CC BY
31
£'Июнь 2008 г.
АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ СТОЛБНЯКА, ДИФТЕРИИ, САЛЬМОНЕЛЛЕЗА И ШИГЕЛЛЕЗА В ПРЕПАРАТАХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ
Радыгина Л. В^ Лаптева Л. К* Перелыгина 0. В.
Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, Москва
Представлены результаты определения антител к антигенам возбудителей столбняка, дифтерии,, сальмонеллеза и шигеллеза в препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения (ИГВ). Показана возможность использования отечественных иммунофермент-ных тест-систем для определения антител к антигенам возбудителей дифтерии и столбняка в ИГВ. Приведены данные о разработках получения противодифтерийного и противостолбнячного иммуноглобулинов человека для внутривенного введения отечественного производства. Ключевые слова: антитела, столбняк, дифтерия, сальмонеллез, шигеллез V___/
Многочисленными исследованиями, проведенными как в нашей стране, так и за рубежом, показано, что в коммерческих препаратах иммуноглобулинов (ИГ) человека содержатся антитела (АТ) к различным антигенам (АГ) вирусов и бактерий. Известно, что степень защищенности организма от бактериальной инфекции определяется, в основном, уровнем АТ к АГ возбудителя.
Столбняк является весьма грозным заболеванием. Чаще всего он возникает при травмах, вызванных авариями, стихийными бедствиями, а также в военное время. Заболеваемость столбняком наблюдается преимущественно среди сельского населения и причиной ее в 71,3% случаев являются мелкие бытовые травмы. В развивающихся странах столбняк у новорожденных — одна из основных причин ранней детской смертности [8].
Дифтерия является предметом эпидемиологического интереса. В современных условиях дифтерией болеют, главным образом, дети, невакцинированные взрослые и лица с нарушением иммунной системы [11].
Уровень заболеваемости острыми кишечными инфекциями в нашей стране остается довольно высоким и нет выраженной тенденции к ее снижению. Острые кишечные инфекции (эшерихиоз 0157, шигеллез, вызванный БИ. Пехпеп 2а) протекают достаточно тяжело и нередко с неблагоприятным прогнозом [10]. В последние годы отмечается возрастающая роль сальмонелл в этиологии острых желудочно-кишечных заболеваний [3].
Целью нашего исследования являлось изучение содержания уровня АТ к возбудителям столбняка, дифтерии, сальмонеллеза и шигеллеза в препаратах ИГВ отечественного и зарубежного производства. Кроме того,
э
проводилась оценка возможности применения имму-ноферментного анализа для определения АТ в ИГВ.
Материалы и методы_
Оценку содержания АТ против АГ дифтерии и столбняка проводили иммуноферментным методом (ИФА) с использованием тест-системы, производства филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Перми. Проанализировано 70 серий препаратов ИГВ отечественного и зарубежного производства: «Хумаглобин» (Humaglobin) фирмы Human serum production and medicine manufacturing Co. LTD. (Венгрия); «ИГ-Вена» (Ig Vena) фирмы Kedrion S.p.A. (Италия); «Октагам» (Octagam) фирмы Octapharma (Австрия); «Интраглобин» (Intraglobin), «Пентаглобин» (Pentaglobin) фирмы Biotest Pharma GmbH (Германия); препараты ИГВ производства филиалов ФП'П «НПО «Микроген» МЗ РФ (Нижегородского «ИмБио» и Хабаровского предприятий по производству бакпрепаратов, Уфимского НПО «Имму-нопрепарат»).
Проведен анализ сертификатов качества 17 серий препарата «ИГ-Вена» и 62 серий препарата «Хумаглобин» по содержанию АТ к АГ возбудителя столбняка, а также 11 серий препарата «Гамимун Н» (Gamimune N) фирмы Talecris Biotherapeutics (США) и 7 серий препарата «Эндобулин» (Endobulin) фирмы Baxter AG (Австрия) по содержанию АТ к АГ возбудителя дифтерии.
Содержание АТ против АГ сальмонелл и шигелл Флекснера определяли в реакции пассивной гемагглю-тинации (РПГА) с использованием диагностикумов фи-
ИРЕПАРАТЫ
Таблица 1
Антитела к антигенам дифтерии и столбняка в препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения
Название препарата Число исследованных серий Антитела к антигенам дифтерии, МЕ/мл Антитела к антигенам столбняка, МЕ/мл
ИГВ (Нижний Новгород) 12 12,00 ± 0,82 14,01 ± 1,85
ИГВ (Хабаровск) 10 14,49 ± 0,80 15,15 ±0,12
Иммуновенин (Уфа) 10 16,65 ± 0,76 22,34 ± 0,84
Хумаглобин (Венгрия) 10 4,68 ± 0,59 19,16 ±0,93
ИГ-Вена (Италия) 3 16,25 ±0,13 25,69 ±0,17
Октагам (Австрия) 10 2,98 ± 0,27 13,47 ±0,67
Интраглобин (Германия) 6 11,67 ±0,80 15,81 ±0,15
Пентаглобин (Германия) 9 11,01 ±0,27 15,15 ±0,12
лиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ предприятия по производству бакпрепаратов им. Г. Н. Габричевского». Оценку содержания AT провели в 53 сериях препаратов ИГВ отечественного и зарубежного производства, в том числе производства филиалов ФГУП «НПО «Микро-ген» МЗ РФ (Нижегородского «ИмБио» и Хабаровского предприятий по производству бакпрепаратов, Уфимского НПО «Иммунопрепарат»); «Октагам» (Австрия); «Хумаглобин» (Венгрия); «ИГ-Вена» (Италия); «Эндобу-лин» (Австрия); «Пентаглобин», «Интраглобин», «Неоге-патект» (Neohepatect), «Цитотект» (Cytotect) и «Неоци-тотект» (Neocytotect) фирмы Biotest Pharma GmbH (Германия); «Гамимун Н», «Гамунекс» (Gamunex) фирмы Talecris Biotherapeutic (США).
Обработка результатов проведена с помощью статистических методов, принятых в биологии и медицине с использованием программного продукта Microsoft Exel на IBM PC/AT.
Результаты и обсуждение_
Для определения АТ к АГ возбудителей дифтерии и столбняка нами выбран метод ИФА, поскольку по данным ряда авторов, ИФА для определения АТ к АГ дифтерийного токсина чувствительнее метода кожной пробы на кроликах, так, ИФА определяет АТ в разведении 10"6, а кожный тест на кроликах в разведении 105 [12]. В то же время, сравнивая ИФА и реакцию биологической нейтрализации при определении АТ к АГ возбудителя столбняка, было показано, что результаты, полученные с помощью этих двух методов одинаковы (коэффициент корреляции г = 0,92-0,98) [7]. Чувствительность
ИФА-систем на основе дифтерийного или столбнячного анатоксинов превышает чувствительность эритро-цитарного диагностикума, используемого для реакции РПГА в 2-3 раза [2].
В результате проведенных исследований установлено, что содержание АТ к столбнячному АГ методом ИФА в препаратах отечественного производства составляет от 14,01 ± 1,851 до 22,34 ± 0,835 МЕ/мл. При исследовании препаратов зарубежного производства наблюдается, в целом, та же картина: от 13,47 ± 0,669 до 25,69 ±0,167 МЕ/мл (табл. 1). Сравнительное изучение содержания АТ к АГ возбудителя столбняка по данным сертификатов качества ряда зарубежных препаратов показало, что содержание АТ составляет от 17,43 ± 0,79 до 20,75 ± 0,35 МЕ/мл (табл. 2). Таким образом, результаты исследования препаратов «ИГ-Вена» и «Хумаглобин» и данные анализа сертификатов имеют близкие значения (р > 0,05). По требованиям нормативной документации (НД) содержание АТ к АГ возбудителя столбняка определяется методом ИФА и должно составлять в препарате «ИГ-Вена» не менее 10 МЕ/мл. В препарате «Хумаглобин» эти данные не нормируются (производители указывают содержание АТ «для информации»). Все исследованные нами серии препарата «ИГ-Вена» соответствовали требованиям НД.
За период с 2003 по 2007 гг. отмечена тенденция к ежегодному увеличению содержания АТ к АГ возбудителя столбняка в ИГВ. Так, в препарате «ИГ-Вена» содержание АТ возросло с 17,7 МЕ/мл до 20,75 ± 0,35 МЕ/мл, а в препарате «Хумаглобин» с 17,43 ± 0,79 МЕ/мл до 19,6 ± 1,6 МЕ/мл (табл. 2). Следует отметить, что наблюдается достоверное снижение количества серий препарата «ИГ-Вена», содержащих АТ в пределах от 14 до 20 МЕ/мл
Таблица 2
Антитела к антигенам столбняка по результатам анализа сертификатов качества препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения (МЕ/мл)
Название Требования НД Год
препарата 2003 2004 2005 2006 2007
ИГ-Вена (Италия) Не менее 10 МЕ/мл 17,7 (п= 1) 18,78 ± 2,79 (п = 5) 18,7 ± 1,50 (и = 5) 19,43 ± 1,75 (п-4) 20,75 ± 0,35 (п = 2)
Хумаглобин (Венгрия) «Для информации» 17,43 ± 0,79 (п = 7) 17,45 ±2,11 (п= 11) 17,57 ± 2,62 (п = 14) 19,5 ± 1,72 (п = 10) 19,6 ± 1,60 (п =20)
(В
£Июнь 2008 г.
(с 20% до 0%), а также увеличение числа серий, содержащих АТ в пределах от 21 до 23 МЕ/мл (с 20% до 100%) (р < 0,05). При анализе сертификатов препарата «Хумаг-лобин» отмечена та же динамика — достоверное снижение количества серий препарата, содержащих АТ в пределах от 13 до 19 МЕ/мл (с 14,29% до 0%), а также увеличение числа серий, содержащих АТ в пределах от 20 до 23 МЕ/мл (с 9,09% до 75%, р < 0,05). Вышеуказанный прирост АТ может быть связан с проведением вакцинации против возбудителя инфекции.
При определении содержания АТ к АГ возбудителя дифтерии методом ИФА обнаружено, что в препаратах отечественного производства уровень АТ колеблется от 12,0 ± 0,820 до 16,65 ± 0,758 МЕ/мл, а в препаратах зарубежного производства от 2,98 ± 0,267 до 16,25 ± 0,131 МЕ/мл (табл. 1). Проведен анализ содержания этих АТ в препаратах зарубежного производства по данным сертификатов качества. По требованиям НД содержание АТ к АГ возбудителя дифтерии в препарате «Гамимун Н» в реакции биологической нейтрализации должно быть не менее 1 МЕ/мл. Все исследованные серии (10 серий) препарата по паспортным данным соответствовали требованиям НД. Отмечена незначительная тенденция к повышению содержания АТ к АГ возбудителя дифтерии с 1,2 МЕ/мл в 2003 г. до 2,17 ± 1,67 МЕ/мл в 2006 г. Увеличение содержания АТ, возможно, также связано с изменениями эпидемиологической ситуации в регионе.
Единственным средством иммунотерапии дифтерии в России до настоящего времени была противодифтерийная сыворотка, получаемая из крови иммунизированных дифтерийным анатоксином лошадей, вводимая внутримышечно. Однако при введении гетерологичной сыворотки происходит аллергизация организма больного, возможно развитие сывороточной болезни вплоть до анафилактического шока [4]. Следует также отметить, что гетерологичные АТ быстрее выводятся из организма, чем гомологичные [6].
Лечение больных дифтерией небольшими дозами противодифтерийного ИГ человека (200-3200 МЕ), создающими в сыворотке крови больных концентрацию антитоксина в пределах 0,06-1 МЕ в 1 мл, обеспечивает высокую эффективность препарата, не уступающую таковой при использовании рекомендуемых доз лошадиной противодифтерийной сыворотки от 20 тыс. до 100 тыс. МЕ [6]. Внутривенный способ введения ИГ имеет существенные преимущества перед внутримышечным, так как позволяет в кратчайшие сроки создавать в крови эффективные концентрации АТ. Кроме того, внутривенно можно ввести более высокую дозу препарата [5].
В РФ предпринята попытка получения специфического ИГ. В Томском НИИ вакцин и сывороток был разработан противодифтерийный ИГВ, который представлял собой иммунологически активную фракцию белка (1дО), выделенную из плазмы крови доноров, иммунизированных дифтерийным анатоксином. В 1994-1995 гг. в клиниках детской больницы им. Св. Владимира и в стационарах Подмосковья проводили клинические испытания препарата. Установлено, что внутривенное введение противодифтерийного ИГ человека дает хороший терапевтический эффект, не вызывает побочных реакций, снижает частоту осложнений или облегчает их течение. Учитывая преимущества противодифтерийного ИГ человека по
сравнению с противодифтерийной лошадиной сывороткой, авторы рекомендуют использовать его для лечения дифтерии, особенно токсических ее форм у детей [9].
В Кировском НИИ гематологии и переливания крови был разработан новый препарат «Противостолбнячный ИГ для внутривенного введения». В основу технологии положен метод кислотно-ферментативного гидролиза. Этот ИГ обладает высокой специфической активностью, в 1 мл препарата содержится не менее 30,0 МЕ АТ. В экспериментах на белых мышах показано, что внутривенное введение противостолбнячного ИГ через 30 мин после заражения животных столбнячным токсином полностью нейтрализовало действие последнего. Введение препарата в более поздние сроки (через 24 ч) также предохраняло всех животных от гибели и у 50% устраняло клинические признаки заболевания [8].
Несмотря на перспективность использования специфических ИГВ, противостолбнячный и противодифтерийный ИГВ в России в настоящее время не выпускаются.
Еще одним объектом нашего изучения ИГВ было определение содержания в них АТ к АГ сальмонелл и ши-гелл. Общий АГ энтеробактерий выявляется в РПГА. АТ к этому АГ встречаются в сыворотке крови как у здоровых лиц, так и у больных дизентерией, сальмонелле-зом, а также при других заболеваниях энтеробактери-альной природы [1].
При сравнительном анализе результатов содержания противосальмонеллезных и противошигеллезных АТ методом РПГА в зарубежных препаратах ИГВ выявлено, что титры АТ составляют от 1:10 до 1:40. Среди отечественных препаратов наблюдается, в целом, та же картина — средний титр АТ к АГ шигелл составляет 1:20-1:40, а к АГ сальмонелл — 1:20. В то же время, у препаратов производства Нижегородского предприятия «ИмБио» выявлены более высокие титры АТ к АГ сальмонелл (33% серий «Имбиоглобулина» титр АТ — 1:40) и шигелл (20% серий ИГВ и 33% серий «Имбиоглобулина» титр АТ — 1:80).
Установлено, что препарат «Пентаглобин» имеет более высокие титры АТ. Так, у 80% серий препарата титр АТ к АГ сальмонелл составляет 1:80, а 20% серий — 1:160 и титр АТ к АГ шигелл — 1:80. Это связано с особенностями препарата (препарат содержит помимо 1дО еще и 1дМ и 1дА).
Таким образом, во всех исследованных препаратах ИГВ выявлены АТ к АГ возбудителей сальмонеллеза, шигеллеза, дифтерии и столбняка. Для выявления АТ более перспективно использование ИФА. В связи с тем, что ИФА тест-системы отечественного производства предназначены для определения АТ в сыворотке (плазме) крови человека, необходимо проведение дальнейших исследований для препаратов ИГВ.
Литература
1. Борисов В. А.//Кишечные инфекции. Респ. меж-вед. сборник. — Киев, 1987. — Вып. 19. — С. 25-27.
2. Дворников В. С. //Ж. микробиологии, эпидемиологии, иммунологии. — 1995. — № 6. — С. 77-78.
3. Иванов Н. Р., Михайлова Ю. М. Сальмонеллезы у взрослых и детей. — Изд. Саратовского университета, 1990. — С. 6.
4. Капустян В. А., Башлай А. Г., Михеева И. В., Резе-пов Ф. Ф., Матохина А. Г., Перелыгина О. В.//С6. научных трудов. — Махачкала, 1996. — С. 73-74.
ПРЕПАРАТЫ
5. Лаптева Л. К., Радыгина Л. В.//Ж. Биопрепараты. — 2006. —№4.—С. 21-24.
6. Матохина А.Г. Экспериментально-клиническая оценка эффективности препаратов, используемых для серотерапии дифтерии. Дисс. на соискание ученой степени к. мед. наук. — М., 1996.
7. Николаева А. М., Ефимова Н. П., Грязнова Д. В., Арсентьев А. М.//Научно-производственные проблемы повышения качества вакцинно-сывороточных препаратов. Ч. 1. — Ташкент, 1987. — С. 48-50.
8. Сапожникова В. С., Думкин И. М.//Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1994. — № 4. — С. 81-84.
9. Феклисова Л. В., Шебекова В., Щипкова Л. Г., Шкуратова А., Резепов Ф. Ф., Матохина А.//С6. науч. ст. «Клиническое применение иммуноглобулина для внутривенного введения». Вып. 2. — Н.Новгород, 1999. — С. 84-90.
10. Ющук Н. Д., Бродов Л. Е. Острые кишечные инфекции: диагностика и лечение. — М., 2001. — С. 10.
11. Karakus R., Aral A. L., Kanat D. О., Hizel К., Caglar К., Sindel S., Yetkin I., Aybay C.//Ren. Fail. — 2007. — № 7. — V. 29. — P. 829-834.
12. Svenson S. В., Larsen J.//lmmunol. Meth. — 1977. — V.17. — P. 249-256.
АНТИТЕЛА К АНТИГЕНАМ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ В ПРЕПАРАТАХ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ЧЕЛОВЕКА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ
Радыгина Л. А, Лаптева Л. К* Юнасова Т. Н* Мотузова Е. Мусина Е. Е.
Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича, Москва
В работе представлены материалы изучения содержания антител к возбудителям вирусных и бактериальных инфекций в препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения, Приведены данные об использовании специфических и неспецифических иммуноглобулинов для внутривенного введения для профилактики и лечения ряда тяжелых заболеваний вирусной и бактериальной природы.
Ключевые слова: антитела, гепатит В, краснуха, корь, цитомегаловирусная, стафилококковая, стрептококковая, синегнойная инфекции
V /
В связи с тем, что клиническая эффективность коммерческих препаратов иммуноглобулинов (ИГ) зависит от наличия в них специфических антител (АТ) к различным возбудителям инфекционных заболеваний, препараты ИГ подлежат контролю на содержание тех или иных АТ. Содержание некоторых видов АТ может значительно варьировать в разных сериях ИГ в зависимости от времени, прошедшего после эпидемической вспышки или подъема соответствующих заболеваний, а также в зависимости от иммунного статуса доноров.
Целью нашего исследования являлось изучение содержания уровня АТ к возбудителям вирусных и бактериальных инфекций в препаратах ИГ человека для внутривенного введения (ИГВ).
Материалы и методы
Содержание АТ к антигенам (АГ) вирусов и бактерий изучали на основании анализа сертификатов качества 15 наименований препаратов ИГВ отечественного и зарубежного производства. Всего проанализировано 1685 сертификатов качества серий препаратов ИГВ, в том числе производства филиалов ФГУП «НПО «Микроген» (Нижегородского «ИмБио» и Хабаровского предприятий по производству бакпрепаратов, Уфимского НПО «Имму-нопрепарат»); производства фирмы Octapharma, Австрия («Октагам»); фирмы Human serum production and medicine manufacturing Co. LTD., Венгрия («Хумаглобин»); фирмы Kedrion S.p.A. Италия («ИГ-Вена»); фирмы Baxter AG, Австрия («Эндобулин»); фирмы Biotest Pharma GmbH,
€
