CC BY
28
УДК 576.8:58
Дармограй Л.М., к.с.-г.н., доцент Лье1еський нащональний утеерситет еетеринарног медицины та бютехнологт
iм. С.З. Гжицького
АНТИМ1КРОБН1 ВЛАСТИВОСТ1 GALEGA ORIENTALIS (LA)
Доведено еплие pi3rnx концентрацт водного екстракту даног культури на ркт чистих культур грам-позитиених i грам-негатиених бактерт i дрiжджiе. Встаноелено iнгiбуючий еплие 20% концентрацп препарату на ркт бактерт штаму Escherichia coli XL1, DH5. Бактерiальна дiя до^дженого препарату на бактерп штаму Micrococcus luteus та дрiжджi Saccharomyces cerevisiae W303 була нижчою. Описано перспектиеи подальших до^джень щодо еиечення даног проблеми.
Ключовi слова: Galega orientalis (La), еодний екстракт, чистi культури, грам-позитиет, грам-негатиет, бактерп, дрiжджi.
Питання пошуюв нових антимшробних агенив, у тому чи^ природного походження, в останш роки е все бшьш актуальним, оскшьки пщвищення мжробюлопчно! чистоти продукпв харчування, кормових добавок та ветеринарних препараив на сьогодшшнш день е одним i3 першочергових завдань науковцiв i виробниюв. Згiдно з публiкацiями вiтчизняних i зарубiжних авторiв, вченi виявляють защкавлешсть щодо вивчення антимшробно! активностi нетрадицшних, альтернативних культур. Однiею з них е (Galega orientalis (La), яка належить до багаторiчних бобових рослин i3 тривалим термiном використання [1, 4, 5, 6, 7].
Актуальшсть використання природних речовин, якi мають антимiкробну дiю навiть i3 шпбуючим ефектом, е досить важливим з огляду на декшька моментiв: не виробляеться у бактерiй iмунiтет на !хню дiю i можливе тривале застосування; не викликають шкщливо! (негативно!) дп на органiзм людини i тварини; завдяки сво!й гальмiвнiй дп на небажану мiкрофлору можуть бути широко застосованi у харчовiй промисловоси, оскiльки при виробництвi дрiжджiв, х^ба тощо не дозволяеться використовувати синтетичш антибiотики.
Метою досл1джень. Метою даного дослщження було тестування можливо! антимшробно! Aii Galega orientalis (La) на ркт чистих культур бактерiй грам-позитивних (Micrococcus luteus), грам-негативних (Escherichia coli XL1, DH5) та дрiжджiв (Saccharomyces cerevisiae W303) на rai дп рiзних концентрацiй водного екстракту дано! рослини.
Матер1али i методи. Матерiалом для дослiдження слугувала висушена вегетативна маса Galega orientalis (La) у фазi бутошзацп i початку цвтння. Тестування можливо! антимiкробно! дi! Galega orientalis (La) на ркт чистих культур бактерш грам-позитивних (Micrococcus luteus), грам-негативних (Escherichia coli XL1, DH5) та дрiжджiв (Saccharomyces cerevisiae W303) проводились у 1нститут бюлогп кл^ини НАН Укра!ни, вiддiл аналiтично!
бютехнологи. MaTepianoM для дослщження слугувала висушена вегетативна маса Galega orientalis (La) у фaзi бутошзаци i початку цвтння. В експериментах використовували середовище „Ендо" для росту грам-негативних бaктepiй i середовище LB на якому виростають як гpaм-пoзитивнi, так i грам-нeгaтивнi бактерп, а також сусло-агар для дpiжджiв. Дaнi дoслiджeння проводили згщно з методикою Т. Маниатис (1984) [2].
Готували 10% i 20% витяжку препарату (висушено! трави) при кип'ятшш та нaстoювaннi впродовж 10-15 год. Екстракти стepилiзувaли холодною фшьтращею. Пiсля цього на поверхню чашки i3 агаризованим середовищем наносили по 0,1 мл дослщжуваного екстракту i зaсiвaли i! газоном суспензш тест-культури. Всi експерименти проводили у 10-кратнш пoвтopювaнoстi (10 контрольних i 10 дослщних чашок). Анaлiзувaли появу колонш на 2-3 добу тсля культивування при +30°С (дpiжджi) i першу добу при +35-37°С (бактери), пopiвнюючи дoслiднi вapiaнти з контролем (без введення екстракту). Отримаш в експериментах цифpoвi дaнi oбpoблeнi бюметрично за методикою М. Плoхiнськoгo (1969) [3] iз використанням комп'ютерних програм в сepeдoвищi MS Office 2003 програма „Statistica". Результати сepeднiх значень вважали статистично вipoгiдними: * - Р<0,05; **- Р<0,01; *** - Р<0,001.
Результати дослiджень. За перюд експерименту було пoмiчeнo, що препарат дослщжувано! культури у концентраци 10 % (у перерахунку на вихiдну масу висушено! рослини) практично не впливав на рют грам-позитивних i грам-негативних бактерш, а також дpiжджiв. Згщно з експериментами встановлено, що на чашках Пeтpi контрольно! групи виростало 540±15 кoлoнiй чистих культур бактерш E. coli штаму XL1, а у дослщнш iз додаванням препарату Galega orientalis (La) нaлiчувaлoсь на 110 колонш менше, при однаковому розведенш. Тобто спoстepiгaлoся пpигнiчeння росту даних бактерш на 20,0% (Р<0,001) пopiвнянo з контрольними чашками. М^жгрупова piзниця за даним показником статистично вipoгiднa. Результати тестування aнтимiкpoбнo! активност дoслiджувaнoгo препарату наведено на таблиц 1.
Таблиця 1
Píct чистих культур бактерш i дргжджчв на тлi дй' екстракту Galega
orientalis (La), (M±m, n=10), к-ть колонш на чашку neTpi
Група Грам-негативш Грам -позитивш Дpiжджi
E.coli (XL1) E.coli (DH5) M.luteus S.cerevisiae (W303)
Контроль 540±15 389±4 1921±81 59±5
Дослад 430±9*** 272±6*** 1694±8* 41±4**
Внaслiдoк вивчення можливо! aнтимiкpoбнo! ди 20,0% водного екстракту Galega orientalis (La) на ркт грам-негативних бактерш E.coli штаму (DH 5) з'ясовано, що у дослщних чашках було на 117 колонш менше, шж у контроле У вщсотковому значенш це на 30,0% (Р<0,001) менше. Даний факт вказуе про
незначний шпбуючий ефект дослщжуваного водного екстракту Galega orientalis (La) на рют чистих культур грам-негативних бактерш E.coli штамiв XL1, DH 5.
Проведет мжробюлопчш дослiдження вказують, що дещо меншою була бактерiйна дiя дослiджуваного препарату на грам-позитивнi бактерп Mic. Luteus. Згiдно з проведеними мiкробiологiчними дослiдженнями встановлено, що 20% водний екстракт Galega orientalis (La) сприяе пригшченню росту даних мiкроорганiзмiв на 12,0% (Р<0,05) порiвняно з аналогами контрольно! групи.
Аналопчний ефект впливу водного екстракту Galega orientalis (La) спостер^ався на ршт колонш дрiжджiв. Внаслiдок тестування антимiкробно! активност дослiджуваного препарату на рiст дрiжджiв Saccharomyces cerevisiae штаму W303 доведено, що у дослщних чашках кшьюсть колонiй була на 30,5% (Р<0,01) менша порiвняно з контролем.
Принагщно вiдзначити, що у всiх випадках експериментальних дослiджень додавання препарату Galega orientalis (La) не змшювало морфолопю колонiй (розмiр колонiй) тестових штамiв.
Отже, отриманi результати дослiджень дозволяють вiдзначити незначну антимiкробну дiю Galega orientalis (La) на рют чистих культур грам-негативних та грам-позитивних бактерш i дрiжджiв. Даний факт дае можливють пояснити принаймi один iз механiзмiв вiдсутностi тимпанi! у тварин, яким згодовували цю рослину. На нашу думку потрiбно проводити комплексш (фракцiонувальнi) дослiдження iз залученням ширших сучасних методiв i методик та наукових лабораторш. Доцiльно також розширити коло тест-культур i дiапазон концентрацш дослiджуваного препарату щодо з'ясування дано! проблеми.
Лггература
1. Дармограй Л.М. Фiтохiмiчне вивчення вмiсту бiологiчно активних речовин та тестування антимiкробно! активност галеги схiдно! (Galega orientalis (La) / Л.М. Дармограй / Наук. Вшник Львiвського нацiонального унiверситету ветеринарно! медицини та бiотехнологiй iм. С. З. Гжицького. Львiв, 2009.- Т. 11. - № 3 (42). - Ч.2. - С. 239-242.
2. Маниатис Т. Молекулярное клонирование / Л.М. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сембрук / М.: Мир, 1984. - 443 с.
3. Плохинский Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников / Плохинский Н.А. - М: Колос, 1969. - 352 с.
4. Estrada A. Isolasion and evaluation of Immunologigal adjuvant activities of saponins from Polygaja senega L. / A. Estrada // Comparative Immunology. Microbiol. Infect. Dis. 23. - 2000. - P. 27 - 43.
5. Irobi O.N. Antimicrobial actuvity of the bare of Bridelia ferruginea / O.N. Irobi // Int. J. Pharmacog. 34. - 1994. - P. 87-90.
6. Olorundare E.E. Antibacterial properties of leaf extract of Cassia alata / E E. Olorundare // Biol. Res. Com. 4. - 1992. - P. 113-117.
7. Sibanda T. In vitro antibacterial regimes of crude aqueous and acetone extracts of Garcinia kola seeds. / T.Sibanda // J. Biol. Sci. 8(1). - 2008. - P. 149-154.
Summary L.M. Darmohray - docent
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnological named after
S.Z. Gzhytskyj, Lviv, Ukraine Antimicrobial properties of Galega orientalis (La)
It has proved the influence of different concentrations of aqueous extract of this culture on the growth of pure cultures of gram-positive and gram-negative bacteria and yeast. Install antimicrobial influence 20% concentrations of preparation on the bacteries growth (Escherichia coli XL1, DH5). Bacterial action of preparation on the bacteries (Micrococcus luteus) and yeasts (Saccharomyces cerevisiae W303) were lower. It was described the prospects for further investigation of this problem.
Keys word: Galega orientalis (La), water extract, clear culture, gram-positive, gram-negative, bactery, yeasts.
Cmammx nadiumna do peda^ii 18.05.2011
