CC BY
43
УДК 576.858.097.22:615.28
Мартинов А.В., доктор фарм. наук, професор 1нститут мкробюлогИ та iмунологп ¡м. ИМечнжова АМН Украгни (м. Харюв); *
Бабкмна М.М., астрант** 1нститут ветеринарног медицини НААНУ (м. Кигв);
Жейнова Н.М., кандидат вет. наук © Харювська обласна асоЦаця птахiвничог промисловостi „Харювптахопром"
АНТИВ1РУСНА АКТИВН1СТЬ АЛЬБУВ1РУ НА МОДЕЛЯХ В1РУСУ ВЕЗИКУЛЯРНОГО СТОМАТИТУ ТА В1РУСУ ГЕРПЕСУ ЛЮДИНИ 1
ТИПУ IN VITRO
У статтi наведем результати до^дження противiрусних властивостей iнгiбiтора адгезп вiрусiв - нового ветеринарного препарату Альбувiр. Показана висока антивiрусна активнсть як на моделi вiрусу везикулярного стоматиту, так i вiрусу герпесу 1 типу. Обробка культури клтин Альбувiром до внесення вiрусу захищае рецептори клтин вiд адгезп на них ВВС та ВПГ1, доповнюе мехашзм гальмування iмпортинiв гальмуванням адгезИ вiрусiв. Показано високе значення хiмiотерапевтичного тдексу для Альбувiру, а саме 50, що тдтверджуе низьку токсичшсть препарату.
Ключоei слова: Альбувiр, вiруси, везикулярний стоматит, вiрус герпесу, токсичшсть, iмпортини.
Вступ. В останнш час був розроблений ушкальний за сво!ми властивостями антив1русний заЫб Альбув1р. Препарат являе собою композищю кислих пептид1в, здатних до самооргашзаци та самоадаптацп в оргашзм^ мехашзм яких базуеться на блокад! пептид1в ядерного 1мпорту/експорту i не дозволяють 1мпортшам з в1русним геномом перетнути ядерну мембрану чи вийти з ядра фрагментам вiрiону. Ефект вщ препарату спостер^аеться вже через 20 хвилин тсля застосування [1]. До препарату неможлива адаптащя з боку вiрусу i оргашзму тварини у зв'язку з тим, що вш е квазiживою системою i його композитний фармакофор е ушкальним для кожно! тварини та вiрусу. Особливо ефективний цей препарат при лшуванш захворювань, викликаних вiрусами, що швидко розмножуються: парамiксовiрус, ортомiксовiрус i бiрнавiрус (грип, хвороба Ньюкасла, шфекцшний ларинготрахе!т, хвороба Марека та ш.). Препарат не мае антимжробно! та iмунотропноl властивостей. Вiдповiдно, перед застосуванням препарату обов'язково необхщно встановлювати етiологiчний фактор захворювання i не застосовувати препарат при мжробних захворюваннях або слiд комбiнувати його з антибютиками. Застосування ж Альбувiру з раннього в^ у тварин виключае мшробну контамiнацiю завдяки вiдновленню ураженого латентними вiрусами iмунiтету тварин. Крiм того, вiдносно низький клiренс (4 години) i вiдсутнiсть кумулятивних властивостей сприяють пiдвищенню якостi м'яса тварин, молока та шшо! продукцп, тому
© Мартинов А.В., Бабшна М.М., Жейнова Н.М., 2011
181
що препарат вже через 8 годин у м'яс неможливо буде виявити. Введення препарату в схеми вирощування птищ може сприяти виключенню з рацюну антибютиюв групи фторхшолошв i тетрациклмв, оскшьки реабiлiтований iмунiтет тварин буде в 3M03Í самостiйно справлятися з бактерiальними iнфекцiями [2].
Метою нашого дослщження було вивчення противiрусних властивостей Альбувiру на моделях цитопатичних вiрусiв ссавщв in vitro.
Матер1али i методи. У сво!х дослщженнях ми використовували антивiрусний зааб Альбувiр (АЛЬ) виробництва НВП „АгроВет" м. Харкiв та як контрольний референт-стандарт - ацикловiр (АЦК) сухий (Fluka, США).
Вiруси: як тест-вiруси використовували вiрус везикулярного стоматиту (ВВС), штам Indiana, який належить до родини Rabdoviridae та штам Л-2 вiрусу герпесу людини 1 типу (ВПГ1), наданий для дослщжень inKiK НАН Укра!ни. 1нфекцшний титр ВВС в культурi кл^ин Vero складав 6,5-7,0 ТЦД5о/о,1мл, а ВПГ1 - 5,5-6,6 ТЦД50/0,1 мл.
Kлiтини: використовували перещеплювану лiнiю кл^ин Vero. Культивування проводили за стандартною методикою [3] на одноразових культуральних планшетах.
Статистичну обробку отриманих даних проводили з використанням критерив Ст'юдента та Мейнелла.
Результати дослщження. Перед тим як вивчати антивiрусну дш, встановлювали максимально переносиму концентрацiю (МПК) для дослiдженого засобу.
Препарати брали в концентращях 0,005; 0,05; 0,5; 5 та 50 мкг/мл. Для кожно! концентраци препаратiв використовували не менш 10 лунок з культурою кл^ин. Як контрольнi були лунки, в як не додавали препараив. Нагляд вели протягом 7-8 дiб. За МПК приймали ту концентрацш препарату, яка не приводила до розвитку ЦПД (цитопаично! ди). Встановлено, що вс дослiдженi препарати мали МПК 50 мкг/мл. Тому в подальших дослiдах вивчалася противiрусна дiя препаратiв в дозах 0,05; 0,5; 5 мкг/мл.
На пiдставi л^ературних даних, зокрема робiт Schoen P. [4], який вивчав полiанiоннi бшки, нами була використана методика обробки кл^ин препаратами за 1 годину до внесення робочо! дози тест^русу. Модифiкацiя стандартного методу вивчення профшактично! антивiрусноl ди речовин полягала в тому, що дослщний препарат не зливався перед внесенням вiрусу, а залишався у культурi клiтин. Це необхщно для встановлення залежностi мiж зменшенням концентраци препарату при його поглинанш клiтинами та противiрусною дieю. В дослiдi передбачалися два контроле контроль культури клiтин та контроль дп вiрусу без внесення препараив.
Облiк результатiв проводили через 48-72 години при наявност 70-80% ЦПД в контролi вiрусу.
За мшмальну активну концентрацiю приймали ту мшмальну дозу препарату, що стримуе цитопатичний ефект вiрусу на 75%. Результати порiвняння МАК представленi на рис. 1. та рис. 2.
100 -,
□ 0,05
□ 0,5
□ 5
АЦК контроль АЛЬ КК КВ препарат
Рисунок 1. МПшмальш активш концентрацп дослщних речовин (АЦК-ациклов1р, контроль - контроль 0,9% розчнн натр1ю хлориду, АЛЬ-альбув1р, КК- контроль культури кштин, КВ - контроль вiрусу) на моделi ВВС
Рисунок 2. МПшмальш активш концентрацп дослщних речовин (АЦК-ациклов1р, контроль - контроль 0,9% розчин натр1ю хлориду, АЛЬ-альбув1р, КК- контроль культури кштин, КВ - контроль вiрусу) на моделi ВПГ1
Середня мiнiмальна активна концентращя для дослiдних речовин отримана слщуюча: для АЦК МАК=0,5 мкг/мл; для АЛЬ МАК=0,05 мкг/мл для обох вiрусiв.
Основною характеристикою противiрусноl дп препарату е хiмiотерапевтичний iндекс (ХТ1), що являе собою вiдношення мiж МПК та МАК. Для тдвищення надiйностi диференщаци антивiрусноl ди вщ токсичностi при визначеннi ХТ1 експериментально встановленi значення МПК занижують вдвiчi.
Таким чином, МПК для АЛЬ було розраховано як 2,5 мкг/мл. Для порiвняння МПК ремантадину 25-50 мкг/мл, ацикловiру - 800 мкг/мл, адамантану 100 мкг/мл [5].
ХТ1 для Альбувiру становив 50.
100
□ 0,05
□ 0,5
□ 5
АЦК контроль АЛЬ КК КВ препарат
При аналiзi отриманих результат можна сказати, що Альбувiр характеризуеться високою антивiрусною активнiстю щодо ВВС та ВПГ1.
Сильною вважаеться антивiрусна дiя препарату, якщо його ХТ1 дорiвнюе 8 та бшьше.
За лiтературними даними, ХТ1 вщносно ВВС для амантадину складае 1-2; для рiбавiрину 4-8 [5].
Висновки.
Отримаш результати дозволяють зробити висновок про значний антивiрусний ефект вiдносно ВВС та ВПГ1 у препарату Альбувiр.
Проведенi дослiдження вiдкривають перспективу для бшьш глибокого вивчення як спектру антивiрусноl активностi Альбувiру, так i механiзму його ди.
Лiтература
1. Кисличенко, В.С., Квазиживые самоорганизующиеся системы как перспективные лекарственные средств [Текст] / Кисличенко В.С., Мартынов А.В., Упыр Д.В. // Фармащя Укра!ни, Т.1. - 2010. - С. 277.
2. Авдосьева, И. К. Альбувир - первый и единственный антивирусный препарат при профилактике и лечении вирусных болезней животных и птицы [Текст] // Авдосьева И. К., Регенчук В. В., Мельничук И. Л., Басараб О. Б., Жейнова Н. Н., Мартинов А. В. // Ефективне птаивництво. - 2010.- № 7.- С.32-37.
3. Swart, P.J. Lactoferrin. Antiviral activity of lactoferrin [Text] /Swart P.J., Kuipers E.M., Smit C. // Adv. Exp. Med. Biol.- 1998.-Vol. 443.- P.205-213.
4. Schoen, P. Inhibition of influenza virus fusion by polyanionic proteins [Text] / Schoen P., Corver J., Meijer D.K. // Biochem. Pharmacol. - 1997.- Vol. 53. -№ 7. - P. 995-1003.
5. Первичное изучение антивирусных свойств синтетических и природных соединений // Методические рекомендации. - Минск. - 1986.
Summary
The results of antiviral properties' studies of the viral adhesion inhibitor, a new veterinary medicine Albuvir was presented. The Albuvir is show a high antiviral activity on a such model virus, as vesicular stomatitis and herpes simplex virus 1 type. Albuvir treatment of cell cultures before viruses added are results in all viral adhesion protection, complementing by viral adhesion the mechanism of importin 's inhibition. Shown the high value of the chemotherapeutic index of Albuvir - namely, 50, confirms that the low toxicity of the drug.
Key words: Albuvir, virus, vesicular stomatitis, herpes simplex virus, toxicity, importin.
Стаття надшшла до редакцИ 6.04.2011
