CC BY
0
Результаты исследований
DOI: 10.24412/2071-5315-2024-13113
Ассоциация полиморфизмов генов фолатного цикла с ранним дебютом артериальной гипертонии у больных подагрой
^ М.Ю. Мишко1, Н.Н. Кушнаренко1, Т.А. Медведева2, Т.М. Караваева1, Н.А. Мироманова1
1 ФГБОУВО "Читинская государственная медицинская академия "Минздрава России 2 Московский многопрофильный клинический центр "Коммунарка"
Определяли ассоциацию полиморфизма генов фолатного цикла с развитием артериальной гипертонии (АГ) у больных подагрой в популяции русских Забайкальского края. Обследовано 80 пациентов с подагрой (соотношение мужчин и женщин 6,3 : 1), медиана возраста пациентов составила 54 (45—65) года. Диагноз подагры выставлен согласно классификационным критериям Американской коллегии ревматологов/Европейского альянса ревматологических ассоциаций 2015 г. Пациенты генотипированы для выявления полиморфизмов генов фолатного цикла (MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G, MTRR A66G). Для оценки ассоциации генотипов и аллелей с подагрой рассчитаны показатели отношения шансов с оценкой 95% доверительного интервала. Группа мужчин с подагрой была разделена на 2 подгруппы: больные с АГ (n = 59) и больные без АГ (n = 10), сопоставимые по факторам риска сердечно-сосудистых заболеваний. У мужчин с подагрой — носителей гомозиготных по минорному аллелю генотипов Т/Т однонуклеотидного полиморфизма (single nucleotide polymorphism, SNP) гена MTHFR C677T и G/G SNP гена MTHFR А1298G дебют АГ наблюдался в более раннем возрасте по сравнению с носителями гомозиготного по доминантному аллелю и гетерозиготного генотипов. Аналогичные данные получены у рецессивных гомозигот SNP гена MTR А2756G в сравнении с доминантными гомозиготами. Результаты исследования свидетельствуют о вовлеченности полиморфизмов генов фолатного цикла в развитие не только подагрического артрита, но и АГ у данной когорты больных. Использование генетических маркеров является перспективным направлением в создании программ персонифицированной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний у больных подагрой. Ключевые слова: подагра, мочевая кислота, генетический полиморфизм, фолатный цикл, MTHFR, MTR, MTRR, артериальная гипертония.
Введение
В последние десятилетия активно обсуждается проблема сердечно-сосудистых нарушений у больных подагрой, механизм которых ассоциирован с гиперурикеми-ей (ГУ) и целым рядом метаболических сдвигов. Подагра ассоциирована с высоким риском возникновения и прогрес-
Контактная информация: Мишко Марина Юрьевна, mm_you@mail.ru
сирования артериальной гипертонии (АГ), обусловленным эндотелиальной дисфункцией и гломерулотубулярными повреждениями, активирующими ренин-ангиотен-зин-альдостероновую систему и повышение артериального давления (АД) на фоне ГУ. Кроме того, ГУ индуцирует развитие хронической болезни почек, патологии углеводного и липидного обмена, которые также сопряжены с неблагоприятным сер-
ШЁШщёШ
Подагра
дечно-сосудистым прогнозом у больных подагрой [1, 2].
Несмотря на тенденцию к увеличению заболеваемости подагрой в последние десятилетия, сроки диагностики заболевания, по разным данным, составляют от 2 до 8 лет с момента дебюта, что существенно повышает сердечно-сосудистые риски в данной когорте больных. Внешние факторы (диета, метаболические нарушения, прием алкоголя, салицилатов и других лекарственных препаратов) как причина развития заболевания в настоящее время освещены данными многочисленных исследований [3]. В связи с этим актуальным для современной науки становится изучение молекулярно-генетиче-ских предикторов этиологии и патогенеза, которые могут позволить своевременно диагностировать подагрический артрит и снизить сердечно-сосудистые риски у данной когорты больных.
Хорошо изученным является участие метаболизма фолатов в биосинтезе пури-новых нуклеотидов, что позволило сформулировать предположение о возможной роли генов фолатного цикла в патогенезе ГУ и подагры и доказать выдвинутую гипотезу. В то же время известно, что нарушения фолатного цикла ассоциированы с повышенным риском развития ряда патологических процессов, главным образом сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) [4, 5].
В связи с указанными аспектами можно предположить участие данных полиморфизмов в механизмах формирования АГ у больных подагрическим артритом наряду с хорошо изученными традиционными факторами риска.
Цель исследования — определение ассоциации полиморфизмов генов фолатного цикла (локусов С677Т и А1298С гена мети-лентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), генов метионин-синтазы (MTR) A2756G и ме-тионин-синтазы-редуктазы (MTRR) A66G) с развитием АГ у мужчин с подагрой в популяции русских Забайкальского края.
Материал и методы
В исследовании приняло участие 80 мужчин и женщин с подагрой, получавших стационарное лечение в отделениях терапевтического профиля ЧУЗ "Клиническая больница «РЖД-Медицина» города Чита". При анализе мощности и предполагаемого объема выборки установлено, что для выявления значимых различий при уровне мощности не менее 80% достаточно сформировать выборку, включающую по 50 пациентов в основной и в контрольной группах.
Медиана возраста пациентов составила 54 (45—65) года (мужчин — 53 (42—66) года, женщин — 56 (45—67) лет). Когорты мужчин и женщин были сопоставимы по возрасту (р = 0,09). Соотношение мужчин и женщин в основной группе составило 69 : 11 (6,3 : 1). Работа одобрена этическим комитетом ФГБОУ ВО "Читинская государственная медицинская академия" Минздрава России (протокол № 74 от 06.11.2015), проводилась с учетом требований Хельсинкской декларации и стандартов надлежащей клинической практики. Информированное согласие на участие в исследовании получено от каждого пациента.
Всем пациентам диагноз подагры установлен согласно классификационным критериям Американской коллегии ревматологов/Европейского альянса ревматологических ассоциаций 2015 г. По национальной принадлежности респонденты относились к популяции русских, родившихся и проживающих на территории Забайкальского края. Принадлежность к популяционной группе определялась по данным генеалогического анамнеза до 3-го поколения (согласно рекомендациям 8-го Международного симпозиума в 1980 г., Лос-Анджелес, США).
Дизайн исследования представлен на рисунке.
В исследование не включались пациенты: возрастом менее 18 и старше 65 лет, имевшие ревматоидный артрит, другие кристаллические артропатии, тяжелую сердечную недостаточность, патологию щитовидной железы, сахарный диабет
Согласие на участие в исследовании Заполнение регистрационной формы Подтверждение диагноза подагры
Изучение клинических особенностей течения подагры
n = 80
69
Изучение клинических особенностей течения подагры
n = 69 n = 11
I этап
Генотипирование для выявления
полиморфизмов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G, MTRR A66G
II этап
Поиск ассоциаций изучаемых полиморфизмов генов фолатного цикла с риском развития подагры
III этап
Поиск ассоциаций изучаемых полиморфизмов генов фолатного цикла с развитием АГ в группе мужчин с подагрой
Дизайн исследования.
1-го типа, злокачественные новообразования, воспалительные заболевания (острые, хронические в стадии обострения), заболевания легких с тяжелой дыхательной недостаточностью, почечную недостаточность (5-я стадия хронической болезни почек), психические заболевания, а также с дебютом АГ до начала подагрического артрита.
Все респонденты находились в межпри-ступном периоде подагры, среди них 57,5% имели рецидивирующее, 42,5% — хроническое тофусное течение заболевания.
Мочевую кислоту (МК) сыворотки крови и мочи определяли с помощью ферментативного колориметрического теста с использованием реакции с уриказой (Human, Германия). В случае регулярного приема пациентами аллопуринола или других пре-
паратов, влияющих на обмен МК, терапия отменялась на 3 дня, после чего производился забор анализов.
Контрольную группу составили 46 здоровых пациентов, сопоставимых по возрасту (медиана возраста составила 53 (44—62) года), у которых при клиническом, лабораторном и инструментальном обследовании не выявлено патологических отклонений от принятых нормативов. По национальной принадлежности все обследованные относились к популяции русских, родившихся и проживающих на территории Забайкальского края.
Молекулярно-генетические исследования выполнены в лаборатории НИИ молекулярной генетики ФГБОУ ВО "Читинская государственная медицинская академия" Минздрава России. Материалом для исследования являлась ДНК, выделенная из лейкоцитов цельной периферической крови с использованием комплекта реагентов "ДНК-Экспресс Кровь" (ООО НПФ "Ли-тех", Россия) согласно инструкции производителя. Все пациенты были генотипиро-ваны для выявления полиморфизмов генов фолатного цикла (4 мутации) — MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G, MTRR A66G с использованием набора "Генетика метаболизма фолатов" (ООО НПО "ДНК-Технология", Россия) методом по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени на ПЦР-амплификаторе ДТ-96 (по алгоритму: начальная денатурация в течение 3 мин при 95°С, далее 40 циклов денатурации с интервалом 15 с при 95°С, отжиг и элонгация — 40 с при 63°С).
Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью статистических программ Statistica 10.0, онлайн-программы "Калькулятор для расчета статистики в исследованиях «случай-контроль»" (http://84.201.145.131/index.php). Распределение генотипов проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью критерия %2. Различия по частоте аллелей и генотипов между группами оце-
ш^шшш
Подагра
Таблица 1. Клинико-лабораторная характеристика пациентов в зависимости от варианта течения подагры
Характер течения подагры
Характеристика хроническое тофусное (n = 34) (42,5%) рецидивирующее (n = 46) (57,5%) p
Возраст дебюта подагры, годы 43 (37-52) 55 (49-63) 0,043
Количество пораженных суставов, абс. 6 (4-8) 2 (1-3) 0,004
Количество атак в год, абс. 7 (5-8) 3 (2-4) 0,002
Медиана длительности течения артрита, дни 7 (4-15) 3 (2-5) 0,003
Интенсивность боли по ВАШ (в периоды: обострений заболевания), баллы 68 (53-74) 55 (47-65) 0,048
Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 628 (553-683) 502 (443-581) 0,001
Уровень МК мочи, мкмоль/л 3721 (3118-4468) 3452(2860-4259) 0,089
СРБ, мг/л 9,6 (5,2-13,8) 6,8 (2,3-8,7) 0,041
Прием аллопуринола, п (%) 26 (76,4) 38 (82,6) -
Регулярный прием аллопуринола, п (%) 19 (55,8) 21 (45,6) -
Прием фебуксостата, п (%) 8 (23,6) 3(6,5) -
Обозначения: ВАШ - визуальная аналоговая шкала, СРБ - С-реактивный белок.
нены с помощью критерия %2 Пирсона, при необходимости вводилась поправка Йейтса на непрерывность. Для оценки ассоциации генотипов и аллелей с подагрой рассчитаны показатели отношения шансов (ОШ) с оценкой 95% доверительного интервала (ДИ). Значение ОШ = 1 показывало отсутствие ассоциации; ОШ >1 свидетельствовало о положительной ассоциации заболевания с признаком (фактор повышенного риска); ОШ <1 рассматривалось как отрицательная ассоциация (фактор пониженного риска). При анализе использованы аддитивная и рецессивная модели (анализ однонуклеотидного полиморфизма (single nucleotide polymorphism, SNP) С677Т гена MTHFR), аддитивная и доминантная модели наследования (анализ полиморфного локуса A2756G гена MTR).
Диагноз АГ выставлен по анамнестическим данным и данным медицинской документации, подтвержден при проведении суточного мониторирования АД (СМАД) с помощью аппарата BPLab ("Петр Телегин", Россия). Средняя длительность мониторирования составила 23,4 ± 1,0 ч. Интервал
между измерениями АД составлял 15 мин днем и 30 мин ночью. Во время проведения СМАД не ограничивались физические нагрузки, больному было рекомендовано вести привычный образ жизни. Накануне и в день проведения СМАД пациенты не принимали антигипертензивных препаратов. Обязательным условием включения пациента в исследование являлся дебют АГ после дебюта подагрического артрита.
Количественные данные представлены в виде Ме (Q1—Q3) (медиана (25-й и 75-й про-центили)), статистическую значимость различий оценивали по критерию Стьюдента при нормальном распределении и с помощью непараметрического и-критерия Манна—Уитни в случае распределения, не соответствующего нормальному. Корреляционный анализ выполнен с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Статистически значимыми считали результаты при р < 0,05.
Результаты исследования
Клиническая характеристика больных подагрой представлена в табл. 1.
Результаты исследований
Таблица 2. Частоты распределения (n (%)) генотипов и аллелей SNP генов фолатного цикла MTHFR С677Т и MTR A2756G у больных подагрой (n = 80) и здоровых респондентов (n = 46)
Ген (генотипы, аллели) Пациенты с подагрой Группа контроля X2 р ОШ (95% ДИ)
MTHFR С677Т
Генотипы
С/С 30 (37,5) 22 (47,8) 1,28 0,26 0,65 (0,31-1,36)
C/T 33 (41,3) 22 (47,8) 0,51 0,47 0,77 (0,37-1,59)
T/T 17 (21,2) 2 (4,4) 6,50 0,01 5,94 (1,3-27,00)
Аллели
С 93 (58,1) 66 (71,7) 4,65 0,03 0,55 (0,31-0,94)
T 67 (41,9) 26 (28,3) 4,65 0,03 1,83 (1,05-3,17)
MTR A2756G
Генотипы
A/A 39 (48,8) 34 (73,9) 7,58 0,006 0,33 (0,15-0,74)
A/G 37 (46,2) 11 (23,9) 5,78 0,01 2,66 (1,18-5,98)
G/G 4 (5,0) 1 (2,2) 0,61 0,43 2,36 (0,26-21,8)
Аллели
A 115 (71,9) 79 (85,9) 6,46 0,01 0,42 (0,21-0,83)
G 45 (28,1) 13 (14,1) 6,46 0,01 2,38 (1,20-4,69)
Распределение частот исследуемых полиморфизмов генов MTHFR С677Т, MTHFR А1298С, MTR A2756G, MTRR A66G в основной и контрольной группах соответствовало теоретически ожидаемому равновесию Харди—Вайнберга (p > 0,05).
В проведенных нами ранее исследованиях была показана ассоциация между некоторыми полиморфизмами генов фо-латного цикла и риском развития подагры в популяции русских Забайкальского края [6]. Установлено, что минорный аллель Т SNP гена MTHFR С677Т обнаружен с частотой 41,9% среди больных подагрой и 28,3% в контрольной группе. Также выявлено, что более высокая частота минорных гомозигот (T/T) гена MTHFR С677Т наблюдалась в основной группе (21,2% по сравнению с 4,4% в группе контроля). Это является свидетельством достоверно более высокого риска развития подагрического артрита у носителей указанного аллеля и генотипа. Частота аллеля дикого типа (С)
преобладала в группе здоровых респондентов, что свидетельствует о его протек-тивной роли. Генотипы С/С и С/Т встречались практически с одинаковой частотой в обеих группах.
Доминантный генотип А/А и аллель А SNP A2756G гена MTR преобладали в группе здоровых респондентов по сравнению с больными подагрическим артритом (73,9 против 48,8% и 85,9 против 71,9% соответственно), что позволяет рассматривать их носительство как фактор пониженного риска развития заболевания. В то же время минорный аллель G и генотип A/G данного SNP чаще встречались в основной группе, повышая вероятность развития подагры (табл. 2).
Частоты аллелей и генотипов SNP генов MTHFR A1298C, MTRR A66G в основной и контрольной группах не имели статистически значимых различий.
Анализ частот распределения аллелей и генотипов SNP генов MTHFR С677Т и MTR
ш^шшш
Подагра
Таблица 3. Частоты распределения (п (%)) генотипов и аллелей полиморфизмов генов фолатного цикла у больных подагрой с АГ (п = 59) и нормальным АД (п = 10)
Ген (генотипы, аллели) Пациенты с подагрой с АГ Пациенты с подагрой без АГ %2 р ОШ (95% ДИ)
MTHFR С677Т
Генотипы
С/С 20 (34,0) 5 (50,0) 0,96 0,32 0,65 (0,13-1,98)
С/Т 26 (44,0) 4 (40,0) 0,51 0,81 1,18 (0,30-4,63)
Т/Т 13 (22,0) 1 (10,0) 0,76 0,38 2,54 (0,29-21,96)
Аллели
С 66 (55,9) 14 (70,0) 1,38 0,23 0,54 (0,19-1,51)
Т 52 (44,1) 6 (30,0) 1,38 0,23 1,83 (1,66-5,11)
MTHFR А1298С
Генотипы
А/А 30 (50,8) 6 (60,0) 0,28 0,59 0,69 (0,18-2,69)
А/С 26 (44,1) 4 (40,0) 0,06 0,81 1,18 (0,30-4,63)
С/С 3 (5,1) 0 - - -
Аллели
А 86 (72,9) 16 (80,0) 0,45 0,50 0,67 (0,21-12,16)
С 32 (27,1) 4 (20,0) 0,45 0,50 1,49 (0,46-4,79)
МШ А2756G
Генотипы
А/А 28 (47,5) 5 (50,0) 0,20 0,88 0,90 (0,24-3,45)
А^ 27 (45,8) 5 (50,0) 0,06 0,80 0,84 (0,22-3,23)
G/G 4 (6,7) 0 - - -
Аллели
А 83 (70,3) 15 (75,0) 0,18 0,67 0,79 (0,27-2,34)
G 35 (29,7) 5 (25,0) 0,18 0,67 1,26 (0,43-3,75)
МТМ A66G
Генотипы
А/А 11 (18,6) 3 (30,0) 0,68 0,41 0,53 (0,12-2,40)
А^ 27 (45,8) 4 (40,0) 0,11 0,73 1,26 (0,32-4,97)
G/G 21 (35,6) 3 (30,0) 0,12 0,73 1,29 (0,30-5,52)
Аллели
А 49 (41,5) 10 (50,0) 0,50 0,48 0,71 (0,27-1,84)
G 69 (58,5) 10 (50,0) 0,50 0,48 1,41 (0,54-3,64)
А2756G в гендерном аспекте не проводился ввиду несоответствия распределения мутаций равновесию Харди—Вайнберга среди женщин в основной и контрольной группах [6].
На заключительном этапе нашего исследования группа мужчин с подагрой (п = 69) была разделена на 2 подгруппы: больные, страдающие АГ (п = 59), и больные без АГ (п = 10).
Таблица 4. Клиническая и лабораторная характеристика пациентов с подагрой с АГ в зависимости от носительства разных генотипов SNP генов фолатного цикла MTHFR С677Т, MTHFR А1298С, MTR A2756G, MTRR A66G
Клинические характеристики SNP X2 р
MTHFR С677Т
Генотип (п; %) С/С (20; 34,0) C/T (26; 44,0) T/T (13; 22,0)
Возраст, годы 56 (45-64) 57 (43-65) 49 (44-58) - >0,05
Курение, п 0,48 >0,05
да 15 21 11
нет 5 5 2
ИМТ, п 0,22 >0,05
17,0-29,9 кг/м2 9 12 5
>30,0 кг/м2 11 14 8
Семейный анамнез АГ, п 0,68 >0,05
имеется 11 16 9
отсутствует 9 10 4
Семейный анамнез ССЗ, п 3,09 >0,05
имеется 7 15 8
отсутствует 13 11 5
Возраст дебюта АГ, годы 50 (46-57) 49 (40-57) 42 (39-45) - Pj = 0,0019 p2 = 0,018
Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 492 (410-557) 500 (426-575) 624 (476-648) - Pj = 0,02 p2 = 0,032
Уровень МК мочи, мкмоль/л 4116 (3490-4691) 3670 (2913-4854) 4590 (3352-4716) - 2 >0,05
САД, мм рт. ст. 145 (128-143) 148 (133-150) 150 (135-152) - >0,05
ДАД, мм рт. ст. 80 (75-90) 80 (78-93) 84 (75-94) - >0,05
ХС ЛПВП, ммоль/л 1,09 (0,99-1,20) 1,14 (0,96-1,24) 1,10 (0,86-1,18) - >0,05
ХС ЛПНП, ммоль/л 2,74 (2,38-3,57) 2,80 (2,30-3,16) 3,04 (2,29-3,75) - >0,05
ТГ, ммоль/л 2,66 (2,13-3,20) 2,82 (2,01-3,14) 2,60 (1,23-2,98) - >0,05
MTHFR А1298С
Генотип (п; %) А/А (30; 50,8) А/С (26; 44,1) С/С (3; 5,1)
Возраст, годы 54 (45-64) 52 (41-64) 47 (47-59) - >0,05
Курение, п 2,29 >0,05
да 22 23 2
нет 8 3 1
ИМТ, п 0,71 >0,05
17,0-29,9 кг/м2 12 13 1
>30,0 кг/м2 18 13 2
Семейный анамнез АГ, п 0,05 >0,05
имеется 18 16 2
отсутствует 12 10 1
Ж
ж
Подагра
Таблица 4. Продолжение
Клинические характеристики SNP X2 р
Семейный анамнез ССЗ, п 2,9 >0,05
имеется 18 10 2
отсутствует 12 16 1
Возраст дебюта АГ, годы 50 (41-57) 47 (45-52) 40 (40-40) р1 = 0,0008 р2= 0,001
Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 500 (441-575) 502 (408-593) 607 (475-607) >0,05
Уровень МК мочи, мкмоль/л 4362 (3299-4753) 4125 (2960-4848) 3852 (3418-3852) >0,05
САД, мм рт. ст. 150 (138-156) 154 (132-164) 157 (144-161) >0,05
ДАД, мм рт. ст. 88 (83-99) 87 (88-102) 92 (87-103) >0,05
ХС ЛПВП, ммоль/л 1,10 (0,96-1,22) 1,12 (0,92-1,27) 0,99 (0,86-1,14) >0,05
ХС ЛПНП, ммоль/л 2,90 (2,45-3,32) 2,69 (2,25-3,66) 2,83 (2,30-3,75) - >0,05
ТГ, ммоль/л 2,47 (1,84-2,96) 2,84 (2,12-3,35) 2,72 (2,42-3,36) - >0,05
MTR А2756G
Генотип (п; %) А/А (28; 47,5) А^ (27; 45,8) G/G (4; 6,7)
Возраст, годы 55 (48-66) 50 (43-61) 47 (44-59) - >0,05
Курение, п 5,24 >0,05
да 19 25 3
нет 9 2 1
ИМТ, п 0,65 >0,05
17,0-29,9 кг/м2 13 12 1
>30,0 кг/м2 15 15 3
Семейный анамнез АГ, п 1,09 >0,05
имеется 19 15 2
отсутствует 9 12 2
Семейный анамнез ССЗ, п 1,16 >0,05
имеется 13 14 3
отсутствует 15 13 1
Возраст дебюта АГ, годы 51 (46-58) 45 (39-52) 41 (40-44) - Р1 = 0,02 Р1 = 0,8
Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 499 (437-545) 513 (422-610) 541 (475-607) - >0,05
Уровень МК мочи, мкмоль/л 3892 (3247-4590) 4367 (3109-4808) 3856 (3399-4109) - >0,05
САД, мм рт. ст. 157 (153-165) 161 (156-162) 161 (153-165) - >0,05
ДАД, мм рт. ст. 89 (84-97) 87 (87-102) 91 (87-102) - >0,05
ХС ЛПВП, ммоль/л 1,18 (1,06-1,34) 1,02 (0,93-1,18) 0,99 (0,94-1,01) - >0,05
ХС ЛПНП, ммоль/л 3,12 (2,50-3,50) 2,86 (2,10-3,25) 2,93 (2,47-3,61) - >0,05
ТГ, ммоль/л 2,41 (1,95-3,14) 2,60 (2,03-3,37) 2,10 (1,83-2,98) - >0,05
Результаты исследований
Таблица 4. Окончание
Клинические характеристики SNP X2 р
MTRR A66G
Генотип (п; %) A/A (11; 18,6) A/G (27; 45,8) G/G (21; 35,6)
Возраст, годы 50 (47-65) 51 (44-65) 56 (45-63) - >0,05
Курение, п 1,02 >0,05
да 9 20 18
нет 2 7 3
ИМТ, п 2,84 >0,05
17,0-29,9 кг/м2 3 11 12
>30,0 кг/м2 8 16 9
Семейный анамнез АГ, п 0,80 >0,05
имеется 8 16 12
отсутствует 3 11 9
Семейный анамнез ССЗ, п 0,54 >0,05
имеется 5 13 12
отсутствует 6 14 9
Возраст дебюта АГ, годы 45 (40-53) 47 (40-56) 49 (44-56) - p1 = 0,28 P2= 0,37
Уровень МК сыворотки крови, мкмоль/л 494 (457-572) 499 (401-594) 507 (490-623) - >0,05
Уровень МК мочи, мкмоль/л 4079 (2984-5030) 3830 (3199-4711) 4469 (3499-4883) - >0,05
САД, мм рт. ст. 157 (147-166) 162 (142-164) 159 (146-168) - >0,05
ДАД, мм рт. ст. 91 (87-94) 90 (88-101) 95 (92-102) - >0,05
ХС ЛПВП, ммоль/л 1,20 (1,05-1,28) 1,07 (0,96-1,20) 1,11 (0,82-1,19) - >0,05
ХС ЛПНП, ммоль/л 2,68 (2,30-2,95) 2,75 (2,15-3,20) 3,10 (2,43-3,85) - >0,05
ТГ, ммоль/л 2,60 (1,58-2,78) 2,72 (2,25-3,30) 2,51 (1,91-3,20) - >0,05
Обозначения: ДАД - диастолическое АД, ИМТ - индекс массы тела, САД - систолическое АД, ХС ЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности, ХС ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности, ТГ - триглицериды, р1 -уровень статистической значимости различий между группами рецессивных и доминантных гомозигот; р2 - уровень статистической значимости различий между группами рецессивных гомозигот и гетерозигот.
Частоты аллелей и генотипов генов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G, MTRR A66G у больных подагрой мужского пола с АГ и нормальным АД соответствовали теоретически ожидаемому равновесию Харди—Вайнберга (p > 0,05).
Артериальная гипертония I степени диагностирована у 64,4% больных (n = 38), II степени — у 20,3% (n = 12), III степени — у 15,3% (n = 9). Когорты больных с разными полиморфными вариантами генов
фолатного цикла MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G, MTRR A66G были сопоставимы по возрасту и традиционным факторам риска ССЗ (дислипидемия, избыточная масса тела и ожирение, курение, наследственность).
По результатам исследования установлена положительная корреляционная взаимосвязь между разными генотипами полиморфного локуса С677Т гена MTHFR и уровнем МК сыворотки крови
ШЁШщёШ
Подагра
(r = 0,21; р = 0,026). У носителей минорных гомозигот полиморфного локуса С677Т гена MTHFR отмечался статистически значимо более высокий уровень МК сыворотки крови по сравнению с нормальными гомозиготами и гетерозиготами (623,95 против 491,5 и 499,5 мкмоль/л соответственно; p < 0,05).
Пациенты с подагрой, не имевшие АГ (n = 10), были сопоставимы по полу, возрасту и традиционным факторам сердечно-сосудистого риска с группой больных подагрой, имевших АГ.
В ходе проведенного анализа не получено статистически значимых различий в распределении аллелей и генотипов SNP генов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G, MTRR A66G в группах больных подагрой с АГ и нормальным АД (табл. 3).
В группе больных подагрой с АГ не обнаружено статистически значимых различий в распределении гетерозигот, нормальных и мутантных гомозигот изучаемых полиморфных локусов генов фолатного цикла в зависимости от степени повышения АД. Однако установлено, что в группе гомозигот по минорному аллелю SNP гена MTHFR С677Т дебют АГ отмечался в более раннем возрасте (42 (39—45) года) по сравнению с носителями гомозиготного по доминантному аллелю и гетерозиготного генотипов (50 (46-57) лет (p = 0,0019) и 49 (40-57) лет (p = 0,018) соответственно). Аналогичные данные получены у носителей генотипа G/G гена MTHFR А1298G (40 (40-40) лет) по сравнению с доминантными гомозиготами и гетерозиготами (50 (41-57) лет (p = 0,0008) и 47 (45-52) лет (p = 0,001) соответственно) и в группе минорных гомозигот SNP гена MTR А2756G (41 (40-44) год) по сравнению с носителями гомозиготного по доминантному аллелю генотипа (51 (46-58) год (p = 0,02)) (табл. 4).
Обсуждение
Фолатный цикл представляет собой важное звено первичного метаболизма клетки
и контролируется ферментами, использующими в качестве коферментов производные фолиевой кислоты. В этом цикле осуществляются метаболизм гомоцистеина (ГЦ), доставка одноуглеродных фрагментов для регенерации метионина, биосинтеза пуриновых нуклеотидов и превращения уридинмонофосфата в тимидилат, метилирования ДНК и РНК [7].
Причинами нарушений метаболизма фолатов являются генетические полиморфизмы основных ферментов, регулирующих процесс, - MTHFR, MTR и MTRR, а также дефицит фолиевой кислоты, витаминов В6 и В12. Нарушения функции ферментов, метаболизирующих ГЦ, приводят к его накоплению в клетках и повышению его уровня в плазме. Гомоцистеин обладает выраженным токсическим, атероген-ным и тромбофилическим действием, что обусловливает повышенный риск развития ССЗ (ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, атеросклероз, инсульт) и патологии системы гемостаза [7]. В то же время нарушения метаболизма фолиевой кислоты сопровождаются нарушениями в системах синтеза нуклеотидов, репарации и метилирования ДНК, что вызывает дестабилизацию генома и нарушение хромосомной сегрегации, что, в свою очередь, может приводить к нарушениям метаболизма пуринов и развитию подагры [7, 8].
С 1990-х годов зарубежными учеными проведено множество исследований по изучению SNP генов фолатного цикла, являющихся генетическими маркерами различных заболеваний. Большое количество исследований посвящено взаимосвязи полиморфизма генов фолатного цикла с кардиоваскулярной патологией. Однако их роль в развитии ГУ и подагры изучена только в ряде азиатских популяций и практически не освещена в отечественной литературе [5, 7, 8].
Ключевым ферментом фолатного цикла, регулирующим метаболизм реметили-рования ГЦ, является MTHFR. В настоя-Лечебное дело 2.2024
щее время в гене МТН¥Я выявлено 9 мутаций [8].
Ген МТН¥Я у человека расположен на коротком плече 1-й хромосомы (1р36.3). Наиболее изучены 2 полиморфных варианта гена МТН¥Я - с заменой цитозина (С) на тимидин (Т) в позиции 677 (данный полиморфизм обозначается как мутация С677Т) и с заменой нуклеотида аденина (А) на ци-тозин (С) в позиции 1298 (мутация А1298С) [7]. У лиц, гомозиготных по 1-му варианту (минорный генотип Т/Т), фермент MTHFR термолабилен и теряет свою активность примерно на 65%. К настоящему времени доказана ассоциация данного полиморфизма с сердечно-сосудистой патологией, дефектами развития плода, онкологическими заболеваниями. Согласно данным литературы, частота встречаемости генотипов этого полиморфизма в популяции составляет: для минорных гомозигот Т/Т - 10-16% в европейской популяции, до 19% в популяции японцев и 26,5% среди китайцев, для гетерозигот - в среднем до 56% в разных популяционных группах. В большинстве популяций преобладает гетерозиготный генотип (С/Т) [9]. В нашем исследовании частота встречаемости минорных гомозигот SNP гена МТН¥Я С677Т среди пациентов с подагрой русской этнической принадлежности, проживающих в Забайкальском крае, составила 21,2%.
У минорных гомозигот второго полиморфного варианта гена МТН¥Я активность фермента снижена до 60% от нормы. В отличие от предыдущей мутации ни у гетерозигот, ни у минорных гомозигот это не приводит к повышению уровня ГЦ в сыворотке крови и изменению уровня фолие-вой кислоты. Тем не менее одновременное носительство гетерозигот по 2 мутациям гена МТН¥Я сопровождается снижением активности фермента, повышением концентрации ГЦ в плазме крови и снижением уровня фолата аналогично гомозиготности по полиморфному варианту МТН¥Я С677Т [5]. Частота встречаемости разных генотипов данного SNP в большинстве популя-
ций: С/С - 3-13%, А/С - 45-55%. Преобладающий генотип указанного SNP среди больных подагрой в нашей выборке - A/A (53,8%), частота гетерозигот составила 41,2%, минорных гомозигот - 5%, что соответствует общепопуляционным данным литературы [8, 10].
Гипергомоцистеинемия может быть связана не только с генетическими, но и с внешними факторами. В ряде исследований установлена положительная корреляционная взаимосвязь между уровнями ГЦ, МК и кофеина в крови у пациентов с атеросклерозом, причем более сильная связь установлена у мужчин старшей возрастной категории [11].
Немногочисленные работы, проведенные преимущественно в выборках азиатских популяций, описывают взаимосвязь мутации гена MTHFR C677T с метаболизмом МК.
S. Itou et al. доказана взаимосвязь между мутацией гена MTHFR и ГУ в группе японских мужчин 39 лет и старше. Исследователями подтверждена гипотеза, что ГУ связана с полиморфизмами генов MTHFR С677Т и тимидилатсинтазы (TS). Не было получено ассоциации между нормальным уровнем МК и различными генотипами MTHFR и TS. Однако выявлена значительная ассоциация между ГУ (уровень МК сыворотки крови 7 мг/дл и более) и генотипами MTHFR С677Т [12].
В исследовании M. Zuo et al., также проведенном в японской популяции, ге-нотипирован 271 пациент мужского пола в возрасте от 40 до 79 лет. Средние уровни МК для носителей генотипов C/C, C/T и Т/Т составили 5,67; 6,00 и 6,39 мг/дл соответственно (р = 0,012). Установлено, что генотип T/T чаще встречался в группе пациентов с более высоким уровнем МК (р = 0,038). Авторы данной работы одними из первых высказали предположение о роли полиморфизма MTHFR C677T в развитии ГУ у пожилых пациентов мужского пола [13].
ШЁШщёШ
Подагра
Аналогичные данные описаны Y.S. Hong et al. Результаты исследования показали, что мутация гена MTHFR может быть фактором риска ГУ у пожилых корейцев. В исследование были включены 327 мужчин в возрасте от 40 до 81 года. Средний уровень МК у пациентов с генотипами C/C, C/T и T/T составил 5,54; 5,91 и 6,33 мг/дл (p = 0,000), причем у респондентов с высоким уровнем МК сыворотки крови преобладающим явился генотип T/T (p = 0,003) [14].
Данные о взаимосвязи мутаций генов MTR и MTRR с метаболизмом МК сыворотки крови в доступной литературе нами не найдены.
Несмотря на установленный факт, что мутация гена MTHFR С677Т является фактором риска развития ГУ и подагры (особенно у пациентов мужского пола), молекулярные механизмы данной взаимосвязи до сих пор остаются не до конца ясными.
Изучению полиморфизма гена MTHFR C677T и его ассоциации с наличием и тяжестью эссенциальной АГ посвящены многочисленные работы исследователей азиатского региона. Так, J. Song et al. в своей работе показали, что ключевой фермент фолатного цикла MTHFR (полиморфизм C677T) тесно связан с возникновением АГ у представителей популяции Северного Китая. В исследовании приняло участие 985 респондентов, из них отобрано 306 человек с эссенциальной АГ. Частоты генотипов С/С, С/Т и Т/Т составили 19,50; 49,95 и 30,46% соответственно, частота мутантного аллеля Т в группе пациентов с АГ — 55,43%. Уровень ГЦ в плазме у минорных гомозигот был статистически значимо выше в сравнении с нормальными гомозиготами и гетерозиготами. Также доказано, что генетические факторы наравне с внешне-средовыми (курение, семейный анамнез, дислипидемия) являются независимыми предикторами риска развития и тяжести течения АГ [15].
Аналогичную взаимосвязь указанного полиморфизма с развитием АГ в популяциях стран Европы и Азии (за исключени-
ем японской подгруппы) продемонстрировал метаанализ K.M. Yang et al., включавший 5418 пациентов с АГ и 4997 здоровых лиц [4].
В последние годы появились данные по изучению SNP генов фолатного цикла и у представителей африканских популяций. Изучение связи между полиморфизмом MTHFR C677T и эссенциальной АГ у камерунской популяции (этническая группа банту) Юго-Западного региона показало, что не только возраст, уровень холестерина липопротеидов низкой плотности, общего холестерина сыворотки и тригли-церидов, но и замена тимина на цитозин в положении 667 гена MTHFR являются независимыми факторами риска развития эссенциальной АГ. Аналогично вышеуказанным исследованиям было показано, что минорный аллель Т данного SNP является предиктором АГ [16]. Исследователями из Марокко также установлено, что у носителей минорных гомозигот SNP С677Т гена MTHFR риск развития эссенциальной АГ в 5 раз выше, чем у гомозигот по мажорному аллелю [17].
Среди работ, посвященных изучению полиморфизма генов фолатного цикла, проведенных в выборках европейских популяций, обращает на себя внимание мо-лекулярно-генетическое исследование О.С. Павловой и соавт. На респондентах белорусской популяции показано, что но-сительство мутантного генотипа Т/Т полиморфизма C677T гена MTHFR ассоциировано с более ранним дебютом эссен-циальной АГ у пациентов моложе 45 лет, преимущественно у мужчин, страдающих ожирением [18].
Доказана ассоциация полиморфизма гена MTHFR C677T c повышенным риском развития ишемического инсульта. S. Jiang et al. установлено, что носители гомозигот по минорному аллелю SNP гена MTHFR C677T с АГ в анамнезе имели более чем 10-кратный риск развития инсульта в течение ближайших 6 лет [19].
Метаанализ, включавший 14 607 респондентов, также показал более высокий риск развития ишемического инсульта у носителей минорных гомозигот SNP гена MTHFR C677T среди представителей как европейских, так и азиатских популяций [20].
В других многочисленных исследованиях установлена не только взаимосвязь SNP гена MTHFR C677T, гипергомоцистеине-мии и АГ, но и их синергизм в отношении развития атеросклероза и сердечно-сосудистых осложнений [21, 22].
В настоящей работе установлена взаимосвязь SNP генов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G как с развитием подагрического артрита, так и с более ранним дебютом АГ в группе респондентов мужского пола с подагрой. Полученные данные могут являться еще одним доказательством существования множества патогенетических взаимосвязей между ГУ, подагрой и сердечно-сосудистой патологией.
Заключение
Статистически значимых различий в распределении аллелей и генотипов SNP генов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G,
MTR A2756G, MTRR A66G в группах мужчин с подагрой с АГ и без АГ получено не было. Однако установлено, что у гомозигот по минорному аллею SNP генов MTHFR С677Т, MTHFR A1298G, MTR A2756G АГ дебютирует в более раннем возрасте.
В связи с тем, что наличие подагры ассоциировано с высоким риском АГ через механизмы влияния ГУ, определение молекулярно-генетических предикторов, способствующих формированию АГ у этой когорты больных, представляет интерес для дальнейших исследований. Необходимо проведение проспективных исследований в больших по объему выборках, которые позволят выявить новые предикторы и механизмы развития АГ у больных подагрой и определят персонифицированный подход в профилактике сердечно-сосудистых осложнений у больных подагрическим артритом.
Конфликт интересов. Все авторы заявляют об отсутствии потенциального конфликта интересов.
Со списком литературы вы можете ознакомиться на нашем сайте www.atmosphere-ph.ru
Association of Folate Cycle Gene Polymorphisms with Early-onset Hypertension in Patients with Gout M.Yu. Mishko, N.N. Kushnarenko, T.A. Medvedeva, T.M. Karavaeva, and N.A. Miromanova
The aim of this study was to explore the association of polymorphisms in folate cycle genes with the development of hypertension (HT) in patients with gout in the Russian population of Trans-Baikal Territory. The total of 80 patients with gout were examined (male to female ratio of 6.3 : 1), the median age was 54 (45—65) years. The diagnosis of gout was made according to 2015 American College of Rheumatology/European Alliance of Associations for Rheumatology classification criteria. All patients were genotyped to detect polymorphisms of folate cycle genes (MTHFR C677T, MTHFR A1298C, MTR A2756G, and MTRR A66G). To assess the association of genotypes and alleles with gout, odds ratios were calculated with a 95% confidence interval. The group of male patients with gout was divided into 2 subgroups: with HT (n = 59) and without HT (n = 10) comparable in cardiovascular risk factors. Male patients with gout carrying T/T genotype MTHFR C677T and G/G genotype MTHFR A1298G single nucleotide polymorphisms (SNP) homozygous for one minor allele had the onset of HT at an earlier age compared to individuals homozygous for the major allele and with heterozygous genotypes. Similar data were obtained for recessive homozygotes of MTR A2756G SNP gene compared with dominant homozygotes. Our study indicated the involvement of polymorphisms in folate cycle genes not only in the development of gouty arthritis, but also in HT in this cohort of patients. The use of genetic markers is perspective for personalized prevention of cardiovascular diseases in patients with gout.
Key words: gout, uric acid, genetic polymorphism, folate cycle, MTHFR, MTR, MTRR, hypertension.
