CC BY
32
Антидепрессивный эффект аксорбата лития в экспериментальной модели стресса у крыс Остренко К. С.1, Колоскова Е. М.2
2Остренко Константин Сергеевич / Ostrenko Konstantin Sergeevich - кандидат биологических наук, докторант,
лаборатория иммунобиотехнологии;
2Колоскова Елена Михайловна /Koloskova Elena Mikhailovna - кандидат биологических наук,
старший научный сотрудник, лаборатория клеточной и генной инженерии,
ВНИИ физиологии, биохимии и питания животных, г. Боровск, Калужская область
Аннотация: депрессия является одной из актуальных проблем современности. Антидепрессивный эффект аскорбата лития является коренным изменением в потенциальном лечении психо-эмоциональных расстройств.
Ключевые слова: депрессия, антидепрессивный эффект, иммобилизация, аскорбат лития, крысы линии Вистар.
Поведение животных является чувствительным к действию стресса. При его анализе уделяют внимание состоянию тревожности животных и признаками депрессивности. Именно тревожность является наиболее часто встречающимся спутником эмоционального стресса, первой реакции ЦНС на стрессор. Для моделирования подобных состояний используют поведенческие тесты, которые основаны на анализе спонтанного поведения при помещении животных в незнакомую для них среду [1]. Ожидание потенциальной опасности в окружающей среде в тестах порождают тревожность и депрессию. Экзогенные вещества, сдвигающие баланс между процессами возбуждения и торможения в ЦНС, способны вызвать выраженные поведенческие реакции в отношении тревожности [2].
Целью настоящего эксперимента явилось определения антидепрессивного эффекта аскорбата лития у крыс линии Вистар при моделировании теста на тревожность.
Тест подвешивания за хвост предназначен для изучения депрессивного поведения лабораторных животных. Крысу подвешивают за хвост на расстоянии 1,5 см от кончика, а расстояние от пола до носа животного составляет 10 см. Оценивается латентный период иммобильности, суммарная иммобильность в течение 6 мин. Снижение иммобильности у животных опытных групп по сравнению с контролем расценивается как антидепрессивный эффект [3]. Этот тест получил широкое распространение в экспериментальной нейрофармакологии при разработке препаратов с антидепрессивным действием.
Было сформировано 4 группы животных по 15 голов в каждой. Препарат вводили перорально в виде водного раствора. В качестве модельного объекта были использованы самцы белых крыс линии Вистар массой 150-170 г. Животные содержались в одинаковых условиях в клетках по 5 крыс в каждой, при температуре 19-21°С. Животных ежедневно кормили комбикормом из расчета 30-40 г на особь. Вода была доступна без ограничения. Аскорбат лития вводили на протяжении 21 дня. 1 группа интактные крыс (крысы получают воду для иньекций); 2 группа - дозировка аскорбата лития (АЛ) 120 мг/кг веса животного, 3 группа - дозировка АЛ 60 мг/кг веса животного, 4 группа - дозировка АЛ 30 мг/кг веса животного. Определялась эффективность аскорбата лития в трех точках: через 7, 14, 21 день после введения аскорбата лития.
Длительность иммобилизации зрительно регистрировали в течении 6 минут одновременно у всех животных. После этого животные оставались в подвешенном состоянии в течение 6 часов. В дальнейшем производился отбор цельной крови кровь из подъязычных сосудов. Затем животное помещалось в эксикатор с диэтиловым эфиром. По прошествии 10 минут производили спинальную декапитацию крыс. Производилось вскрытие брюшной полости и подсчитывалось количество язв на внутренней поверхности желудка. Полученную цельную кровь помещали в две пробирки. Для исследования количества эозинофилов по методу Дункера использовали цельную кровь. Для определения биохимического состава крови использовалась сыворотка. В качестве биохимических показателей определились адреналин, норадреналин. Данные показатели являются специфическими маркерами выявления воздействия стресс-факторов различной этиологии (4).
Результаты обрабатывали на PC, используя программные продукты Excel_03 и Statistica 6.0, подсчитывая M ± m, достоверность различий между группами определяли по непараметрическому критерию U— Вилкоксона-Манна-Уитни. Все процедуры и опыты на мышах проводились в соответствии с международными правилами обращения с животными.
Результаты
Результаты оценки влияния введений аскорбата лития на показатели теста «подвешивания за хвост» показали, что введение воды для инъекций не оказывало существенного влияния на продолжительность иммобилизации: в среднем разность по показателю до и после введения препаратов составляла после 7 дней 24,1±12,2 c.; после 14 дней 26,7±10,6 с.; после 21 дня 26,7±14,3 с. В опытных группа разные дозы оказывали схожее действия. Во всех дозировках латентный период иммобилизации уменьшался. Причем достоверное уменьшение наблюдалось как в группах с высокими дозировками, так и с низкими, разницы между ними не
наблюдалось. 2 гр. (120 мг/кг) 7д. - 20,3±7,3с.; 14 д. - 15,4±12,4с.; 21 д. - 14,7±6,4с.; 3гр. (60 мг/кг) 7д. -20,7±6,8с.; 14 д. - 16,9±8,4с.; 21 д. - 16,2±9,7с; В 4 группе при наименьшей дозировке 30 мг/кг эффект был на 14 и 21 сутки лучше, чем в группе с высокой дозировкой соответственно: 21,0±5,7 с.; 15,1±7,4с.; 13,8±6,1с.
Дальнейшее исследование выявило воздействие длительного стресс-фактора на морфологические и биохимические показатели крови крыс и влияние стресса на функционирование желудочно-кишечного тракта.
Таблица 1. Количество выявленных язв в желудке
№ Количество язв в желудке
групп 7 день введения 14 день введения 21 день введения
1 23,5 ± 0,9 21,2 ± 0,2 21,2 ± 0,2*
2 4,0 ± 0,5* 2,5 ± 1,1* 2,1 ± 0,7
3 4,1 ± 0,8 2,6 ± 0,4 2,4 ± 0,5
4 4,5 ± 0,9 2,4 ± 0,2* 1,9 ± 0,4
(*р < 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем)
1 - контрольная группа; 2 - 120 мг/кг АЛ; 3 - 60 мг/кг АЛ; 4 - 30 мг/кг АЛ
Таблица 2. Определение эозинофилов в цельной крови по Дункеру
№ Количество эозинофилов к цельной крови
групп 7 день введения 14 день введения 21 день введения
1 311,6 ± 5,8 285 ± 1,5 291 ± 0,2
2 768 ± 6,7 885 ± 3,8 911 ± 8,2
3 791 ± 1,2* 866 ± 9,4 910 ± 4,1*
4 764 ± 6,5 897 ± 7,2 954 ± 9,7
(*р < 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем)
1 - контрольная группа; 2 - 120 мг/кг АЛ; 3 - 60 мг/кг АЛ; 4 - 30 мг/кг АЛ
Таблица 3. Определение адреналина и норадреналина в сыворотки крови
№ групп Количество адреналина и норадреналина в сыворотке крови
7 день введения 14 день введения 21 день введения
Адреналин мкг/л Норадреналин мкг/л Адреналин мкг/л Норадреналин мкг/л Адреналин мкг/л Норадреналин мкг/л
1 27,1 ±3,91 68,6 ± 1,52 28,3 ± 1,27 68,9 ± 9,41 27,7 ± 2,46 70,5 ± 3,54
2 7,6 ± 0,38 20,2 ± 5,67 8,7 ± 3,82 20,3± 4,83 9,6 ± 3,28 18,4 ± 5,27
3 7,9 ±0,21* 22,1 ± 1,98 7,1 ± 1,19 20,3 ± 3,49 7,3 ± 2,14* 19,3 ± 6,13
4 8,1 ± 0,52 24,3 ± 2,2 6,9 ± 2,77 18,2 ± 5,28 6,9 ±0,97* 17,9 ± 0,95*
(*р < 0,05 при сравнении по t-критерию с контролем)
1 - контрольная группа; 2 - 120 мг/кг АЛ; 3 - 60 мг/кг АЛ; 4 - 30 мг/кг АЛ
Результаты исследования показали, что аскорбат лития обладает высокой антидепресивной активностью, защищая организм крыс от неблагоприятного кратковременного и длительного стрессового воздействия. Причем зависимость дозировки существенно не влияет на эффективность действия. Если длительность стрессового фактора превышает ресурсы организма, то наступает нервное истощение, вегето-сосудистая дистония, повышенная потливость, чувство слабости, так называемый синдром хронической усталости. То есть перечисленные симптомы и болезни являются чистого вида психосоматикой. Вследствие этого необходимо купировать и не допускать длительного воздействия различных стрессов на организм.
На основании совокупности данных, полученных в результате проверки эффективности аскорбата лития, можно сделать вывод, что при пероральном введении водных растворов достоверно происходит быстрая адаптация организма. При введении малых доз эффективность препарата достоверно не меняеться по сравнению с большими дозами. В период накопления аскорбата лития в организме опытных животных ответ организма на стресс не зависит от дозы введения. Доза 30 мг/кг веса не уступает по эффективности дозе 120 и 60 мг/кг.
Литература
1. Salum C. Anxiety like behavior in rats: a computational model / C. Salum, S. Morato, C. Roque da Silva // Neural Networks. 2000. V. 13. P. 21-29.
2. Nutt D. J. GABA-A receptors. Receptor Data for Biological Experiments: a Guide to Drugs Selectivity / Nutt D. J. L.: Ellis Horwood. 1991. P. 225-229.
3. Duman С. Н. Models of Depression // Vitamins and Hormones. 2010. Vol. 82. № 10. Р. 1-21.
4. Крыжановский Г. Н. Общая патофизиология нервной системы: Руководство. - М.: Медицина., 1997. С. 352.
