CC BY
20
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
с заболеваниями урогенитального тракта. У 60,2% пациентов диагностирована латентная ГВИ без нарушений иммунного статуса. Хронический рецидивирующий характер с нарушениями иммунорегу-ляторной функции Т-лимфоцитов и фагоцитарной активности мононуклеарных клеток носило заболевание у 7,7% больных. Именно в этой группе больных (72 человека) была дана оценка эффективности лечения противовирусными препаратами в комплексе с иммунотерапией ферровиром. По результатам иммунологического исследования, у 56,9% этих пациентов наблюдался выраженный иммуномодулирую-щий эффект: восстановление зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов, числа фагоцитирующих клеток. В 85% случаев длительность межрецидивного периода увеличивалась в 2,5—3 раза, с ослаблением клинических симптомов рецидива ГВИ. Побочных эффектов от проводимого лечения не наблюдалось. Отмечалось также улучшение общего состояния организма и повышение жизненного тонуса.
Таким образом, использование в клинической практике испытанных алгоритмов диагностики и лечения ГВИ позволили получить оптимальный результат и улучшить качество жизни пациентов.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ В СИСТЕМЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ
М.Н. Прадед1, Т.С. Селезнева1, С.В. Малинина2, Н.В. Бирюлева2, Т.Е. Любимова2, Р.А. Панферова3, С.Б. Яцышина1
ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора», Москва; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в ВАО г. Москвы; ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в СЗАО г. Москвы
Вакцинация против коклюша входит в национальные календари прививок большинства стран мира, однако, цель, поставленная ВОЗ — сократить заболеваемость коклюшной инфекцией к 2010 г. до уровня менее 1 случая на 100 тыс. населения, не достигнута ни в одной стране. В РФ за 2008—2011 гг. заболеваемость регистрируется на уровне 2,5—3,8 на 100 тыс. населения, однако, можно предположить, что эти данные существенно занижены. Возможными причинами сохранения неблагоприятной ситуации являются недостатки в лабораторной диагностике коклюша, что выражается в неизвестности истинной распространенности возбудителя среди населения, низком проценте установления источников инфекции, составившем в 2011 г. лишь 11,6% случаев, и связано с отсутствием разрешенных для применения в РФ эффективных и доступных средств быстрой лабораторной диагностики. Не менее важной проблемой являются недостаточный охват прививками, несоблюдение календаря прививок, а также вероятное несоответствие по антигенному спектру вакцинных и современных штаммов. В пользу последнего предположения говорят снижение напряженности иммунитета в отношении коклюша и вовлечение в эпидемический процесс привитых детей, подростков и взрослых. С целью оптимизации лабораторной диагностики в ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора разработан и поставлен на производство набор реагентов «АмплиСенс Bordetella multi-FL», предназначенный для выявления и дифференциации ДНК возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза в биоло-
гическом материале методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Проведены приемочно-технические и клинические испытания набора реагентов. Как было показано на этапе апробации в ФБУЗ ЦГиЭ ВАО г. Москвы при обследовании 364 детей с анамнезом, не исключающем коклюшную инфекцию, диагностическая чувствительность разработанного набора реагентов оказалась в 16 раз выше по сравнению с чувствительностью стандартного бактериологического исследования (17,6 и 1,1% соответственно) при 100% специфичности. ДНК возбудителей коклюшной инфекции (B. pertussis в 52 (14,3%) образцах, ДНК B. parapertussis — в 4 образцах; в 8 образцах видовая принадлежность возбудителя не могла быть уточнена по причине недостаточного содержания микроорганизма в клиническом материале) обнаруживалась с первых дней и до 18 дня болезни. Высокая аналитическая чувствительность набора реагентов (500—1000 ГЭ в 1 мл исследуемого материала) позволит повысить процент установления источников инфекции при работе в очагах и скрининге носителей. С целью изучения антигенных различий современных изо-лятов B. pertussis в сравнении с вакцинными штаммами проведен анализ с помощью MAST (multiple antigen sequence typing) с изучением 3х генов (ptxP, prn и tcfA) генома B. pertussis. Исследованы 3 штамма B. pertussis, использующиеся в вакцине АКДС (305, серовар 1,2.0, выделен в 1957г; 267, серовар 1,0.3 выделен в 1967 г.; и 475, серовар 1,2.3 выделен в 1966г), 29 штаммов (из коллекции ФБУН ЦНИИЭ), выделенные с 1975 по 1998 гг и 33 изолята (серовар 1,0.3.), выделенные в ФБУЗ ЦГиЭ СЗАО за 2010-2011 гг. Результаты молекулярно-генетического анализа трех локусов, косвенно характеризующих антигенные свойства B. pertussis, показали наличие различий по двум локусам — ptxP и prn изолятов, выделенных с 2010 по 2011 гг. (аллели ptxP3, prn2), по сравнению с изолятами прошлых лет (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), включая вакцинные штаммы (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), что свидетельствует о произошедших изменениях антигенных свойств B. pertussis за время применения вакцинации. При этом результаты изучения напряженности иммунитета к каждому из вакцинных штаммов B. pertussis, полученные при исследовании 100 сывороток от привитых в срок и не болевших коклюшем детей 5-7 лет свидетельствуют об эффективности вакцины: защитные титры (1:160-1:5120) к штамму 267 имели 77% детей, к штамму 305 — 42% детей, к штамму 475 — 40% детей.
АССОЦИАТИВНЫЙ МИКРОБНЫЙ СИМБИОЗ ПОЛОВЫХ ПУТЕЙ ЖЕНЩИН
Т.Д. Примак
ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия, г. Чита
Заболеваемость инфекциями репродуктивного тракта за последние годы не имеет тенденции к снижению, при этом не всегда учитываются микробные ассоциации. Проведены количественные исследования резидентной микрофлоры и условно-патогенных микроорганизмов отделяемого цервикального канала. Обследовано 30 сексуально активных здоровых женщин в возрасте 18-25 лет, не имеющих урологических и гинекологических заболеваний, не болевших в течение 6 месяцев острыми инфекционными заболеваниями и не имеющих патологических измене-
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
ний в общих анализах крови, мочи и скрининговом ультразвуковом исследовании внутренних половых органов. Молекулярно-генетическая диагностика (ПЦР) позволила исключить среди обследованных лиц присутствие хламидийной, микоплазменной и уреаплазменной инфекций. Посевы инкубировали в аэробных и анаэробных условиях (10% СО2, 10% Н2, 80% N2) в течение 2—4 суток. При посевах отделяемого цервикального канала отмечалась 100% контаминация. Во всех пробах обнаруживались ассоциации микроорганизмов, которые состояли из пяти культур и более. Микрофлора цервикально-го канала женщин чаще всего содержала анаэробные грамположительные палочки рода Lactobacillus spp., — 97,7% (29), Peptostreptococcus spp. — 40% (12), Bifidobacterium spp. — 36,7% (11) и Bacteroides spp. — 16,7% (5). У большинства женщин были обнаружены грибы рода Candida spр. — 93% (28) и E. coli в следующих вариациях: нормоферментативная — 36,7% (11), низкоферментативная — 20% (6) и гемолитическая — 13% (4). Из аэробных микроорганизмов чаще выделялась грамположительная микрофлора, которая была представлена КОС (коагулазоотрицатель-ными стафилококками), энтерококками и штаммами Corynebacterium spp. — 10% (3). Среди КОС были выделены S. saprophyticus — 53,3% (16), S. albus — 13,3% (4), S. haemolyticus — 10,0% (3), S. epidermidis — 13,3% (4). Из рода энтерококков идентифицированы E. faecium — 23,3% (7), E. faecalis — 20,0% (6). В единичных случаях были выделены Proteus mirabilis, S. aureus, Klebsiella oxytoca, Citrobacter diversus. Наиболее частыми были ассоциации микроорганизмов: Lactobacillus spp. + Bifidobacterium spp. + КОС + E. coli + Candida spp.; Lactobacillus spp. + Enterococcus spp. + КОС + E. coli + Candida spp. Общее колонизационное число микробиоты цервикального канала составило 105—108 КОЕ/мл. Наибольшее микробное число отмечалось у бактерий рода Lactobacillus spp. — 105—107 КОЕ/мл и Bifidobacterium spp. — 105-106 КОЕ/ мл. Микробное число других микроорганизмов не превышало 103—104 КОЕ/мл. Таким образом, у здоровых сексуально активных молодых женщин в норме в цервикальном канале обнаруживаются аэробно-анаэробные ассоциации, имеющие по всей вероятности сложные меж- и внутривидовые взаимоотношения компонентов данного микробного биотопа.
ВЫДЕЛЕНИЕ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ А В ДЕТСКОЙ БОЛЬНИЦЕ г. КОЛПИНО
О.Е. Пунченко1, С.Е. Морозова2
'ГБОУВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург; 2Детская городская больница № 22, Санкт-Петербург
В настоящее время ежегодно регистрируется 6—8 млн случаев респираторных стрептококковых инфекций. Чаще всего этиологическим фактором являются стрептококки серологической группы А. Но только заболевания, вызванные Streptococcus pyogenes, характеризуются развитием постстрептококковых аутоиммунных (ревматизм, гломеру-лонефрит) и токсико-септических (некротические фасциит и миозит, синдром токсического шока, метатонзиллярный и перитонзиллярный абсцессы) осложнений. Поэтому своевременная дифференциация S. pyogenes от других видов стрептококков, обладающих антигеном группы А, чрезвычайно важна для профилактики отдаленных последствий.
За 2011 год в бактериологическую лабораторию ДГБ № 22 поступило 817 образцов материала для исследования на S. pyogenes от детей в возрасте от 0,5 до 17 лет, находящихся на лечении в стационаре. Материал забирали и транспортировали в соответствии с МУ 4.2.2039-05, МУ 3.1.1885-04. Для диагностики стрептококковой инфекции использовали схему, предложенную Американской Академией Педиатрии. В качестве экспресс-метода использовали латекс агглютинацию PathoDx Strep A Kit (Oxoid, UK) для выявления стрептококков группы А. Первичный посев материала проводили на кровяной агар для оценки гемолитической активности. Культуры микроорганизмов с ß-гемолитической активностью исследовали для определения серо-группы, а также определяли у них чувствительность к бацитрацину (диск 0,04 ЕД) и наличие фермента L-пиродонилариламидазы (PYR диск).
Стрептококки были выделены из 86 (10,5%) образцов. При этом стрептококки группы А составили 81% (70 образцов), группы В — 17% (15 образцов). Чаще всего при обнаружении стрептококков группы А детям ставился первичный диагноз «ОРЗ» (40%). У 40% детей, проходящих лечение в хирургическом и инфекционном отделениях, было выявлено но-сительство в титрах более 105 КОЕ. Пик заболеваний зарегистрирован в октябре — 31 случай (44%). При дифференциации стрептококков внутри серологической группы S. pyogenes был подтвержден в 40 случаях, что составило 57% от стрептококков группы А и 46,5% от всех выделенных стрептококков.
Таким образом, экспресс-метод идентификации стрептококков группы А имеет ориентировочное значение и не заменяет посев материала на плотные среды и дальнейшую дифференцировку внутри группы.
МЕТИОНИН-ГАММА-ЛИАЗА - ПОТЕНЦИАЛЬНАЯ МИШЕНЬ ДЛЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ СРЕДСТВ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ
С.В. Ревтович1, Е.А. Морозова1, Н.В. Ануфриева1, М.И. Котлов2, Т.В. Демидкина1, Ю.Ф. Белый2
1ФГБУ «Институт молекулярной биологии
им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва; 2ФГБУ«НИИЭМ
им. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития РФ, Москва
Метионин-гамма-лиаза (КФ 4,4.1,11, МГЛ) принимает участие в метаболизме серосодержащих аминокислот у многих патогенных бактерий. В связи с тем, что данный фермент отсутствует у млекопитающих, МГЛ может служить мишенью для новых антибактериальных средств, созданных на основе его ингибиторов и/или суицидальных субстратов. Нами был проведен поиск и анализ аминокислотных последовательностей, аннотированных как «МГЛ» в базах данных бактерий, вызывающих инфекционные заболевания человека. Для дальнейшей работы была выбрана предполагаемые МГЛ Clostridium difficile (возбудитель антибиотико-ассоциированных диарей и псевдомембранозного колита), C. tetani (возбудитель столбняка), Brucella melitensis (возбудитель бруцеллеза), Porphyromonas gingivalis (возбудитель агрессивного пародонти-та) и C. sporogenes (возбудитель газовой гангрены). Гены указанных белков были клонированы и экс-прессированы в клетках Escherichia coli, получены гомогенные препараты ферментов, проверена их реакционная специфичность и определены кинетические свойства. Показано, что лишь фермен-
