CC BY
76
АНТИТРОМБОЦИТАРНАЯ И АНТИТРОМБОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ФИТОЭСТРОГЕНОВ ЭКСТРАКТА СЕМЯН ЛЬНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОВАРИОЭКТОМИИ
А.М. Анищенко1, О.И. Алиев1, Т.М. Плотникова2, Н.В. Васильева2
1ФГБУ "НИИ фармакологии" СО РАМН, Томск 2ГБОУ ВПО "Сибирский государственный медицинский университет" Минздрава России, Томск
E-mail: mbp2001@mail.ru
ANTIPLATELET AND ANTITHROMBOGENIC ACTIVITY OF PHYTOESTROGENS OF FLAX SEED EXTRACT IN EXPERIMENTAL OVARIECTOMY
A.M. Anishchenko1, O.I. Aliev1, T.M. Plotnikova2, N.V. Vasileva2
federal State Budgetary Institution "Research Institute of Pharmacology" of Siberian Branch under the Russian Academy of Medical Sciences, Tomsk 2Siberian State Medical University, Tomsk
Показано, что экстракт семян льна при курсовом введении (40 мг/кг внутрижелудочно в течение 14 дней) предотвращал внутрисосудистое тромбообразование, инициированное аппликацией на сосуд 10%-го раствора хлорида
железа. У крыс после овариоэктомии экстракт семян льна повышал антиагрегантную активность сосудистой стенки и потенцировал эндотелийзависимую вазолилатацию.
Ключевые слова: овариоэктомия, экстракт семян льна, агрегация тромбоцитов, эндотелиальная дисфункция.
The study showed that the flax seed extract (p.o. 40 mg/kg daily for 14 days) prevented the development of intravascular carotid artery thrombosis induced by application of 10% FeCl2 solution on the vascular wall. In the ovariectomized rats, the flax seed extract increased the antiplatelet activity of the vascular wall (abdominal aorta) and potentiated the endothelium-mediated vasodilatation.
Key words: ovariectomy, flax seed extract, platelet aggregation, endothelial dysfunction.
Введение
Лечение климактерического синдрома является весьма актуальной медицинской и социально-экономической проблемой, поскольку в постменопаузальный период происходит увеличение частоты возникновения и тяжести сердечно-сосудистых заболеваний [5, 12]. Постменопаузальный синдром связан со снижением концентрации циркулирующих в крови эстрогенов. Для лечения синдрома дефицита эстрогенов, обусловленного искусственной или естественной менопаузой, применяют гормональную заместительную терапию (ГЗТ). Однако, учитывая повышенный риск индукции эстрогензависимого опухолевого процесса и наклонность к тромбозам при длительном применении гормонов [6, 8], успешной заменой ГЗТ, особенно для профилактики сердечно-сосудистых осложнений климактерического синдрома, могут быть фитоэстрогены - средства, содержащие в своем составе селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (изофлавоноиды, лигнаны) [7].
Цель работы: исследование антитромбоцитарной и антитромбогенной активности экстракта семян льна, содержащего лигнан секоизоларицирезинола диглюкозид, в условиях модели эстрогенной недостаточности.
Материал и методы
Опыты проводили на 43 крысах-самках Вистар массой 250-280 г. Исследование антитромбогенной, анти-тромбоцитарной активности и эндотелийпротекторных свойств экстракта семян льна (ЭСЛ) проводили на крысах после овариоэктомии. Удаление яичников у животных контрольной и опытной групп осуществляли под эфирным наркозом согласно общепринятой методике [2]. Исследования проводили в 3 сериях опытов, крысы каждой серии опытов были разделены на 3 группы: ложно-оперированные, контрольные и опытные животные. Крысы опытной группы получали стандартизированный ЭСЛ (содержащий 42% секоизоларицирезинола диглюкозида) ежедневно внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг в течение 2 недель, начиная с 8-х суток после моделирования овариоэктомии. Контрольные животные получали эквиобъем-ное количество 1%-й крахмальной слизи по той же схеме.
В первой серии опытов исследовали антитромбоген-ную активность ЭСЛ. Для этого через 1 ч после последнего введения препарата животных наркотизировали (уретан 1 г/кг, внутрибрюшинно), выделяли левую общую сонную артерию и воспроизводили модель внутрисосудис-того тромбоза аппликацией 10%-го раствора БеС12 на сосуд [3]. На сонную артерию накладывали манжеточный
датчик и регистрировали величину кровотока по сосуду с помощью электромагнитного расходомера крови MFV-1100 (Nihon Kohden, Япония). Отмечали уровень снижения и время полной остановки кровотока в стенозиро-ванном сосуде. Через сутки проводили эвтаназию животных передозировкой эфирного наркоза, осуществляли изъятие участка сосуда, на который накладывали раствор FeCl2, тромб выделяли и взвешивали.
Во второй серии экспериментов исследовали влияние ЭСЛ на антитромбоцитарную активность сосудистой стенки по методу В.П. Балуды и И.И. Деянова [1]. У животных под эфирным наркозом проводили забор сегмента брюшной аорты (масса сегмента 3,0±0,7 мг). Сосуд отмывали от крови и в течение 3 мин инкубировали в стандартизированной богатой тромбоцитами плазме (БТП), полученной от крыс-доноров, затем сосуд удаляли и регистрировали амплитуду агрегации тромбоцитов при добавлении к плазме аДф в концентрации 4х10-5 М.
В третьей серии опытов изучали влияние ЭСЛ на ва-зодилатационную активность эндотелия. Под наркозом (тиопентал-натрий, 50 мг/кг) у животных контрольной и опытной групп катетеризовали сонную артерию для регистрации артериального давления после болюсного внутривенного введения веществ, вызывающих эндотелийзависимую (ацетилхолин, 5 мкг/кг) и эндотелийне-зависимую (натрия нитропруссид, 30 мкг/кг) вазодила-тацию. Коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) оценивали как отношение площади над кривой снижения артериального давления при введении натрия нит-ропруссида к величине этого показателя при введении ацетилхолина.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ STATISTICA 8.0. Данные представлены в виде M±m, где M - среднее значение, m - стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Mann-Whitney U test. Статистически значимыми различия считались при р<0,05.
Результаты и обсуждение
У животных контрольной группы после воздействия на сосудистую стенку 10%-м раствором FeCl2 происходила полная остановка кровотока в сонной артерии в среднем через 20 мин. В стенозированных сосудах формировались тромбы, и через сутки после окклюзии средняя масса тромба составляла 0,5 мг (табл. 1). При курсовом введении животным ЭСЛ зафиксировано снижение кровотока на 28% от исходного значения к 90-й мин эксперимента. На следующие сутки в просвете сонных арте-
Сибирский медицинский журнал, 2013, Том 28, № 2
Таблица 1
Влияние ЭСЛ (40 мг/кг, внутрижелудочно в течение 14 дней) на показатели внутрисосудистого тромбообразования (М±т)
Группы животных Кровоток по сонной артерии, мл/мин Масса тромба через сутки, мг
Исходный кровоток через 90 мин
Контроль (п=6) 4,5±0,6 0,1±0,2* 0,50±0,07
Экстракт семян льна (п=7) 3,2±1,1 2,3±1,2+ 0
Примечание: *- р<0,05 по сравнению с исходными значениями; +- р<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.
Таблица 2
Влияние ЭСЛ на амплитуду агрегации тромбоцитов до и после инкубации сегмента брюшной аорты в стандартизированной БТП (%) и на коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД, отн. ед.) крыс после овариоэктомии (М±т)
Группы животных Амплитуда агрегации тромбоцитов КЭД
До инкубации После инкубации
Ложнооперированные (п=5) 22+1# 2,56+0,13
Овариоэктомия Контроль (п=5) 41+2 26+1* 3,12+0,17*
Экстракт семян льна (п=5) 22+1+ 2,48+0,07+
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями до инкубации с сегментами сосудов; *- р<0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; + - р<0,05 по сравнению со значениями в группе контроля.
рий у крыс этой группы тромбов не обнаружено, что свидетельствует о выраженной антитромбогенной активности исследуемого препарата.
Формирование тромба при воздействии хлорида железа на сосуд происходит в результате инициации процессов ПОЛ и, как следствие, активации сосудисто-тром-боцитарного звена гемостаза [3]. Учитывая эти данные, для изучения возможных механизмов антитромбогенно-го действия ЭСЛ были проведены эксперименты по оценке его антитромбоцитарных и эндотелийпротективных эффектов.
Исследования антитромбоцитарной активности сосудистой стенки показали, что амплитуда необратимой АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов у крыс-до-норов достигала 41% (табл. 2). После инкубации донорской БТП с сегментом брюшной аорты ложнооперирован-ных животных амплитуда агрегации тромбоцитов была на 53% меньше, чем без инкубации. После инкубации БТП с сегментом брюшной аорты овариоэктомированных крыс (контроль) амплитуда агрегации тромбоцитов повышалась на 18% по сравнению со значениями у ложно-оперированных животных, что свидетельствует о снижении антитромбоцитарной активности эндотелия брюшной аорты у крыс после овариоэктомии. Амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов после инкубации с сегментом брюшной аорты овариоэктомирован-ных крыс, получавших ЭСЛ, соответствовала значениям ложнооперированных животных, что отражает способность препарата восстанавливать сниженную в условиях овариоэктомии антитромбоцитарную активность эндотелия аорты крыс.
У животных контрольной группы выявлена дисфункция эндотелия: КЭД был на 22% выше, чем у ложнооперированных крыс. Следовательно, эстрогенная недостаточность, вызванная овариоэктомией, как и менопауза у женщин, способствует развитию эндотелиальной дисфункции [4, 11], что проявилось ослаблением ее антиагреган-
тной и эндотелийзависимой вазодилатационной активности. КЭД в группе животных, получавших ЭСЛ, снижался на 21% по сравнению со значением в контрольной группе. Величина этого показателя практически достигала соответствующего уровня у ложнооперированных крыс, свидетельствуя о способности препарата восстанавливать баланс эндотелийзависимой и эдотелийнезависи-мой вазодилатации в условиях экспериментальной ова-риоэктомии. Эндотелийпротективный эффект ЭСЛ, вероятно, обусловлен антиоксидантной активностью секо-изоларицирезинола диглюкозида и его способностью как модулятора эстрогеновых рецепторов обеспечивать через БИ-а эстрогеновые рецепторы негеномную активацию эндотелиальной Ш-синтазы [9, 10].
Заключение
ЭСЛ обладает антитромбогенным действием, одним из механизмов реализации которого является выраженная эндотелийпротективная активность препарата, выявленная у крыс после овариоэктомии. Полученные данные позволяют предполагать, что ЭСЛ может быть альтернативой ГЗТ для профилактики и лечения сердечнососудистых осложнений климактерического синдрома.
Литература
1. Балуда В.П., Деянов И.И. Значение определения антитром-богенных свойств стенки сосудов в профилактике тромбозов // Кардиология. - 1988. - Т. 28, № 5. - С. 103-105.
2. Киршенблат ЯД. Практикум по эндокринологии. - М., 1969.
- С. 55-57.
3. Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Антиоксидантная биотерапия для защиты сосудистой стенки производными суперок-сиддисмутазы и каталазы // Цитология. - 1999. - Т. 41, № 9.
- С. 81-82.
4. Плотникова А.М., Шульгау З.Т., Плотникова Т.М. и др. Анти-тромбогенная и антитромбоцитарная активность экстрак-
та из древесины маакии амурской // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - Т. 147, № 2. - С. 164-167.
5. Тихомиров А.Л. Заместительная гормональная терапия в физиологической и хирургической постменопаузе // Фарма-тека. - 2007. - № 10. - С. 37-41.
6. Canonico M., Scarabin P.Y. Hormone therapy and risk of venous thromboembolism among postmenopausal women // Climacteric. - 2009. - Vol. 12, suppl. 1. - P. 76-80.
7. Dixon R.A. Phytoestrogens // Annu. Rev. Plant Biol. - 2004. -Vol. 55. - P. 225-261.
8. Gaete L., Tchernitchin A.N., Bustarmante R. et al. Daidzein-estrogen interaction in the rat uterus and its effect on human breast cancer cell growth // J. Med. Food. - 2012. - Vol. 15. No. 12. - P. 1081-1090.
9. Moree S.S., Rajesha J. Investigation of in vitro and in vivo antioxidant potential of secoisolariciresinol diglucoside // Mol. Cell Biochem. - 2013. - Vol. 373, No. 1-2. - P. 179-187.
10. Patkar S., Farr T.D., Cooper E. et al. Differential vasoactive effects of oestrogen, oestrogen receptor agonists and selective oestrogen receptor modulators in rat middle cerebral artery // Neurosci. Res. - 2011. - Vol. 71, No. 1. - P. 78-84.
11. Taddei S., Virdis A., Ghiadoni L. et al. Menopause is associated with endothelial dysfunction in women // Hypertension. - 1996.
- Vol. 28, No. 4. - P. 576-582.
12. Writing Group for the Women’s Health Initiative Investigators. Risk and benefit of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results from the Women’s Health Initiative randomizes controlled trail // JAMA. - 2002. -Vol. 288, No. 3. - P. 321-333.
Поступила 24.03.2013
Сведения об авторах
Анищенко Анна Марковна, канд. мед. наук, научный сотрудник лаборатории фармакологии кровообращения ФГБУ “НИИ фармакологии” СО РАМН.
Адрес: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3.
E-mail: nuska-80@mail.ru.
Алиев Олег Ибрагимович, докт. мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории фармакологии кровообращения ФГБУ “НИИ фармакологии” СО РАМН. Адрес: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3.
E-mail: oal67@yandex.ru.
Плотникова Татьяна Макаровна, докт. биол. наук, профессор кафедры фармакологии ГБОУ ВПО СибГ-Му Минздрава России.
Адрес: 634050, г. Томск, Московский тр., 2.
E-mail: mbp2001@mail.ru.
Васильева Наталья Викторовна, аспирант кафедры фармакологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России. Адрес: 634050, г. Томск, Московский тр., 2.
