CC BY
24
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 4 - P. 89-93
УДК: 617.3 DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16231
АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ НОВОГО КОСТНОГО КСЕНОМАТЕРИАЛА В ИССЛЕДОВАНИЯХ IN VITRO
З.С. НАУМЕНКО*, Д.В. СМОЛЕНЦЕВ**, М.В. СТОГОВ*, А.Д. КРУЧИНИНА***, Н.В. ГОДОВЫХ*, М.В. ГУРИН****,
Е.А. КИРЕЕВА*
*ФГБУ «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» им. акад. Г.А. Илизарова» Минздрава РФ, ул. Ульяновой, д. 6, г. Курган, Курганская обл., 640014, Россия **ООО «Мед-Инж-Био», ул. Центральная, д. 1, корп. 5, г. Пенза, Пензенская обл., 440068, Россия ***ФГБОУ ВО «Пензенский государственный университет», ул. Красная, д. 40, к.7, г. Пенза, Пензенская обл., 440026, Россия ****ООО «Кардиоплант», ул. Стасова, д. 14, г. Пенза, Пензенская обл., 440066, Россия
Аннотация. В исследовании проведена оценка in vitro антимикробных свойств оригинальных костных имплантацион-ных ксеноматериалов, импрегнированных антибиотиками (ванкомицин и меропенем). Костный ксеноматериал получали из костей быков (возраст до 6 месяцев). Содержание на костном блоке ванкомицина составляло 100 мкг, меропенема - 180 мкг. Контролем служили костные блоки, сделанные по аналогичной технологии, но без импрегнации антибиотиков. В качестве тест-объектов при изучении бактерицидного эффекта костных блоков использовали клинические штаммы Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Escherichia coli. В каждой серии опытов использовали по шесть костных блоков. Статистическое оценивание проводили с применением непараметрического критерия хи-квадрат. Показано, что антимикробный эффект протестированных материалов присутствует. В частности после инкубации костных блоков в микробной суспензии (11,5*105 кл/мл) отмечалось подавление роста S. aureus костными блоками с ванкомицином, P. aeruginosa и E. coli костными блоками с меропенемом. Антимикробная активность тестированного материала отсутствует при его инкубации в суспензии с микробной концентрацией 1-1,5*108 кл/мл. Делается вывод, что импрегнация ксеногенного костного материала антибиотиками расширяет биологические характеристики изделия и приводит к возможности придания материалу новой характеристики - бактерицидной активности.
Ключевые слова: костный ксеноматрикс, антимикробная активность.
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF NEW BONE XENOMATERIAL IN EXPERIMENTS IN VITRO
Z.S. NAUMENKO*, D.V. SMOLENTSEV**, M.V. STOGOV*, ^D. KRUCHININA***, N.V. GODOVYKH*, M.V. GURIN****,
Е.А. KIREEVA*
*Russian Ilizarov Scientific Center "Restorative Traumatology and Orthopaedics",
Ulyanov Str., 6, Kurgan, Kurgan region, 640014, Russia **Med-Eng-Bio LLC, Central Str., 1, Corp. 5, Penza, Penza region, 440068, Russia ***Penza State University, Krasnaya Str., 40, building 7, Penza, Penza region, 440026, Russia ****Cardioplant LLC, Stasov Str., 14, Penza, Penza region, 440066, Russia
Abstract. The evaluation in vitro of the antimicrobial properties of the original bone implantation xenomaterials impregnated with antibiotics (vancomycin and meropenem) was performed. Bone xenomaterial was obtained from the bones of bulls (up to 6 months old). The content on the bone block of vancomycin was 100 ^g, meropenem - 180 ^g. The controls were bone blocks made using a similar technology, but without impregnation of antibiotics. Clinical strains Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli were used as test objects for studying the bactericidal effect of bone blocks. In each series of experiments, 6 bone blocks were used. Statistical estimation was carried out using a nonparametric chi-square test. It is shown that the antimicrobial effect of the tested materials is present. In particular, after the incubation of bone blocks in a microbial suspension (1-1.5x105 cells/ml), S. aureus growth was suppressed by bone blocks with vancomycin, P. aeruginosa and E. coli bone blocks with meropenem. The antimicrobial activity of the tested material is absent when it is incubated in a suspension with a microbial concentration of 1-1.5x108 cells/ml. Conclusion. The impregnation of xenogeneic bone material with antibiotics expands the biological characteristics of the product and leads to the possibility of giving the material a new characteristic - bactericidal activity.
Keywords: bone xenomatrix, antimicrobial activity.
Введение. В настоящее время в травматологии и ортопедии используется большой спектр костных имплантационных материалов различного происхождения [10]. Однако широкое внедрение в практику многих из них ограничено, причиной чего являются требования безопасности, эффективности и удобства в работе врача [2,7]. Этим вызвано значительное число исследований в разработке новых дизайнов костных имплантационных материалов [1,6,11,15].
По нашему мнению, достаточно перспективным выглядит применение материалов на основе ксено-
матрикса костной ткани. Несомненным достоинством ксеноматериалов остается доступность сырья для получения, доступность технологий обработки и, как следствие, относительная дешевизна конечного продукта. Недостатком применения этих имплантатов является их антигенная активность, сниженная механическая прочность, в результате процедур обработки, и сниженные по сравнению с ауто- и алломате-риалами остеоиндуктивные характеристики, поэтому разработки по совершенствованию таких материалов являются достаточно актуальными [9,14].
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 4 - P. 89-93
Работы по повышению биоактивности ксеноко-сти идут в направлениях совершенствования технологии подготовки имплантатов [3,4] и введения в них дополнительных веществ, стимулирующих ос-теогенез [8,12]. Отдельное направление - модификация ксеноматериала антибактериальными веществами, что позволит при его имлантации наряду с замещением кости достигать купирования инфекционного процесса (в том числе и для его профилактики). Такие материалы, по нашему мнению, востребованы для лечения инфицированных очагов костной ткани [5,13].
Цель исследования - оценка in vitro антимикробных свойств оригинальных костных импланта-ционных ксеноматериалов, импрегнированных антибиотиками.
Материалы и методы исследования. Технология получения ксеноматериала. Костный ксеномате-риал получали из костей быков, возрастом до 6 месяцев, с соблюдением требований ГОСТ Р ИСО 22442. Экспериментальные образцы изготавливались из губчатой кости, распиленной на блоки 20*15*5 мм, очищенной от сухожилий ручным способом с помощью ножа. Блоки предварительно были промыты проточной водой 2-3 мин, обработаны в растворе 7% NaCl 12 часов, ультразвуковой ванне в растворе 0,1% перекиси водорода 48 часов. После каждой обработки блоки промывались проточной водой, затем были подсушены на фильтровальной бумаге перед экстракцией в течение трех часов в пластиковой таре. Финальную глубинную очистку проводили с помощью сверхкритической флюидной экстракции с помощью СО2. Экстракцию проводили с использованием следующих параметров: P=350 атм, t=50°C, поток 20-22 scfh (ср. 16,9 жидкий СО2 Г/мин) и чередованием по времени циклов, состоящих из динамического режима (25 мин) и статического (5 мин). Экстракцию липидов из узла сбора регистрировали визуально и при регистрации выхода только газа выдерживали 25 минут поточного режима для достоверности, дополнительно взвешивали образцы, при отсутствии изменения массы считали очистку завершенной, а данный подход гарантией качества очистки. Изготовление остеопласти-ческого материала по данной методике описано в патенте на изобретение № 2609201 от 14.08.2015.
Далее костные блоки насыщали различными растворами антибиотиков: ванкомицина и меропе-нема. Импрегнацию костных блоков антибиотиками осуществляли путем заполнения имеющихся в материале пор из водного раствора лекарственного препарата. Раствор антибиотика готовили на дистиллированной воде, в концентрации 5 и 10 мг/мл, соответственно для ванкомицина и меропенема, в объеме 50 мл. Затем костные блоки размерами 20*15*5 мм помещали в раствор, сосуд с раствором загружали в реактор установки для сверхкритической флюидной экстракции Waters (США). В камеру подавали углекислый газ и доводили параметры среды до P=250 атм,
t=25°C Устанавливали статический режим и выдерживали блоки 3 часа. После костные блоки лиофили-зировали в сушке VaCo-2 (Zirbus, Германия). Вышедшие блоки стерилизовали газовой стерилизацией в среде оксида этанола, с последующим вакуумирова-нием и аэрацией в течение 2 суток. Конечное содержание на костном блоке ванкомицина составило 100 мкг, меропенема - 180 мкг.
Далее была измерена кинетика выхода антибиотиков из костных блоков. Для этого блок с фиксированным антибиотиком помещали в раствор фосфатного буфера (рН 7,4) на 30 мин. на шейкер. После этого измеряли изменение оптической плотности среды на спектрофотометре UVmini - 1240 (Shimadzu, Япония). Затем выдерживали еще 2 часа, сутки и двое суток в новых растворах. Обнаружено, что выход обоих антибиотиков полностью прекращался через 24 часа инкубации в фосфатном буфере. Таким образом, для оценки антимикробной активности in vitro были получены блоки костного ксено-матрикса с импрегнированным ванкомицином и меропенемом.
Методика оценки антимикробной активности in vitro. В качестве тест-объектов при изучении бактерицидного эффекта костных блоков использовали клинические штаммы Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Escherichia coli (выделены у пациента с хроническим остеомиелитом клиники гнойной остеологии ФГБУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г.А. Илизарова»). Выбор Staphylococcus aureus в качестве тест-микроорганизма был обусловлен частотой его обнаружения у пациентов с инфекционными осложнениями после оперативного лечения костно-суставной патологии. Выбранные для исследования грамотрицательные микроорганизмы (P. aeruginosa и E. mli) нередко формируют госпитальные штаммы, вызывающие внутрибольничные инфекции. Тест-микроорганизмы культивировали на мясопептонном агаре (МПА) при температуре 37°С в течение 1824 часов. Непосредственно перед использованием тест-микроба убеждались в чистоте культуры и отсутствии посторонней микрофлоры: выросшие колонии на чашке Петри подвергали визуальному контролю, оценивали однородность роста и морфологию колоний, проводили микроскопию мазков, окрашенных по Граму. Рабочие суспензии тест-культур готовили из выросших на МПА суточных культур, смывая биомассу стерильным 0,9% раствором NaCl (pH 7,2-7,4). Полученную бактериальную взвесь стандартизировали с помощью денситометра «Densimat» (Bio Merieux, Франция), доводя конечную концентрацию до необходимых значений. В опытах использовали бактериальные взвеси двух концентраций: 1,5*108 клеток/мл (0,5 единиц МакФарланда) и 1,5*105 клеток/мл. Непосредственно после приготовления рабочей суспензии осуществляли контаминацию блоков, содержащих антибиотик (опытные блоки), и без антибиотика (контрольный блок). Контрольные блоки сделаны по аналогичной методоло-
ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2019 - Т. 26, № 4 - С. 89-93 JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 4 - P. 89-93
гии, но без импрегнации антибиотиков.
Для контаминации костные блоки помещали в контейнер с рабочей суспензией микробной культуры так, чтобы блок был полностью погружён в жидкость (5 мл) и оставляли на 60 (первая серия опытов) и на 20 мин (вторая серия опытов) в термостате при 37°С. Затем в асептических условиях удаляли избыток жидкости стерильной фильтровальной бумагой и переносили блоки на поверхность плотной питательной среды - кровяной агар (КА) и изготавливали мазки-отпечатки с двух сторон блока. Параллельно проводили высев на КА рабочей суспензии из контейнера, в котором находился блок. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 час. Результаты оценивали по отсутствию/наличию роста тест-микроорганизма на поверхности питательной среды в чашке Петри. В каждой серии опытов использовали по 6 костных блоков. Статистическое оценивание проводили с применением непараметрического критерия %2. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимали равным 0,05.
Результаты и их обсуждение. S. aureus и ван-комицин. В первой серии опытов в случае контаминации костного блока с ванкомицином суспензией, содержащей 105 микробных клеток в 1 мл, рост микроорганизмов на чашках Петри с мазками-отпечатками отсутствовал (табл. 1). На чашках с питательной средой, в которые был произведен высев из рабочей суспензии после обработки в ней блока, содержащего ванкомицин, выросло в среднем 44 колонии бактерий. По результатам микроскопии это были грамположительные кокки. После контаминации блока суспензией, содержащей 108 микробных клеток в 1 мл, наблюдали рост микроорганизмов как на мазках-отпечатках, так и на чашках с высевом из рабочей суспензии. На чашках Петри с мазками-отпечатками микробный рост отмечали по периферии отпечатка, на чашках с высевом из рабочей суспензии выросло в среднем 74 колонии. Окраска по Граму выросших бактерий и последующая микроскопия показали, что во всех случаях это были грамположительные кокки. На мазках-отпечатках блока без антибиотика и на чашках Петри с КА, на которые был произведен высев из рабочих суспензий (105 и 108 кл/мл), наблюдали сплошной бактериальный рост.
Во второй серии опытов в бактериологических посевах блока, импрегнированного ванкомицином, рост бактерий отсутствовал (табл. 2). В аналогичных посевах блока без антибиотика наблюдали сплошной бактериальный рост, по результатам микроскопии мазков, окрашенных по Граму, - грамположитель-ные кокки с характерной для стафилококков морфологией.
Таблица 1
Бактерицидная активность остеопластического матрикса, импрегнированного ванкомицином, длительность контаминации S. aureus 60 минут
Концентрация S. aureus Бактерицидное действие
Блок А Блок Б
Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА
1х105 кл/мл Роста нет* 44 колонии Сплошной рост Сплошной рост
1х108 кл/мл Рост по периферии отпечатка 74 колонии Сплошной рост Сплошной рост
Примечание: Блок А - остеопластический матрикс, им-прегнированный антибиотиком; Блок Б - остеопластический матрикс без антибиотика. * - достоверные отличия от блоков серии Б при р<0,001
Таблица 2
Бактерицидная активность остеопластического матрикса, импрегнированного ванкомицином, при контаминации с рабочей суспензией S. aureus 20 минут
Концентрация S. aureus Бактерицидное действие
Блок А Блок Б
Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА
1*105 кл/мл Роста нет* Роста нет* Сплошной рост Сплошной рост
Примечание: Блок А - остеопластический матрикс, им-прегнированный антибиотиком; Блок Б - остеопластический матрикс без антибиотика. * - достоверные отличия от блоков серии Б при р<0,001
Pseudomonas aeruginosa и меропенем. Результаты тестирования блоков, насыщенных меропенемом, в отношении P. aeruginosa представлены в табл. 3. Инфекции, вызванные P. aeruginosa, характеризуются трудностью подбора антибиотикотерапии, этот возбудитель отличается устойчивостью во внешней среде, возможностью к быстрой реализации нескольких механизмов устойчивости к антибиотикам, в том числе к карбапенемам. В нашем эксперименте в отношении Р.aeruginosa при высокой микробной нагрузке (1,5*108 кл/мл) отсутствовал бактерицидный эффект остеопластического матрикса, насыщенного меропенемом. В то же время при меньшей концентрации контаминирующей микробной суспензии (1,5*105 кл/мл) были выявлены бактерицидные свойства исследуемого материала. Эти данные позволяют предположить, что тестированные блоки могут быть эффективным для предотвращения развития инфекции, то есть использоваться в профилактических целях.
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 4 - P. 89-93
Таблица 3
Бактерицидная активность остеопластического матрикса, импрегнированного меропенемом, при контаминации с рабочей суспензией P. aeruginosa 20 минут
Концентрация P. aeruginosa Бактерицидное действие
Блок А Блок Б
Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА
1,5*10s кл/мл Роста нет* Роста нет* Сплошной рост Сплошной рост
1,5*108 кл/мл Сплошной рост Сплошной рост Сплошной рост Сплошной рост
Примечание: Блок А - остеопластический матрикс, им-прегнированный антибиотиком; Блок Б - остеопластический матрикс без антибиотика. * - достоверные отличия от блоков серии Б при р<0,001
Escherichia coli и меропенем. В отличие от синег-нойной палочки, рост другого грамотрицательного микроорганизма - E. соИ - подавлялся препаратом, импрегнированным в блок. Бактерицидный эффект проявлялся независимо от концентрации клеток возбудителя в контаминирующей суспензии (табл. 4).
Таблица 4
Бактерицидная активность остеопластического матрикса, импрегнированного меропенемом, при контаминации с рабочей суспензией E. coli 20 минут
Примечание: Блок А - остеопластический матрикс, им-прегнированный антибиотиком; Блок Б - остеопластиче-ский матрикс без антибиотика. * - достоверные отличия от блоков серии Б при р<0,001
Меропенем (как и другие карбапенемы) активен в отношении практически всех возбудителей инфекций, вызванных E. coli, к карбапенемам отмечается наименьший уровень устойчивости госпитальных штаммов Enterobacteriaceae. Костные импланта-ционные материалы, насыщенные карбапенемами, вероятно, будут наиболее востребованы хирургами при лечении пациентов, у которых в анамнезе были случаи выделения мультирезистентных грамотрица-тельных возбудителей.
Полученные данные демонстрируют, что антимикробный эффект протестированных материалов присутствует как в отношении грамположительных, так и грамотрицательных бактерий. В частности показана возможность подавления роста S. aureus, P. aeruginosa и E. coli на модели in vitro. Однако антимикробная активность материала, очевидно, отсутствует при высокой контаминации изделия, т.е. бак-
терицидная активность изделия зависит от окружающей материал концентрации бактерий и от длительности контакта с бактериальной суспензией.
Заключение. Импрегнация ксеногенного костного материала антибиотиками расширяет биологические характеристики изделия. В частности приводит к возможности придания материалу новой характеристики - бактерицидная активность. Очевидно, что новые свойства ксеногенного костного матрикса не только повысят эффективность данного изделия, но и позволяют уточнить показания к его применению (например, для пациентов с остеомиелитом, перипротезными инфекциями, для профилактики гнойных осложнений после первичного эн-допротезирования и т.д.).
Литература / References
1. Костнопластические остеоиндуктивные материалы в травматологии и ортопедии / Лекишвили М.В. [и др.] // Гений ортопедии. 2015. № 4. С. 61-67 / Lekishvili MV, et al. Kostnoplasticheskie osteoinduktivnye materialy v travmatologii i ortopedii [Bone plastic osteoinductive materials in traumatology and orthopedics]. Geniy ortopedii. 2015;4:61-7. Russian.
2. Некоторые правовые и организационные аспекты получения и применения посмертных тканей в клинической трансплантологии / Савельев В.И. [и др.] // Травматология и ортопедия России. 2010. № 1. С. 175-178 / Savel'ev VI, et al. Nekotorye pravovye i organizatsionnye aspekty polucheniya i primeneniya posmertnykh tkaney v klinicheskoy transplantologii [Some of the legal and organizational aspects of production and application of post-mortem tissues in clinical transplantation]. Travmatologiya i ortopediya Rossii. 2010;1:175-8. Russian.
3. Разработка остеопластических материалов с высоким потенциалом биоинтеграции для ускоренной регенерации костной ткани / Сенотов А.С. [и др.] // Медицинский академический журнал. 2016. № 4. С. 35-36 / Senotov AS, et al. Razrabotka osteoplasticheskikh materialov s vysokim potentsialom biointegratsii dlya uskorennoy regeneratsii kostnoy tkani [Development of osteoplastic materials with high potential of biointegration for accelerated bone regeneration]. Meditsinskiy akademicheskiy zhurnal. 2016;4:35-6. Russian.
4. Экстракционная очистка ксеногенного костного мат-рикса в среде сверхкритического диоксида углерода и оценка свойств полученного материала / Смоленцев Д.В. [и др.] // Сверхкритические флюиды: Теория и практика. 2017. № 2. С. 60-67 / Smolentsev DV, et al. Ekstraktsionnaya ochistka ksenogennogo kostnogo matriksa v srede sverkhkriticheskogo dioksida ugle-roda i otsenka svoystv poluchennogo materiala [Extraction purification of xenogenic bone matrix in supercritical carbon dioxide medium and evaluation of the properties of the obtained material]. Sverkhkriticheskie flyuidy: Teoriya i praktika. 2017;2:60-7. Russian.
5. Этиология острой перипротезной инфекции суставов и результаты ее хирургического лечения / Клюшин Н.М. [и др.] // Гений ортопедии. 2017. № 4. С. 417-422 / Klyushin NM, et al. Etiologiya ostroy periproteznoy infektsii sustavov i rezul'taty ee khirurgicheskogo lecheniya [Etiology of acute periprosthetic joint infection and results of its surgical treatment]. Geniy ortopedii. 2017;4:417-22. Russian.
6. Biomimetic materials and fabrication approaches for bone tissue engineering / Kim H.D. [et al.] // Adv. Healths Ma-
Концентрация E. coli Бактерицидное действие
Блок А Блок Б
Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА Мазок-отпечаток на КА Высев суспензии на КА
1,5*105 кл/мл Роста нет* Роста нет* Сплошной рост Сплошной рост
1,5*108 кл/мл Роста нет* Роста нет* Сплошной рост Сплошной рост
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2019 - V. 26, № 4 - P. 89-93
ter. 2017. V. 6. № 23 / Kim HD, et al. Biomimetic materials and fabrication approaches for bone tissue engineering. Adv. Healthc. Mater. 2017;6(23).
7. Blokhuis T.J., Arts J.J. Bioactive and osteoinductive bone graft substitutes: definitions, facts and myths // Injury. 2011. Vol. 42, Suppl 2. P. S26-29 / Blokhuis TJ, Arts JJ. Bioactive and osteoinductive bone graft substitutes: definitions, facts and myths. Injury. 2011;42(2):S26-9.
8. Bone augmentation using a synthetic hydroxyap-atite/silica oxide-based and a xenogenic hydroxyapatite-based bone substitute materials with and without recombinant human bone morphogenetic protein-2 / Thoma D.S. [et al.] // Clin. Oral Implants Res. 2015. Vol. 26, № 5. P. 592-598 / Thoma DS, et al. Bone augmentation using a synthetic hydroxyap-atite/silica oxide-based and a xenogenic hydroxyapatite-based bone substitute materials with and without recombinant human bone morphogenetic protein-2. Clin. Oral Implants Res. 2015;26(5):592-8.
9. Bone healing evaluation in critical-size defects treated with xenogenous bone plus porcine collagen / Maciel J. [et al.] // Implant. Dent. 2017. Vol. 26, № 2. P. 296-302 / Maciel J, et al. Bone healing evaluation in critical-size defects treated with xenogenous bone plus porcine collagen. Implant. Dent. 2017;26(2):296-302.
10. Bone regenerative medicine: classic options, novel strategies, and future directions / Oryan A. [et al.] // J. Orthop. Surg. Res. 2014. Vol. 9, № 1. P. 18 / Oryan A, et al. Bone regenerative medicine: classic options, novel strategies, and future directions. J. Orthop. Surg. Res. 2014;9(1):18.
11. Clinoptilolite/PCL-PEG-PCL composite scaffolds for bone tissue engineering applications / Pazargeviren E. [et al.] // J. Biomater. Appl. 2017. Vol. 31, № 8. P. 1148-1168 /
Pazargeviren E, et al. Clinoptilolite/PCL-PEG-PCL composite scaffolds for bone tissue engineering applications. J. Biomater. Appl. 2017;31(8):1148-68.
12. Holt D.J., Grainger D.W. Demineralized bone matrix as a vehicle for delivering endogenous and exogenous therapeutics in bone repair // Adv. Drug Deliv. Rev. 2012. Vol. 64, № 12. P. 1123-1128 / Holt DJ, Grainger DW. Demineralized bone matrix as a vehicle for delivering endogenous and exogenous therapeutics in bone repair. Adv. Drug Deliv. Rev. 2012;64(12):1123-8.
13. Regenerative treatment of peri-implantitis bone defects with a combination of autologous bone and a demineral-ized xenogenic bone graft: a series of 36 defects / Wiltfang J. [et al.] // Clin. Implant. Dent. Relat. Res. 2012. Vol. 14, N3. P. 421427 / Wiltfang J, et al. Regenerative treatment of peri-implantitis bone defects with a combination of autologous bone and a demineralized xenogenic bone graft: a series of 36 defects. Clin. Implant. Dent. Relat. Res. 2012;14(3):421-7.
14. Xenogenic demineralized bone matrix and fresh autogenous cortical bone effects on experimental bone healing: radiological, histopathological and biomechanical evaluation / Bigham A.S. [et al.] // J. Orthop. Traumatol. 2008. Vol. 9, № 2. P. 73-78 / Bigham AS, et al. Xenogenic demineralized bone matrix and fresh autogenous cortical bone effects on experimental bone healing: radiological, histopathological and bio-mechanical evaluation. J. Orthop. Traumatol. 2008;9(2):73-80.
15. Yunus Basha R., Sampath Kumar T.S., Doble M. Design of biocomposite materials for bone tissue regeneration // Mater. Sci. Eng. C Mater. Biol. Appl. 2015. Vol. 57. P. 452-463 / Yunus Basha R, Sampath Kumar TS, Doble M. Design of biocomposite materials for bone tissue regeneration. Mater. Sci. Eng. C Mater. Biol. Appl. 2015;57:452-63.
Библиографическая ссылка:
Науменко З.С., Смоленцев Д.В., Стогов М.В., Кручинина А.Д., Годовых Н.В., Гурин М.В., Киреева Е.А. Антимикробная активность нового костного ксеноматериала в исследованиях in vitro // Вестник новых медицинских технологий. 2019. №4. С. 8993. DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16231.
Bibliographic reference:
Naumenko ZS, Smolentsev DV, Stogov MV, Kruchinina AD, Godovykh NV, Gurin MV, Kireeva EA. Antimikrobnaya aktivnost' novogo kostnogo ksenomateriala v issledovaniyakh in vitro [Antimicrobial activity of new bone xenomaterial in experiments in vitro]. Journal of New Medical Technologies. 2019;4:89-93. DOI: 10.24411/1609-2163-2019-16231. Russian.
