CC BY
170
Фармация
УДК 615.27:615.324:595.78
АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТА ЛИЧИНОК БОЛЬШОЙ ВОСКОВОЙ МОЛИ И ЭКСТРАКТА ПРОПОЛИСА
Ю.В. Шикова1, Ю.Л. Баймурзина1, В.А. Лиходед1, Р.Р. Фархутдинов1,
А.В. Епифанова1, З.Р. Кадырова1, С.Б. Бахтиярова2, Р.А. Зарипов2,
1ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет», г. Уфа,
2Государственное автономное научное учреждение Республики Башкортостан «Центр аграрных исследований», г. Уфа
Епифанова Алина Валерьяновна - e-mail: [email protected]
В статье отражены результаты проведенных исследований по определению антиоксидантной активности спиртовых экстрактов личинок большой восковой моли и прополиса, входящих в состав суппозиториев, применяемых в гинекологической практике при комплексном лечении воспалительных заболеваний и бесплодия. Рассмотрены также антиокислительные свойства водных и спиртовых извлечений из соответствующих суппозиториев, содержащих желатин, глицерин, воду; лутрол F-68, кремофор RH-40, полиэтиленгликоль 4000. Влияние указанных препаратов на процессы свободнорадикального окисления в модельных системах in vitro с использованием экспресс-метода определения антиоксидантной активности, основанного на регистрации хемилюминесценции.
Ключевые слова: экстракт личинок большой восковой моли, экстракт прополиса, продукты пчеловодства, антиоксидантная активность, хемилюминесценция, воспалительные заболевания,
бесплодие, гинекология.
In the article the results of studies in determining antioxidant action of ethanolic extract of larvae of large wax moth and propolis, which are included in formulation of the suppositories, used in gynaecological practice in complex treatment of inflammatory diseases and infertility have been reflected. Also antioxidant properties of aqueous and ethanolic extractions from the corresponding suppositories, containing gelatin, glycerine, water; lutrol F-68. kremofor RH-40, polyethylene glycol 4000 have been considered. The influence of these drugs on the processes of free radical oxidation in model systems in vitro using quick test for determining antioxidant action, based on the registration of chemiluminescence.
Key words: extract of larvae of large wax moth, extract of propolis, bee products, antioxidant action, chemiluminescence, inflammatory diseases, gynaecology, infertility.
Введение
В последнее время отмечается повышенный интерес к изучению процессов свободнорадикального окисления (СРО), с которыми связаны многие жизненно важные метаболические и физиологические процессы в организме. Для поддержания необходимой концентрации свободных радикалов используются лекарственные препараты, биологически активные вещества. Природные продукты включают естественный комплекс биоантиоксидантов (флавоноиды, каро-тиноиды, витамины, эфирные масла, гликозиды и т. д.). В их состав входят микроэлементы, влияющие на СРО (селен, железо, медь, цинк и др.) [1, 2]. Они отличаются сродством к организму, благоприятным соотношением основных компонентов, участвующих в физиологической антиоксидантной защите, не токсичны, не вызывают привыкания, могут длительно использоваться в профилактических целях. Немаловажно и то обстоятельство, что продукты, содержащие естественные антиоксиданты, традиционно используются в народной медицине и пользуются высоким потребительским спросом у населения [3, 4]. Поиск средств природного происхождения, влияющих на скорость СРО, их применение для лечения с использованием экспресс-способов контроля эффективности их применения представляет собой актуальную проблему, имеющую научно-практическое значение [5, 6].
Цель данного исследования - изучение влияния спиртовых экстрактов прополиса и личинок большой восковой моли, а также водных и спиртовых извлечений из суппози-торных основ, содержащих желатин, глицерин, воду (далее основа № 1); лутрол F-68, кремофор RH-40, полиэтиленгликоль (ПЭГ) 4000 (далее основа № 2) на процессы СРО в модельных системах in vitro с использованием экспресс-
метода определения антиоксидантной активности, основанного на регистрации хемилюминесценции (ХЛ) - свечения, возникающего при взаимодействии свободных радикалов. Антиоксидантная активность (АОА) препаратов есть показатель качества препарата, характеризующий его восстанавливающие свойства, т. е. свойства вступления в реакцию с активными формами кислорода (АФК).
Материалы и методы
Для оценки влияния различных препаратов на процессы СРО in vitro исследования были проведены на модельных системах, генерирующих АФК. В качестве модельной системы, где генерировались АФК, использовали 20 мл фосфатного буфера (20 мМ фосфорнокислого калия, 105 мМ хлорида калия) с добавлением раствора люминола (10-5М) и цитрата натрия (50 мМ). Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 ед. титрованием насыщенным раствором едкого калия. Для инициирования реакций, сопровождающихся образованием АФК, вводили 1 мл 50 мМ раствора солей двухвалентного железа. Регистрация свечения продолжалась в течение 5 минут при постоянном перемешивании. АОА препаратов определялась методом хемилюминесценции и регистрировалась на установке ХЛМ-003. ХЛ модельных систем характеризовалась спонтанным свечением, быстрой вспышкой и развивающейся затем медленной вспышкой. Основными наиболее информативными характеристиками ХЛ служили светосумма свечения, определяющаяся по интенсивности излучения, и амплитуда максимального свечения.
Исследовано влияние на СРО следующих препаратов: спиртовых экстрактов прополиса и личинок большой восковой моли, а также водных и спиртовых извлечений из суппо-зиторных основ № 1 и № 2.
Фармация
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Исследуемые препараты в дозировках, сопоставимых с терапевтической, добавлялись в модельные системы, в которых инициировалось образование АФК. В качестве контроля использовали исходные модельные системы без добавления препаратов. АОА определялась по степени угнетения ХЛ, в присутствии исследуемых веществ, и пересчитывалась в процентах от контроля. В контроль при исследовании спиртовых экстрактов был добавлен 96% спирт [7].
ТАБЛИЦА.
Показатели хемилюминесценции в модельной системе, генерирующей АФК при добавлении препаратов
Проба Светосумма, % Максимальная светимость, %
Контроль+спирт 100% 100%
Экстракт прополиса 18+2 8+2
Экстракт личинок большой восковой моли 31±5 30+5
Спиртовое извлечение из основы № 1 46+2 6+2
Спиртовое извлечение из основы № 2 99+3 133+3
Контроль 100% 100%
Водное извлечение из основы № 1 86+2 79+2
Водное извлечение из основы № 2 134+4 134+4
в-
в
а
0 * «О
1
о
S
в
S
РИС. 1.
/ 1
І /
3 2
1.0 1 2-0 1 3.0
время, мин.
Запись хемилюминесценции в модельной системе, генерирующей АФК после добавления препаратов: 1 - контроль, 2 - спиртовой экстракт личинок большой восковой моли, 3 - спиртовой экстракт прополиса.
\ 1 :
її/ \
РИС. 2.
Запись хемилюминесценции в модельной системе, генерирующей АФК после добавления препаратов: 1 - контроль, 2 - водное извлечение из основы № 1, 3 - водное извлечение из основы № 2.
Результаты и их обсуждение
Результаты опытов свидетельствуют о существенном ингибирующим влиянии исследуемых образцов на кинетику СРО в тестируемой системе. Как видно из таблицы и рисунка 1, в модельной системе, где генерировались АФК, спиртовые экстракты прополиса и личинок большой восковой моли при конечной концентрации вещества 1 мг/мл, достоверно угнетали показатели ХЛ. Наибольший антиоксидантный эффект в данной системе проявил экстракт прополиса сни-
жая светосумму свечения на 92%, а спиртовой экстракт личинок большой восковой моли снизил светосумму свечения на 69%, что является приемлемым показателем АОА действующих веществ при создании лекарственных форм для комплексного лечения воспалительных заболеваний. Контроль был принят за 100%.
РИС. 3.
Запись хемилюминесценции в модельной системе, генерирующей АФК после добавления препаратов: 1 - контроль, 2 - спиртовое извлечение из основы № 1, 3 - спиртовое извлечение из основы № 2.
Согласно данным таблицы и рисунков 2 и 3, в исследуемой модельной системе АФК спиртовые извлечения из суп-позиторных основ № 1 снизили светосумму свечения на 54%, а № 2 оставила данные показатели без изменений. Водные же извлечения из этих основ не проявили выраженных антиоксидантных свойств.
Выводы
Таким образом, методом регистрации ХЛ модельной системы, в которых протекают реакции СРО - генерация АФК - была оценена антиокислительная активность спиртовых экстрактов прополиса и личинок большой восковой моли, а также водных и спиртовых извлечений из суппози-торных основ, содержащих желатин, глицерин, воду; лутрол F-68, кремофор RH-40, полиэтиленгликоль 4000. Выявлено, что экстракт личинок большой восковой моли и изученные нами препараты обладают антиоксидантными свойствами и могут быть рекомендованы для профилактики и коррекции процессов свободнорадикального окисления.
ЕЯ
ЛИТЕРАТУРА
1. Чумбуридзе Б.И., Кунчулия Л.Ш., Чиквиладзе Н.И. и др. Продукты пчеловодства для производства фармацевтических препаратов. Аллергология и иммунология. 2004. Т. 5. № 3. С. 448-449.
2. Лудянский Э.А. Апитерапия. Вологда. 1994. 459 с.
3. Асфандиярова Л.Н. Бальзам доктора Рачкова. Апитерария сегодня: материалы XIII Всероссийской научно-практической конференции «Успехи апитерапии». Рыбное. 2008. С. 125-128.
4. Макуха В.Е., Прохорова С.Н. Препарат на основе личинок восковой моли «Укрин» - натуральный иммуномодулятор. Апитерария сегодня: материалы XIII Всероссийской научно-практической конференции «Успехи апитерапии». Рыбное. 2008. С. 6-10.
5.Шикова Ю.В. Биофармацевтическое обоснование составов и разработка технологии производства мягких лекарственных форм: дис. ... д-ра фарм. наук. Уфа. 2005. 360 с.
6. Шикова Ю.В., Баймурзина Ю.Л., Кайбышев Т.В. Изучение антиокисли-тельной активности дибунола и экстракта прополиса в опытах in vitro. Материалы 69-й республиканской итоговой научно-практической конференции молодых ученых и студентов РБ с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины». БГМУ. Уфа. 2004. С. 224-225.
7. Хемилюминесцентные методы оценки функционального состояния животных: методические рекомендации. М.: Издательская группа «БДЦ -пресс», 2005. 40 с.
