CC BY
9
Полученные данные важны для определения различий в свойствах и локализации стволовой популяции у мыши и у человека. Понимание этих различий необходимо для изучения эндометрия человека с использованием мыши в качестве модельного объекта. Работа выполнена за счет гранта Российского Научного Фонда (проект № 21-74-30015).
РЕМОДЕЛИРОВАНИЕ НЕЙРОГЛИИ В ПОЯСНИЧНОМ УТОЛЩЕНИИ СПИННОГО МОЗГА ПОСЛЕ КОНТУЗИОННОЙ ТРАВМЫ В НИЖНЕГРУДНОМ ОТДЕЛЕ У МИНИ-СВИНЕЙ
Р.Р. Гарифулин, М.А. Давлеева, Э.И. Бариев, С.С. Таргачев, Р.Х. Ахметов, И.С. Минязева, В.П. Петрова, А.Р. Хамитов, А.А. Измайлов, Р.Р. Исламов
ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России, Казань, Россия
e-mail: ravil.l16rus@mail.ru
Ключевые слова: контузионная травма спинного мозга, нейроглия, мини-свинья, поясничное утолщение.
Многочисленные научные работы, посвященные изучению травмы спинного мозга (ТСМ), нацелены на исследование реактивной нервной ткани, непосредственно прилегающей к очагу поражения спинного мозга. При этом, патологические сдвиги градиентно распространяется в ростральном и каудальном направлениях от эпицентра нейротравмы. Феномен отдаленных вторичных повреждений имеет важное значение в посттравматическом восстановлении спинного мозга и является актуальным направлением для разработки принципов нейро-реабилитации пациентов с ТСМ.
Цель исследования — иммунофлуоресцентный анализ клеток нейроглии в поясничном утолщении спинного мозга через 60 сут после моделирования контузионной травмы на уровне Th8-Th9 у мини-свиней.
В исследовании были использованы самки мини-свиней (вьетнамская вислобрюхая) весом 20-25 кг (n=8): интактные животные (n=4) и опытные животные с конту-зионной ТСМ (n=4). Дозированную контузионную травму вызывали между позвонками Th8 и Th9 с помощью металлического стержня массой 50 г, падающего с высоты 50 см на открытый спинной мозг. Через 60 суток после моделирования нейротравмы поясничный отдел спинного мозга процессировали для иммунофлуоресцентного исследования.
Поперечные срезы спинного мозга толщиной 20 мкм окрашивали с помощью антител против маркеров астро-цитов (GFAP), олигодендроцитов (Olig2) и микроглии (Iba 1). Экспрессию GFAP и Iba 1 оценивали как относительную имммунопозитивную площадь в процентах, количество 0Нд2-иммунопозитивных ядер подсчитывали с учетом окраски ядер с помощью DAPI. Результаты представлены как средняя ± стандартная ошибка среднего.
Анализ экспрессии GFAP показал увеличение относительной GFAP-позитивной площади в поясничном утолщении у опытных животных как в передних (26,99 ± 0,97 %), так и в задних (18,37 ± 2,06, %) рогах, при сравнении с интактными животными (10,15 ± 0,6% и 16,9 ± 1,14%, соответственно). Относительная Iba 1 -позитивная площадь была также больше у опытных животных в передних (18,73 ± 0,49%) и задних (15,38 ± 0,63%) рогах, при сравнении с интактными животными (9,53 ± 0,94% и 8,13 ± 0,28%, соответственно). Количество
ОПд2-положительных ядер у интактных мини-свиней составило 13 ± 0,93 в передних и 11,33± 1,23 в задних рогах. При этом у опытных мини-свиней было выявлено меньшее количество ОПд2-положительных ядер как в передних (4,67 ± 0,61), так и в задних (3,67 ± 0,33) рогах.
Таким образом, увеличение площади, занимаемой астроцитами и клетками микроглии, а также снижение количества олигодендроглиальных клеток в поясничном утолщении спинного мозга через 60 сут после контузи-онной травмы в нижнегрудном отделе у мини-свиней свидетельствуют о вторичных патологических изменениях в нервной ткани, удаленной от эпицентра нейротравмы.
АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ВИТАМИНА
Е И ЭКСТРАКТА АМЛЫ НА ЦИБРИДЫ
А.Д. Гелетканич, Е.Б. Жигмитова2 3,
Е.Е. Безсонов2 3
1 РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия
2 ФГБНУ РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского, Москва, Россия
3 Институт общей патологии и патофизиологии, Москва, Россия
e-mail: artiom.geletkanich@yandex.ru
Ключевые слова: антиоксиданты, митохондрии, мутации,
цибриды, гетероплазмия, атеросклероз.
В развитие атеросклероза вовлечено множество факторов и дисфункция митохондрий в клетках пораженной области, может занимать ключевую роль в возникновении и прогрессировании заболевания [1]. Митохондриальная дисфункция проявляется в виде мутаций мтДНК, вызывая окислительный стресс, ухудшенному развитию АТФ [2]. Явление, когда мутированная мтДНК может сосуществовать с не мутировавшей мтДНК, называется гетероплазмией. Антиоксиданты, например, витамин Е (VE) и Emblica officinalis (EO), теоретически могут снижать степень окислительного стресса [3,4]. Удобной моделью для изучения роли ми-тохондриальных мутаций являются цибриды. Поскольку мутации мтДНК могут быть связаны со степенью активации моноцитов, были использованы цибриды, полученные из моноцитарной линии THP-1 с разной мтДНК пациентов с атеросклерозом.
THP-1, TCN-521, LSM1 культивировали 48 ч с VE и EO с концентрацией 15 и 500х103 мг/л соответственно. Выживаемость была высокой с VE 96-98%, но с EO была относительно низкой 75-86%. После инкубации с анти-оксидантами измеряли гетероплазмию мутаций, связанных с атеросклерозом: T3336C, C3256T, C5178A [1]. VE не повлиял на гетероплазмию THP-1, но у TCN-521 смог уменьшить на 4,4 ± 1,82 % у мутации C5178A. Клетки линии LSM1 мутации T3336C уменьшилась с 50 ± 0,7% до 39 ± 3,1%, а при мутации C3256T увеличилась на 6,4 ± 1,5%. При культивировании с ЭА гетероплазмия у THP-1 на всех мутациях снизилась от 2,4 ± 0,6% до 9,9 ± 2%, у TCN-521 и LSM1 максимальное снижение отмечено у мутации T3336C на 8,3 ± 2,4% и 8,2 ± 2,5% соответственно. Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда, грант № 22-25-00480.
Литература:
1. Bezsonov E.E., Sobenin I.A., Orekhov A.N. Int J Mol Sci 2021;
22(8): 4080
2. Mitrofanov K.Y. et al. Experimental and Molecular Pathology. —
2016. — Т. 100. — № . 1. — С. 87-91.
3. Nashine S. et al. Aging (Albany NY). - 2019. - Т. 11. - № . 4. -С. 1177.
4. De Gaetano, G. (2001). Lancet (London, England), 357(9250), 89-95.
БИОТРАНСПЛАНТАТ КУЛЬТИВИРОВАННЫХ КЛЕТОК ЭПИТЕЛИЯ ГУБЫ ДЛЯ РЕКОНСТРУКЦИИ ЭПИТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ
М.Ю. Герасимов, Д.С. Островский, Б.Э. Малюгин, С.А. Борзенок
Лаборатория трансплантологии и клеточной биологии ФГАУ НМИЦ МНТКМикрохирургия глаза им. акад. С.Н. Федорова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: gerasimovmy@mntk.ru
Ключевые слова: фибриновый гель, роговица, эпителий, биотрансплантат
В докладе будет представлен оригинальный подход к созданию биотрансплантата из культивированных клеток эпителия губы на основе фибринового геля.
Целью создания биотрансплантат является его применение в офтальмологии для установления нового эпителиального покрова на роговице у пациентов с тяжелыми заболеваниями, затрагивающих оба глаза.
Будет представлена полная технологическая цепочка его получения: 1) оценка иммунофенотипа места биопсии; 2) влияние культуральных систем на клетки; 3) морфология, иммунофенотип и проточная цитофлюори-метрия культивированных клеток; 4) технология сборки биотрансплантата; 5) жизнеспособность клеток в биотрансплантате; 6) моделирование выхода клеток.
ПОЛУЧЕНИЕ СЕКРЕТОМА СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРОИЗВОДНЫХ НЕРВНОГО ГРЕБНЯ, КУЛЬТИВИРОВАННЫХ В БЕЗСЫВОРОТОЧНОЙ СРЕДЕ
Т.Е. Гетманова, Ю.Р. Джумалиева, В.Р. Тагланов
ФГБОУ ВО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава России, Ставрополь, Россия
e-mail: tgetmanova734@gmail.com
Ключевые слова: стволовые клетки производные нервного гребня, секретом NCSCs, экзосомы, безсывороточная среда.
Благодаря своей легкодоступности и высокой пластичности, аутологичные стволовые клетки производные нервного гребня (neural crest-derived stem cells, NCSCs) взрослого организма представляют собой идеальный вид клеток для использования в регенеративной медицине при восстановлении костно-хрящевых дефектов [1]. Применение бесклеточных технологий, в которых используются только внеклеточные продукты их жизнедеятельности, сопоставимо по эффективности с трансплантацией клеток и наряду с культивированием NCSCs в среде свободной от сыворотки представляется более биологически безопасным [2, 3].
Первичные культуры стволовых клеток производных нервного гребня (neural crest related stem cells, NCSCs) мыши культивировались в свободной от сыворотки среде DMEM при 37°С и 10% СО2 (опыт) и в аналогичных условиях с добавлением 10% FBS (контроль). Для получения
секретома NCSCs клетки помещались в стерильный раствор PBS на 24 ч при комнатной температуре, после чего отбирали супернатант с последующей фильтрацией и центрифугированием. Анализ содержания нуклеиновых кислот и белка проводили методом фотометрии. Фракция экзосом выделялась с использованием метода магнитной сепарации и анализировалась при помощи проточной цитометрии.
В опытной группе наблюдалось более низкое, по сравнению с контролем, содержание нуклеиновых кислот и белка в полученном секретоме (на 12,37% и 9,84%) и уменьшение фракции экзосом (на 14,81%), при этом статистически значимых различий обнаружено не было.
Таким образом, наши предварительные данные свидетельствуют в пользу возможности применения безсы-вороточной среды для культивирования NCSCs в целях получения их секретома.
Литература:
1. Grimm W.D., Didenko N., Fritsch T et al. Biomedical Journal of Scientific and Technical Research. 2019. V. 17. № 2. P. 12732.
2. Zeuner, M.-T., Didenko, N.N., Humphries, D. et al. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2018. V. Apr 11. № 6. P. 39.
3. Диденко Н.Н., Серенко Т.В., Диденко М.О. Неделя науки — 2021. Материалы международного молодёжного форума: Сб. науч. трудов. Ставрополь: СтГМУ, 2021. С. 356.
ИЗУЧЕНИЕ ИЗМЕНЕНИЙ В ОПУХОЛЕВЫХ СФЕРОИДАХ АДЕНОКАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ДОБАВЛЕНИИ ИНДУЦИРОВАННЫХ ЦИТОХАЛАЗИНОМ В МЕМБРАННЫХ ВЕЗИКУЛ
З.Е. Гилазиева, А.С. Пономарев, В.В. Соловьева, А.А. Ризванов
ФГАОУ ВО Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: zegilazieva@gmail.com
Ключевые слова: микроокружение опухоли, клетки глиобла-стомы, аденокарцинома молочной железы, мезенхимные стволовые клетки, мембранные везикулы, цитохалазин В
Опухолевые клетки и их микроокружение постоянно взаимодействуют и влияют друг на друга через внеклеточные везикулы, к которым относятся мембранные везикулы или микровезикулы (МВ). Изучение влияние МВ на опухолевые сфероиды может предоставить новые данные, которые будут играть роль в развитии биологии опухоли. Целью работы является установить изменения, которые происходит в опухолевых сфероидах под действием индуцированных цитохалазином B мембранных везикул мезенхимных стволовых клеток жировой ткани человека (иМВ МСК) и клеток глиобластомы человека (иМВ SNB-19).
В этом исследовании клетки аденокарциномы молочной железы (MCF-7) использовались для создания опухолевых сфероидов в суспензии. Клетки глиобласто-мы (SNB-19) и мезенхимные стволовые клетки (МСК), полученные из жировой ткани, были использованы для выделения иМВ с помощью 10 мкг/мл цитохалазина B. Добавление иМВ SNB-19 и иМВ МСК к сфероидам проводили в концентрациях 5 мкг, 10 мкг и 20 мкг. Влияние иМВ анализировали с помощью конфокальной микроскопии, проточной цитометрии и ПЦР в реальном времени. Кроме того, для анализа влияния ци-тохалазина В на везикулы было проведено их сравнение
