CC BY
12
А. В. Иванов, Е. А. Непоклонов[и др.] // Казань: ФЕН, 2002. -592 с.
3. Донник, И. М. Этиология и профилактика массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: мате-риалымеждунар. науч.-практ. конф. - Воронеж, 2002. - С. 11-13.
4. Федоров, Ю.Н. Иммунопрофилактика болезней новорожденных телят // Ветеринария. 2006. - № 11. - С. 3-6.
5. Мникова, Л. А. Мониторинг вирусных (рота-корона-ВД) болезней крупного рогатого скота в неблагополучных по желудочно-кишечным инфекциям хозяйствах / Л. А. Мникова, Н. Л. Соколова, Т. А. Ишкова [и др.] // Труды ВИЭВ. - 2013. -Т. 77. - С. 99-102.
УДК 619:616.98:578.833.3:636.2
АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ИЗОЛЯТОВ MANNHEIMIA HAEMOLYTICA, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ТЕЛЯТ НА МОЛОЧНЫХ КОМПЛЕКСАХ СИБИРИ ANTIBIOTIC RESISTANCE OF MANNHEIMIA HAEMOLYTICA ISOLATES, ISOLATED FROM CALVES ON DAIRY COMPLEXES OF SIBERIA
Нефедченко Алексей Васильевич, канд. ветеринар. наук, Глотова Татьяна Ивановна, д-р биол. наук, Глотов Александр Гаврилович, д-р ветеринар. наук Сибирский федеральный научный центр агробиотехнологий Российской академии наук, Российская Федерация, Новосибирская обл., р.п. Краснообск Nefedchenko Alexey Vasilyevich, Cand. Vet. Sci. Glotova Tatyana Ivanovna, Dr. Biol. Sci. GlotovAlexandrGavrilovich, Dr. Vet. Sci.
Siberian Federal Scientific Centre of Agro-BioTechnologies of the Russian Academy of Sciences, Russia, settlement Krasnoobsk, Novosibirsk district, Novosibirsk reg.
Аннотация: изучена частота выделения бактерии Mannheimia haemolytica на молочных фермах в период с 2006 по 2016 годы, а также охарактеризованы 54 изолята бактерии по фенотипическим, биохимическим признакам, антибиотикорези-стентности и наличию гена лейкотоксина (lkta). Все тестированные изоляты были устойчивы хотя бы к одному из антибиотиков. Самая высокая устойчивость (33,3 %) установлена к препарату бензилпенициллин, а низкая (1,9 %) - тулатромицин и сульфаниламидам. Выявлена различная степень устойчивости изолятов М. haemolytica к антибиотикам старого и нового поколения, что указывает на необходимость проведения мониторинга для контроля циркуляции и выявления резистентных вариантов бактерии и повышения эффективности антибактериальной терапии.
Ключевые слова: mannheimia haemolytica, крупный рогатый скот, антибиотики, устойчивость.
Abstract: the frequency of isolation of the bacterium Mannheimia haemolytica on dairy farms in the period from 2006 to 2016 was studied, and also 54 bacterial isolates were characterized by phe-notypic, biochemical features, antibiotic resistance and the presence of the leukotoxin gene (lkta). All tested isolates were resistant to at least one of the antibiotics.The highest resistance of the bacterium (33.3 %) was found tobenzylpenicillin, and lowest (1.9 %) - totula-tromycin and sulphanylamides. A different degree of resistance of M.haemolytica isolates to antibiotics of the old and new generations has been revealed, which indicates the need for monitoring to control of circulation and to identify resistant variants of the bacterium and to increase the effectiveness of antibiotic therapy.
Key words: mannheimia haemolytica, cattle, antimicrobial resistance.
Респираторные болезни крупного рогатого скота (КРС) широко распространены в молочном животноводстве и являются наиболее важной причиной экономического ущерба [1, 2, 3].Из всех бактериальных возбудителей, связанных с респираторными болезнями, Mannheimia haemolytica является более важным [4].
Антимикробные препараты до сих пор остаются эффективным инструментом лечения животных с респираторной патологией. Однако в последние годы многие авторы сообщают о выделении от животных с респираторной патологией полирезистентных штаммов бактерии, что снижает эффективность антибактериальной терапии [5].
Целью данного исследования было изучение частоты выделения бактерии М. haemolytica из проб биоматериала от телят разного возраста с респираторной патологией, идентификация выделенных изолятов по биохимическим показателям, типиро-вание по гену lkta и определение их устойчивости к антибиотикам.
Методика. Для достижения поставленной цели исследовали пробы легких от 732 телят разного возраста с респираторными болезнями. Для выделения M. haemolyticaпроводили посевы на кровяной агар с добавлением 5 % крови, которые культивировали в атмосфере 5 % СО2 при 370С в течение 18-24 часов. Далее колонии бактерий с характерными морфологическими признаками и наличием гемолиза пересевали с целью получения чистой бактериальной культуры, у которой определяли биохимические свойства, устойчивость к антибиотикам методом диффузии в агар в соответствии с рекомендациями CLSI [6]. Каждый изолят был испытан с 24 препаратами на среде Мюллера-Хитона с добавлением 5 % крови овец.
Для тестирования изолятов по гену lktaиспользовали праймеры TGTGGATGCGTTTGAAGAAGG и
ACTTGCTTTGAGGTGAT-CCG. Реакцию проводили по стандартной методике. По результатам реакции все изоляты разделили на 2 группы: lkta+ и lkta-.
Результаты исследований и их обсуждение. На момент проведения исследований из 55 молочных хозяйств, расположенных в восьми регионах Сибири, наиболее тяжелая ситуация по респираторным заболеваниям была отмечена в 11 крупных молочных комплексах среди телят, рожденных от завезенных из-за рубежа нетелей. Самая высокая заболеваемость респираторными болезнями была у телят первого поколения. В молочных хозяйствах без завоза животных из-за рубежа максимальная за-
болеваемость респираторными болезнями была отмечена у телят в возрасте 1-3 месяца.
Из исследованных 738 проб легких, культуры бактерии выделили из 235, что составило 31,8 %. Частота выделения бактерии в крупных хозяйствах с завозом или без завоза животных не различалась и составляла от 34,2% до 35,3 % соответственно. В средних и мелких хозяйствах бактерию выделили из 26,3 % исследованных проб.
Всего выделили 54 культуры бактерии M. haemolytica. Они представляли грамотрицательные, неподвижные коккобак-терии с выраженной гемолитической активностью, ферментировали маннит, глюкозу, мальтозу, сорбит и сахарозу с образованием газа, не ферментировали трехалозу, глюкозидазу и араби-нозу, не продуцировали индол и уреазу.
По результатам ПЦР их разделили на 2 группы - lkta+ (положительные) и lkta- (отрицательные). Из 54 изолятов у 45 (83,3 %) присутствовал ген 1ка, а у 9 (16,7 %) - нет.
При изучении устойчивости к антимикробным препаратам было установлено, что каждый исследованный изолятов был устойчив как минимум к одному из них. При этом количество изолятов, устойчивых к широко и длительное время используемым антибиотикам (пенициллин, тетрациклин, хлорамфеникол, ген-тамицин и канамицин), варьировало от 16,7 % для гентамицина до 33,3 % для бензинпенициллина. Из препаратов группы ами-ногликозидовчувствительность была достоверно (р<0.01) выше к спектиномицину и канамицину, из Р-лактамных антибиотиков - к комбинации А/КК (амоксициллин/клавулоновая кислота) и цефалоспоринам, а из макролидов - к тулатромицину(р<0.05).
Изоляты бактерии М. haemolytica, выделенные от животных из хозяйств разных категорий, обладали различной устойчивостью к антибиотикам. В среднем каждый из них был устойчив к 4 препаратам. От животных из крупных молочных комплексов получили 27,2 % изолятов, устойчивых к 11 и более препаратам, средних хозяйств - 14,3 %, а из мелких - 4,5 %. Количество культур бактерии М. haemolytica от животных средних хозяйств, устойчивых к 6-10 антибиотикам, составило 54,5 %.
Анализ полученных данных позволяет предположить, что при завозе высокопродуктивных импортных животных может происходить занос полирезистентных к антибиотикам штаммов бактерии M. haemolytica, способных вызывать высокую заболеваемость и летальность у животных. Не исключена циркуляция таких штаммов среди поголовья КРС на крупных животноводческих комплексах. Об этом свидетельствует резистентность изо-лятов бактерии M. haemolytica к новым антибиотикам широкого спектра действия (спектиномицин и тулатромицин), ранее не применявшимся на территории Сибири. Кроме этого, беспорядочное применение антибактериальных препаратов может привести к появлению полирезистентных клонов бактерии M. haemolytica и на молочных комплексах без завоза импортных животных. Их циркуляция, особенно на фоне возбудителей вирусной природы, может приводить к повышению заболеваемости и падежа телят в первые месяцы жизни.
Выводы. Респираторным патогенном для молодняка крупного рогатого скота в молочных хозяйствах Сибири является бактерия M. haemolytica, имеющая разную устойчивость как к длительно использующимся, так и к новым антибиотикам, что свидетельствует о необходимости мониторинга циркуляции резистентных вариантов бактерии для повышения эффективности антибактериальной терапии.
Метод типирования и дифференциации выделенных изо-лятов бактерии по гену лейкотоксина может быть полезным инструментом в изучении биологических свойств возбудителя.
Список литературы
1. Глотов, А.Г. Этиология бронхопневмоний крупного рогатого скота на молочных комплексах / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, О.В. Семенова, К.В. Войтова // Ветеринария. - 2014. - №4. -С. 72 -78.
2. Глотов, А.Г. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова, О.Г. Петрова, А.В. Нефедченко, А.Т. Татарчук, С.В. Котенева // Ветеринария. 2002. - № 3. - С. 17 - 21.
3. Глотов, А.Г. Респираторные болезни телят вирусно-бактериальной этиологии / А.Г. Глотов, Т.И. Глотова // Новосибирск, 2008. - 256 с.
4. Глотов, А.Г.Гетерогенность пастерелл, выделенных от крупного рогатого скота на молочных комплексах // А.Г. Глотов, Т.Е. Терентьева, А.В. Нефедченко, Т.И. Глотова, А.Н. Шиков, А.П. Агафонов // Ветеринария. - 2014. - № 12. - С. 23-26.
5. Angen, O. Phenotypic and genotypic characterization of Mannheimia (Pasteurella) haemolytica-like strains isolated from diseased animals in Denmark./ O. Angen, P. Ahrens, M. Bisgaard // Vet .Microbiol. - 2002. - № 84. - С.103-114.
6. Clinical and Laboratory Standards Institute, 2013. Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility test for bacteria isolated from animals; Approved standard susceptibility testing, Third edition, CLSI/NCCLS document M31-A4. Wayne, PA, USA.
УДК 619:618.56
ИЗУЧЕНИЕ РАЗДРАЖАЮЩЕГО И СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ ПОСЛЕРОДОВЫХ ЭНДОМЕТРИТОВ БАКТЕРИАЛЬНО-МИКОЗНОЙ ЭТИОЛОГИИ У КОРОВ STUDY OF IRRITATING AND SENSIBILIZING EFFECT OF A NEW DRUG FOR PREVENTION AND THERAPY OFPUERPERAL ENDOMETRITISOF BACTERIAL AND MYCOTIC ETIOLOGYINCOWS
Новикова Елена Николаевна, канд. ветеринар. наук Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт - обособленное структурное подразделение ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии», Российская Федерация, г. Краснодар
Коба Игорь Сергеевич, д-р ветеринар. наук, профессор ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина», Российская Федерация, г. Краснодар
