CC BY
147
АНТИГЕН-ПРЕДСТАВЛЯЮЩИЕ КЛЕТКИ ЛИМФОГИСТИОЦИТАРНОГО ИНФИЛЬТРАТА ПРИ БОЛЕЗНИ ШЕГРЕНА
Е.Б. Родионова', В.И. Васильев2, В.Д. Прокопенко', О.А. Логвиненко2 'РУДН,2ГУ Институт ревматологии РАМН, Москва
Резюме
Цель. Изучить наличие антиген-представляющих клеток (АПК) в лимфогистио-цитарном инфильтрате малых слюнных желез (МСЖ) при болезни Шегрена (БШ).
Материал и методы. Обследованы 58 жен. с БШ в возрасте от 20 до 89 лет (45,4±13,2г) с длительностью заболевания от 1г до 26 лет (8,3± 5,6г). Для выявления АПК в лимфогистиоцитарном инфильтрате проводилось иммунофенотипи-рование МСЖ в биоптатах нижней губы. Для выявления дендритных клеток (ДК) использовались моноклональные антитела к поверхностным CD21 и CD23 рецепторам, для обнаружения моноцитов и гистиоцитов был использован моноклональный маркер CD163 в реакции непрямой иммунофлюоресценции. В качестве вторых антител использовались меченные Fab-фрагменты антител против иммуноглобулинов мыши. При подозрении на лимфопролиферацию проводилось гистологическое и иммуннофенотипическое исследование лимфоузлов, костного мозга, трепанобиоптатов, подсчет миелограмм, сцинтиграфическое исследование лимфоузлов с Ga-67, компьютерная томография органов грудной и брюшной полости. Совокупность клинических, морфологических, иммунофенотипических характеристик лимфом оценивалась на основании WHO-классификации.
Результаты. При анализе 58 образцов биопсийного материала лимфогистиоцитар-ного инфильтрата МСЖ при БШ были обнаружены маркеры ДК (CD21.CD23) в 53% случаев, маркеры гистиоцитов и моноцитов (CD 163) в 90% случаев. Анализ интенсивности экспрессии маркеров ДК в 67% случаев показал возможное образование зародышевых центров в ткани МСЖ.
Заключение. Изучение маркеров АПК в лимфогистиоцитарном инфильтрате МСЖ при БШ может способствовать установлению факта агрессивного течения заболевания и его перехода в злокачественную форму.
Ключевые слова: антиген-представляющие клетки, малая слюнная железа, болезнь Шегрена
Болезнь Шегрена (БШ) — это системное аутоиммунное заболевание, характеризующееся поражением экзокринных эпителиальных желез, в клинической картине которого ведущую роль играет патология слюнных и слезных желез с развитием паренхиматозного паротита и сухого кератоконъю-нктивита. Заболевание встречается во всех возрастных группах, но в большинстве случаев первые клинические симптомы появляются в возрасте 3050 лет, причём в 10-25 раз чаще у женщин [1].
Морфологической основой БШ является лим-фогистиоцитарная инфильтрация ткани желез с последующим разрушением паренхимы и угнетением секреторной функции. В 4-10% случаев бо-
Адрес: 15522, Москва, Каширское ш., д.34 А. ГУ Институт ревматологии РАМН Тел.(495)114-44-80
лезнь из доброкачественной лимфопролиферации переходит в злокачественную форму (преимущественно неходжскинские лимфомы) [9]. Клеточный состав инфильтрата зависит от стадии его развития и содержит все типы клеток, отвечающих за нормальный иммунный ответ [7]. Немаловажную роль в формировании инфильтрата играют антиген-представляющие клетки (АПК), к которым относятся дендритные клетки (ДК), а также макрофаги и моноциты [6,22].
В большинстве исследований отмечено присутствие моноцитов и гистиоцитов в биопсийном материале малых слюнных желез (МСЖ) пациентов с БШ [11]. Основной функцией этих клеток является создание демаркационного вала между воспаленным участком и здоровой тканью [6,13]. При сравнении количественного соотношения указанных клеток при БШ и неспецифическом хроническом
сиалоадените выяснилось, что макрофагально-мо-ноцитарная реакция не является специфической для БШ [12].
Главная роль ДК — представление антигена в иммуногенном виде для Т-лимфоцитов, т.е. непосредственное участие в запуске каскада иммунных реакций, приводящих к уничтожению генетически чужеродного материала [11]. Для этого на поверхности ДК, как и любых других АПК, находятся рецепторы главного комплекса гистосовместимости I и II класса. Именно с помощью этих структур происходит передача информации с АПК на Т-лимфо-циты. По литературным данным, в ткани неизмененной слюнной железы эти клетки отсутствуют, появляясь с началом аутоиммунного процесса и принимая активное участие в формировании зародышевых центров (ЗЦ) в слюнных железах [4]. ДК в ткани МСЖ характерны именно для аутоиммунного заболевания и не выявляются при неспецифическом сиалоадените [21]. Было установлено, что ДК МСЖ экспрессируют на своей поверхности антигены С035, СБ21 (рецепторы комплемента), СБПс, СЭЮб (адгезионные молекулы сосудистых клеток), С023 [2]. Таким образом, был сделан вывод, что ДК, представленные в МСЖ пациентов с БШ, по их фенотипическим характеристикам относятся к немиелоидным ДК крови. Они связываются с адгезионными молекулами, располагающимися на эндотелиальных клетках МСЖ, проникая таким образом в ткань железы [2]. Была обнаружена прямая зависимость между количеством фокусов лимфогистиоцитарного инфильтрата и размерами сети из ДК [12]. При увеличении числа лимфогис-тиоцитарных фокусов пропорционально увеличивается количество ДК, располагающихся вокруг участков с Т — и В — клетками [5].
Известно, что ДК МСЖ способны образовывать десмосомальную связь с лимфоцитами, создавая сеть, участвующую в формировании ЗЦ [3]. В норме ЗЦ располагаются в первичных фолликулах лимфоидных органов (лимфатические узлы, селезенка, Пейеровы бляшки) [13,15,16]. ПоявлениеЗЦ при БШ говорит о прогрессировании развития лимфогистиоцитарного инфильтрата, его созревании и возможном переходе из доброкачественной лимфопролиферации в злокачественную форму [15]. По литературным данным, та же схема развития характерна и для других аутоиммунных заболеваний (аутоиммунный тиреоидит Хашимото, ревматоидный артрит, миастения гравис) [10].
Имеются данные о присутствии при БШ НЬА-ОИ. рецепторов не только на антиген-представляю-щих клетках, но и на эпителиальных клетках слюнных желез [19].
Целью данной работы являлись качественная и количественная оценка наличия АПК (гистиоцитов, моноцитов, дендритных клеток) в составе лимфогистиоцитарного инфильтрата МСЖ при БШ,
установление факта возможного присутствия ЗЦ в биопсийном материале МСЖ при БШ.
Материа.1 и методы
За период 2000-2004 гг 58 женщин с БШ в возрасте от 20 до 89 лет (45,4±13,2) с длительное™ заболевания от 1 года до 26 лет (8,3± 5,6) прошли обследование в клинике Института ревматологии [1]. Для определения АПК в лимфогистиоцитарном инфильтрате проводилось иммунофенотипирова-ние МСЖ в биоптатах нижней губы. Для выявления ДК использовались моноклональные антитела к поверхностным СБ21 и СЭ23 рецепторам. Для обнаружения моноцитов и гистиоцитов был использован моноклональный маркер С0163. Применялся метод непрямой иммунофлюоресценции. В качестве вторых антител использовались меченные РаЬ-фрагменты антител против иммуноглобулинов мыши. При подозрении на злокачественную лимфопролиферацию проводилось гистологическое и иммуннофенотипическое исследование лимфоузлов, костного мозга, трепанобиоптатов, подсчет миелограмм, сцинтиграфическое исследование лимфоузлов с Оа-67, компьютерная томография органов грудной и брюшной полости. Совокупность клинических, морфологических, иммунофе-нотипических характеристик лимфом оценивали на основании '\УНО-классификации [8].
Результаты
В результате иммуногистохимического исследования биоптатов МСЖ 58 пациенток с БШ присутствие ДК было обнаружено у 30 из них (53%). При этом в 67% случаев (20 биоптатов) экспрессия маркеров ДК имела ярко выраженный характер, образуя сеть. По типу доминирующего маркера были выделены 3 группы, представленные в табл. 1.
Кроме того, из общего числа пациенток была выделена группа с БШ, осложненной злокачест-
Таблица 1
МАРКЕРЫ ДК В БИОПТАТАХ МСЖ
Маркер ДК Число биоптатов, имеющих маркёр
Абс. %
CD21 К) 50
CD23 1 5
CD21 и CD23 9 45
венным лимфопролиферативным заболеванием (ЛПЗ), состоящая из 11 чел. (19%). Нами рассматривались 2 вида ЛПЗ: MALT(mucosa-associated lymphoid tissue) лимфома слюнных желез (5 чел.) и В-клеточная крупноклеточная нодальная лимфома (B-CCL) с вовлечением слюнных желез (6 чел.). Анализ маркеров ДК представлен в табл. 2, из которой видно, что в 4 (80%) случаях из 5 с диагнозом MALT-лимфома в инфильтрате присутствовали оба
маркера ДК. При анализе группы с В-ССЬ лимфом видна обратная ситуация: только в 1 случае (17%) были обнаружены маркеры ДК в инфильтрате.
Таблица 2
МАРКЕРЫ ДК В ЛИМФОГИСТИОЦИТАРНОМ ИНФИЛЬТРАТЕ МСЖ ПРИ БШ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМ ЛПЗ
№ Тип лимфомы CD21 маркер СБ23 маркер
1 MALT сеть сеть
2 MALT сеть сеть
3 MALT сеть единичные клетки
4 MALT сеть сеть
5 MALT - -
6 B-CCL сеть сеть
7 B-CCL - -
8 B-CCL - -
9 B-CCL - -
10 B-CCL - -
11 B-CCL - -
Для определения положительной экспрессии гистиоцитарно-моноцитарного маркера CD 163 проводился анализ 52 биоптатов МСЖ у больных с диагнозом БШ. Выявлено его присутствие в 90% образцов (47 чел.). Выраженная экспрессия наблюдалась в 53,2% случаев, единичные клетки обнаружены в 46,8%.
Обсуждение
Депо ДК в норме находится во вторичных лимфоидных органах, где они участвуют в дифферен-цировке В-клеток и образовании ЗЦ [2,4,11,12,15]. При БШ это происходит в МСЖ, что дает возможность предположить наличие там процесса, сходного с лимфоидным органогенезом, находящемся на стадии развития ЗЦ. Об этом свидетельствует тот факт, что из 30 положительных на наличие ДК биоптатов в 20 (67%) имелась ярко выраженная экспрессия маркеров ДК, образующая сеть. Именно эти случаи рассматривались нами как возможно содержащие ЗЦ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Васильев В.И., Симонова М.В., Сафонова Т.Н. Болезнь Шегрена. В кн. Под ред. Насоновой В.А., Бунчука Н.В. Ревматические болезни. М., Медицина, 1997, 196-210
2. Aziz К.Е., McCluskey P., Wakefield D. Characterisation of follicular dendritic cells in labial salivary glands of patients with primary Sjogren's syndrome: comparison with tonsilar lymphoid follicles. Ann. Rheum. Dis.,1997, 56, 140-143.
При анализе полученных результатов обращает на себя внимание большое число случаев с наличием маркера CD21. Можно предположить, что этот маркер появляется в инфильтрате первым, поскольку он присутствовал хотя бы в виде единичных клеток у 28 пациентов из 30, имеющих маркеры ДК. Присоединение к нему второго маркера ДК CD23 изменяет картину в инфильтрате, так как во всех биоптатах, имеющих оба этих маркера, ДК выглядят как хорошо развитая сеть. Скорее всего, это является следующей стадией развития лимфогистио-цитарного инфильтрата.
Нужно также отметить, что в 4 (44%) из 9 случаев, характеризующихся наличием сразу двух маркеров ДК CD21 и CD23, была диагностирована лимфома. При этом в 3 случаях это была MALT-лимфома и лишь в одном случае - B-CCL. Можно предположить, что появление сразу двух маркеров ДК в лим-фогистиоцитарном инфильтрате свидетельствует о формировании MALT в слюнной железе. Именно этот факт, вкупе с другими гистологическими и им-мунофенотипическими характеристиками, позволил выявить дебютную стадию злокачественного ЛПЗ ещё в одном случае в группе с двумя маркерами ДК. Отсутствие маркеров ДК в 83% случаев при B-CCL, возможно, свидетельствует о переходе лимфопроли-ферации низкой степени злокачественности в высокую.
Гистиоцитарно-моноцитарный маркер CD 163 был выявлен в биоптатах МСЖ в 90% случаев. Нам не удалось обнаружить какой-либо связи между этим показателем и экспрессией рецепторов ДК, как и наличием признаков злокачественного ЛПЗ.
Выводы
1) При анализе 58 образцов биопсийного материала лимфогистиоцитарного инфильтрата МСЖ при БШ нами были обнаружены маркеры ДК (CD21,CD23) в 53% случаев, маркеры гистиоцитов и моноцитов (CD 163) в 90% случаев.
2) Анализ интенсивности экспрессии маркеров ДК в 67% случаев выявил возможное образование ЗЦ в ткани МСЖ.
3) Предполагается, что наличие активной экспрессии сразу двух маркеров Д К может являться признаком формирования MALT и развития MALT- лимфомы в слюнной железе.
3. Bagdi E., Krenacs L., Krenacs T. Follicular dendritic cells in reactive and neoplastic lymphoid tissues: a reevaluation of staining patterns of CD21, CD23, and CD35 antibodies in paraffin sections after wet heat-indused epitope retrieval. Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol., 2001, 9(2),117-124.
4. Brandtzaeg P., Farstad I.N., Johansen F.E. The B-cell system of human mucosae and exocrine glands. Immunol. Rev., 1999, 171, 45-87.
5. Wfeyand C.M., Kurtin P.J., Goronzy J. J. Ectopic lymphoid organogenesis. Am. J.Pathol., 2001, 159, 3-6.
6. Cuida M., Brun J.G., Johannessen A.C., Jonsson R. Immunohistochemical characterization of the cellular infiltrates in Sjogren's syndrome, rheumatoid arthritis and osteoarthritis with special referee to calprotectin-produsing cells. APMIS, 1996, 104(12), 881-890.
7. Delaleu N., Jonsson R., Koller M.M. Sjogren’s syndrom. Rev.Eur. J. Oral. Sci., 2005, 113, 101-113.
8. Harris N.J., Jaffe E.S., Kiebold S. et al. Lymphoma classification - from controversy to consensus: the REAL and WHO classification of lymphoid neoplasms. Ann. Oncol., 2000,ll(suppll), s3-sl0.
9. Ioannidis J.P.A, Vassiliou A.V., Moutsopoulos H.M. Long-term risk of mortality and lymphoproliferative disease and predictive classification of primary Sjogren's syndrome. Arthr. Rheum., 2002, 46, 741747.
10. Jonsson R., Klareskog L., Bacman K. Expression of HLA-D locus (DP, DQ, DR)-coded antigens, beta2-microglobulin, and the interleukin 2 receptor in Sjogren's syndrome. Clin. Immunol. Immunopathol., 1987, 45, 235-243.
11. Kosko M.H, Pflugfelder E., Gray D. Follicular dendritic cell-dependent adhesion and proliferation of B cells in vitro. J. Immunol., 1992, 148, 2331-2339
12. MacLennan I.C., Liu Y.U., Johnsos G.D. Maturation and dispersal of B-cell clones during clones T cell-dependent antibody responses. Immunol. Rev., 1992, 126,143-161.
13. Meyer-Hermann M.E. Maini P.K. Cuttin Edge: back to "one-way" germinal centers. J. Immunol., 2000, 56, 142-156
14. Mustafa W., Zhu J., Deng G. Augmented levels of macrophage and Thl cell-related cytokine mRNA in submandibular glands of MRL/lpr mice with autoimmune sialoadenitis. Clin. Exp. Immunol., 1998, 112, 3, 389-396.
15. Said J.W., Pinkus J.L., Shintaku I.P. Alteration in fascin-expressing germinal center dendritic cells in neoplastic follcles of В-cell lymphomas. Mod. Pathol., 1998, 11(1),1-5.
16. Salomonsson S., Jonsson M.V., Skarstein K. Cellular basis of germinal center formation and autoantibody production in the target organs of patients with Sjogren's syndrom. Arthr. Rheum., 2003,48, 11,3187-3201
17. Scoazes J.Y., Berger F., Magaud J.P The dendritic reticulum cell pattern in В cell lymphomas of the small cleaved, mixed, and large cell types: an immunohistochemical study of 48 cases. Hum. Pathol., 1989, 20(2), 124-131.
18. Taki C., Kitajiama S., Sueyoshi K. MUC1 mucin expression in follicular dendritic cells and lym-phoepithelial lesions of gastric mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma. Pathol. Int., 2002, 52(11), 691-701.
19. Tsunawaki S., Nakamura S., Ohyama Y. Possible function of salivary gland epithelial cells as nonprofessional antigen-presenting cells in the development of Sjogren's syndrome. J. Rheumatol., 2002, 29(9), 1884-1896.
20. Van Blokland S.C., Wierenga-Wolf A.F., van Helden-Meeuwsen C.G. Professional antigen presenting cells in minor salivary glands in Sjogren's syndrome: potential contribution to the histopatho-logical diagnosis? Lab. Invest., 2000, 80(12), 19351941.
21. Xanthou, Tapinos, Polihronis. CD4 cytotoxic and dendritic cells in the immunopathologic lesion of Sjogren's syndrome. Clin. Exp. Immunol., 1999, 118, 1, 154-156.
22. Zeher М., Adany R., Nagy G. Macrophage containing factor 13 subunit a in salivary glands of patients with Sjogren's syndrome. J. Investig. Allerg. Clin. Immunol., 1991, 1(4), 261-265.
Поступила 08.11.05
Abstract
E.B. Rodionova, V.I. Misiljev, V.D. Prokopenko, O.A. Logvinenko
Antigen-presenting cells of lymphohistiocytic infiltrate in primary Sjogren’s syndrome and their role in the development of the disease.
Objective. .To study presence of antigen-presenting cells (APC) in small salivary gland (SSG) lymphohistiocytic infiltrate in primary SjSgren's syndrome (PSS).
Materials and methods. 58 females with PSS aged 20 to 89 years (mean 45± 13,2 years) with disease duration from 1 to 26 years (mean 8,3±5,6 years) were included. Lymphohistiocytic infiltrate APC were investigated with immunophenotyping of samples from under lip SSG. Dendritic cells (DC) were examined with monoclonal antibodies to surface CD21 and CD23 receptors, monocytes and histiocytes were investigated with CD 163 monoclonal marker in reaction of indirect immunofluorescence. Marked Fab-fragments of antibodies to mouse immunoglobulin were used as second antibodies. At suspicion of lymphoproliferation histological and immunophenotypic examination of lymph nodes, bone marrow, trepanobiopsies, myelogram counting, lymph nodes scintigraphy with Ga-67, chest and abdominal cavity computed tomography scan were performed. Whole clinical, morphological and immunophenotypic characteristics of lymphomas were assessed according to WHO classification.
Results. Analyzing 58 samples of SSG lymphohistiocytic infiltrate in PSS we found DC markers (CD21, CD23) in 53% of cases, histiocyte and monocyte marker (CD 163) in 90% of cases. Analysis of DC markers expression intensity revealed possible development of germinal centers in SSG tissue in 67% of cases.
Conclusion. Examination of APC markers in SSG lymphohistiocytic infiltrate in PSS may contribute revealing aggressive course of the disease and its transformation into malignant form.
Keywords: antigen-presenting ctlls, small salivary gland, SjSgren’s syndrome
