Антимикробная активность нового комбинированного препарата на основе флуорфеникола и доксициклина Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro HamoHaibHoro ymBepcnreTy BeTepHHapHoi' MeguuHHH

Ta 6ioTexHonoriH iMeHi C.3. I^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj

doi: 10.15421/nvlvet7728

ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online

http://nvlvet.com.ua/

УДК 636:636.087.8

Антимжробна актившсть нового комбшованого антибактерiального препарату на основi флуорфенiколу та доксициклшу

Т.1. Стецько1, В.П. Музика1, Л. Л. Островська1, В.1. Буцяк2 [email protected], [email protected], [email protected], [email protected]

1Державний науково-дослгдний контрольний тститут ветеринарних npenapamie та кормових добавок,

вул. Донецька,11, м. Львiв, 79019, Украгна;

2Львiвський нацюнальний умверситет ветеринарног медицини та бiотехнологiй гмеш С.З. Гжицького,

вул. Пекарська, 50, м. Львiв, 79010, Украгна

Бактeрiальнi тфекцй незаразного характеру е одними з найпоширешших захворювань серед сыьськогосподарських тварин та птищ. Часто eтiологiчним фактором захворювання е асощащя мiкроорганiзмiв. У такому разi актуальним стае питання впровадження в клжчну практику антибактeрiальних прeпаратiв i3 широким спектром антимжробног активностi, яка б охоплювала якнайбтьше мiкроорганiзмiв, збуднитв бактeрiальних тфекцт. Одним з прийнятних i дощ-льних мeтодiв, який би тдвищував ефективтсть хiмiотeрапii бактeрiальних тфекцт, е рацюнальне застосування поед-нань антимжробних речовин. У статтi наведет результати до^дження антимжробног активностi новоствореного комбтованого антибактeрiального препарату на основi синтетичного антибiотика флуорфетколу iз групи фeнiколiв та доксициклшу - антибютика, що належить до групи тетрациклжв. Рiвeнь бактерюстатичног активностi комбтованого препарату порiвнювали з бактeрiостатичною активтстю монопрeпаратiв, джчими речовинами яких е окремо флуорфет-кол i доксициклт. Визначали мтмальш iнгiбуючi концентрацп (М1К) комбтованого препарату i монопрeпаратiв для грам-позитивних та грамнегативних бактерт, таких як Staphylococcus aureus, Streptococcus suis, Bordetella bronchiseptica, Escherichia coli i Salmonella pullorum, видыених з бiологiчного матeрiалу, вiдiбраного вiд хворих на рiзнi бактeрiальнi захворювання свиней та курчат-бройлeрiв. Отримаю результати вказують на те, що флуорфеткол i доксициклт у комбтова-ному прeпаратi дiють тдиферентно вiдносно до видтених штамiв Staphylococcus aureus, Streptococcus suis та Escherichia coli, коли кожен антибютик у комбтацп проявляе незалежну дiю на мжрооргашзм, не вiдмiнну за активтстю вiд гх роздi-льного застосування. Водночас дiючi речовини комбтованого препарату проявляють певну синeргiчну дж вiдносно до видi-лених штамiв Bordetella bronchiseptica та Salmonella pullorum, що проявляешься тдвищенням активностi поеднання анти-бактeрiальних сполук порiвняно з сумою гх незалежних eфeктiв за рахунок зростання активностi одного або обох з активно дiючих компонeнтiв препарату..

K.mnoei слова: фармакологiя, антимжробна актившсть, флуорфеткол, доксициклт, бактерюстатична актившсть, комбтований препарат.

Антимикробная активность нового комбинированного препарата на основе флуорфеникола и доксициклина

Т.1. Стецко, В.П. Музыка, Л. Л. Островская, В.1. Буцяк [email protected], [email protected], [email protected], [email protected]

'Государственный научно-исследовательский контрольный институт ветеринарных препаратов и кормовых добавок, ул. Донецкая, г. Львов, 79019, Украина;

2Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,

ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79010, Украина

Citation:

Stetsko, T.I., Muzyka, V.P., Ostrovska, L.L., Butsyak, V.I. (2017). Antimicrobial activity of new combined antibacterial drug based on florfenicol and doxycycline. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 19(77), 125-130.

Бактериальные инфекции незаразного характера являются одними из самых распространенных заболеваний среди сельскохозяйственных животных и птицы. Этиологическим фактором заболевания является ассоциация микроорганизмов. В таком случае актуальным становится вопрос внедрения в клиническую практику антибактериальных препаратов широкого спектра антибактериальной активности, которая бы охватывала наибольшее количество микроорганизмов, возбудителей бактериальных инфекций. Одним из приемлемых и целесообразных методов, который повышал бы эффективность химиотерапии бактериальных инфекций, является рациональное применение сочетаний антимикробных веществ. В статье представлены результаты изучения антимикробной активности нового комбинированного антибактериального препарата на основе синтетического антибиотика флуорфеникола из группы фениколов и доксициклина - антибиотика, принадлежащего к группе тетрациклинов. Уровень бактериостатической активности комбинированного препарата сравнивали з бактериостатической активностью монопрепаратов, действующими веществами которых являются отдельно флуорфеникол и доксициклин. Определяли минимальные ингибирующие концентрации (МИК) комбинированного препарата и монопрепаратов для грамположительных и грамотрицательных бактерий, таких как Staphylococcus aureus, Streptococcus suis, Bordеtella bronchiseptica, Escherichia coli и Salmonella pullorum, выделенных из биоматериала, отобранного от больных различными бактериальными заболеваниями свиней и цыплят-бройлеров. Полученные результаты показали, что флуорфеникол и доксициклин в комбинированном препарате действуют индиферентно по отношению к выделенным штаммам Staphylococcus aureus, Streptococcus suis та Escherichia coli, когда каждый антибиотик в комбинации проявляет независимое действие на микроорганизм, не отличное по активности от их раздельного применения. В то же время действующие вещества комбинированного препарата проявляют некоторое синергическое действие по отношению к выделенным штаммам Bordеtella bronchiseptica и Salmonella pullorum, что проявляется увеличением активности сочетания антибактериальных соединений по сравнению с суммой их независимых эффектов за счет активности одного или обоих из активно действующих компонентов препарата.

Ключевые слова: антимикробная активность, флуорфеникол, доксициклин, бактериостатическая активность, комбинированный препарат.

Antimicrobial activity of new combined antibacterial drug based on florfenicol

and doxycycline

T.I. Stetsko1, V.P. Muzyka1, L.L. Ostrovska1, V.I. Butsyak2 [email protected], [email protected], [email protected], [email protected]

1State Scientific Research Control Institute of veterinary preparations and feed additives, Donetska Str., 11, Lviv, 79019, Ukraine;

2Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyi,

Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine

Bacterial infections of noncontagious character is one of the most common diseases among livestock and poultry. Often an association of microorganisms is etiological factor for these diseases. In this case, actual is an introduction into clinical practice antibiotics with a broad spectrum of antimicrobial activity, which would cover the most microorganisms, causative agents of bacterial infections. One of appropriate and suitable methods that would increased the effectiveness of chemotherapy of bacterial infections is a rational use of a combination of antimicrobial agents. In the article the results of the study of antimicrobial activity of new combined antibacterial preparation, based on synthetic antibiotic florfenicol from the group amfenicols and doxycycline from the group of tetracyclines, are given. The level of bacteriostatic activity of the combination drug was compared with bacteriostatic activity of monopreparations, active ingredients in ones are separately florfenicol and doxycycline. Were determined the minimum inhibitory concentration (MIC) of the combined drug and monopreparations for gram-positive and gram-negative bacteria such as Staphylococcus aureus, Streptococcus suis, Bordetella bronchiseptica, Escherichia coli and Salmonella pullorum, isolated from biological material, took from pigs and broiler chickens with various bacterial diseases. The results showed that florfenicol and doxycycline in combined preparation act indifferently regarding isolates Staphylococcus aureus, Streptococcus suis and Escherichia coli, when every antibiotic in an combination demonstrates independent action on the organism, not different activity at their separate application. At the same time, the active ingredients of the combined drug showed a synergistic effect against the isolated strains Bordetella bronchiseptica and Salmonella pullorum, demonstrated by increasing the activity of the combination of antibacterial compounds compared to the sum of their independent effects by increasing the activity of one or both of active drug components.

Key words: antimicrobial activity, flofe^^, doxycycline, bacteriostatic activity, combined preparation.

Вступ

Недолжом застосування монопрепарапв за лшу-вання тварин з незаразными захворюваннями бактерь ально! етюлоги е низька терапевтична ефектившсть, оскшьки вони впливають лише на певний мшроорга-шзм. А до того ж не на всю асощацш, що призводить до хрошзацп патолопчного процесу, який у подаль-шому не тдцаеться л^ванню. Крiм того, дос вшсу-тня виражена протимжробна дiя на мжрофлору за асоцшованих бактерiозiв. Одним iз прийнятних i до-

Шльних методiв, який би пщвищував ефектившсть хiмiотерапii бактерiальних шфекцш та уповшьнював розвиток резистентносп у мiкроорганiзмiв, е рацюна-льне застосування сукупного поеднання антимшроб-них речовин (Stetsko, 2008).

Використання комбшовано! хiмiотерапii' розрахо-ване на максимально можливе охоплення потенцшних збуднишв захворювання i на досягнення бактерицидного ефекту, оскшьки за важкого шфекцшного процесу захисш сили оргашзму ослаблеш i не можуть впо-

ратися з бактерюстатично пригшченими мшрооргаш-змами (Kovalev, 1983).

Дя антимшробних препарапв вщносно мшроор-ган1зм1в вщбуваеться на клпинному або молекулярному р1вш та проявляеться у вигляд1 антагошстично-го, 1ндиферентного, адитивного i синерпчного ефек-пв. У разi антагонiзму ефект вщ використання поед-нання антибактeрiальних сполук нижчий, шж вщ будь-якого з них, взятого окремо. 1ндиференцгя являе собою незалежну дiю кожного iнгрeдiента комбшацп на мшрооргашзм, не вiдмiнну за ефектившстю вiд 1х роздiльного застосування. За адитивно! дп фармако-логiчний ефект вщ застосування сукупного поеднання препарапв eквiвалeнтний сумi eфeктiв при !х роздшь-ному використаннi.

Пщ синерпзмом мають на увазi пiдвищeння акти-вностi за сукупного поеднання антибактeрiальних сполук порiвняно з сумою 1'х незалежних eфeктiв (Stetsko, 2008). Класичним прикладом синeргiзму е спiльнe застосування сульфаншамщв та триметопри-му. Подiбнiсть мeханiзму дп та фармакологiчних властивостей дшчих речовин (швидке всмоктування через слизову оболонку травного тракту, тривала тера-певтична концeнтрацiя у кровi та тканинах тварин, приблизно однакова швидк1сть виведення з органiзму), а також оптимальне 1'х спiввiдношeння (4 : 1) дозволило збшьшити силу антимiкробноl до препарату в 4-6 разiв порiвняно з первинними компонентами (Indiveri and Hirsh, 1986; Stetsko, 2005).

Мета роботи - порiвняти антимiкробну актив-нiсть нового комбiнованого антибактeрiального препарату на основi флорфeнiколу та доксициклшу з активнiстю монопрeпаратiв iз аналогiчними дiючими речовинами вiдносно до мiкроорганiзмiв, збудник1в бактeрiальних iнфeкцiй у свиней та свшсько! птицi.

М1К дослiджуваних препаратов

Матерiал i методи досл1джень

Дослщження проводили на польових штамах мш-роорганiзмiв, видiлeних з бюлопчного матeрiалу (кров, носовi видшення, каловi маси, гнiй iз абсцесу), вщбраного вщ свиней та курчат-бройлeрiв. До того ж видiлeно та щентифшовано такi мiкроорганiзми: Staphylococcus aureus, Streptococcus suis, Bordetella bronchiseptica, Escherichia coli, Salmonella pullorum. Видшення та щентифшацш проводили за загальнови-знаними мшробюлопчними методиками (Golovko et al., 2007). Рiвeнь бактeрiостатичноi активностi препарату встановлювали шляхом визначення мшмально! iнгiбуючоl концентрац^' (М1К) його дшчо! основи для бактeрiй-iзолятiв. М1К препарату встановлювали методом сершних розведень у рщкому живильному сeрeдовищi (Metodychni vkazivky, 2008). Рiвeнь бакте-рiостатичноl активносп комбiнованого препарату порiвнювали з бактерюстатично1 активностi монопре-паратiв, дiючими речовинами яких е окремо флуор-фешкол i доксициклiн.

Отриманi значення мшмальних iнгiбуючих кон-цeнтрацiй антибiотикiв штерпретували зг1дно з Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated from Animals. Значення М1К флуорфешколу штерпретували таким чином: М1К < 2 мкг/мл - штам мшрооргаш-зму чутливий; М1К 2-8 мкг/мл - помiрно чутливий; М1К > 8 мкг/мл - резистентний. Значення М1К докси-циклiну iнтeрпрeтували так: М1К < 2 мкг/мл - штам мшрооргашзму чутливий; М1К 2-8 мкг/мл - помiрно чутливий; М1К > 8 мкг/мл - резистентний.

Результати та Тх обговорення

Рiвeнь бактeрiостатичноi активностi дослiджува-них препарапв для бактeрiй-iзолятiв наведений у таблицях 1-5.

Таблиця 1

Комбшований препарат Монопрепарат (флуорфенжол) Монопрепарат (доксициклш)

Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту

150 — 100 — 200 —

75 — 50 — 100 —

37,5 — 25 — 50 —

18,7 — 12,5 — 25 —

9,3 — 6,2 — 12,5 —

4,7 + 3,1 — 6,2 —

2,4 + 1,6 + 3,1 +

1,2 + 0,8 + 1,6 +

0,6 + 0,4 + 0,8 +

0,3 + 0,2 + 0,4 +

0,15 + 0,1 + 0,2 +

Примiтка: «+» - наявнiсть росту; «—» - вiдсутнiсть росту

Отримане значення М1К комбiнованого препарату для Staphylococcus aureus становить 9,3 мкг/мл. Осш-льки спiввiдношeння флуорфeнiколу до доксициктну в прeпаратi становить 1 : 2, то вщповщно оч^ване значення М1К флуорфeнiколу становить 3,1 мкг/мл, а М1К доксициклiну - 6,2 мкг/мл. Рiвeнь бактeрiостати-

чно! активностi монопрепарату на основi флуорфешколу для iзоляту Staphylococcus aureus становить

3.1 мкг/мл, а монопрепарату на основi доксициклшу -

6.2 мкг/мл.

Отримаш результати вказують на те, що юнуе по-мiрна чутливiсть CTафiлOKOKу до усiх препарапв. Су-

дячи 3i значень мшмально! шпбуючо! концентрацп, дiючi речовини комбiнованого препарату проявляють iндиферентну дiю вiдносно до видшеного штаму Staphylococcus aureus, коли кожен антибютик у ком-бшацп проявляе незалежну дiю на мшрооргашзм, не вiдмiнну за активнiстю вщ i'x роздiльного застосування.

Значения М1К препарату для Streptococcus suis становить 4,7 мкг/мл. Рiвень бактерюстатично! актив-ностi монопрепарату на основi флуорфенiколу для iзоляту Streptococcus suis становить 1,6 мкг/мл, а монопрепарату на основi доксициктну - 3,1 мкг/мл.

Шсля отримання значения М1К комбшованого препарату стрептокок виявився чутливим до флуорфешколу i пом1рно чутливим до доксициклшу. Чутливим виявився iзолят Streptococcus suis до монопрепарату на основi флуорфешколу i помiрно чутливим -до монопрепарату на основi доксицимну. Флуорфе-нiкол i доксициклiн у комбшованому прeпаратi проявляють шдиферентну дш вiдносно до видiлeного штаму Streptococcus suis.

М1К дослщжуваних мрсмарапв для 1золяту Streptococcus suis

Таблиця 2

Комбшований препарат Монопрепарат (флуорфеткол) Монопрепарат (доксициклш)

Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявтсть росту Розведення, мкг/мл Наявтсть росту

150 — 100 — 200 —

75 — 50 — 100 —

37,5 — 25 — 50 —

18,7 — 12,5 — 25 —

9,3 — 6,2 — 12,5 —

4,7 — 3,1 — 6,2 —

2,4 + 1,6 — 3,1 —

1,2 + 0,8 + 1,6 +

0,6 + 0,4 + 0,8 +

0,3 + 0,2 + 0,4 +

0,15 + 0,1 + 0,2 +

Примггка: «+» - наявтсть росту; «—» - вщсутшсть росту

Таблиця 3

М1К досл1джуваних мрсмараив для 1золяту Bordetella bronchiseptica

Комбшований препарат Монопрепарат (флуорфенжол) Монопрепарат (доксициклш)

Розведення, мкг/мл Наявтсть росту Розведення, мкг/мл Наявтсть росту Розведення, мкг/мл Наявтсть росту

150 — 100 — 200 —

75 — 50 — 100 —

37,5 — 25 — 50 —

18,7 — 12,5 — 25 —

9,3 — 6,2 — 12,5 —

4,7 — 3,1 — 6,2 —

2,4 — 1,6 — 3,1 —

1,2 + 0,8 — 1,6 +

0,6 + 0,4 + 0,8 +

0,3 + 0,2 + 0,4 +

0,15 + 0,1 + 0,2 +

Примiтка: «+» - наявшсть росту; «—» - ввдсутшсть росту

Значення М1К комбшованого препарату для Bordetella bronchiseptica становить 2,4 мкг/мл. За отриманим значенням М1К комбiнованого препарату Bordetella bronchiseptica виявилася чутливою як до флуорфешколу, так i до доксициклшу. Рiвeнь бактерь остатично1 активностi монопрепарату на основi флуо-рфeнiколу для iзоляту Bordetella bronchiseptica стано-вив 0,8 мкг/мл, а монопрепарату на основi доксицик-лiну - 3,1 мкг/мл.

Судячи з отриманих значень мшмально1 шпбую-чо1 концентрацй' дiючi речовини комбшованого препарату проявляють певну синерпчну дiю, що прояв-ляеться пщвищенням активностi поеднання антибак-тeрiальних сполук порiвняно з сумою ïx незалежних

ефектiв за рахунок зб№шення активностi доксицик-л1ну вiдносно до видшеного штаму Bordetella bronchiseptica.

Значення М1К комбшованого препарату для Escherichia coli становить 9,3 мкг/мл. Значення М1К монопрепарату на основi флуорфешколу становить

3.1 мкг/мл, а монопрепарату на основi доксициклшу -

6.2 мкг/мл. Результати вказують про помiрну чутли-вють видшеного штаму кишково! палички до всix препарапв. Зг1дно з отриманими значеннями мшма-льно! iнгiбуючоi концентрацй' дiючi речовини комбь нованого препарату проявляють шдиферентну дш вiдносно до iзоляту Escherichia coli.

Таблиця 4

М1К досл1джуваних препаратов для 1золяту Escherichia coli_

Комбшований препарат Монопрепарат (флуорфенжол) Монопрепарат (доксициклш)

Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту

150 — 100 — 200 —

75 — 50 — 100 —

37,5 — 25 — 50 —

18,7 — 12,5 — 25 —

9,3 — 6,2 — 12,5 —

4,7 + 3,1 — 6,2 —

2,4 + 1,6 + 3,1 +

1,2 + 0,8 + 1,6 +

0,6 + 0,4 + 0,8 +

0,3 + 0,2 + 0,4 +

0,15 + 0,1 + 0,2 +

Примiтка: «+» - наявнiсть росту; «—» - вщсутшсть росту

Таблиця 5

_М1К досл1джуваних препаратов для 1золяту Salmonella pullorum_

Комбшований препарат Монопрепарат (флуорфенжол) Монопрепарат (доксициклш)

Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту Розведення, мкг/мл Наявшсть росту

150 — 100 — 200 —

75 — 50 — 100 —

37,5 — 25 — 50 —

18,7 — 12,5 — 25 —

9,3 — 6,2 — 12,5 —

4,7 — 3,1 — 6,2 —

2,4 — 1,6 — 3,1 —

1,2 + 0,8 + 1,6 +

0,6 + 0,4 + 0,8 +

0,3 + 0,2 + 0,4 +

0,15 + 0,1 + 0,2 +

Приметка: «+» - наявшсть росту; «—» - вщсутшсть росту

Значення М1К комбшованого препарату для Salmonella pullorum становить 2,4 мкг/мл. Значення М1К монопрепарату на основi флуорфешколу становить 1,6 мкг/мл, а монопрепарату на основi доксициктну -3,1 мкг/мл.

За значенням М1К комбшованого препарату саль-монела виявилася чутливою як до флуорфешколу, так i до доксициктну. Чутливим виявився ¡золят Salmonella pullorum до монопрепарату на основi флуорфешколу i помiрно чутливим - до монопрепарату на основi доксициклшу. Проте, судячи з отриманих значень мiнiмальноï iнгiбуючоï концентрацй, дiючi речовини комбiнованого препарату проявляють виражену синeргiчну дiю вщносно до видiлeного штаму Salmonella pullorum, що проявляеться п1двищенням актив-ностi поеднання флуорфeнiколу i доксициктну в комбiнованому прeпаратi, порiвняно з актившстю цих антибiотикiв у монопрепаратах.

Висновки

Доцiльнiсть розробки комбiноваииx антибактeрiа-льних прeпаратiв полягае у шдвищенш антимшробно1' активностi або розширeннi спектру антимiкробноï дiï комбiнацiï дiючиx антимшробних речовин.

Дiючi речовини нового антимшробного препарату, флуорфeнiкол i доксициклiн, у комбшацп проявляють iндифeрeнтну або синерпчну дiю вiдносно до мшроо-

praHi3MiB, 36ygHHKiB 6aKTepiagbHux m^e^in y CBHHen Ta CBiHCbKoi' птнцi.

nepcnexmueu nodanbwux docmdwenb. AKTyagbHHM 3a^HmaeTbca po3po6Ka hobhx KoM6iHoBaHHx aHTu6aK-Tepia^bHHx 3aco6iB 3 mupoKHM cneKTpoM aHTHMiKpo6-Hoi' i HacaMnepeg, cHHepriHHoi' gii' aKTHBHo gironux pe-hobhh, y nepmy nepry BigHocHo go nogipe3ucTeHTHux mTaMiB MiKpoopraHi3MiB, 36ygHHKiB 6aKTepiagbHux m^e^in y TBapuH.

eis^iorpa^inm iiocii. lanim

Stetsko, T.I. (2008). Zasady efektyvnoi antybiotykoterapii u veterynarnii medytsyni. Veterynarna biotekhnolohiia. 13(1), 194-203 (in Ukrainian). Kovalev, V.F. (1983). Puti povyshenija jeffektivnosti

antibiotikov. Veterinarija. 10, 72-74 (in Russian). Stetsko, T.I. (2008). Vzaiemodiia antymikrobnykh preparativ. Naukovo-tekhnichnyi biuleten Instytutu biolohii tvaryn i DNDKI vetprepartiv ta kormovykh dobavok. 9(4), 323-331 (in Ukrainian). Indiveri, C., Hirsh, D.C. (1986). Sysceptibility of obligate anaerobes to trimethoprim-sulfamethoxazole. J. Am. Veter. Med. Assn. 188(1), 46-48. Stetsko, T.I. (2005). Shliakhy pidvyshchennia efektyvnos-ti antybiotykoterapii. Tvarynnytstvo Ukrainy. 12, 2427 (in Ukrainian).

Golovko, A.N., Ushkalov, V.A., Skrypnik, V.G. (2007). Mikrobiologicheskie i virusologicheskie issledovanija v veterinarnoj medicine. Spravochnoe posobie. Har'kov: NTMG (in Russian). Metodychni vkazivky po vyznachenniu bakteriostatychnoi ta bakterytsydnoi kontsentratsii antybakterialnykh preparativ metodom seriinykh rozveden (zatverdzheni naukovo-tekhnichnoiu radoiu

DDVM Ukrainy Ministerstva ahropolityky Ukrainy vid 19.12.2002 r.). Kyiv, 2007, 12 (in Ukrainian).

M31-A3 Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals; Approved Standard - Third Edition, 2008. Vol. 24, No 8.

Cmammn nadiümna do peda^ii 20.03.2017