CC BY
87
Литература
1. Батоцыренова Э.Т., Шантанова Л.Н., Цы-ренжапова О.-Д.Д. Антигипоксические свойства сухого экстракта астрагала перепончатого // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - № 4. - Т. 86, ч. 1. -С. 178-180.
2. Бродова М.С., Минеева М.В., Дороничева
Н.Б. Применение специфических ферментных систем in vitro для выявления целевой биологической активности фармакологически активных веществ // Биомед. технология и радиоэлектроника. - 2004. -№1-2. - С. 24-30.
3. Окислительный стресс: патологические состояния и заболевания / Е.Б. Меньщикова и др. -Новосибирск: Арта, 2008. - 284 с.
4. Николаев С.М. Фитофармакотерапия и фитофармакопрофилактика заболеваний. - Улан-Удэ. -2012. - 278 с.
5. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М.,
- 2000. - 263 с.
6. Степанова М.С. Коррекция окислительного стресса мозга с помощью природных и синтетических антиоксидантов: дис. ... канд. биол. наук. - М. -2009. - 127 с.
Торопова Анна Алексеевна - кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713, е-mail: anyuta-tor@mail.ru
Лемза Сергей Васильевич - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713, е-mail: Lemza@mail.ru
Ажунова Татьяна Александровна - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713.
Хабаева Ольга Владимировна - аспирант лаборатории экспериментальной фармакологии ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713, e-mail: anyuta-tor@mail.ru
Toropova Anna Alexeevna - candidate of biological sciences, researcher, laboratory of safety of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS; ph. (3012) 433713, e-mail: anyuta-tor@mail.ru Lemza Sergey Vasilevich - candidate of biological sciences, senior researcher, laboratory of experimental pharmacology, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, ph. 43-37-13.
Azhunova Tatyana Alexandrovna - doctor of biological sciences, leading researcher, laboratory of safety of biological active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, ph. 43-37-13, e-mail: t.azhunova@mail.ru
Khabaeva Olga Vladimirovna - postgraduate student, laboratory of safety of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS, ph. (3012) 433713.
УДК 615.322
© А.А. Торопова, Д.Э. Гармаев, Я.Г. Разуваева
АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ НАСТОЙКИ CIMICIFUGA DAHURICA (TURCZ.) MAXIM. В УСЛОВИЯХ IN VITRO
В представленной работе проведено исследование антиоксидантной активности настойки Qmicifuga dahurica (Тшга.) Махіт. в условиях in vitro. Установлено, что испытуемое средство обладает выраженной мембраностабилизирующей активностью, проявляет высокую способность к хелатированию ионов Fe2+, а также обладает выраженным антирадикальным действием в отношении DPPH-радикала.
Ключевые слова: Cimicifuga dahurica, антиоксидантная активность, мембраностабилизирующая активность, Fe2+, DPPH, супероксид анион (радикал), оксид азота.
A.A. Toropova, D.E.Garmaev, Ya.G. Razuvaeva
ANTIOXIDANT ACTIVITY OF TINCTURE CIMICIFUGA DAHURICA (TURCZ.)
MAXIM. IN IN VITRO EXPERIMENTS
In the work the research of antioxidant activity of tincture from Qmicifuga dahurica (Ттга.) Мaxim. in in vitro experiments has been carried out. It has been found that the remedy under study has the expressed membrane stabilizing activity, it also demonstrates high ability to chelating of Fe2+ ions and has the expressed antiradical affect on free DPPH
- radical.
Keywords: Cimicifuga dahurica, antioxidant activity, membrane stabilizing activity, Fe2+, DPPH, superoxide anion (radical), nitrogen oxide.
В настоящее время накоплен фактический материал о взаимосвязи развития многих патологических состояний с интенсивностью процессов свободнорадикального окисления (СРО) биомолекул. Известно, что СРО является метаболическим процессом, протекающим в организме в условиях физиологической нормы за счет функционирования согласованной системы антиоксидантной защиты, осуществляющей главным образом контроль за содержанием активных форм кислорода и связыванием ионов Fe2+. Однако при дисбалансе между интенсивностью СРО и функциональной активностью антиоксидантной системы происходит развитие оксидативного стресса, который является одним из ведущих механизмов клеточной патологии, включая нейродегенеративные, аутоиммунные, сердечно-сосудистые и другие заболевания. В связи со значительной интенсивностью окислительного метаболизма в мозге, значительным содержанием в мозговой ткани полиненасы-щенных жирных кислот, являющихся субстратом для перекисного окисления липидов (ПОЛ), а также наличием металлов с переменной валентностью, легко вступающих в окислительновосстановительные реакции, особо подвержена действию оксидативного стресса центральная нервная система. На основании этого актуальным является разработка новых лекарственных средств, направленных на коррекцию расстройств нервной системы, при этом способствующих снижению интенсивности процессов СРО и ингибированию конечных этапов ПОЛ [11, 12].
Цель исследования
Определение антиоксидантной активности настойки Cimicifuga dahurica (Turcz.) Maxim. в условиях in vitro.
Материалы и методы
Настойка C. dahurica получена путем экстракции измельченного сырья 70 % этиловым спиртом.
Для оценки мембраностабилизирующего действия исследуемого фитосредства спиртовую настойку C. dahurica деалкоголизировали. Мембраностабилизирующую активность испытуемого средства оценивали с использованием метода перекисного и осмотического гемолиза 1%-ной суспензии эритроцитов донорской крови [3]. Перекисный гемолиз эритроцитов вызывали реактивом Фентона, компоненты которого были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих 100% лизис эритроцитов:
Fe2SO4* 7H2O - 0,01мг/мл (в пересчете на 100% раствор перекиси водорода). Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. Деалкоголизированную настойку фитосредства исследовали в концентрациях 3,8; 38,0;
380.0 мг/мл, соответствующих экспериментально-терапевтическим дозам. Степень гемолиза определяли фотометрически при длине волны 420 нм. Мембраностабилизирующее действие C. dahurica оценивали в процентах по отношению к показателям в контроле (без добавления фитосредства в инкубационную среду). Рассчитывали концентрацию исследуемого фитосредства, ингибирующую перекисный и осмотический гемолиз на 50 % (IC50).
Антирадикальную активность определяли DPPH-методом [10]. Хелатирующую активность испытуемого средства определяли с использованием о-фенантролинового метода [2]. Влияние исследуемого фитосредства на связывание супероксидных анион-радикалов (О2) оценивали в неэнзиматической системе феназинмето-сульфат / НАДН по методу Chen A.-S. с соавт. [4]; по отношению к NO - по методу Govindarajan R. с соавт. [5]. В качестве веществ сравнения были использованы кверцетин, рутин (Fluka), кофейная, аскорбиновая кислоты и ио-нол (Sigma Aldrich). Все реактивы были аналитического качества и использовались без предварительной очистки. Значения полученных результатов выражены через концентрацию исследуемых средств, необходимую для связывания 50% реактивных частиц в инкубационной среде (IC50).
Спектрофотометрические исследования проведены с применением спектрофотометра CECIL СЕ 2011 (England) в кварцевых кюветах с толщиной слоя 10 мм.
Корреляционный анализ проведен с применением пакета программ Advanced Grapher ver. 2.07, статистическая обработка результатов - по рекомендациям [1].
Результаты и их обсуждение
В исследованиях показано, что деалкоголи-зированная настойка C. dahurica оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие на перекисный и осмотический гемолиз эритроцитов в условиях in vitro (табл.1). Наибольшее мембраностабилизирующее действие исследуемое фитосредство проявляет в концентрации
380.0 мкг/мл, при которой отмечается ингибирование процессов перекисного и осмотическо-
го гемолиза на 87,6 и 82,0% соответственно. При этом 1С50 C. dahurica для перекисного гемолиза составляет 93,3 мкг/мл, а для осмотического - 50,0 мкг/мл. Данный эффект обусловлен,
по-видимому, наличием в его химическом составе тритерпеновых сапонинов и флавоноидов (кверцетин и кемпферол) [12].
Таблица 1
Влияние настойки Cimicifuga dahurica на перекисный и осмотический гемолиз эритроцитов
Условия опыта Концентрация C. dahurica, мкг/мл Перекисный гемолиз, % Осмотический гемолиз, %
Контроль (Erlm) - 100 і 0,11 100 ± 0,07
Опыт (Er/m+C. dahurica) 380,0 12,4 і 0,09 18,0 ± 0,75
38,0 73,7 і 2,25 59,7 ± 2,32
3,8 74,2 і 2,07 83,7 ± 2,86
IC50, мкг/мл 93,3 і 3,15 50,0 ± 1,07
Поскольку известно, что свободные радикалы, образующиеся при распаде реактива Фентона (перекисный гемолиз), индуцируют ПОЛ клеточных мембран и, как следствие, лизис клеток, можно полагать, что ведущим механизмом мембранопротекторного действия испытуемого деалкоголизированного настоя C. dahurica явля-
ется ингибирование процессов СРО. Указанный механизм подтвержден в серии экспериментов in vitro. В частности, показано, что C. dahurica
Т"1 2+
оказывает выраженную Fe -хелатирующую активность, превышающую таковую веществ сравнения. Величина IC50 для настойки C. dahurica составляет 655 мкг/мл (табл. 2).
Таблица 2
Антирадикальная активность спиртовой настойки Cimicifuga dahurica в модельных системах, IC5o
Объект Fe2+ мкг!мл DPPH-метод, мкг!мл o2- мкг!мл NO мкг!мл
Настойка C. dahurica б55і10,52 б3,01і3,15 >5000 >5000
Рутин а >5000 12,10і0,21 1,91і0,11 ^,2^0,52
Кверцетин а >5000 9,91і0,20 32,02і1,15 150,00і4,24
Кофейная кислота3 >5000 11,б0і0,20 б,01і0,23 276,22±8,67
Аскорбиновая кислотаа 150і9,11 4^0,15 101,0і3,21 1045,0і24,17
Ионол а - 45,1і1,37 - -
Примечания: БРРИ-метод - антирадикальная активность в отношении ДФПГ", Бе2+ - Бе2+-хелатирующая активность, О2" - связывание супероксид-анион радикала, N0 - связывание молекул оксида азота (II),3 вещество сравнения.
Установлено, что спиртовая настойка C. dahurica проявляет высокую антирадикальную активность в отношении связывания стабильного БРРИ-радикала (табл. 2). Концентрация исследуемого фитосредства, необходимая для связывания 50 % БРРИ, составляет 63,0 мкг/мл и сравнима с таковой ионолом (1С50 = 45,1 мкг/мл). Данный эффект настойки C. dahurica обусловлен, по-видимому, наличием в ее составе полифенольных соединений и фенолкарбо-новых кислот (кофейная, феруловая, изоферу-ловая) [9].
При изучении влияния исследуемого фитосредства на ряд активных форм кислорода (02- и N0) выявлена его умеренная активность к их инактивации (1С50 >5000 мкг/мл).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что настойка C. dahurica оказывает выраженное мембраностабилизирующее
у 2+
действие, проявляет высокую Бе -хелатирующую и антирадикальную активность. Вероятно, что в основе механизма мембраностабилизирующего действия исследуемого фитосредства лежит ингибирование процессов
СРО биологических мембран. Результаты проведенных исследований дают основание рассматривать настойку C. dahurica в качестве потенциального антиоксидантного средства, характеризующегося значительным содержанием флавоноидов, тритерпеновых сапонинов и фе-нолкарбоновых кислот [6; 7; 8; 9].
Литература
1. Дерффель К. Статистика в аналитической химии. - М.: Мир, 1994. - 98 с.
2. Химический состав сока каллизии душистой (Callisia fragrans Wood.) и его антиоксидантная активность (in vitro) / Д.Н. Оленников и др. // Химия растительного сырья. - 2008. - №4. - С. 95-100.
3. Ковалев И.Е., Данилова Н.П., Андронати С.А. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и другим факторами // Фармакология и токсикология. -1986. - № 4. - С. 89-91.
4. Chen A.-S., Taguchi T., Sakai K. et al. Antioxidant activities of chitibiose and chititriose // Biol. Pharm. Bull. - 2003. - Vol. 26, № 9. - P. 1326-1330.
5. Govindarajan R., Rastogi S., Vijayakumar M. Studies on the antioxidant activities of Desmodium ga-genticum // Biol. Pharm. Bull. - 2003. - Vol. 26, № 10.
- P. 1424-1427.
6. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflanzen -Basel; Stuttgart, 1973. - Bd 6. - 882 S.
7. Kimura O., Sakuroi N., Unone T. Studies on the Chinese crude drug shoma: Isolation and determination of genuine natural products, acetylshengmanol xyloside, 24-O-acetylhydroshengmanol xyloside and shengmanol xyloside, in Cimicifuga daurica and the other Cimicifuga plants // Yakugaku zasshi, 1983. - Vol. 103. - № 3. - P. 293-299; Chem. Abstrs. 1983. - Vol. 98. - № 221680.
8. Liu Y., et al. Two new cyclolanostanol xylo-sides from aerial parts of Cimicifuga daurica // J. Nat. Prod., 2002. - Vol. 65. - № 10. - P. 1486-1488.
9. Oktyabrsky O., Vysochina G., Muzyka N. et. al. Assessment of antioxidant activity of plant extracts using microbial test systems // J. Appl. Microbiol. - 2009. -Vol. 106, № 4. - P. 1175-1783.
10. Seyoum A., Asres K., El-Fiky F.K. Structure-radical scavenging relationships of flavonoids // Phytochemistry. - 2006. - Vol. 67, № 18. - P. 2058-2070.
11. Valko M., et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2007. - Vol. 39, № 1. - P. 4484.
12. Zhao B.L. Natural antioxidants protect neurons in Alzheimers disease and Parkinsons disease // Neuro-chem Res. - 2009. - Vol. 34. - P. 630 - 638.
Торопова Анна Алексеевна - кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713, e-mail: anyuta-tor@mail.ru
Гармаев Дамдин Эрдынеевич - аспирант лаборатории экспериментальной фармакологии ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713.
Разуваева Янина Геннадьевна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории безопасности биологически активных веществ ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН, тел. (3012) 433713, e-mail: tatur75@mail.ru
Toropova Anna Alexeevna - candidate of biological sciences, researcher, laboratory of safety of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, ph. (3012) 433713, e-mail: anyuta-tor@mail.ru Garmaev Damdin Erdyneevich - postgraduate student, laboratory of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS, тel. (3012) 433713.
Razuvaeva Yanina Gennadevna - candidate of biological sciences, senior researcher, laboratory of safety of biologically active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, рЬ (3012) 433713, e-mail: tatur75@mail.ru
УДК 615.40:54
© Т.В. Корнопольцева, Т.А. Асеева, Е.А. Ботоева
ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАСТИТЕЛЬНОЙ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
С учетом сведений научной и народной медицины доказана целесообразность применения растительной композиции, полученной из надземной части панцерины шерстистой (Pаnzerina lanata (L).) и листьев какалии копьевидной ^acalia hastate L.), в качестве средства для лечения гинекологических заболеваний.
Ключевые слова: биологически активные вещества, фармакологическая эффективность.
