CC BY
81
Al
SSM
4. Maschieto A., Martinez R., Palazzo I.C.V. et.al. Antimicrobial Resistance of Enterococcus sp. Isolated from the Intestinal Tract of Patients from a University Hospital in Brasil. Memories do Institute Oswaldo Cruz. 1999. Vol. 99. № 7. P. 76-836.
5. Бондаренко В.М., Суворов А.Н. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции. М. 2007. 30 с.
Bondarenko V.M., Suvorov A.N. Simbioticheskie enterococci i problem enterococcovoi opportunisticheskoi infeccii. M. 2007.30 s.
6. Бондаренко В.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. 304 с.
Bondarenko V.M., Maculevich T.V. Disbacterios kishechnika kak klinico-laboratornii sindrom: sovremennoe sostoianie problemi. М.: GEOTAR-Media, 2007.304 s.
7. Dutka-Malen S., Evers S., Courvalin P. Detection of glycopeptide resistance genotypes and identification to the species level of clinically relevant enterococci by PCR. J Clin Microbiol. 1995. № 33. P. 1434.
8. Martin B., Garriga M., Hugas M. et.al. Genetic diversity and safety aspects of enterococci from slightly fermented sausages. J Appl Microbiol. 2005. № 98 (5). P. 1177-1790.
9. Malik R.K., Montecalvo M.A., Reale M.R. et.al. Epidemiology and control of vancomycin-resistant enterococci in a regional neonatal intensive careunit. Pediatr Infect Dis J. 1999. № 18 (4). P. 352-356.
10. Pusch T., Kemp D., Trevino S., Button T. et al. Controlling outbreak of vancomycin-resistant Enterococcus faecium among infants caused by an
endemic strain in adult inpatients. Am J Infect Control. 2013. № 41 (1). P. 51-56.
11. Benzer D., Yavuzcan Ozturk D. et al. Vancomycin-resistant enterococcus colonization in neonatal intensive care unit: prevention and eradication experience. Mikrobiyol Bul. 2012. № 46 (4). P. 682-688.
12. Lee H.K., Lee W.G., Cho S.R. Clinical and molecular biological analysis of a nosocomial outbreak of vancomycin-resistant enterococci in a neonatal intensive care unit. Acta Paediatr. 1999. № 88 (6). P. 651-654.
13. losifidis E., Evdoridou I., Agakidou E. et al. Vancomycin-resistant Enterococcus outbreak in a neonatal intensive care unit: epidemiology, molecular analysis and risk factors. Am J Infect Control. 2013. № 41 (10). P. 857-861.
14. Meers P.D. The shedding of bacteria and skin squames after handwashing In: Newsom SWB, Caldwell A.D.S. eds. Problems in the control of hospital infection. London: Royal Society of Medicine, 1980. P. 13-18.
15. Tulzer G., Hohenauer L. Erreger der Neugeborenensepsis und ihr Resistenzverhalten. Wein. med. Wschr. 1988. Vol. 138. № 9. P. 213-216.
16. Singh N., Leger M.M., Campbel J. et al. Control of vancomycin-resistant enterococci in the neonatal intensive care unit. Infect Control Hosp Epidemiol. 2005. № 26 (7). P. 646-649.
17. Khan E., Sarwari A., Hasan R. et.al. Emergence of vancomycin-resistant Enterococcus faecium at a tertiary care hospital in Karachi, Pakistan. J Hosp Infect. 2002.№ 52 (4). P. 292-296.
18. Lee W.G., Ahn S.H., Jung M.K. et.al. Characterization of a vancomycin-resistant Enterococcus faecium outbreak caused by 2 genetically different clones at a neonatal intensive care unit. Ann Lab Med. 2012. № 32 (1). P. 82-86. __
УДК 576.851.2:616-001-06-022.6
АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ACINETOBACTER BAUMANII, ВОЗБУДИТЕЛЕЙ РАНЕВОЙ ОЖОГОВОЙ ИНФЕКЦИИ
Н.А. Гординская, Е.В. Сабирова, Н.В. Абрамова, Г.Н. Карасева, Е.С. Некаева,
ФГБУ «Приволжский федеральный медицинский исследовательский центр», г. Н. Новгород
Гординская Наталья Александровна - e-mail: [email protected]
Охарактеризована структура, антибиотикорезистентность и молекулярно-генетические особенности представителей рода Acinetobacter среди возбудителей раневой ожоговой инфекции пациентов Приволжского федерального медицинского исследовательского центра Минздрава России за 2013-2014 годы. Acinetobacter baumanii составили 96,2% всех ацинетобактерий. В анализируемый период 53,3% штаммов были резистентны к карбапенемам, а 94,2% карбапенемрезистентных Acinetobacter baumanii экспрессировали ген ОХА-40 подобных карбапенемаз, 5,8% - ген ОХА-23 подобных карбапенемаз, генов металло-р-лактамаз не выявлено. Регулярный мониторинг видового состава раневой ожоговой микрофлоры и рациональная стартовая антибактериальная терапия привели в последние годы к снижению резистентности Acinetobacter baumanii в отделениях термической травмы.
Ключевые слова: Acinetobacter spp., антибиотикочувствительность, приобретенные
карбапенемазы, металло-р-лактамазы.
The research characterizes the structure, antibiotic sensitivity and molecular genetic features of Acinetobacters among burn wound infectious agents in patients of the Volga Federal Medical Research Center of the Ministry of Health of Russia in 2013-2014. Acinetobacter baumanii amounted to 96,2% of all acinetobacteria. Over the analyzed period, 53,3% of strains were resistant to carbapenems, while 94,2% carbapenem-resistant Acinetobacter baumanii expressed 0XA-40 carbapenemase gene, 5,8% - ОХА-23 carbapenemase gene; no metallo-beta-lactamase genes were revealed. In recent years, regular monitoring of species composition of burn wound microflora and reasonable starting antibacterial therapy resulted in reduction of Acinetobacter baumanii resistance in thermal injury departments.
Key words: Acinetobacter spp., antibiotic sensitivity, acquired carbapenemases,
metallo-p-lactamases.
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Актуальность
Грамотрицательные неферментирующие бактерии в структуре возбудителей различных инфекционных процессов, в том числе и нозокомиальных инфекций, за последнее десятилетие прочно заняли второе место, уступая лишь грамположительным коккам [1, 2, 3]. Среди неферментиру-ющих бактерий в различных клиниках неизменно выделяются Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter baumann, которые делят лидерство между собой. В ожоговых стационарах за последние годы представители рода Acinetobacter, опередив Pseudomonas aeruginosa, обусловили одну из серьезных проблем [4].
Проблема ожоговой инфекции, вызванной Acinetobacter spp., состоит не только в частоте выявления, ацинетобактеры все чаще характеризуются высокой устойчивостью ко всем группам антибактериальных препаратов, включая карбапе-немы [5, 6, 7].
Наиболее значимым из известных механизмов резистентности к карбапенемам является продукция приобретенных карбапенем-гибролизующих ß-лактамаз класса D: ОХА-23, ОХА-40 и ОХА-58 подобных карбапенемаз, а также металло-ß-лактамазы групп IMP и VIM. [8]. Большинство генов, кодирующих продукцию приобретенных карбапенемаз, входят в состав интегронов, которые обладают высокой мобильностью и быстро распространяются между микроорганизмами с помощью плазмид и транспозонов. Также в составе инте-гронов могут присутствовать дополнительные генные кассеты, несущие детерминанты устойчивости к антибактериальным препаратам других классов, поэтому передача интегро-нов приводит к одномоментному появлению сложного фенотипа множественной лекарственной устойчивости полирезистентных штаммов [8]. Ранее мы публиковали данные об увеличении количества Acinetobacter spp. среди возбудителей инфекции, а также о высоком уровне их антибио-тикорезистентности в травматологических стационарах [1].
Целью настоящего исследования является анализ частоты выделения Acinetobacter spp. у пациентов с раневой ожоговой инфекцией за последние два года и определение молекулярно-генетических особенностей, обуславливающих фенотип антибиотикорезистентности этих бактерий.
Материал и методы
В работе проанализирована микрофлора, выделенная у пациентов c термической травмой, лечившихся в Нижегородском ожоговом центре в 2013-2014 гг. Всего за отчетный период выделено 2219 микроорганизмов, из них 297 бактерий Acinetobacter spp.
Видовая идентификация микрофлоры проводилась на анализаторе iEMS Reader FM (Labsystems, Финляндия) c помощью набора тест-систем (Lachema, Чехия). Анализ видового состава микрофлоры и устойчивости к антибактериальным препаратам осуществляли с помощью компьютерной программы «Микроб-автомат».
Антибиотикорезистентность определялась диско-диффузионным методом на агаре Мюллера-Хинтон с помощью сенси-дисков (BioRad, США), минимальные подавляющие концентрации препаратов (МПК) рассчитывали на анализаторе антибиотикограмм ADAGIO (BioRad,CI±IA) [2].
Выявление генов ОХА-карбапенемаз (группы ОХА-23, ОХА-58 и ОХА-40 подобных) и видоспецифических (ген ОХА-51) ß-лактамаз Acinetobacter baumanii осуществляли
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридиза-ционно-флюоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени».
Амплификация проводилась на приборе «Rotor Gene 6000» в соответствии с методическими указаниями к набору «АмплиСенс Ab-OXA» (ФБУН ЦНИИЭ, Россия).
Результаты исследования
Анализ видового состава раневой микрофлоры пациентов с термической травмой за отчетный период показал, что ацинетобактерии прочно занимают второе место среди возбудителей ожоговой инфекции после стафилококков. При этом частота выделения Acinetobacter spp. незначительно колеблется по годам, составляя в среднем у взрослых пациентов 14,5%, у детей - 11,8%.
▲1
SSM
При определении видовой принадлежности ацинетобак-терий выявлено, что 96,2% штаммов экспрессируют ген видоспецифических р-лактамаз ОХА-51 и, следовательно, являются представителями Ас^оЬайег baumanii, остальные 3,8% штаммов принадлежат к виду Acinetobacter calcoaceticus.
Оценка антибиотикорезистентности Аапе^Ьайег baumanii - возбудителей раневой ожоговой инфекции как у взрослых, так и в детском отделении - демонстрирует высокий процент полирезистентных штаммов. Резистентность ацинетобактерий представлена на рисунках 1 и 2.
Как показано на рисунках, резистентность выделенных Acinetobacter Ьаитапп в отношении всех классов антибактериальных препаратов превышает 50% и у детей, и у взрослых пациентов с ожоговой инфекцией. Уровень резистентности в детском отделении несколько ниже, чем у взрослых, кроме того, у детей за 2014 год наметилась тенденция к дальнейшему снижению антибиотикорезистентности аци-нетобактеров, что может объясняться рациональностью назначений препаратов с учетом молекулярно-генетических исследований, в то же время выявлено увеличение числа устойчивых ацинетобактеров к карбапенемам. В отделении термической травмы взрослых снижение резистентности Acinetobacter Ьаитапп наблюдалось только к ингибиторза-щищенным пенициллинам, в отношении карбапенемов изменений практически не было. Следует отметить, что к меропенему резистентность ацинетобактеров в обоих отделениях была выше, чем к имипенему. Нечувствительные к карбапенемам штаммы, как видно на рисунках, характеризовались множественной антибиотикорезистентностью.
Учитывая особое значение приобретенных карбапенемаз и металло-р-лактамаз у всех штаммов Ас^оЬайег 5рр., резистентных к карбапенемам, проведены специальные исследования по определению механизмов резистентности. В результате выявлено, что 94,2% изученных культур Acinetobacter spp. экспрессировали ген ОХА-40 подобных карбапенемаз, остальные 5,8% - ген ОХА-23 подобных карбапенемаз. Продуцентов ОХА-58 карбапенемаз, а также металло-р-лактамаз не выявлено.
Заключение
Таким образом, среди возбудителей раневой ожоговой инфекции 13,3% микроорганизмов принадлежат к бактериям рода Acinetobacter, большинство из них являются Аапе^Ьайег Ьаитапп. Фенотип резистентности Acinetobacter spp. свидетельствует о наличии приобретенных р-лактамаз и нозокомиальном происхождении выделенных штаммов.
Микроорганизмы, продуцирующие карбапенемазы, представляют серьезную угрозу для лечения ожоговой болезни. ОХА-карбапенемазы обладают высокой каталитической активностью и широким спектром субстратной специфичности, не ингибируются клавулановой кислотой,
сульбактамом, тазобактамом. Детекция этих механизмов резистентности крайне важна для назначения оптимальной терапии пациентам, эпидемиологического контроля распространения резистентных штаммов в стационарах и разработки противоэпидемических мероприятий.
Молекулярно-генетические исследования полирезистентных штаммов на практике позволяют корректировать назначения антибактериальной терапии, дают важную информацию для создания новых комбинаций препаратов, действующих в обход механизмов резистентности, позволяя сдерживать распространение нозокомиальной инфекции и снизить уровень резистентности в стационарах.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гординская Н.А., Сабирова Е.В., Абрамова Н.В. и др. Особенности нозо-комиальных штаммов Acinetobacter spp. в травматологической клинике. Клин. микробиол. и антимикроб. химиотер. 2013. Т. 15. № 2. С. 143-146.
Gordinskaja N.A., Sabirova E.V., Abramova N.V. i dr. Osobennosti nozokomial'nyh shtammov Acinetobacter spp. v travmatologicheskoj klinike. Min. mikrobiol. i antimikrob. himioter. 2013. T. 15. № 2. S. 143-146.
2. Мартинович А.А. Динамика антибиотикорезистентности и эпидемиология инфекций, вызванных Acinetobacter spp., в России. Клин. микробиол. и антимикроб. химиотер. 2010. Т. 12. № 2. С. 96-103.
Martinovich A.A. Dinamika antibiotikorezistentnosti i jepidemiologija infekcij, vyzvannyh Acinetobacter spp., v Rossii. Klin. mikrobiol. i antimikrob. himioter. 2010. T. 12. № 2. S. 96-103.
3. Гончаров А.Е. Эпидемиологические особенности гнойно-септических инфекций, вызванных Acinetobacter baumanii и Pseudomonas aeruginosa в ожоговом реанимационном отделении: автореф. дис. ... канд. мед. наук. СПб., 2005. 21 с.
Goncharov A.E. Jepidemiologicheskie osobennosti gnojno-septicheskih infekcij, vyzvannyh Acinetobacter baumanii i Pseudomonas aeruginosa v ozhogovom reanimacionnom otdelenii: avtoref. dis.... kand. med nauk. SPb., 2005. 21 s.
4. Lizaso D., Aguilera C.K., Correa M. et al. Nosocomial bloodseream infections caused by gram-negative bacilli: epidemiology and risk factors for mortality. Rev. Chilena Infectol. 2008. Vol. 25. № 5. P. 3 68-373.
5. Спиридонова Т.Г., Смирнов С.В., Лазарев Е.Б. и др. Особенности бактериемии и сепсиса у больных с термической травмой. Неотложная медицина. 2011. № 1. С. 43-47.
Spiridonova T.G., Smirnov S.V., Lazarev E.B. i dr. Osobennosti bakteriemii i sepsisa u bol'nyh s termicheskoj travmoj. Neotlozhnaja medicina. 2011. № 1. S. 43-47.
6. Шевченко О.В., Эйдельштейн М.В., Степанова М.Н. Металло-ß-лактамазы: значение и методы выявления у грамотрицательных нефермен-тирующих бактерий. Клин. микробиол. и антимикроб. химиотер. 2007. Т. 9. № 3. С. 211-218.
Shevchenko O.V., Jejdel'shtejn M.V., Stepanova M.N. Metallo- ß-laktamazy: znachenie i metody vyjavlenija u gramotricatel'nyh nefermentirujushhih bakterij. Klin. mikrobiol. i antimikrob. himioter. 2007. T. 9. № 3. S. 211-218.
7. Van Looveren M., Goossens H. ARPAC Steering Group. Antimicrobial resistanca of Acinetobacter spp. in Europe. Clin. мкгоЬю1. Infect. 2004. Vol. 10. № 8. P. 684-704.
8. Montefour К., Friden J., Hurst S. et al. Acinetobacter baumanii: an emerging multidrug-resistant pathogen in critical care. Crit. Care Nurse. 2008. Vol. 1. P. 15-25.
9. Van Looveren M., Goossens H. ARPAC Steering Group. Antimicrobial resistanca of Acinetobacter spp. in Europe. Clin.Microbiol. Infect. 2004. Vol. 10. № 8. P. 684-704.
