CC BY
696. Korotkov, A.V. Ocenka razdrazhayushchih i allergiriruyushchih svojstv spirtovogo rastvora hlorofilipta invivo i invitro na krolikah. Ego antimikrobnaya aktivnost' na nekotoruyu patogennuyu mikrofloru [The in vivo and in vitro assessment of irritating and allergy-inducing properties of spirit solution of chloride in rabbits. Its antimicrobial activity on some pathogenic microflora] / A.V.Korotkov, EH.K.Papunidi // Izvestiya Gorskogo GAU. - 2013. - Vol.. 50, Part. 2. - P. 165-169.
7. Aktual'nye problemy veterinarnoj toksikologii [The current problems of veterinary toxicology] / M.YA.Tremasov, K.H.Papunidi, EH.I.Semenov, E.YU.Tarasova // Vestnik veterinarii. - 2012. - № 4 (63). - P. 16-18.
УДК 619:615.32:615.9: 633.854.54
АНТИМИКРОБНЫЕ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ОЗОНИРОВАННОГО ЛЬНЯНОГО МАСЛА
Л.В.Бледных - кандидат ветеринарных наук, доцент; С.В.Николаев - старший преподаватель;
И.Г.Конопельцев - доктор ветеринарных наук, профессор
ФГБОУ ВО "Вятская государственная сельскохозяйственная академия», г. Киров (610017, г.Киров, Октябрьский пр., 133; тел. +7(332) 57-43-04, е-mail: info@vgsha.info).
Научный поиск экологически безопасных лекарственных средств, обладающих неспецифической полиантимикробной активностью для оказания лечебной помощи животным с акушерско-гинекологической патологией, остается одним из приоритетных направлений ветеринарного акушерства. Целью исследований явилось изучение антимикробных и токсикологических свойств у озонированного льняного масла. В работе использованы нерафинированные подсолнечное, льняное, кукурузное, оливковое и горчичное масла. Насыщение масел озоном проводили с помощью сертифицированного медицинского генератора озона. Антимикробные свойства обработанных озоном масел определяли на музейных штаммах Staphylococcus аигеив и Escherichia соИ. Суспензию бактерий, смешанную с озонированным средством, инкубировали в течение 30 минут или 2-х часов. Оценку острой токсичности у озонированного льняного масла проводили на здоровых половозрелых белых мышах-самцах, живой массой 22-26 граммов. Для изучения реакции замедленного типа сенсибилизацию мышей проводили путем двукратного внутрибрюшинного введения озонированного льняного масла в переносимой дозе 0,1 мл, предварительно разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:4 с интервалом сутки. Среди растительных масел наибольшей антимикробной активностью после обработки озоном обладало льняное масло. При шуттелировании озонированных масел и микроорганизмов в течение 2-х часов они ингибировали рост музейных культур в разведении 108 м.т/мл. При инкубировании озонированных масел с взвесью музейных культур в течение 30 минут озонированное льняное масло сдерживало рост золотистого стафилококка в концентрации 104, а кишечной палочки - в 105 м.т./мл. Оптическая плотность льняного масла интенсивно изменяется в первые 5,5 часов барботирования озоно-кислородной смесью. При парентеральном введении озонированного льняного масла переносимая доза для мышей составила 4000 мг/кг, токсическая доза - 6600 мг/кг, а ЛД40 - 10000 мг/ кг. В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 оно относится к 4 классу токсичности (ЛД50 более 1000 мг/кг). Рекомендуемая разовая доза озонированного льняного соответствует 187,2 мл для коровы с живой массой 600 кг. Озонированное льняное масло не вызывает проявление реакции замедленного типа. Озонированное льняное масло при 30 минутной инкубации с суспензией культуры, подавляет рост Staphylococcus аureus при концентрации 104, и Escherichia rnli при концентрации 105 м.т./мл. Насыщение озоном льняного масла в объеме 400,0 мл необходимо проводить не менее 5 часов. Оно обладает незначительным и кратковременным раздражающим эффект, относится к 4 классу токсичности и не вызывает реакции гиперчувствительности замедленного типа.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: озонированное льняное масло, антимикробные свойства, токсичность.
Поступательное развитие сельскохозяйственных предприятий, основной деятельностью, которых является разведение пород молочного скота, зависит от количества произведенной продукции с минимальными затратами. Однако с ростом молочной продуктивности коров отмечается и высокая заболеваемость их акушерско-гинекологическими болезнями [2, 4], что приводит к удорожанию продукции. В этиопатогенезе воспалительных болезней матки и
вымени у коров особое место отводится различным микроорганизмам [1, 2, 5].
Несмотря на большое количество антимикробных препаратов, применяемых при лечении и профилактике акушерско-гинекологической патологии животных, в связи с возросшими требованиями к молоку и все чаще встречаемой устойчивостью возбудителей, на первое место выходит поиск новых экологически безопасных лекарственных средств, не снижающих каче-
ственных характеристик животноводческой продукции и обладающих широким диапазоном антимикробного действия [3, 7, 8, 11].
В связи с вышеизложенным, представляется важной научная работа по оценке антимикробных свойств и токсичности у растительных масел после различного режима барботирования озоно-кислородной смесью. Как известно появление у них способности подавлять жизнедеятельность различных микроорганизмов объясняется синтезом в них озонидов, которые активно провоцируют окисление липидного слоя микробной стенки, нарушая метаболические процессы [4, 6].
Цель исследования - изучение антимикробных и токсикологических свойств у озонированного льняного масла.
Материалы и методы. Экспериментальные исследования проводились в 2016 году в производственной ветеринарной лаборатории АО Агрофирма «Доро-ничи» и лаборатории кафедры хирургии, акушерства и заразных болезней Вятской ГСХА (г.Киров).
Озон получали с помощью сертифицированного медицинского генератора озона «А-с-ГОКСф-5-02-0-ЗОН» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства ОАО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» г. Киров из химически чистого кислорода. Для исследований были взяты нерафинированные растительные масла: подсолнечное, льняное, кукурузное, оливковое, горчичное. Масла в объеме 400 мл барботировали озоно-кисло-родной смесью посредством керамического распылителя, при концентрации озона на выходе 30 мг/литр и скорости подачи кислорода 1,5 литра в минуту.
Антимикробные свойства обработанных озоном масел определяли на музейных штаммах Staphylococcus aureus АТСС 25923 № 201189 и Escherichia coli АТСС 25922 № 240533 по методике, предложенной Платоновым В.А. с соавт. [9] в нашей модификации. Для этого по стандарту мутности получали суспензию бактерий на физиологическом растворе с концентрацией 1 х 109м.т./ мл и готовили ряд десятикратных разведений от 109 до 102. Взвесь бактерий смешивали 1:1 с предварительно приготовленной 50%-ной эмульсией масел. Эмульсию получали путем смешивания 10,0 мл масла с 10,0 мл физиологического раствора и добавлении 0,2 мл эмульгатора полисорбат 80. Суспензию бактерий, смешанную с полученной эмульсией, инкубировали в течение 30 мин или 2-х ч при комнатной температуре, встряхивая в шуттель-аппарате, после чего 0,1 мл смеси высевали на МПА и инкубировали в термостате при температуре 380С. Результат учитывали через 24, 48 и 72 ч путем визуального подсчета колоний. Контролем служили пробы, в которых использовали те же масла, не подвергнутые обработкой озоном.
Изменения оптической плотности льняного масла при обработке озоном определяли с применением калориметра фотоэлектрического концентрационного КФК - 2МП в спектре длины волн 340 нм.
Доклиническое исследование озонированного льняного масла проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [10]. Раздражающее действие исследовали на кроликах породы шиншилла, путем аппликации на конъюнктиву глаза. Учет результатов проводили через 5, 60 мин, 3, 24, 48 ч и 7 суток.
Исследование острой токсичности проводили на здоровых половозрелых белых мышах-самцах, живой массой 22-26 г, полученных из вивария Вятской ГСХА. Животные во время опыта находились в одинаковых условиях, получали идентичный корм и имели свободный доступ к воде. Для эксперимента сформировали 4 группы по 10 мышей в каждой. Предварительно готовили эмульсию, состоящую из 10,0 мл физиологического раствора, 10,0 мл льняного озонированного масла и 0,2 мл эмульгатора полисорбат 80, которую разводили на стерильном физиологическом растворе натрия хлорида в убывающей концентрации - 1:1, 1:2 и 1:4. Первой, второй и третьей опытной группе мышей вводили однократно внутрибрюшинно 1,0 мл соответствующего разведения препарата. Мышам контрольной группы в таком же объеме вводили физиологический раствор. Максимальная доза озонированного льняного масла при этом составила 0,25 мл или в пересчете на массу тела мыши - 10000 мг/кг, минимальная доза - 0,1 мл или 4000 мг/кг. За животными наблюдали в течение 14 сут, первые 6 ч мыши находились под постоянным наблюдением.
Взвешивание мышей проводили до кормления через 1, 3, 7 и 14 сут от начала опыта. Острую интоксикацию организма экспериментальных животных в результате применения озонированной эмульсии оценивали по клинической картине и выживаемости в зависимости от дозы препарата. При этом учитывали изменение поведения и двигательной активности, массы тела, аппетита и жажды, характер фекальных масс, состояние волосяного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, частоту дыхательных движений, изменение массы тела. Павших в ходе опыта животных, а также вынужденно убитых вскрывали и проводили макроскопическую оценку состояния внутренних органов.
Для изучения реакции замедленного типа было сформировано две группы животных - опытная и контрольная (п=6). Сенсибилизацию мышей опытной группы проводили путем двукратного внутрибрюшин-ного введения озонированного льняного масла в переносимой дозе 0,1 мл, предварительно разведенной физиологическим раствором в соотношении 1:4 с интервалом сутки. Мышам контрольной группы двукратно внутрибрюшинно вводили 0,5 мл физиологического раствора натрия хлорида с интервалом 24 часа.
Через пять суток после последней инъекции животным обеих групп в плюсну одной лапы вводили разрешающую дозу озонированной эмульсии в объеме 0,01 мл, а другой лапы - 0,01 мл физиологического раствора.
ЕГЕПШАРНЫЙ
Врач
Спустя 24 часа измеряли толщину задних лап в области плюсны при помощи инженерного микрометра МК-25. Индекс отека у мышей каждой группы рассчитывали по формуле: И=(Уо - Ук) / х 100, где Уо - толщина опытной лапы, Ук - толщина контрольной лапы.
Полученный материал обработан методом вариационной статистики на достоверность различия сравниваемых показателей с использованием кри-
терия Стьюдента с применением программного комплекса Microsoft Excel.
Результаты исследований. На первом этапе экспериментальной работы провели исследования по оценке антимикробных свойств у различных растительных масел после барботирования озоно-кислородной смесью в течение 4-х часов. В ходе исследований было установлено, что наибольшей антимикробной активностью обладает озонированное льняное масло (табл. 1, 2).
Таблица 1
Антимикробные свойства различных озонированных масел при 2-х ч инкубации с музейной культурой
бактерий
Озонированное масло Максимальная концентрация микробных клеток в мл, при которой после экспозиции с маслом рост культуры отсутствует
Staph.eureus E. соП
Льняное 108 108
Оливковое 108 108
Кукурузное 108 108
Подсолнечное 107 107
Горчичное 105 107
Контроль (не озонированные масла) Рост во всех разведениях Рост во всех разведениях
Таблица 2
Антимикробные свойства различных озонированных масел при 30 мин инкубации с музейной культурой
бактерий
Озонированное масло Максимальная концентрация микробных клеток в мл, при которой после экспозиции с маслом рост культуры отсутствует
Staph.eureus E. соП
Льняное 104 105
Оливковое 103 103
Кукурузное 102 102
Подсолнечное Рост во всех разведениях Рост во всех разведениях
Горчичное 102 103
Контроль (не озонированные масла) Рост во всех разведениях Рост во всех разведениях
Так, при шуттелировании смеси в течение 2-х часов (таблица 1), антимикробные свойства озонированного льняного, оливкового и кукурузного масла имели одинаковые значения и ингибировали рост музейных культур при их максимальной концентрации в разведении, соответствующем 108 м.т/мл. При шуттелировании озонированных масел с взвесью музейных культур в течение 30 мин (табл. 2), наибольшую антимикробную активность показало озонированное льняное масло, которое ингибировало рост золотистого стафилококка при его концентрации 104 и кишечной палочки 105 м.т./мл. Для дальнейших исследований, исходя из полученных данных, нами было выбрано льняное масло, как показавшее наибольшую антимикробную активность после обработки озоном.
На следующем этапе экспериментальной работы изучили изменения антимикробных свойств и оптической плотности льняного масла в зависимости от продолжительности его барботирования озоно-кислород-ной смесью (табл. 3).
Анализируя данные таблицы 3, можно сделать вывод, что при обработке озоно-кислородной смесью 400,0 мл льняного масла, его антимикробные свойства усиливаются в течение первых 5 ч барботирования, а более продолжительное воздействие на льняное масло озоно-кисло-родной смесью не ведет к дальнейшему увеличению его антимикробной активности. Оптическая плотность льняного масла также интенсивно изменяется в первые 5,5 ч барботирования. За указанный период насыщения масла озоном, поглощающая способность выбранного спектра
Таблица 3
Изменения оптической плотности и антимикробных свойств льняного масла в зависимости от продолжительности его барботирования озоно-кислородной смесью
Время барботирования озоно - кислородной смесью, мин Изменение оптической плотности Максимальная концентрация микробных клеток в мл, при которой после 30 мин экспозиции с маслом рост культуры отсутствует
Staph. aureus Е. соП
0 1,000 рост во всех разведениях рост во всех разведениях
30 0,924 рост во всех разведениях рост во всех разведениях
60 0,891 рост во всех разведениях рост во всех разведениях
90 0,862 рост во всех разведениях 102
120 0,835 102 103
150 0,816 102 103
180 0,795 103 103
210 0,781 103 104
240 0,769 104 105
270 0,754 104 105
300 0,716 105 106
330 0,709 105 106
360 0,701 105 106
390 0,700 105 106
420 0,699 105 106
волн маслом понизилась на 29,1%. Дальнейшая обработка льняного масла озоно-кислородной смесью, как показали результаты исследований, не влечет существенного изменения оптической плотности.
Таким образом, исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что при выбранном режиме барботирования озоно-кислородной смесью льняного масла в объеме 400,0 мл, процедуру насыщения озоном необходимо проводить не менее 5 часов. Озонирование любого объема льняного масла при разных режимах барботирования необходимо осуществлять до увеличения поглощающей способности в спектре волн 340 нм не менее, чем 0,716, при котором озонированное льняное масло начинает проявлять наибольшую антимикробную активность.
В дальнейшем мы провели ряд доклинических исследований изучаемого озонированного льняного масла, которое нами предполагается использовать как этиотропное средство при акушерской и гинекологической патологии у коров.
В ходе исследований раздражающего действия озонированного льняного масла на конъюнктиву глаза кролика нами было установлено, что оно обладает кратковременным и незначительным раздражающим действием, которое исчезает через 5 мин после его нанесения.
Результаты исследований по определению острой токсичности озонированного льняного масла представлены в таблице 4.
Таблица 4
Проявления острого токсического действия озонированногольняного масла (n=10)
Количество животных с проявлениями клинической картины интоксикации
Группа Количество эмульсии (озон. масла) снижение массы тела и аппетита изменение поведения кратковременное учащение дыхания, возбуждение цианоз кожи и слизистых оболочек отечность век Погибло животных
1 0,25 мл (10000 мг/кг) 10 10 0 4 4 4
2 0,165мл (6600мг/кг) 10 10 10 0 0 0
3 0,1мл (4000мг/кг) 0 0 0 0 0 0
4 Контрольная группа (физ. раствор, 0,5 мл) 0 0 0 0 0 0
ЕГЕПШАРНЫЙ
Врач
Данные таблицы 4 показывают, что после введения озонированного льняного масла животным второй опытной группы в дозе 0,165 мл (6600 мг/кг) наблюдали следующую картину интоксикации: сразу после введения препарата у всех мышей отмечалось возбуждение, учащение дыхания, проявлялись рефлексы умывания и почесывания, затем наступало незначительное угнетение, снижение аппетита. Спустя час состояние животных нормализовалось, аппетит восстановился. Снижения массы тела на следующий день и в последующем не происходило. Погибших животных в данной группе не было.
Аналогичную картину наблюдали у мышей первой опытной группы, которым было введено масло в максимальной дозе 0,25 мл (10000 мг/кг). Но вышеперечисленные симптомы проявились значительно позже, через 1-1,5 ч после введения препарата. Возможно, это связано с более медленной резорбцией препарата в разведении 1:1, чем при разведении 1:2. При этом у четырех мышей из группы отмечали признаки прогрессирующего ухудшения общего состояния: мыши сидели, сгорбившись, отказывались от корма и воды, в последующем развился блефароспазм, отек век, цианоз кожи и слизистых оболочек. На следующий день произошла их гибель. При внешнем осмотре трупов отмечали следующее: сильную отечность век, увеличение живота, цианоз кожи и слизистых оболочек, при взвешивании - снижение массы. При вскрытии у всех павших мышей наблюдали следующую патологоана-томическую картину: желудок и кишечник не содержал кормовых масс, сердце было увеличено в размере, его
Как показывают результаты исследований, индекс отека в опытной группе недостоверно отличается от индекса отека в контрольной группе, соответственно озонированное льняное масло не вызывает проявление реакции замедленного типа.
Заключение. Наибольшей антимикробной активностью обладает озонированное льняное масло, которое после 4-х часового барботирования озо-но-кислородной смесью при 30 мин инкубации с суспензией культуры, подавляет рост музейного штамма Staph. aureus при концентрации 104, и Е.соИ при концентрации 105 м.т./мл.
Насыщение озоном льняного масла в объеме 400,0 мл необходимо проводить не менее 5 часов,
Литература
верхушка притуплена, миокард истончен, в печени и почках острая застойная гиперемия.
У остальных мышей первой опытной группы общее состояние нормализовалось на вторые сутки наблюдения, аппетит постепенно восстановился. В целом по группе наблюдалось недостоверное снижение массы тела на вторые сутки, которая через три дня вернулась к исходной, а через 14 сут. не отличалась от массы тела мышей других опытных и контрольной групп.
При введении животным третьей опытной группы препарата в дозе 0,1 мл (4000 мг/кг), гибель не наблюдалась, общее состояние и патологоанатомическая картина вынужденно убитых мышей - без изменений.
Таким образом, на основании результатов по определению острой токсичности озонированной эмульсии на основе льняного масла, было установлено, что при парентеральном введении препарата переносимая доза для мышей составила 4000 мг/кг, токсическая доза - 6600 мг/кг, а ЛД40 - 10000 мг/кг. В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 данный препарат относится к 4 классу токсичности (ЛД50 более 1000 мг/кг) и характеризуется как малотоксичный. С учетом коэффициентов межвидового пересчета доз лекарственных препаратов в зависимости от массы тела рекомендуемая разовая доза коровам для клинических испытаний составляет не более 624 мг/кг, что соответствует 187,2 мл масла для коровы с живой массой 600 кг.
В дальнейшем провели исследование аллергизи-рующего действия озонированного льняного масла. Результаты исследований представлены в таблице 5.
или до достижения его оптической плотности равной 0,71 и более при длине волны спектра 340 нм.
Доклинические исследования озонированного льняного масла показали, что оно оказывает незначительный и кратковременный раздражающий эффект, относится к 4 классу токсичности (малотоксичный) и не вызывает реакции гиперчувствительности замедленного типа.
Таким образом, все описанное выше дает теоретическое обоснование возможности применения данного препарата, как этиотропного средства для профилактики и терапии воспалительных заболеваний матки и молочной железы у коров.
Таблица 5
Проявление аллергизирующего действия озонированной эмульсии на белых мышах
Группа Толщина контрольной лапы, мкм (физ. раствор) Толщина опытной лапы, мкм (озонир. масло) Индекс отека в группе
Опытная 230,67+9,28 335,67+6,33 45,77+3,42
Контрольная 217,33+8,64 308,0+5,69 42,15+5,99
1. Дубовикова, М.С. Микробная контаминация гениталий коров, больных хроническим эндометритом / М.С. Дубовикова, И.С.Коба, Н.И.Крюков // Актуальные проблемы современной ветеринарной науки и практики: материалы Междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию Краснодарского НИВИ. - Краснодар, 2016. - С. 367-371.
2. Иноземцев, В.П. Акушерско-гинекологические болезни у коров в сельхозпредприятиях России / В.П.Иноземцев // Итоги и перспективы научных исследований по проблемам патологии животных и разработке средств и методов терапии и профилактики: материалы координац. совещания. - Воронеж, 1995. - С. 254-258.
3. Конопельцев, И.Г. Применение озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров-первотелок / И.Г.Конопельцев, С.В.Николаев // Ветеринария. - 2016. - № 6. - С. 36-41.
4. Конопельцев, И.Г. Антимикробная активность нового носителя озонидов / И.Г.Конопельцев, Д.А.Троегу-бов, В.А.Платонов // Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-гинекологических заболеваний и биотехники размножения животных: материалы Междунар. науч.-практ. конф. - Киров, 2005. - С. 71-75.
5. Конопельцев, И.Г. Озонотерапия и озонопрофилактика воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров: автореф. дис. ... д-ра вет. наук / И.Г.Конопельцев. - Воронеж, 2004. - 40 с.
6. Конопельцев, И.Г. Ультраструктурные изменения у микроорганизмов при обработке озонированным рыбьим жиром / И.Г.Конопельцев, Е.В.Видякина, А.А.Костяев // Нижегородский медицинский журнал. - 2005. -Приложение. - С. 236-237.
7. Муравина, Е.С. Разработка и эффективность способа терапии больных послеродовым эндометритом коров с применением озонированной эмульсии: дис. ... канд. вет. наук / Е.С.Муравина. - Воронеж, 2013. - 149 л.
8. Николаев, С.В. Заболеваемость коров разного возраста послеродовым эндометритом в условиях привязного содержания и его профилактика с применением озонированной эмульсии / С.В.Николаев, И.Г.Конопельцев // Пермский аграрный вестник. - 2016. - № 2. - С. 133-140.
9. Пат. 2240556 Рос. Федерация, МКП7 в01Ы033/02. Способ определения антимикробной активности растительных масел ¡пуйго / В.А.Платонов, Е.В.Копылова, Е.Р.Клабукова, И.Г.Конопельцев, И.М. Земцова; патентообладатель Кировская медицинская академия. - № 2002130225/13; заявл. 10.11.2002; опубл.20.11.2004, Бюл. № 32. - 6 с.
10. Хабриев, Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Р.У.Хабриев. - М.: ОАО «Изд-во «Медицина», 2005. - 832 с.
ANTIMICROBIAL AND TOXICOLOGICAL PROPERTIES OF OZONATED FLAXSEED OIL
Blednykh L.V. - Candidate of Veterinary Sciences; Nikolaev S.V. - senior lecturer;
Konopeltsev I.G. - Doctor of Veterinary Medicine, professor.
Vyatka State Agricultural Academy, Kirov (e-mail info@vgsha.info).
The scientific search for environmentally safe medications with non-specific antimicrobial activity to provide medical care to animals with obstetric-gynecological pathology is one of the priorities of veterinary obstetrics. Its relevance is due to the increased resistance of microorganisms, the demand for high quality livestock products, the need to extend the economic use of the genetic potential of highly productive animals. The purpose of the research was to study the antimicrobial and toxicological properties of ozonated flaxseed oil. Unrefined sunflower, flax, corn, olive and mustard oil was used in the studies. The saturation of the oil with ozone was carried out by a certified medical ozone generator. Antimicrobial properties, the ozone-treated oils were determined according to Staphylococcus aureus and Escherichia coli reference strains. The suspension of bacteria mixed with ozonized medium was incubated during 30 minutes or 2 hours. The acute toxicity of ozonated linseed oil was evaluated on healthy mature white mice males with body weight ranging from 22 to 26 grams. The reaction of delayed-type sensitization in mice was studied by twofold intraperitoneal administration of ozonated linseed oil in a tolerance dose of 0.1 ml, diluted with saline solution in 1:4 ratio with a day-long interval. Of the vegetable oils linseed oil had the highest antimicrobial activity after treatment with ozone. At shuttle-bay treatment of ozonated oils and microorganisms for 2 hours the oils inhibited the growth of the reference bacteria cultures in culturing 108 m. t/ ml. At incubation of ozonized oils with reference bacteria culture suspension for 30 minutes ozonated linseed oil inhibited the growth of Staphylococcus aureus at concentrations of 104, and E. coli - 105 m. t./ml. The optical density of linseed oil significantly changes during the first 5.5 hours of bubbling ozone-oxygen mixture. For parenteral administration of ozonated Flaxseed oil the tolerated dose for mice was 4000 y/kg, toxic dose was 6600 mg/kg, and LD40 was 10000 y/kg. According to the State standard # 12.1.007-76 linseed oil belongs to the 4th class of toxicity (LD50 more than 1000 mg/kg).The recommended single dose of ozonated Flaxseed is 187.2 ml for cows with body weight of 600 kg. Ozonated Flaxseed oil does not cause the manifestation of the reaction of delayed-type. Ozonated linseed oil at 30 minute incubation, the suspension culture inhibits the growth of Staph.aureus at a concentration of 104, and E. coli at a concentration of 105 M.T./
ml. Linseed oil in the amount of400.0 ml must be ozonated during at least 5 hours. It has a slight irritating effect and belongs to the 4 th class of toxicity and does not cause hypersensitivity reaction of the delayed type.
KEYWORDS: ozonated Flaxseed oil, antimicrobial properties and toxicity.
References
1. Dubovikova, M.S. Mikrobnaya kontaminaciya genitalij korov, bol'nyh hronicheskim ehndometritom [Microbial contamination of the genitalia of cows with chronic endometritis] / M.S.Dubovikova, I.S.Koba, N.I.Kryukov // Aktual'nye problemy sovremennoj veterinarnoj nauki i praktiki - Current problems of modern veterinary science and practice:proceedings from Int.sci.and pract.conference dedicated to 70th anniversary of Krasnodar Veterinary Research Institute. - Krasnodar, 2016. - P.367-371.
2. Inozemcev, V.P. Akushersko-ginekologicheskie bolezni u korov v sel'hozpredpriyatiyah Rossii [Obstetric and gynecological diseases in cows in farms of Russia] / V.P. Inozemcev // Itogi i perspektivy nauchnyh issledovanij po problemam patologii zhivotnyh i razrabotke sredstv i metodov terapii i profilaktiki- Results and perspectives of scientific. Investigations of problems of animal pathology and development of means and methods of therapy and prevention: proceedings from coordination. meeting. - Voronezh, 1995. - P.254-258.
3. Konopel'cev, I.G. Primenenie ozonirovannoj ehmul'sii pri poslerodovom ostrom ehndometrite u korov-pervotelok [Use of ozonated emulsion in treatment of heifers with acute postpartum endometritis] / I.G.Konopel'cev, S.V.Nikolaev // Veterinariya meditsina. - 2016. - Vol. 6. - P. 36-41.
4. Konopel'cev, I.G. Antimikrobnaya aktivnost' novogo nositelya ozonidov[Antimicrobial activity of new source of ozonides] / I.G.Konopel'cev, D.A.Troegubov, V.A.Platonov // Povyshenie ehffektivnosti lecheniya i profilaktiki akushersko-ginekologicheskih zabolevanij i biotekhniki razmnozheniya zhivotnyh - Increase the effectiveness of treatment and prevention of obstetric-gynecologic diseases and Biotechny and animal reproduction: proceedings from Int.sci.and pract.conference - Kirov, 2005.- P. 71.
5. Konopel'cev, I.G. Ozonoterapiya i ozonoprofilaktika vospalitel'nyh zabolevanij i funkcional'nyh rasstrojstv matki u korov [Ozone-based therapy and prevention of inflammatory diseases and functional disorders of the uterus in cows]: abstrat from dissertation of Doctor of Veterinary Medicine. - I.G.Konopel'cev. - Voronezh, 2004. - 40p.
6. Konopel'cev, I.G. Ul'trastrukturnye izmeneniya u mikroorganizmov pri obrabotke ozonirovannym ryb'im zhirom [Ultrastructural changes in microorganisms at processing with ozonized cod liver oil] / I.G.Konopel'cev, E.V.Vidyakina, A.A.Kostyaev // Nizhegorodskij medicinskij zhurnal. - 2005. - Appendix. - P. 236-237.
7. Muravina, E.S. Razrabotka i ehffektivnost' sposoba terapii bol'nyh poslerodovym ehndometritom korov s primeneniem ozonirovannoj ehmul'sii [Development and efficiency of ozonized emulsion-based treatment of cows with postpartum endometritis]: dissertation thesis for Candidate of veterinary Sciences / E.S.Muravina. - Voronezh, 2013. - 149p.
8. Nikolaev, S.V. Zabolevaemost' korov raznogo vozrasta poslerodovym ehndometritom v usloviyah privyaznogo soderzhaniya i ego profilaktika s primeneniem ozonirovannoj ehmul'sii [Postnatal endometritis sickness rate in cows of different ages and its prevention with the application of ozonized emulsion]/ S.V.Nikolaev, I.G.Konopel'cev // Permskij agrarnyj vestnik. - 2016 - Vol.2. - P. 133-140.
9. The Russian Federation Patent 2240556 IPC7 G01N033/02. Sposob opredeleniya antimikrobnoj aktivnosti rastitel'nyh masel invitro [A method of in-vitro identification of antimicrobial activity of herbal oils] / V.A.Platonov, E.V.Kopylova, E.R.Klabukova, I.G.Konopel'cev, I.M.Zemcova; patent owner: Kirov medical academy. - № 2002130225/13; applied on 10.11.2002; published on 20.11.2004, Bulletin № 32. - 6p.
10. Habriev, R.U. Rukovodstvo po ehksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniyu novyh farmakologicheskih veshchestv [A guideline on experimental (preclinical) trial of new pharmacological substances] / R.U.Khabriev. - Moscow: JSC "Publishing house "Medicine", 2005. - 832 p.
