CC BY
47
требовалось 8,2±2,5 секунды, в то время как детеныши не леченых крыс выполняли этот тест только за 33,4±3,87 секунды. Аналогичные результаты наблюдались и при проведении теста на вращающейся платформе. При этой пробе крысята демонстрируют безусловный компенсаторный рефлекс: поворот головы противоположно направлению вращения. Применение донатора N0 сократило время этой пробы с 37,3±6,7 с до 24,4±5,1 с.
Таблица 3
Оценка состояния развития центральной нервной системы у новорожденных крысят на 2-ой день жизни
Показатель Кон- троль НМПК НМПК+Деп
Частота выполнения переворота со спины, % средн. 89,3% 86,5% 93,6%
рі 0,67і 0,478
р2 0,288
Время переворота, с средн. і4,2±2,і 11,8±2,55 11,3±2,5
рі 0,48 0,38
р2 0,88
Частота выполнения теста на накл. плоскости,% средн. 60% 48,07% 93,6%
рі 0,184 0,0008
р2 0,0001
Время выполнения теста на накл. пл-ти, с средн. 3і,3±2,7 33,4±3,87 8,2±2,5
рі 0,66 <0,000
р2 <0,000
Частота выполнения теста на вращающ. платформе, % средн. 50% 43,7% 80%
рі 0,694 0,055
р2 0,047
Время выполнения теста на вращающ. платформе, с средн. 37,5±4,2 37,3±6,7 24,4±5,1
рі 0,98 0,056
р2 0,139
рі - сравн. с контр., р2 - сравн. с той же гр.+ Деп.
Нарушение МПК ведет к задержке внутриутробного развития, проявляющегося снижением массы тела 20-дневных плодов и угнетением показателей крови и у плодов, и у 2-дневных крысят. Нарушение МПК негативно сказывается на развитии центральной нервной системы двухдневных крысят. Применение депонита-10 на фоне нарушения МПК способствует нормализации показателей крови плодов и крысят, улучшает функциональное состояние ЦНС новорожденных животных. Обладая протекторным действием, N0 препятствует дегенеративному влиянию на физическое развитие животных внутриутробной гипоксии.
Литература
1. Горячев В.В. Хроническая плацентарная недостаточность и гипотрофия плода.-Саратов: Изд-во Сарат. ун-та.- 1990.
2. Кургалюк Н.Н.// Успехи физиологических наук.- 2002.-Т. 33, № 4.- С. 65-79.
3. Новиков А.А. Роль оксида азота при нормальной беременности и нарушении маточно-плацентарного кровообращения у белых крыс: Дис... канд. биол. наук.- Иваново, 2005.
4. Реутов В.П. и др. Циклические превращения оксида азота в организме млекопитающих.- М.: Наука.- 1997.
5. Серая И.П., Нарциссов Я.Р. // Успехи современной биологии-2002.- Т. 122, № 3.- С.249-258.
6. Серова Л.В. Онтогенез млекопитающих в невесомости.-М.: Наука, 1988.- С. 82-88.
7. Сидорова И.С., Макаров И.О. Фетоплацентарная недостаточность: Клинико-диагн. аспекты.- М.: Знание - М.-2000.
УДК 616. 153.915:612 (085)
АНТИОКСИДАНТНАЯ КОРРЕКЦИЯ ПОСТРАДИАЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ КРОВЕТВОРЕНИЯ И КЛЕТОЧНОГО СОСТАВА КРОВИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У КРОЛИКОВ
Л.В. ИОНИЧЕВА, Л.Д. СМИРНОВ, И.Н. КУСТИКОВА, Н.И. МИКУЛЯК, А.И. ЗИНОВЬЕВ*
В связи с испытаниями ядерного оружия, авариями на атомных установках наблюдается глобальное радиационное загрязнение окружающей среды. Угроза атомной войны тоже заставляет задуматься о возможности массового поражения людей.
События и перемены последнего десятилетия в государстве и Вооруженных силах заставляют искать пути защиты населения от чрезвычайных ситуаций, причиной которых служат стихийные бедствия, радиационные и химические катастрофы. Проблемы радиационной опасности тесно связаны с развитием и эксплуатацией объектов атомной энергетики. Во всех сферах человеческой деятельности все более увеличивается использование источников ионизирующего излучения. Это касается многих отраслей промышленности, сельского хозяйства, медицины, космонавтики, военного труда и т.д.
Причиной острой лучевой болезни может быть и тотальное облучение организма с терапевтической целью - при трансплантации костного мозга, лечении множественных опухолей. Широко используемые в медицине методы лучевой диагностики зачастую приводят к нежелательным последствиям, нередко проявляющимся сокращением продолжительности жизни, а особенно в детской практике могут способствовать возникновению онкологических заболеваний в отдаленном периоде. Экологические катастрофы природного и техногенного происхождения, необходимость обслуживания источников ионизирующего облучения, использование лучевой энергии в медицине требуют адекватного применения надежных медицинских мероприятий, направленных на реабилитацию здоровья больших контингентов населения, подвергшихся воздействию радиации в различных дозах.
При выработке стратегий использования лекарственных препаратов в тех или иных ситуациях необходимо опираться на результаты доклинических исследований, поэтому эффективное адекватное моделирование и апробация на моделях известных лекарственных препаратов приобретают решающее значение. Существующие препараты, применяемые для профилактики и лечения радиационных поражений, недостаточно эффективны и их количество чрезвычайно мало. Поэтому целесообразно проводить исследования по изысканию новых средств, обладающих радиопротекторной активностью. Учитывая важную роль свободнорадикальных процессов в возникновении острой лучевой болезни, перспективными в этом плане являются препараты с антиоксидантным действием, а именно производные 3-оксипиридина, которые имеют широкий спектр фармакологического действия [1], проявляют защитные свойства при различных патологических состояниях [2, 3]. При этом один из препаратов группы (мексидол) выгодно отличается прогнозируемостью, стабильностью и возможностью контроля за фармакологическим эффектом [4]. В качестве наиболее радиочувствительных критических структур выступают органы кроветворения [5].
Цель - анализ применения мексидола и соединения этил-метилгидроксипиридина гемисукцината для коррекции послелу-чевых повреждений кроветворения и клеточного состава крови.
В работе использованы производные 3-оксипиридина: препарат мексидол в виде 5% официнального раствора в ампулах по 2 мл и соединение этилметилгидроксипиридина гемисукцинат, синтезированное профессором Смирновым Л.Д. (институт биохимической физики им. Н.М. Эммануэля РАН), которые вводились животным в краевую вену уха по схемам.
Мексидол (3-окси-6-метил-2-этил-пиридина сукцинат) является ингибитором перекисного окисления липидов и оказывает противогипоксическое, транквилизирующее, антистрессорное, ноотропное и вегототропное действие [6]. Клинические исследования показали положительное влияние препарата на течение инсульта, устраняя невротические нарушения [7], уменьшая расстройства обмена липидов в поджелудочной железе [2], снижая проявления симптомов диабетической стопы [3], и доказали необходимость его применения для профилактики нагноений и стимуляции заживления послеоперационных ран [8], снижения степени тромбинемии и улучшения гомеостаза при химиотерапии [9]. Препаратом сравнения явилось близкое по химической структуре к мексидолу новое производное 3-оксипиридина этил-метилгидроксипиридина гемисукцинат.
Эксперименты были проведены на 30 кроликах-самцах породы «шиншилла», массой 2,5-3,0 кг. В опытах использовали животных, не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме. Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 10 животных в каждой. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 часов, с соблюдением принципов, изложенных в Кон-
* Каф. физиологии человека Медицинского института Пензенского ГУ
венции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (Страсбург, Франция, 1986).
Выполнено три серии опытов, в которых изучалась реакция системы крови на ионизирующую радиацию без какой-либо коррекции, а также на фоне фармакологической коррекции мек-сидолом и этилметилгидроксипиридина гемисукцинатом. В 1-й контрольной серии выявлены нарушения клеточного состава венозной крови и кроветворной ткани после лучевого удара. Во 2-й опытной серии исследовано влияние мексидола на пострадиационную динамику клеточного состава крови и кроветворного костного мозга. В 3-й опытной серии в качестве радиомиелопро-тектора применен этилметилгидроксипиридина гемисукцинат.
Таблица І
Структура эксперимента
№ n Серии Режим эксперимента
1 10 Контроль Облучение: Co60, РИП - 90, maximum ионизации 5,31 Гр, процентная глубинная доза 93%, d=5^.
2 10 Опытная Облучение: Co60, РИП - 90, maximum ионизации 5,31 Гр, процентная глубинная доза 93%, d=5^. Мексидол 5 мг/кг в/в через день в течение 29 суток
3 10 Опытная Облучение: Co60, РИП - 90, maximum ионизации 5,31 Гр, процентная глубинная доза 93%, d=5^. Этилметилгидроксипиридина гемисукцинат 5 мг/кг в/в через день в течение 29 суток
Во всех сериях венозную кровь забирали до радиационного воздействия, на 8-е, 15-е, 22-е и 29-е сутки опыта из краевой вены уха кроликов. Исследовали клеточный состав венозной крови (абсолютное число лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов в 1 мкл крови, абсолютное и относительное содержание ретикулоци-тов в венозной крови, концентрацию гемоглобина в крови и плазме, степень гемолиза эритроцитов, лейкоцитарную формулу венозной крови с расчетом индекса ядерного сдвига, лейкоцитарный состав крови по унифицированным методикам. Костный мозг брали при помощи асептической аспирации иглой Кассирского и шприцом (обезвоженными) из подвздошной кости под местным обезболиванием 2-2,5% раствором новокаина. Из полученного пунктата готовили мазки, затем разводили для подсчета миелокариоцитов и мегакариоцитов. Исследовали абсолютное количество миелокариоцитов в костном мозге, абсолютное и относительное количество недифференцированных бластных клеток, промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов, базофи-лов, эритробластов, пронормобластов, нормоцитов базофильных, полихроматофильных и оксифильных, моноцитов, лимфоцитов, плазматических клеток, мегакариоцитов, а также лейкоэритроб-ластическое соотношение, костномозговые индексы созревания нейтрофилов и эритроцитов, абсолютное и относительное количество кроветворных клеток в состоянии митотического деления. Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами (по Меньшикову В.В.,1987).
Статистическую обработку результатов экспериментальных исследований проводили с помощью t-критерия Стьюдента (Гельман В.Я., 2002) на персональном компьютере IBM
PC/Pentium с использованием программы «Microsoft Excel». Проверка нормальности распределения ввиду относительно малого количества данных производилась визуально по графикам на вероятностной бумаге и наблюдавшаяся близость экспериментальных точек к прямой линии позволила не отвергать гипотезу о нормальности распределения. Вычисляли среднюю арифметическую выборочную (М), ошибку средней арифметической (m) и коэффициент достоверности (t). Степень достоверности различий показателей определяли в каждой серии по отношению к исходному результату (Р), к показателю через 8 суток химиотерапевтического воздействия (Pi), через 15 суток (Р2) и через 22 суток (Р3). Находили достоверность различий показателей в сериях через 29 суток цитостатической терапии с коррекцией и без коррекции. Явление считали достоверным при Р<0,05 (0,01; 0,001). Кратковременное действие ионизирующей радиации в дозе 5 Гр на большие области тела подопытных животных вызывало выраженные изменения клеточного состава венозной крови и костного мозга. На всех этапах опыта в мазках венозной крови присутствовали гиперокрашенные форменные элементы, встречались сегментоядерные нейтрофилы с гиперсегментированными ядрами, лимфоциты с патологическими чертами и с аберрацией ядер.
В венозной крови развивалась нормохромная гипорегенера-торная анемия с постоянным, синхронным снижением количества эритроцитов и гемоглобина. Минимальный уровень эритроцитов (3,23±0,01х106/мкл) и гемоглобина (83,11±0,64 г/л) был зафиксирован на 29-е сутки наблюдения, т.е. через 1 месяц после облучения. Анемия имела гипоарегенераторный характер - через 7 дней после лучевого поражения ретикулоциты в пробах обнаружены не были, спустя еще неделю в 1 мкл крови определялось 0,031±0,006105/мкл ретикулоцитов, что более чем в 6 раз достоверно ниже исходных данных. В конце 3-й и 4-й недели постлу-чевая супрессия регенераторной активности костного мозга и периферическая ретикулоцитопения сохранялись с количеством ретикулоцитов в крови соответственно 0,051±0,009105/мкл и 0,043±0,006105/мкл. Количество тромбоцитов уменьшилось уже через 7 дней после радиоактивного воздействия от 285,76±23,75 х103/мкл до 180,00±8,66х103/мкл, затем сформировалась тромбо-цитопения тяжелой степени до 60,00±8,66х 103/мкл в конце 2-й недели наблюдения и до 80,00±15,81х103/мкл на 22-е и 29-е сутки эксперимента (Р<0,001, Рі<0,001, Р2>0,05, Р3>0,05). В первые 2 недели после острого лучевого поражения наблюдалась алейкия до 0,69±0,25х103/мкл на 8-е сутки опыта и 0,83±0,30х103/мкл на 15-е сутки (Р<0,001, Р1>0,05), за счет пострадиационного аграну-лоцитоза с 9-кратным, до 0,26±0,03х103/мкл, сокращением численности нейтрофилов и отсутствием эозинофилов в пробах, абсолютной моноцитопении (0,08±0,03х103/мкл) и лимфоцитопе-нии (7-кратное уменьшение количества лимфоцитов по сравнению с исходными данными). Абсолютная нейтропения сопровождалась гиперрегенераторным ядерным сдвигом.
Вслед за первоначальным падением, содержание лейкоцитов в крови повысилось к концу 3-й недели до 4,11±,08х103/мкл, спустя еще 7 дней снизилось до 3,80±0,08х103/мкл (Р2<0,001, Р3>0,05). Отмечался дефицит сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов. В пробах присутствовали миелоциты и метамиелоциты (соответственно 0,50 и 3,50% в лейкоформуле), было вдвое повышено процентное содержание палочкоядерных нейтрофи-лов. Однократное облучение в дозе 5 Гр в первые 2 недели после воздействия вызвало пострадиационное опустошение костного мозга с уменьшением объема клеточной массы пунктата в 6 и 3,5 раза на 8-й и 15-й день (Р<0,001) и радиационным блоком митозов от 1,06±0,26х103/мкл до 0,044±0,02х103/мкл на 8-е и до 0,090±0,01х103/мкл на 15-е сутки. Первоначальный цитопениче-ский эффект развивался за счет сокращения численности всех разновидностей миелокариоцитов. Миелокариоцитопения продолжалась в течение 2-х недель, ее глубина была максимальной в конце 1-й недели после лучевого удара. Абсолютное количество недифференцированных бластных клеток через 7 дней после повреждения уменьшилось в 5 раз от 0,59±0,18х103/мкл до 0,15±0,07х103/мкл, на 15-е сутки составило 0,39±0,07х 103/мкл. Через 1 неделю после облучения произошло четырехкратное сужение объема пролиферативного гранулоцитарного пула от 2,23±0,04х103/мкл до 0,57±0,03х103/мкл, спустя еще неделю общее количество промиелоцитов, миелоцитов и метамиелоцитов возросло до 1,01±0,04х 103/мкл. Содержание в пунктате зрелых гранулоцитов на 8-й день опыта было в 16 раз меньше первоначального, на 15-й день - в 7 раз. Через 1 неделю после радиоактивного поражения 1 мкл пунктата содержал 27,00±4,00 эозино-филов, что в 6 раз меньше исходного значения, а в конце 2-й недели - 47,00±15,00. На 8-е сутки опыта общее количество пронормобластов и базофильных нормоцитов составило 0,24±0,03х103/мкл, еще через 7 дней - 0,50±0,04х103/мкл. Более чем восьмикратно сократился объем пула гемоглобинсодержащих эритрокариоцитов в конце 1-й недели после воздействия, а еще через 7 дней число полихроматофильных и оксифильных нормоцитов равнялось У от первоначальной величины. Повреждения эритроидного ряда и потери эритрокариоцитов были более значительными, чем повреждения и потери белых клеток пункта-та, что подтверждалось изменением лейкоэритробластического соотношения миелограммы от 1,64±1,00 до 2,35± 1,00.
На 22-е сутки эксперимента, спустя 3 недели после кратковременного воздействия ионизирующей радиации, вслед за первоначальной цитопенической реакцией наблюдалось транзи-торное накопление миелокариоцитов в костном мозге. Общее количество кроветворных предшественниц составило 84000,00±1394,43 /мкл, превысив в 5 раз исходные данные и в 18,5 раз - результат, полученный в конце 2-й недели после облу-
чения (Р<0,001, Р2<0,001). Митотическая активность была повышена - вдвое против первоначальной и >21 раз по сравнению с данными, полученными на 15-е сутки опыта. Энергичное увеличение клеточной массы костномозгового пунктата произошло за счет накопления практически всех разновидностей миелокарио-цитов. Абсолютное количество генераций бластных и созревающих клеток костного мозга достоверно возросло в 10-20 раз.
Через 1 месяц после лучевого воздействия, на 29-й день наблюдения транзиторное (абортивное) накопление кроветворных предшественниц, сменилось новым падением абсолютных показателей. Конечный результат для той или другой генерации миелокариоцитов был различным. В одних случаях содержание клеток в 1 мкл пунктата оставалось в 1,3-2,4 раза выше первоначального - например, абсолютное количество всех миелокариоцитов, мегакарио-цитов, сегментоядерных нейтрофилов, костномозговых эритрокариоцитов, моноцитов и лимфоцитов. Абсолютное количество клеток пролиферативного гранулоцитарного пула и нормоцитов оксифильной генерации оказалось ниже первоначальной величины в 1,6—1,7 раз.
У животных 2-й опытной серии, получавших после облучения мексидол, как и в контрольной группе после облучения развилась анемия с максимальныем снижением эритроцитов и гемоглобина до 3,71±0,03х106/мкл и 94,60±0,40 г/л на 3-й неделе после облучения. В конце опыта количество эритроцитов и концентрация гемоглобина восстановились до первоначальных значений. Применение мексидола полностью предотвращало внутрисосудистый гемолиз эритроцитов и концентрация в плазме свободного гемоглобина достоверно не превышала первоначальную величину. Мексидол не устранял пострадиационное торможение регенераторной активности кроветворного костного мозга и через 1 неделю после облучения ретикулоциты в пробах крови не определялись. Но в последующие недели восстановление количества ретикулоцитов происходило заметно интенсивнее по сравнению с контрольной группой.
У кроликов, не получавших антиоксидант, количество тромбоцитов к концу 2-й недели после облучения сократилось от 289,12 до 60,00 и оставалось на этом уровне до конца эксперимента. Применение мексидола обеспечило почти полную сохранность тромбоцитов венозной крови со следующими результатами еженедельного мониторинга: у интактных 289,17±7,86х103/мкл, через неделю после лучевого удара 200,00±4,71х103/мкл, на 15-е, 22-е и 29-е сутки -соответственно 180,00±4,71х103/мкл, 160,00±4,71х103/мкл и 160,00±4,71х103/мкл. Пострадиационная лейкопения (до
0,78±0,02х103/мкл) на фоне мексидола продолжалась 1 неделю, была чуть менее глубокой по сравнению с результатом контроля - 0,69±0,25х103/мкл. Эта лейкопения была обусловлена потерей всех разновидностей лейкоцитов с развитием абсолютной нейтропении (до 0,61±0,02х 103/мкл), эозинопении (до 0,01±0,002х103/мкл), абсолютных моно- и лим-фоцитопении (от 0,42±0,01х103/мкл до 0,03±0,002х103/мкл соответственно и от 2,84±0,04х103/мкл до 0,41±0,01х103/мкл). Признаки начавшегося восстановления были отмечены на 15-е сутки, когда в 1 мкл крови определялось 2,70±0,03х103 лейкоцитов. Спустя еще неделю, в конце опыта число лейкоцитов в крови -4,60±0,04х103/мкл. Восстановление лейкоцитарного состава крови шло равномерно для всех разновидностей лейкоцитов.
У животных, получавших мексидол, через неделю после облучения 1 мкл костномозгового пунктата содержал 12650,00±1462,59 миелокариоцитов (15767,50±389,45 у здоровых животных). Спустя еще неделю было отмечено достоверное увеличение общей клеточной массы пунктата до 28500,00±291,07/мкл. На 22-е и 29-е сутки опыта абсолютное количество миелокариоцитов равнялось 19000,00±377,50/мкл и 18000±357,46/мкл. Пострадиационная динамика данного показателя на фоне мексидола принципиально и в лучшую сторону отличалась от результатов контрольной группы. Наиважнейшим позитивным отличием является без сомнения практически отсутствие периода миелокариоцитопении. Аналогичным образом мексидол защищал популяцию костномозговых мегакариоцитов, полностью устраняя период послелучевой мегакариоцитопении. Применение мексидола позволило не допустить радиационный блок митозов и сохранить на достаточно высоком уровне проли-
феративную активность миелокариоцитов. Количество митотиче-ски делящихся клеток достоверно не уменьшалось на всех этапах эксперимента. Абсолютное количество недифференцированных бластных клеток через 7 дней после повреждения составило 0,996±0,12х103/мкл, что вдвое превысило первоначальное значение, равное 0,580±0,11х 103/мкл (Р<0,01), в конце 2-й недели после облучения возросло до 2,540±0,07х103/мкл. У особей контроля в эти сроки щло сокращение численности данных клеток
В серии с применением мексидола через 1 неделю после облучения было отмечено незначительное и недостоверное сокращение численности миелокариоцитов (от 15767,50±1,463/мкл до 12650,00±1,463/мкл) за счет послелучевых потерь среди эрит-рокариоцитов. Так, например, абсолютное количество базофиль-ных и оксифильных нормоцитов уменьшилось пятикратно до 0,373±0,06х103/мкл (Р<0,001) и до 0,373±0,06х103/мкл (Р<0,001). Через 2 недели после воздействия радиации 1 мкл пунктата содержал 28500,00±0,291 миелокариоцитов. Этот подъем показателя продолжался не более 7 дней и был связан с интенсивным накоплением в костном мозге всех разновидностей эритрокарио-цитов. Число способных к пролиферации пронормобластов и нормоцитов базофильных выросло до 4,948±0,001 х 103/мкл, превысив первоначальную величину в 2 раза (Р<0,001). Общее количество гемоглобинсодержащих генераций полностью восстановлено. Качественный и количественный состав прочих ростков на данных этапах опыта не пострадал.
На 22-е сутки опыта, через 3 недели после воздействия лучистой энергии объем клеточной массы пунктата сократился до 19000,00±0,471/мкл (Р<0,001, Р1<0,001, Р2<0,001) в результате уменьшения количества почти всех разновидностей миелокарио-цитов. Спустя 4 недели после излучения абсолютное содержание миелокариоцитов в пунктате составило 19000,00±0,357/мкл без отличий от первоначальной величины (Р>0,05), но с достоверным дефицитом клеток гранулоцитарного пролиферативного пула -промиелоцитов 0,218±0,02х103/мкл (0,991±0,02х103/мкл у ин-
Таблица 2
Сравнительная характеристика миелопротекторной активности мексидола и 3-оксипиридина при экспериментальной острой лучевой болезни у кроликов
Серия 1-я Контрольная. Облучение без коррекции 2-я Опытная Облучение + Мексидол 3-я Опытная Облучение + Производное 3-окси-пиридина этилметил гидроксипиридина гемисукцинат
Показатели
Кровь.
1. Анемия: Есть Есть Есть
Продолжительность 4 недели 3 недели 4 недели
Глубина Эритроциты Эритроциты
Эритроциты 3,23±0,01х106/мкл 3,71±0,03х106/мкл 3,47±0,04x 106/мкл
Гемоглобин 83,11±0,64 г/л 94,60±0,4 г/л 81,43±2,02 г/л
Нормализация в
конце опыта Нет Есть Нет
2.Тромбоцитопения: Есть Есть Есть
Продолжительность 4 недели В конце опыта 4 недели
Максимальная
глубина 60х103/мкл 160,00±4,71х 103/мкл 30,00±2,58x103/мкл
В конце опыта 80,00±15,81х103/мкл 160,00±4,71х103/мкл 70,00±2,58x103/мкл
3. Лейкопения: Есть Есть Есть
Продолжительность 2 недели 1 неделя 2 недели
Максимальная
глубина 0,69±0,25х103/мкл 0,78±0,07х103/мкл 0,75±0,07x 103/мкл
Нормализация в
конце опыта Нет Есть Нет
Костный мозг:
1. Миелокариоитопе-
ния: Есть Нет Есть
Продолжительность 2 недели 2 недели
Максимальная
глубина 2000,00±901,0/мкл 2000,00±129,00/мкл
Нормализация в
конце опыта Нет Да Нет
2. Мегакариоцитопе-
ния: Есть Нет Есть
Продолжительность 2 недели 4 недели
Максимальная
глубина 27,78±3,29/мкл 29,38±0,95/мкл
В конце опыта Нормализация Норма 68,75±2,95/мкл
3. Пострадиацион-
ный блок митозов Есть Практически нет Есть
Продолжительность 4 недели 4 недели
В конце опыта Супрессия сохраня- Супрессия отсутст- Супрессия сохраня-
ется вует ется
тактных особей), миелоцитов 0,359±0,05х03/мкл (первоначально 0,596±0,03х103/мкл) и метамиелоцитов 0,363±0,05х103/мкл (исходно 0,630±0,04х103/мкл).
В 3-й опытной серии в качестве радиомиелопротектора был использован оксипиридин, схема вливаний которого полностью соответствовала таковой для мексидола. В крови подопытных животных признаки гипорегенераторной анемии появились на 8-е сутки после облучения - снижение количества гемоглобина от 122,53±2,04 г/л и ретикулоцитов от 0,211±0,06х105/мкл до 0,060±0,002х105/мкл. В последующие недели наблюдения анемия углублялась. На 15-е сутки после радиации появился дефицит эритроцитов (3,71±0,06х106/мкл против 5,13±0,05х106/мкл в начале опыта), ретикулоциты в пробах не обнаруживались. В конце опыта число эритроцитов в крови составило 3,47±0,04х106/мкл, ретикулоцитов 0,035±0,002х105/мкл, концентрация гемоглобина равнялась 81,43±2,02 г/л. В первые 2 недели после облучения была тромбоцитопения до 30,00±2,58х103/мкл, во второй половине опыта - 70,00±2,58х103/мкл. Период глубокой лейкопении (0,70±0,06х103/мкл) продолжался 2 недели, на 22-е сутки эксперимента следовал абортивный подъем показателя до 10,50±0,14х103/мкл, спустя еще неделю - повторное снижение до 3,84±0,07х103/мкл. Динамика отдельных разновидностей лейкоцитов полностью соответствовала схеме «постлучевая цитопения - транзиторное повышение - повторный спад показателей».
В костном мозге после воздействия ионизирующей радиации на фоне вливаний оксипиридина в первые 2 недели отмечалась миелокариоцитопения до 2000,00±129,09/мкл, затем временное увеличение показателя до 14000,00±129,09/мкл, и в конце опыта вторичное снижение до 90,00±471,40/мкл. Количество мегакариоцитов через 1 неделю после повреждения уменьшилось от 138,59±8,14/мкл до 29,38±0,95/мкл, в конце 2-й и 3-й недели -87,50±2,95/мкл, в конце опыта - 68,75±2,95/мкл. Шло пострадиационное торможение митотической активности, которое сохранялось на протяжении опыта. Послелучевая миелокариоцитопе-ния была настолько глубокой, что оказалось невозможным вывести миелограмму - в мазках отсутствовали клетки. На 22-е сутки, в период абортивного подъема, отмечался дефицит палочкоядерных, сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов. В конце опыта (29-е сутки после облучения) число миелокариоци-тов сократилось до 90,00±471,40/мкл за счет спада численности всех разновидностей миелокариоцитов, но наибольшие потери касались эритрокариоцитов - лейкоэритробластическое соотношение в конце опыта равно 3,01/1,00 (1,64/1,00 в начале опыта).
Сравнительная характеристика радиомиелопротекторной активности изучаемых препаратов приведена в табл. 2.
Мексидол при применении его в указанном режиме, оказывает радиомиелопротекторное действие при экспериментальной острой лучевой болезни у кроликов, проявляющееся в уменьшении глубины и продолжительности постлучевых анемии и лейкопении, защите тромбоцитарного звена клеток крови, устранении пострадиационного блока митозов среди миелокариоцитов костного мозга, защите и стимуляции ростков кроветворения. Производное 3-оксипиридина этилметилгидроксипиридина гемисукци-нат в указанном режиме введения не способствует коррекции пострадиационных нарушений кроветворения и клеточного состава крови в эксперименте у кроликов.
Литература
1. Воронина Т.А. и др. // Мат-лы IX Всерос. нац. конгр. «Человек и лекарство».- М.- 2002.
2. Власов А.П. и др. // Эксперим. и клин. фармакол.- 2003.-№1.- С.40-45.
3. Волчегорский И.А. и др. // Клин. медицина.- 2004.- №11.-С.31-35.
4. Дюмаев К.М. и др. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологии ЦНС.- М.,- 1996.- С.52.
5. Белоусова А.К. // Эксперим. онкол.- 1996.- Т.18.- С. 197.
6. Гусев Е.И., Скворцова В.И. // Ишемия головного мозга.-М.: Медицина.- 2002.
7. Воронина Т.А., Середенин С.Б. // Эксперим. и клинич. фармакол.- 2002.- №5.- С.4-17.
8. Климов Ю.В. Производные 3-оксиперидина в профилактике нагноений и стимуляции заживлений п/операционных ран в гинекологической практике: Автореф. дис.. .к.м.н .-М., 2000.
9. Булавкин Ю. В. и др. // Рос. онкол. ж.- 2000.
ANTIOXIDANT CORRECTION OF POSTRADIATION DISTURBANCES OF HEMOPOIESIS AND CELL’S COMPOSITION IN RABBITS IN EXPERIMENT
L.V. IONITCHEVA, L.D. SMIRNOV, I.N. KUSTIKOVA, N.Y. MIKULYAK, A.I. ZINOV’EV
Summary
The application of Mexydol affects upon radiomyeloprotective action at experimental acute radiation sickness in rabbits, revealing to decreasing of depth and duration postradiation anemia and leuco-penia, to defense thrombocytic section of bloodscells, to postradiation bloc elimination between myelocariocytes of spinal brain and to stimulation of hemopoiesis.
Key words: postradiation anemia and leucopenia
УДК 615.324:616.153.922:519.22/.25
ОЦЕНКА НАРУШЕНИЙ МЕЖСИСТЕМНОЙ КООПЕРАЦИИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ДИСЛИПИДЕМИИ И СПОСОБЫ ИХ КОРРЕКЦИИ
Т.И. ВИТКИНА*, Ю.К. КАРАМАН*, С.П. КАСЬЯНОВ**, Е.Г. ЛОБАНОВА, Т.П. НОВГОРОДЦЕВА*
Для коррекции дислипидемии использовали липиды гепатопанкреа-са камчатского краба, обладающие липидкорригирующими, антиок-сидантными и противовоспалительными свойствами, снижающие напряженность функционирования систем организма крыс.
Алиментарная дислипидемия (ДЛП) характеризуется комплексом нарушений, включающих в себя помимо повышения уровня липидов, интенсификацию их перекисного окисления (ПОЛ), изменение функционирования иммунной и антиокси-дантной систем (АОС). Данные процессы вызывают отклонения в работе иммунитета, главным образом, за счет патологического изменения состава клеточных мембран иммунокомпетентных клеток (ИКК) [1, 3, 5]. В свою очередь, основные сигнальные молекулы иммунной системы - цитокины - могут индуцировать существенные изменения в липидном метаболизме [3, 6]. Цито-кины усиливают синтез печеночного холестерина путем индукции экспрессии гена ГМГ-КоА-редуктазы и снижения катаболизма холестерина в печени; ингибируют холестерол-7-альфа-гидроксилазу - ключевой энзим в синтезе желчных кислот [6, 10, 14]. ДЛП характеризуется как внутрисистемными нарушениями, так и сбоем коммуникативно-регуляторных механизмов. Коррекция ДЛП должна включать мероприятия, направленные на регуляцию кооперации основных этиозависимых систем.
Для профилактики и лечения ДЛП могут использоваться препараты из морских гидробионтов, содержащие ю-3 полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК). Известно, что ПНЖК ю-3 оказывают модулирующее влияние на структурнофункциональную организацию клеточных мембран, активность мембраносвязанных ферментов и биосинтез эйкозаноидов [1, 4]. Морские гидробионты содержат ряд др. специфических липидных компонентов, имеющих высокую биологическую активность. Одно из таких веществ - алкил-диацилглицериды (АДГ). Анализ литературных источников [2, 12] и собственных данных [7] показал, что АДГ влияют на гемопоэз, обладают антиокси-дантными и иммуномодулирующими свойствами. Необходимы исследования, позволяющие установить характер комплексного воздействия многокомпонентных природных препаратов, как на функционирование отдельных систем, так и на их кооперацию.
Цель работы - изучение нарушений взаимодействия ли-пидтранспортной, антиоксидантной, иммунной систем при формировании алиментарной дислипидемии у крыс и возможность их коррекции липидами из гепатопанкреаса камчатского краба.
Материалы и методы. Исследовалась функциональная активность липидной фракции гепатопанкреаса камчатского краба Paralithodes camtschatica, содержащей 10% алкил-диацилглицеридов, 10% ПНЖК ю3 и комплекс биоантиоксидантов (альфа-токоферол, бета-каротин). Эксперимент выполнен на
ВФ ГУ ДНЦ ФПД СО РАМН НИИ медицинской климатологии и восста-
*н*овительного лечения, 690105, г. Владивосток, ул. Русская 73-г
** ФГУП Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, 690950, г. Владивосток, ГСП, пер. Шевченко, 4, тел. (4232) 40-08-01
