CC BY
184
Химия растительного сырья. 2016. №3. С. 41-47. DOI: 10.14258/jcprm.2016031082
УДК 541.127
АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИСТЬЕВ И ЯГОД ГОДЖИ (ДЕРЕЗА ОБЫКНОВЕННАЯ)
© Л.Р. Варданян1, С.А. Айрапетян1, P.JI. Варданян1, P.C. Арутюнян2, Г.Ю. Овсепян3
1 Горисский государственный университет, ул. Авангард, 4, Горис, 3205 (Армения), e-mail:[email protected]
2 Ереванский государственный университет, ул. Алека Манукяна, 1, Ереван 0025 (Армения)
3 Институт физиологии им. Г\. А. Орбели HAH РА, ул. Бр. Орбели, 22, Ереван, 0028 (Армения)
На примере модельной реакции окисления кумола исследованы антиоксидантные свойства этанольных и этил-ацетатных экстрактов листьев и ягод годжи. Определено суммарное содержание антиоксидантных веществ в исследованных экстрактах и их антиоксидантные активности. Установлено, что в наибольшем количестве антиоксидантов (1,95-10"4М/мг) экстрагируется этилацетатом из свежих несушеных ягод, собранных в августе. Эгилацетатом больше всего антиоксидантов экстрагируется из воздушно-сухих образцов листьев годжи (0,81-10"4 М/мг), чем из ягод (0,33-10" 4 М/мг). Показано, что 70% этанол, по сравнению с этилацетатом, в 4 раза меньше экстрагирует антиоксидантные вещества как из ягод, так и из листьев годжи.
Измерены температурные зависимости константы скорости (к7) реакции R02 + /иН —» ROOH + In характеризующие антиоксидантные активности исследованных экстрактов. Установлено, что высокую антиоксидантную активность проявляет экстракт из свежих (невысушенных) ягод годжи к7=12,5-10"4 M''-с"1 (348К).
Ключевые слова: антиоксидантное свойство, антиоксидантная емкость, Lycium harbarum L., ягоды, листья, экстракты.
Введение
Из лекарственных растений в последнее время все больше рекламируются ягоды годжи (дереза обыкновенная, тибетский барбарис, Lycium harbarum L.) как полезный продукт, способствующий долголетию, отличное лекарственное средство для излечения многих заболеваний: онкозаболевания, инфаркт, сахарный диабет, ожирение, повышение температуры тела, ухудшение зрения и т.д. [1]. На востоке эти плоды называют также «ягодами долголетия», «ягодами счастья», и это неслучайно, поскольку при потреблении этих ягод нормализуется уровень сахара и холестерина в крови, уменьшаются жировые отложения, укрепляются кости и зубы, нормализуется давление, проходят головные боли и выводятся из организма токсины.
Столь уникальные свойства ягод годжи (ЯГ) обусловлены их химическим свойством. Установлено [2], что в ЯГ содержится 18 аминокислот (причем из них 8 незаменимых), витамины А, В, Е, С (содержание в ЯГ витамина С в 500 раз превышает его количество в апельсине), более 20 минералов (в этом числе кальций, калий, цинк, железо, натрий, медь, марганец, магний, германий, селен и др.), полисахариды (LBP-1; 2; 3; 4),
- ненасыщенные жирные кислоты (омега-3,6), кароти-
Варданян Луиза Размиковна - кандидат химических наук, доцент, e-mail: [email protected]
ноиды, флавоноиды, биологически активные вещест-
Айрапетян Сюзанна Арсеновна - кандидат химических ва и другие полезные составляющие.
наук, ассистент, e-mail: [email protected] И'! приведенного химического состава следу-
ет, что экстракт из ЯГ должен обладать высокой
Варданян Размик Левонович - доктор химических наук, профессор, e-mail: [email protected]
Арутюнян Ромик Суренович - доктор химических наук, антиоксидантной активностью (АОА). В связи с чем
профессор, e-mail: [email protected] ЯГ считается 100%-ным природным антиоксидан-
Овсепян Грайр Юрикович - соискатель, том [ з | Однако, несмотря на это, в литературе очень e-mail: [email protected]
Автор, с которым следует вести переписку.
мало работ (за исключением [4], где исследовано антиоксидантное действие порошка ЯГ на гомогенатах печени крыс), где на конкретной реакции окисления изучались бы антиоксидантные активности экстракта или сока из ЯГ.
В работах [5-7] нами исследованы антиоксидантные действия (как содержание антиоксидантов, так и их АОА) экстрактов различных органов из более 100 лекарственных растений. Установлено, что в листьях одних и тех же растений содержится большее количество антиоксидантов, чем в их цветках и плодах. В связи с этим в данной работе исследуются содержание антиоксидантов в экстрактах из листьев и ЯГ, а также из сока ЯГ, и их антиоксидантные способности.
Экспериментальная часть
В качестве модельной реакции было выбрано инициированное азодиизобутиронитрилом (АИБН) окисление кумола. За кинетикой окисления кумола следили волюмометрическим методом, измеряя количество поглощенного кислорода в интервале температур 328-348 К и атмосферном давлении (650 мм рт. ст.) кислорода на манометрической установке [8].
Сбор сырья (листьев и ягод) осуществляли из кустарника годжи, произрастающего в Ереване, по мере его вегетации.
Суммарное содержание антиоксидантов было определено: а) в соке ягод (ЯГ1), в этилацетатных экстрактах несушеных ЯГ2, полусушеных ЯГ3, воздушно-сухих ягодах ЯГ4 и воздушно-сухих листьях годжи (ЛГ). Полусушеные образцы ягод получали, расстилая их на бумаге и выдерживая при комнатной температуре один месяц. Из невысушенных ЯГ экстракты получали следующим образом: на выжимку ягод добавили экстрагент (этилацетат (ЯГ2), 100%-ный (ЯГ5) и 70%-ный (ЯГ6) этанол) соотношением 1 : 20 (на 1 г выжимки 20 мл экстрагента), оставили при комнатной температуре в течение суток, затем отфильтровали через бумажный фильтр. После испарения экстрагента при комнатной температуре (298 К) экстракт высушили в вакуумном шкафу.
С целью получения воздушно-сухих образцов листьев и ягод годжи сырье высушивали при 308 К. Полученное сырье расстирали в керамической ступке до порошкообразного состояния (размер частиц < 1 мм). Из полученного порошка экстракт получили вышеописанным способом.
В работе использовались: дважды перегнанная вода (для приготовления 70%-ного раствора этанола), АИБН (в качестве инициатора окисления), кумол (как окисляемое вещество) и хлорбензол (растворитель в реакционной смеси) очищенные по методикам, описанным в [9]. Во всех опытах концентрация кумола составляла 2,87 моль/л. Обьем реакционной смеси (кумол - хлорбензол - АИБН - экстракт) - 5 мл.
Результаты и их обсуждения
На рисунке 1 представлены кинетические кривые поглощения кислорода системой кумол - АИБН -хлорбензол соответственно, в отсутствие (прямая 1) и в присутствии (кривые 2-4) экстрактов из ягод и листьев годжи. На рисунке видно, что в присутствии исследованных экстрактов на кинетических кривых появляются четко выраженные периоды индукции, что свидетельствует о содержании в них антиоксидант-ных веществ.
Обнаруженные периоды индукции (х) описываются уравнением (1), характерным для классических ингибиторов-антиоксидантов (рис. 2).
[1пН] о
т = (1)
где [/иН]о - исходная концентрация ингибитора-антиоксиданта в экстракте, У11 ] - скорость инициирования, /- стехиометрический коэффициент ингибирования - число радикалов, обрывающихся на одной молекуле ингибитора.
Спрямляя экспериментально обнаруженные периоды индукции в координатах уравнения (1), определили суммарное содержание антиоксидантов (/:|/яН|и) в исследованных экстрактах, в единицах М/мг, т.е. концентрацию антиоксидантов при растворении 1 мг экстракта в 1 л раствора. Результаты этих расчетов приведены в таблице.
100% получали, перегоняя 95,6% этанол над СаО.
О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120
ыпн
Рис. 1. Кинетические кривые поглощения кислорода при окислении кумола в отсутствие (1) и в присутствии: (2) - 5,37 мг экстракта из ЯГ5; (3) - 10,65 мг экстракта из ЯГ4, (4) - 3,76 мг экстракта из ЯГ2, (5) - 7,28 мг экстракта из ЛГ. Т=348 К, У1=1,2510_7М с"1
V"1 ■ Ю-'СМ"1 ■ с)
0,0 0,4 0,8 1 ,2 1 ,Б
0 12 3 4
111. МГ
Рис. 2. Зависимость периода индукции поглощенного кислорода от (1) скорости инициирования, при т (экстракт ЯГ2) = 2,43 мг, Т = 348 К; и от массы ЯГ2 (У,= 1,25-10-7 М-с"1)
Из приведенных в таблице результатов следует, что по мере сушки ЯГ содержание антиоксидантных веществ в полученных экстрактах уменьшается примерно в 7 раз (сравнить данные при 348К для экстрактов ЯГ2 и ЯГ4). При измерении суммарного содержания /:|/яН|() в экстрактах из ЯГ (высушенных до одной и той же степени) при разных температурах, наблюдается увеличение содержания/[/иН],, по мере уменьшения температуры эксперимента. Например, для эсктракта ЯГ4 при 348 К /:|/яН|() = 1,8-10~\ а при 328 К -/[/иН],) = 3,3-10"5.
Обнаруженные явления можно объяснить высоким содержанием витамина С (аскорбиновой кислоты - АК) в ЯГ, содержание которого уменьшается по мере высушивания сырья. Причиной является то, что АК подвергается автоокислению и, естественно, чем выше температура или же чем дольше нагреваются ягоды, тем большая часть витамина С будет расходоваться, что приведет к уменьшению периодов индукции окисления, следовательно, и измеряемые величины /[/иН],,. Факт автоокисления АК нами исследован в работе [10].
Рис. 3. Зависимость количества поглощенного кислорода при окислении кумола за время периода индукции в присутствии 7,28 мг экстракта из листьев (1) и 1,13 мг экстракта из ЯГ2 (2) от параметра 1п (1 - \!т). Т = 348 К
Суммарное содержание антиоксидантов в экстрактах ЛГ и ЯГ, и их АОА
Сырье Время сбора m экстракта, т, мин /[/иН]0-104, М kr104, М-'с"1 lgA Е, кал/моль Т,К V„-106, М-с1
мг
Кумол - - 0 0 - - - 348 3,0
2,87 мол/л — — 0 0 0 0 — — — 339 328 2,0 1,0
ЯГ! 20,7 43,5 55,2 18 33 40 0,065 0,057 0,054 - - - 348 3,60 3,75 3,80
яг2 1,13 20 1,33 11,53 2,72
1,86 32 1,32 12,15 348 2,85
2,43 42 1,30 11,75 11,96 10920 2,82
3,76 65 1,28 10,66 2,95
0,75 21 1,34 8,35 339 1,75
0,45 29 1,35 4,82 328 0,96
ЯГ3 15.10.14 1,84 17 0,69 8,15 348 2,60
1,23 18 0,70 5,48 11,68 10770 339 1,78
1,23 43 0,72 3,15 328 0,93
яг4 10,65 26 0,18 7,74 348 1,65
6,00 33 0,26 4,82 12,08 11480 339 1,16
3,00 48 0,33 2,70 328 0,66
яг2 6,12 53 0,65 3,97 348 1,43
яг2 3,06 47 0,72 2,66 11,34 10730 339 1,21
яг2 3,06 117 0,79 1,54 328 0,52
яг5 5,37 - 0 - - - 348 2,7
яг6 5,37 6 0,08 - - - 2,6
яг2 15.06.15 8,25 28 0,25 8,5 - - 1,60
15.08.15 5,55 144 1,95 12,50 - - 348 2,80
15.08.15 7,50 33 0,33 8,75 - - 1,75
ЛГ 8,7 65 0,56 4,92 348 1,38
05.06.15 5,3 2,2 77 84 0,68 0,79 3,48 1,59 12,73 12800 339 328 1,02 0,69
13,30 117 0,66 6,76 348 0,73
15.07.15 3,80 62 0,77 4,32 12,51 12215 339 0,83
2,80 110 0,81 2,30 328 0,45
7,28 79 0,81 6,92 348 1,26
15.08.15 4,85 1,46 95 84 0,92 1,18 4,40 2,45 12,23 11765 339 328 1,20 0,58
ЛГ! 15.06.15 13,3 28 0,16 - - - 348 1,54
15.08.15 13,3 32 0,18 - - - 1,45
Суммарное содержание антиоксидантов определено также в экстрактах ЛГ и ЯГ, собранных в разные времена года. Результаты этих исследований приведены в таблице, откуда следует, что наибольшее количество антиоксидантов экстрагируется из ягод, собранных в августе. Этот результат соответствует выводам [1], где отмечается, что самую высокую биологическую активность проявляют ЯГ, собранные именно в августе.
В таблице приведены также результаты по определению суммарного содержания антиоксидантов в этилацетатных экстрактах из воздушно-сухих листьев ЯГ, собранных также в разные времена года. Из таблицы следует, что листья годжи содержат большее количество антиоксидантов, чем высушенные ягоды. Например, из воздушно-сухих ЯГ, собранных в августе, экстрагируется 3,3-10"5 М антиоксидантов, а из листьев - 8,Ы0~5 М. Экстракты высушенных листьев отличаются от высушенных ЯГ еще тем, что в присутствии экстрактов из листьев скорость реакции окисления кумола после выхода из периодов индукции) Veo остается существенно заниженной по сравнению с безингибированным окислением (см. графу V, в таблице). Эти результаты согласуются с ранее полученными нами результатами [5-7] и объясняются ан-тиоксидантными свойствами продуктов окисления исходных антиоксидантов, находящихся в экстрактах.
В научной литературе больше всего исследуются антиоксидантные свойства этанольных экстрактов лекарственных растений [11-13]. В связи с этим с практической точки зрения интересно было бы сопоста-
вить антиоксидантные свойства этилацетатных экстрактов ЯГ с этанольными экстрактами. Результаты этих исследований представлены в таблице.
Опыты показали, что 100%-ный этанол из свежих (невысущенных) ЯГ не экстрагирует антиоксидантные вещества. В присутствии этих экстрагентов на кинетических кривых поглощения кислорода не обнаруживаются индукционные периоды и они являются слабыми замедлителями окисления кумола. Так, при 348 К (У = 1,25-10"7 М-с1), в присутствии 5,37 мг этого экстракта скорость окисления кумола (V = 2,7-10~6 М-с1) уменьшается всего в 1,11 раза по сравнению с неингибированным окислением (V = 3-Ю"6 М-с"1). Учитывая, что в литературе [11-13] в качестве экстрагента используется 70%-ный этанол, нами опробован и этот экстрагент. Выяснилось, что 70%-ный этанол из листьев и ЯГ экстрагирует антиоксидантные вещества существенно меньше, чем этилацетат. Например, содержание антиоксидантов в этилацетатном экстракте на порядок выше, чем в 70%-ном этанольном, /|/яН| ЯГ4 = 0,18-104М, а/[/иН] ЯГ6= 0,08-104М. Отметим, что аналогичные результаты нами получены при изучении антиоксидантного свойства экстракта тимьяна ползучего [14]. На наш взгляд, эти данные необходимо учитывать, особенно когда ставится цель экстрагировать из лекарственных растений вещества, обладающие антиоксидантными свойствами.
Эффективность экстрактов характеризуется не только содержанием в них антиоксидантов, но и активностью, которая представляет собой константа скорости реакции пероксидных радикалов (в нашем случае кумилпероксидные - ШЭ^ЙОг) с ингибиторами/;?Н
Я0'2 + 1пН -> ЯООН + 1п\
т.е. константой реакции линейного обрыва цепей (А7).
Значения А> определяли по уравнению [15]
[ДО,] к2 £
(2)
где [Д02] - концентрация поглощенного кислорода за время 1< т. т - период индукции, [КН] [ЯН] концен-
'ехр
трация кумола (2,87 М), к2 - константа скорости продолжения цепей, _ 4 577. ю'* ехр[ _ 9800 | [16].
КТ
яо; + ЯН^ЯООН + Я'.
Для экстрактов листьев и ЯГ из прямолинейной зависимости [ДО2] от 1п( 1ч/т) по тангенсу углов наклона полученных прямых (рис. 3) были рассчитаны абсолютные значения А>, характеризующие АОА ингибиторов, содержащихся в исследованных экстрактах. Для параметров А7 в интервале 328-348 К, определены температурные зависимости в аррениусовых координатах (рис. 4). Результаты приведены в таблице.
Рис. 4. Температурная зависимость АОА (к-,) экстрактов ЯГ4 (1) и листьев годжи (2)
Из таблицы следует, что как по содержанию, так и по антиоксидантной активности отличается этил-ацетатный экстракт из свежих (невысушенных) ЯГ. Причем по мере сушки ЯГ в полученных экстрактах уменьшается не только содержание антиоксидантов, но и их АОА (например, при 348 К к- от 1,22-105 до 0,77-105. Это свидетельствует о том, что по мере сушки в ЯГ меняется не только количественный, но и качественный состав антиоксидантов. Это вытекает из того, что АОА, т.е. параметр не зависит от количественного содержания антиокисдантов в реакционной смеси и зависит только от качественного состава антиоксидантов, т.е. какие именно антиоксиданты входят в состав экстракта.
Выводы
Обнаружено ингибирующее действие экстрактов и соков из ЯГ и ЛГ на процесс инициированного окисления кумола.
При применении ЯГ как источника антиоксидантов необходимо осуществлять сбор в августе и использовать в свежем виде. Причем для этой цели можно использовать и листья годжи.
Список литературы
1. НиколаеваЮ.Н. Ягоды годжи. Плоды долголетия и суперздоровья. М., 2015. 90 с.
2. Все о Ягоде Годжи: и польза, и вред // Журнал о здоровом образе жизни «Долгие Лета» [Электронный ресурс]. URL: http://dolgieleta.com/pravilnoe-pitanie/dary-prirody/yagody/yagody-goji.html
3. Годжи. Целебные свойства и применение ягоды годжи [Электронный ресурс]. URL: http://www.magicworld.su/zdorove/203-godzhi-tselebnye-svojstva-i-primenenie-yagody-godzhi.html
4. Плаксен Н.В., Степанов C.B., Текутьева Л.А., Фшценко Е.С., Сон О.М. Исследование антиоксидантного действия сиропов из дикорастущего сырья // Тихоокеанский медицинский журнал. 2013. №2. С. 73-75.
5. Варданян Л.Р., Шутова А.Г., Айрапетян С.А., Варданян Р.Л., Агабеков В.Е., Решетников В.Н. Количественное содержание и активность антиоксидантов в лекарственных растениях различных климатических зон // Доклады Национальной академии наук Беларуси. 2013. Т. 57, №5. С. 72-76.
6. Айрапетян С.А., Варданян Л.Р., Варданян Р.Л. Содержание и активность антиоксидантов этилацетатных экстрактов растений, произрастающих в Горисском регионе Армении // Химический журнал Армении. 2015. Т. 68 (1). С. 40-50.
7. Шутова Т.Г., Шутова А.Г., Варданян Л.Р., Айрапетян С.А., Варданян Р.Л., Агабеков В.Е. Ингибирование окисления эмульсий ненасыщенных жирных кислот эфирными маслами монарды дудчатой и тысячелистника обыкновенного // Труды БГУ. 2013. Т. 8. №1, С. 111-116.
8. Эмануэль Н.М., Денисов Е.Т., Майзус З.К. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе. М., 1965. 375 с.
9. Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. 514 с.
10. Варданян Р.Л., Варданян Л.Р., Айрапетян С.А., Арутюнян Л.Р., Арутюнян Р.Л. Антиоксидантное и проокси-дантное действие аскорбиновой кислоты //Химия растительного сырья. 2015. №1. С. 113-119.
11. Кузнецов Б.Н., Кузнецова С.А., Левданский В.А., Судакова И.Г., Веселова О.Ф. Совершенствование методов выделения, изучение состава и свойств экстрактов березовой коры // Химия в интересах устойчивого развития. 2005. Т. 13. С. 391^100.
12. Кусков В.П. Исследования соединения спирторастворимых веществ в древесной зелени ели сибирской и сосны обыкновенной // Химико-лесной комплекс - проблемы и решения : сб. статей научно-практической конференции. Красноярск, 2001. С. 316-317.
13. Шадрин Е.Е., Корейская И.М., Измалкова Е.М. Определение антиоксидантной активности спиртовых настоев из лекарственного растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. научных трудов. Пятигорск, 2015. Вып. 70.
14. Hayrapetyan S.A., Vardanyan L.R., Vardanyan R.L. Antioxidant activity of creeping thyme (thymus serpyllum 1.) In cumene oxidation reaction//Proceedings Of The Yerevan State University. Chemistry and Biology. 2013. N2. Pp. 23-31.
Поступило в редакцию 27 января 2016 г.
После переработки 4 мая 2016 г.
Vardanyan L.R.1, Hayrapetyan S.A.1, Vardanyan R.L.1*, Harutyunyan R.S.2, Hovsepyan G.Yu.3 ANTIOXIDANT ACTIVITY OF LEAVES AND GOJI BERRIES (LYCIUM BARBARUM)
1 Goris state university, ul. Avangard, 4, Goris, 3205 (Armenia), e-mail: [email protected]
2 Yerevan state university, ul. Aleka Manukyana, 1, Yerevan, 0025 (Armenia)
3 L.A. Orbeli Institute of Physiology ÑAS RA, ul. Br. Orbeli, 22, Yerevan, 0028 (Armenia)
On the exemple of the model reaction of cumene initation oxidation the antioxidant properties of ethanol and ethyl acetate extracts of leares and berries of Lycium barbarum. The summary content of antioxidant substances in the investigated of extracts of Lycium barbarum. It's established that most of antioxidants (l,9510"4M/mg) extracted by ethyl acetate from the fresh, not dried berries, collected in August month.
It's shown that 70% eyhanol as compared with ethylacetate, in 4 times less than extracts antioxidante of substances both from berries and from the leaves of Lycium barbarum. From air-dry standards most antioxidant are extracted from leaves (0,8110"4M/mg), than from berries (0.33- 10-4M/mg).
Measured temperature dependence of speed constans (k7) of reaction R02 + /«H —» ROOH + In, characterizing the antioxidant activity of the investigated extracts.
It was found that high antioxidant activity shown by an extract from fresh-undried berries k7=12,5-10"4 M^ s"1.
Keywords: antioxidant properties, antioxidant activity, Lycium harbarum L., berries, leaves, extracts.
References
1. Nikolaeva Iu.N. Iagody godzhi. Plody dolgoletiia i superzdorov'ia. [Goji berries, longevity and super healthy fetus], Moscow, 2015, 90 p. (in Russ.).
2. Zhurnal o zdorovom obraze zhizni 'Dolgie Leta' [Journal about healthy lifestyles 'long summer']. [Electronic resource], URL: http://dolgieleta.com/pravilnoe-pitanie/dary-prirody/yagody/yagody-goji.html. (in Russ.)
3. Godzhi. Tselebnye svoistva i primenenie iagody godzhi [Goji. Medicinal properties and applications goji berries], [Electronic resource]. URL: http://www.magicworld. su/zdorove/203-godzhi-tselebnye-svoj stva-i-primenenie-yagody-godzhi.html. (inRuss.)
4. Plaksen N.V., Stepanov S.V., Tekut'eva L.A., Fishchenko E.S., Son O.M. Tikhookeanskii meditsinskii zhurnal, 2013, no. 2, pp. 73-75. (in Russ.)
5. Vardanian L.R., Shutova A.G., Airapetian S.A., Vardanian R.L., Agabekov V.E., Reshetnikov V.N. Doklady Natsional'noi akademii naukBelarusi, 2013, vol. 57, no. 5, pp. 72-76. (in Russ.)
6. Airapetian S.A., Vardanian L.R., Vardanian R.L. Khimicheskii zhurnal Armenii, 2015, vol. 68 (1), pp. 40-50. (in Russ.)
7. Shutova T.G., Shutova A.G., Vardanian L.R., Airapetian S.A., Vardanian R.L., Agabekov V.E. Trudy BGU, 2013, vol. 8, no. l,pp. 111-116. (inRuss.)
8. Emanuel' N.M., Denisov E.T., Maizus Z.K. Tsepnye reaktsii okisleniia uglevodorodov v zhidkoi faze. [Chain reactions in the liquid phase oxidation of hydrocarbons], Moscow, 1965, 375 p. (in Russ.)
9. Gordon A., FordR. Sputnik khimika. [Satellite chemist], Moscow, 1976, 514 p. (in Russ.)
10. Vardanian R.L., Vardanian L.R., Airapetian S.A., Arutiunian L.R., Arutiunian R.L. Khimiia rastitel'nogo syr'ia, 2015, no. l,pp. 113-119. (in Russ.)
11. Kuznetsov B.N., Kuznetsova S.A., Levdanskii V.A., Sudakova I.G., Veselova O.F. Khimiia v interesakh ustoichivogo razvitiia, 2005, vol. 13, pp. 391^100. (in Russ.)
12. Kuskov V.P. Khimiko-lesnoi kompleks -problemy i resheniia: Sb. statei nauchno-prakticheskoi konferentsii. [Chemical-forest complex - problems and solutions: Collection of articles of scientific-practical conference], Krasnoiarsk, 2001, pp. 316-317. (in Russ.)
13. Shadrin E.E., Korenskaia I.M., Izmalkova E.M. Razrabotka, issledovanie i marketing novoi formatsevticheskoi produktsii. Sb. Nauchnykh trudov. [Development, research and marketing of new pharmaceutical products. Collection of scientific papers], vol. 70, Piatigorsk, 2015. (in Russ.)
14. Hayrapetyan S.A., Vardanyan L.R., Vardanyan R.L. Proceedings Of The Yerevan State University. Chemistry and Biology, 2013, no. 2, pp. 23-31.
Received January 27, 2016 Revised May 4, 2016
Corresponding author.
