya sterilnosti [Biological medicinal products for veterinary use. Method of bacteriological control of sterility].
18. GOST 28086-2013. Mezhgosudarstvennyiy standart vaktsinyi protiv miksomatoza krolikov zhivyie. Tehnicheskie usloviya [Interstate standard of live vaccine against rabbit myxomatosis. Technical conditions].
19. GOST R 55765-2013. Natsionalnyiy standart Rossiyskoy Federatsii. Sredstva lekarstvennyie dlya veterinarnogo primeneniya. Vaktsinyi protiv virusnoy gemorragicheskoy bolezni krolikov tkanevyie inaktivirovannyie [National standard of the Russian Federation. Medicines for veterinary use. Tissue inactivated vaccines against viral haemorrhagic disease of rabbits].
20-23. Vide supra.
24. Rabbivak-R: Instruktsiya po primeneniyu [Rabbivak-P: Instructions for use] [Elektronnyiy resurs]: https://www.zoosite.com.ua/veterinary_ preparation_1053.html
DOI: 10.25690/VETPAT.2021.73.67.003
Kunikova E. D., Moroz N. V., Kulakov V. Yu., Dolgova M. A.
ASSOCIATED VACCINE AGAINST MYXOMATOSIS, PASTERELLOSIS AND
RABBIT HEMORRHAGIC DISEASE TYPES 1 AND 2
Key Words: associated vaccine against myxomatosis, pasteurellosis and rabbit hemorrhagic disease types 1 and 2, rabbit hemorrhagic disease, myxomatosis, pasteurellosis of rabbits.
Abstract: We studied the immunobiological properties of the associated vaccine against myxomatosis, pasteurellosis and rabbits hemorrhagic disease types 1 and 2, which consists of two components.
Liquid component - antigens of inactivated hemorrhagic disease virus (RGDV-I and -II) and antigen of inactivated pasteurellosis bacteria (P. multocida serotype A), in the form of a mixture on a solution of aluminum hydroxide gel. The dry component is the attenuated rabbit myxomatosis virus (strain «Mixo / ARRIAH-18»). Before use, the components were mixed in predetermined proportions and inoculated intramuscularly in rabbits. The reactogenic, antigenic and protective effects of the combined preparation were evaluated. The following is defined. The reactogenic effect of the drug in the form of a local inflammatory reaction can persist up to 12 days after injection. The accumulation of serum antibodies to a stable protective level to all antigenic components occurs 14 days after immunization. The maximum level of protection for positive control to the virus of hemorrhagic disease types I and II, completely protective level of immunity to pasteurellosis and index of protection against myxomatosis, exceeding three orders of magnitude the drug is able to create to a 28 days after vaccination. An important advantage of the associated vaccine over the known commercial analogs is the possibility of using the drug as a single intramuscular injection, without resorting to multiple vaccinations of animals against each disease, reducing labor costs and stress of animals.
Сведения об авторах:
Куникова Екатерина Дмитриевна, аспирант ФГБУ «ВНИИЗЖ»; д. 33, ул. Институтский городок, г. Владимир, Российская Федерация, 600901; e-mail: kunikova@arriah.ru
Мороз Наталья Владимировна, канд. вет. наук, заведующая лабораторией профилактики болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ»; д. 33, ул. Институтский городок, г. Владимир, Российская Федерация, 600901; e-mail: moroz@arriah.ru
Кулаков Владимир Юрьевич, канд. вет. наук, ведущий научный сотрудник ФГБУ «ВНИИЗЖ»; д. 33, ул. Институтский городок, г. Владимир, Российская Федерация, 600901; e-mail: kulakov@arriah.ru
Долгова Мария Алексеевна, канд. биол. наук, младший научный сотрудник ФГБУ «ВНИИЗЖ»; д. 33, ул. Институтский городок, г. Владимир, Российская Федерация, 600901; e-mail: dolgova@arriah.ru
Author affiliation:
Kunikova Ekaterina Dmitrievna, Postgraduate Student of the FSBI «ARRIAH»; house 33, Institutsky gorodok str., Vladimir city, Russian Federation, 600901; e-mail: kunikova@arriah.ru Moroz Natal'ya Vladimirovna, Ph. D. in Veterinary Medicine, Head of the Laboratory for Prevention of Bird Diseases of the FSBI «ARRIAH»; house 33, Institutsky gorodok str., Vladimir city, Russian Federation, 600901; e-mail: moroz@arriah.ru
Kulakov Vladimir Yur'evich, Ph. D. in Veterinary Medicine, Leading Researcher of the FSBI «ARRIAH»; house 33, Institutsky gorodok str., Vladimir city, Russian Federation, 600901; e-mail: kulakov@arriah.ru
Dolgova Maria Alekseevna, Ph. D. in Biology, Junior Researcher of the FSBI «ARRIAH»; house 33, Institutsky gorodok str., Vladimir city, Russian Federation, 600901; e-mail: dolgova@ arriah.ru
Б01: 10.25690/УБТРЛТ.2021.41.89.001 УДК: 619:612.017.1:636.083.37
Агарков А. В., Дмитриев А. Ф., Квочко А. Н., Агарков Н. В.
РАЗРАБОТКА СПОСОБА ОЦЕНКИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНОГО
Ключевые слова: иммунологическая реактивность, свиньи, функциональное состояние, иммунобиологический статус, новорожденное потомство, иммунитет, беременные животные.
