Антидепрессивные свойства и нейро-фармакологический профиль 3-фенилсульфонилтиетан-1,1-диоксида (н69) Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И БИОЛОГИЯ

УДК 615.214.32: 547.71

© О.А. Иванова, И.Л. Никитина, Р.А. Габидуллин, Е.К. Алехин, Е.Э. Клен, Н.Н. Макарова, Ф.А. Халиуллин, 2010

О. А. Иванова, И. Л. Никитина, Р.А. Габидуллин,

Е.К. Алехин, Е.Э. Клен, Н.Н. Макарова, Ф.А. Халиуллин АНТИДЕПРЕССИВНЫЕ СВОЙСТВА И НЕЙРО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ 3-ФЕНИЛСУЛЬФОНИЛТИЕТАН-1,1-ДИОКСИДА (Н69)

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа

В опытах на мышах-самцах исследованы антидепрессивные свойства производного тиетан-1,1-диоксида (Н69). Н69 в дозе 2мг\кг и 20 мг\кг, в/б) при однократном и 2-недельном введении уменьшает продолжительность иммобилизации и индекс депрессивности в тесте принудительного плавания. Его эффект сопоставим с таковым флуоксетина (10мг/кг). Н69 статистически значимо уменьшает каталептогенный эффект галоперидола, препятствует снижению базальной температуры, индуцированной введением апоморфина, уменьшает выраженность 5-окситриптофанового гиперкинеза и существенно не влияет на ареколиновый тремор, клофелиновую и резерпиновую гипотермию и птоз. Средняя летальная и среднеэффективная дозы Н69 составили 148мг/кг и 10 м/кг соответственно.

Ключевые слова: антидепрессивная активность; мыши; тест принудительного плавания; тиетан-1,1-диоксиды; механизм действия.

O.A. Ivanova, I.L. Nikitina, R.A. Gabidullin,

E.K. Alekhin, E.E. Klen, N.N. Makarova, F.A. Khaliullin ANTIDEPRESSIVE ACTIVITY AND NEURUPHARMACOLOGICAL PROFILE OF 3-PHENYLSULPHOTHIETAN-1,1-DIOXYDE (N69)

Antidepressive effects of 3-phenylsulphothietan-1,1-dioxyde (N69) have been studied in male mice. N69 (2 mg/kg and 20 mg/kg i.p.) reduces immobility time and depression index in the forced swimming test after acute and chronic (14 days) administration. Its effect has been shown to be similar to that of fluoxetine (10 mg/kg i.p.). N69 exhibits antagonism with haloperidol, apo-morphine, 5-hydroxytryptophan and it is ineffective in tests with reserpine, clonidine and arecoline. The lethal dose (50) and effective dose (50) values for intraperitoneal administration of the N69 appear to be 148mg \ kg and 10 mg/kg, respectively.

Key words: antidepressant-like effect; mice; forced swimming test; thietan-1,1-dioxyds; mechanism action.

Депрессия - распространенное психическое заболевание, характеризующееся пониженным настроением, потерей интереса к жизни и, как следствие, утратой трудоспособности и высоким риском суицида [10]. Основным методом коррекции депрессии является фармакотерапия, однако, современные антидепрессанты не позволяют быстро купировать депрессивный эпизод и характеризуются широким профилем нежелательных фармакологических реакций. Кроме того, от 30 до 50% пациентов резистентны к стандартной анти-депрессивной фармакотерапии [7]. Поэтому создание новых антидепрессантов является актуальной проблемой современной медицины.

Для поиска новых веществ, обладающих антидепрессивной активностью, на кафедре фармакологии № 1 БГМУ был проведен скрининг и изучена связь «структура - антидепрессивная активность» новых производ-

ных 1,2,4 триазола и тиетан-1,1-диоксида1. С помощью прогноза целевой активности на базе 8АКО-21 найдены новые производные 3-замещенного тиетан-1,1-диоксида, обладающие выраженным антидепрессивными свойствами, - 3-метокситиетан-1,1-диоксид (лабораторный шифр Н14), 3-(2-изопропокси-5-метилфенокси) тиетан-1,1-диоксид (лабораторный шифр Н40) и 3-

фенилсульфонилтиетан-1,1-диоксид (лабораторный шифр Н69), которые впоследствии подтверждены экспериментально [2].

Поэтому целью работы было изучение антидепрессивных свойств и механизма действия одного из найденных производных тие-тан-1,1-диоксида: 3 -фенилсульфонилтиетан-

1,1-диоксида.

Материал и методы

Антидепрессивную активность оценивали в тесте принудительного плавания (Б8Т) [11] в модификации Щетинина Е. В. [5] на не-

1 Вещества синтезированы на кафедре фармацевтической химии БГМУ (зав. кафедрой д.фарм.н., профессор Халиуллин Ф.А.) под руководством к.фарм.н. Клен Е.Э.

инбредных мышах-самцах. Н69 вводили однократно внутрибрюшинно (в/б) в дозе 2 и 20 мг/кг за 30 минут до теста или ежедневно в течение 14 дней в дозе 2 мг\кг. FST проводили через сутки после последнего введения соединений. Препаратом сравнения служил флуоксетин - 10мг/кг (Апо-Флуоксетин капсулы 0,02 «Апотекс-Инк»)[6]. В FST оценивали общее время иммобилизации и индекс де-прессивности (ИД). Ход эксперимента записывали на цифровую видеокамеру, визуальную оценку поведения животных проводили с использованием программы “BrainTest” (свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ №2008610170).

Спектр нейрофармакологической активности Н69 изучали с помощью тестов апо-морфиновой и клофелиновой гипотермий, га-лоперидоловой каталепсии, 5-

окситриптофаниндуцированного гиперкинеза, взаимодействия с L-допой, ареколинового тремора, антагонизма с резерпином [1]. В качестве препаратов сравнения использовали имипрамин - 10 мг/кг (Мелипрамин, раствор для инъекций 1,25%-2 мл, «Эгис») и мокло-бемид - 40 мг/кг (Аурорикс, таблетки 0,015, «Roche»).

Среднюю эффективную (ED50) и летальную (LD50) дозы соединений определяли по методу Личфилда-Уилкоксона при однократном внутрибрюшинном введении неин-бредным мышам-самцам [8].

Статистическую обработку данных проводили с помощью программы “Statistica 6.0”: для описания групп использовали медиану и квартили, для сравнения - Н-критерий Кру-скала-Уоллиса, U-критерий Манна-Уитни и Q-критерий Данна [3].

Результаты и обсуждение

После однократного введения в дозе 2 мг\кг Н69 оказывал значимый антидепрессив-ный эффект: существенно снижались как длительность иммобилизации, так и ИД. В дозе 20мг\кг антидепрессивный эффект Н69 сохранялся: ИД снижался на 23,4%, хотя длительность иммобилизации была сопоставима с контролем. Эффект соединения сопоставим с эффектом флуоксетина в дозе 10мг/кг (табл.1).

На следующем этапе был изучен эффект Н69 при 14-кратном введении. Необходимость изучения курсового введения продиктована длительным введением антидепрессантов в клинике и известным феноменом отсроченно-сти наступления антидепрессивного эффекта. Так, спустя сутки после 14-дневного введения Н69 были выявлены четкая тенденция к уменьшению иммобилизации по сравнению с

контролем на 30% и достоверное уменьшение ИД почти в 2 раза (табл. 1). Подобный эффект вызывал и флуоксетин: иммобилизация

уменьшалась на 27%, а ИД - в 2,1 раза. Примечательно, что ИД у контрольной группы животных в остром опыте был в 2 раза меньше чем у животных контроля, получавшего на протяжении 2-х недель 0,9%№С1, а продолжительность иммобилизации сопоставима (табл. 1). Вероятно, увеличение ИД связано с ежедневным инъекционным стрессом, поскольку известно, что хронический мягкий стресс способен вызвать депрессивноподобное состояние [12]. Н69 при 14-кратном введении уменьшал ИД до уровня контрольной группы, получавшей однократную инъекцию растворителя, что может свидетельствовать о его способности предотвращать развитие депрессивноподобного состояния, вызванного стрессогенными факторами. Таким образом, ИД является более чувствительным критерием антидепрессивного действия, чем продолжительность иммобилизации, что согласуется с данными Щетинина Е.В. и коллег (1989) [5].

В таблице приведены: медиана (Ме), межквартильный интервал (^Я), п - количество животных. * Изменения достоверны по сравнению с контролем 1 (р<0,05 для критерия Манна Уитни). ** Изменения достоверны по сравнению с контролем 2 (р<0,05 для критерия Манна Уитни).

Важным этапом исследования антиде-прессивного действия новых соединений является изучение их эффектов в тестах нейро-фармакологического взаимодействия. Это позволяет не только подтвердить наличие анти-депрессивной активности, но и предположить возможный механизм действия потенциальных антидепрессантов.

Введение апоморфина (10 мг/кг в/б) привело к достоверному снижению ректальной температуры животных в среднем на 40С (рис.1). Н69 устранил гипотермический эффект апоморфина (р< 0,05), при этом его дей-

Таблица 1

Антидепрессивная активность Н69 в тесте принудительного

Кратность введения (ра3) Группа Иммобилизация (с) Индекс депрессивности

Ме (IQR), n Ме (IQR), n

1 Контроль1 (0,9% NaCl) 126,0 (102,0-166,0) n=34 1,42 (1,08-1,79) n=34

Н69(2мг/кг) 80,0* (35,5-119,0) n=16 0,88* (0,79-0,99) n=16

Н69(20мг/кг) 114,5 (60,0-162,0) n=16 1,08* (0,74-1,41) n=16

Флуоксетин (10 мг/кг) 57,5* (30,5-95,0) n=8 1,08* (0,86-1,2) n=8

14 Контроль2 (0,9% NaCl) 113,0 (96,0-137,0) n=9 2,26* (2,0-2,69) n=9

Н69(2мг/кг) 79,5 (67,0-137,0) n=10 1,17** (1,06-1,3) n=10

Флуоксетин (10мг/кг) 82,0 (45,0-129,0) n=10 1,09** (1,00-1,24) n=10

ствие было достоверно более выражено, но менее продолжительно в сравнении с имип-рамином. Уменьшение апоморфиновой гипотермии связывают с влиянием соединений на норадрен- и дофаминергическую нейротрансмиссию [4].

ірііими

Рис.1. Влияние Н69 на апоморфиновую гипотермию. На графике представлены медиана и межквартильный интервал. * Изменения достоверны по сравнению с апоморфином (р<0,05 для критерия Манна Уитни). ** Изменения достоверны по сравнению с имипрамином (р<0,05 для критерия Манна Уитни).

Галоперидол (3 мг/кг в/б) вызвал развитие каталепсии у животных: через 30 минут после его введения мыши сохраняли позу «лектора» более 1 минуты, что соответствует 3-м баллам по шкале СЫага-МогеШ [9]. В

группе, получавшей Н69, выраженность каталепсии достоверно снижалась на 30-й минуте эксперимента (Н69 - 0 баллов; р<0,05 по критерию Манна-Уитни), тенденция к снижению сохранялась на протяжении 60минут. В группе, получавшей имипрамин, достоверное уменьшение каталепсии отмечено лишь на 45й минуте тестирования (имипрамин- 0 баллов, галоперидол - 2,5 балла; р<0,05 по критерию Манна-Уитни). Уменьшение каталептогенного эффекта галоперидола при введении антидепрессантов может быть связано с их влиянием на дофамин- и/или серотонинэргическую нейротрансмиссию [4].

Тест с 5-окситриптофаном (5-ОТФ) используют для выявления влияния соединений на серотонинэргическую нейротрасмиссию. Развитие тремора при его введении связано с увеличением серотонинергической нейротрансмиссии и стимуляцией постсинапти-ческих 5-НТ2- и 5-НТ3- рецепторов [4]. При этом введение малых доз 5-ОТФ (50мг/кг) практически не вызывает возникновения кивков, и только антидепрессанты - ингибиторы МАО- способны потенцировать эффекты малых доз 5-ОТФ, тогда как антидепрессанты -ингибиторы захвата моноаминов- и особенно атипичные антидепрессанты (миансерин, тра-зодон) уменьшают количество кивков, вызванных введением больших доз 5-ОТФ (300мг\кг) [4].

5-ОТФ в дозе 50 мг/кг не вызывал развития гиперкинеза, а имипрамин и Н69 не потенцировали его эффекты. В контрольной группе, получавшей 5-ОТФ в дозе 300 мг/кг, наблюдалось развитие гиперкинеза, который был наиболее выражен в начале эксперимента (до 30 минут). Н69 на всем протяжении опыта проявлял четкую тенденцию к уменьшению выраженности гиперкинеза, а через 60 минут после введения 5-ОТФ вызывал статистически значимый эффект (рис.2). В группе, получавшей имипрамин, снижение количества кивков отмечено лишь на 30-й минуте наблюдения.

хо

ко

!

т од

■»11Ч.1—1

—миюалг -•■■мгцм« ■ »-но

Рис.2. Влияние Н69 на выраженность 5-отф гиперкинеза. На графике представлены медиана и межквартильный интервал. * Изменения достоверны по сравнению с 5-ОТФ (р<0,05 для критерия Манна Уитни).

Таблица 2

Влияние Н69 на ректальную температуру мышей _______________при введении Ь-допы_____________________

Группа Ректальная температура, °С

30 мин Me (ЩЕ), п 60 мин Me (ЩЕ), п 90 мин Me (Ш), п

Контроль (0,9% №01) 37,6 (37,0-38,0) п=6 36,7 (36,6-36,8) п=6 37,3 (37,0-37,6) п=6

Ь-допа 140мг/кг 33,8 *•” (33,6-34,4) п=6 36,2 •” (35,6-36,6) п=6 36,9 •” (36,8-37,4) п=6

Ь-допа 700мг/кг 39,0 *# (38,2-40,2) п=6 37,6 # (37,0-38,4) п=6 35,2 *# (34,4-36,6) п=6

Моклобемид + Ь-допа 140мг/кг 38,5 # (37,0-39,6) п=6 38,8 *# (38,0-39,0) п=6 35,0 *# (34,0-37,0) п=6

Н69 + Ь-допа 140мг/кг 35,2 *#•” (34,8-35,8) п=6 36,1 *•” (34,8-36,4) п=6 37,6 • (37,2-38,2) п=6

В таблице приведены: медиана (Ме), межквартильный интервал (^Я), п - количество животных. * Изменения достоверны по сравнению с контролем (р<0,05 для критерия Манна Уитни). # Изменения достоверны по сравнению с Ь-допой 140 мг/кг (р<0,05 для критерия Манна Уитни). * Изменения достоверны по сравнению с Ь-допой 700 мг/кг (р<0,05 для критерия Манна Уитни). ” Изменения достоверны по сравнению с моклобеми-дом (р<0,05 для критерия Манна Уитни).

Для выявления МАО-ингибирующих свойств Н-69 был выполнен тест с Ь-допой. Введение Ь-допы в малой дозе (140 мг\кг) сопровождалось развитием гипотермии на 30-й и 60-й минутах эксперимента. Большая доза

Ь-допы (700 мг/кг), наоборот, вызывала статистически значимое повышение ректальной температуры. Однако к 90-й минуте в группе, получавшей Ь-допу в дозе 700 мг/кг, была зарегистрирована гипотермия, что связано с уменьшением концентрации Ь-допы в организме (табл. 2). Моклобемид достоверно повышал ректальную температуру мышей, получавших Ь-допу в малой дозе, на 30-й минуте эксперимента, что сопоставимо с эффектами больших доз Ь-допы. Н69 не препятствовал развитию гипотермии под действием малой дозы Ь-допы, что может быть связано с отсутствием у него МАО-ингибирующих свойств.

Н 69 (2 мг/кг) не препятствовал развитию гипотермии, вызванной центральным агонистом а-адренорецепторов клофелином (0,3 мг/кг в/б), не влиял на латентный период и продолжительность тремора, вызванного центральным М-холиномиметком ареколином (15 мг/кг в/б) и не оказывал значимого влияния на развитие птоза и гипотермию, вызван-

ных предварительным введением симпатоли-тика резерпина (2,5 мг/кг в/б). Таким образом можно заключить, что Н69 прямо не влияет на а-адрено- и М-холинорецепторы.

При исследовании острой токсичности на мышах-самцах при внутрибрюшинном введении установлено, что по классификации К.К Сидорова (1977) Н69 относится к IV классу опасности (малотоксичное соединение: ЬБ50=148мг/кг), тогда как флуоксетин - умеренно токсичное соединение (ЬБ50=87мг/кг; III класс опасности), а ЕБ50 Н69 сопоставима с флуоксетном. Таким образом, терапевтический индекс Н69 превосходит таковой флуок-сетина в 1,7 раза.

Заключение

Н69 обладает антидепрессивной активностью, сопоставимой с флуоксетином, и имеет более высокий профиль безопасности. Механизм действия Н69, вероятно, связан с его влиянием на серотонин- и дофаминерги-ческие структуры головного мозга, но не с МАО-ингибирующим действием.

Сведения об авторах статьи Иванова Ольга Александровна, ассистент кафедры фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии БГМУ тел. раб. 276-10-98; сот.89051802638, email: pharma 1 olga@yandex.ru Никитина Ирина Леонидовна,

д.м.н., профессор кафедры фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии БГМУ, тел. 276-10-98 Габидуллин Ришат Анварович,

ассистент кафедры фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии БГМУ, тел. 276-10-98 Алехин Евгений Константинович,

проф., д.м.н., зав. кафедрой фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии БГМУ тел. 272-09-09 Клен Елена Эдмундовна, к.ф.н., доцент кафедры фармацевтической химии БГМУ, тел.274-95-52 Макарова Надежда Николаевна, ассистент кафедры фармакологии № 2 БГМУ, тел.272-49-25 Халиуллин Феркат Адельзянович, проф., д.ф.н., зав. кафедрой фармацевтической химии БГМУ тел.274-95-52

ЛИТЕРАТУРА

1. Андреева, Н.И. Методические указания по изучению антидепрессантной активности фармакологических веществ / Н.И. Андреева // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/ отв. за выпуск Р.У. Хабриев. М.: Медицина; 2005.- С.244-253.

2. Габидуллин, Р.А. Поиск новых антидепрессантов в ряду производных 1,2,4-триазола и тие-тан-1,1-диоксида: Автореф. дисс.... канд. мед. наук - Уфа, 2009.

3. Гланц, С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ.- М.: Практика, 1999. - С. 323-365.

4. Машковский, М.Д., Фармакология антидепрессантов./ М.Д.Машковский, Н.И.Андреева, А.И.Полежаева // М.: Медицина, 1983.- С.194-212.

5. Щетинин, Е.В. Биоритмологический подход к оценке принудительного плавания как экспериментальной модели «депрессивного» состояния. / Е.В.Щетинин, В .А. Батурин, Э.Б.Арушанян [и др.] // Журнал высшей нервной деятельности.- 1989. - №5.-С. 958 - 964.

6. Devadoss T. Effect of acute and chronic treatment with QCF-3 (4-benzylpiperazin-1-yl) (quinox-alin-2-yl) methanone, a novel 5-HT(3) receptor antagonist, in animal models of depression / T. Devadoss, D. K. Pandey, R. Mahesh, S. K.Yadav // Pharmacol. Rep.-2010.-vol.62.-P. 245-257.

7. Kupfer D. Difficult-to-treat depression /D. Kupfer, D. Charney // Biol. Psychiatry.-2003.-vol.53.-№

8.-Р 633-634.

8. Litchfield J. T. A simplified method of evaluating dose-effect experiments / J. T, Litchfield, F. T. Wilcoxon // J. Pharmacol. Exp. Ther.-1949.- vol.96.-№2.- Р. 99-113.

9. Morelli, M. Role of substantia nigra pars reticulata neurons in the expression of neuroleptic-induced catalepsy / M. Morelli, M. L. Porceddu, et al. //Brain. Res. -1981.-vol.217.-№2.-P.357-359.

10.Pacher P. Trends in the development of new antidepressants. Is there a light at the end of the tunnel? /P Pacher, V. Kecskemeti // Curr. Med. Chem.-2004.- vol.11.-№7.-P. 925-43.

ii.Porsolt, R. D. Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants /R. D Porsolt, A. Bertin, M. Jalfre //Arch. Int. Pharmacodyn. Ther.-i977.-vol. 229.-№2.-P. 327-336. i2.Strekalova T. Stress-induced anhedonia in mice is associated with deficits in forced swimming and exploration /T Strekalova, R. Spanagel, D. Bartsch, F. A Henn, P. Gass// Neuropsychopharmacology-2004.-vol.29.-№ 11.-P. 2007-2017.

УДК 616.314:616.716+615.9

© А.Т. Зулькарнаева, С.В. Чуйкин, С.В. Аверьянов, Т.Р. Зулькарнаев, Л.А. Мусина, 2010

А.Т. Зулькарнаева, С.В. Чуйкин, С.В. Аверьянов, Т.Р. Зулькарнаев ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЛИЯНИЯ ЭКОТОКСИКАНТОВ НА ЗУБОЧЕЛЮСТНУЮ СИСТЕМУ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Уфа

В статье представлены данные экспериментальных исследований, которые подтверждают влияние экотоксикантов лабораторных животных в пренатальный период, вызывая значительные нарушения гистогенеза костной ткани и зачатков зубов, что лежит в основе патогенеза зубочелюстных аномалий.

Ключевые слова: эксперимент, экотоксиканты, зубочелюстная система, лабораторные животные

A.T. Zulkamaeva, S.V. Chuikin, S.V.Averyanov, T.R. Zulkamaev

IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDIES OF THE EFFECT OF ECOTOXICANTS ON THE DENTITION SYSTEM OF THE LABORATORY ANIMALS

The paper presents data of experimental studies that confirm the effect of ecotoxicants during prenatal development of the laboratory animals. Ecotoxicants were found to cause considerable impairment in histogenesis of the osseous tissue and tooth germs that underlie pathogenesis of dentition abnormalities.

Key words: experiment, ecotoxicants, dentition system, laboratory animals

Изучению влияния различных химических веществ на организм человека и лабораторных животных посвящено большое количество работ отечественных и зарубежных авторов. Данные исследования помогают понять механизмы патогенеза патологических состояний и обосновать мероприятия для их профилактики.

А.Д.Абдазимов (1992), изучая механизм комплексного воздействия вредных факторов производственной среды на зубочелюстную систему в эксперименте на животных, которые находились на кариесогенном рационе, установил, что эти факторы приводят к увеличению частоты поражения зубов кариесом и существенно сказываются на тяжести течения кариозного процесса.

Э.М.Мельниченко с соавт. (1997) проводили облучение крыс, а затем и приплода с мощностью экспозиционной дозы 110 мР/ч. Малые дозы ионизирующей радиации оказывали влияние на структуру и развитие зачатков зубов.

Н.Н.Чешко, Г.А.Берлов (2002) провели опыты на 27 белых беспородных крысах. Облучение крыс проводили дозой 110 мР/ч. Малые дозы ионизирующей радиации значительно угнетали пролиферативную актив-

ность клеток зубных зачатков. Под действием облучения максимально изменилась площадь эмалевого органа. Авторами описаны деструктивные изменения базальной мембраны, зубной пластинки, частичное сохранение мембраны между внутренним эмалевым эпителием и пульпой эмалевого органа, снижение клеточной дифференцировки, что привело к уменьшению размеров, площади, количества слоев, вакуолизации, дискомплексации клеток, формированию кист, изменению формы и структуры зубных зачатков в целом.

Е.Ю.Апраксина с соавт. (2008) изучали морфологию зубных зачатков при воздействии вибрации. Измерение слоя дентина показало увеличение его толщины по сравнению с контролем на 45%. Площадь мезенхимы околозубных структур была увеличена на 76,5% в сравнении с контролем.

Все морфологические изменения, выявленные в зачатках зубов плодов, взятых от крыс, подвергавшихся вибрационному воздействию, свидетельствовали об ухудшении трофики клеточных элементов зубного зачатка.

Г.С.Чучмай и Н.И.Смоляр (1972), изучая зачатки зубов, утверждают, что при патологическом течении беременности минерали-