CC BY
18Н. В. Корожан, Г. Н. Бузук
АНТИАНАФИЛАКТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НАСТОЕВ ТРАВЫ ВИДОВ ЧЕРЕДЫ И ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО СБОРА
Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет
В работе показано, что настои травы череды трехраздельной, травы череды олиственной и противоаллергического сбора на основе травы череды, травы фиалки и листьев березы в дозах 100, 200 и 400 мг/кг оказывают выраженное антианафилактическое действие, статистически значимо не отличающееся от такового для средства сравнения — натрия кромогликата. Трава череды олиственной рекомендована как лекарственное растительное сырье с противоаллергической активностью наряду с травой череды трехраздельной. В качестве противоаллергического средства может быть использован сбор на основе травы череды, травы фиалки и листьев березы.
Ключевые слова: трава череды, противоаллергический сбор, соединение 48/80, анафилактический шок.
ВВЕДЕНИЕ
Поиск лекарственного растительного сырья с противоаллергической активностью и сборов на его основе является перспективным направлением. Чаще всего с этой целью используется сырье, основной группой биологически активных веществ которого являются флавоноиды [1]. Для ряда из них (листья березы, трава фиалки, трава зверобоя, трава череды, трава хвоща и др.) проведены исследования на модели системной и пассивной кожной анафилаксии [2].
Трава череды трехраздельной издавна применяется в качестве противоаллергического средства. В то же время отмечается широкое распространение другого вида череды - череды олиственной [3], которая может рассматриваться как альтернативный источник противоаллергического лекарственного растительного сырья. Кроме того, сочетание травы череды с другими видами лекарственного растительного сырья с противоаллергической активностью может приводить к усилению фармакологического эффекта, что, безусловно, является перспективным.
Для изучения аллергизирующего и противоаллергического действия лекарственных средств ряд публикаций рекомендуют модель системной анафилаксии [4, 5]. При этом в зарубежных публикациях чаще всего в этой модели используют соединение 48/80 [6-8]. Это обусловлено доступностью реагента и простотой постановки модели системной анафилаксии с его использованием.
Соединение 48/80, использованное нами для индукции анафилактической ре-
акции, представляет собой полимер, получаемый путем конденсации N-метил-и-метоксифенэтиламина с формальдегидом. Данное соединение вызывает у животных анафилактоидные реакции за счет прямого действия на тучные клетки и базофилы, что приводит к резкому высвобождению гистамина и ряда других медиаторов [9]. Высвобождение данных соединений приводит к сокращению гладкой мускулатуры сосудов, бронхиол, бронхов, желудочно-кишечного тракта, увеличению проницаемости сосудов, обусловливает кожный зуд, расширение сосудов кожи. Высокие концентрации медиаторов в крови вызывают анафилактический шок, при котором развиваются судороги, потеря сознания на фоне резкого падения давления, без своевременной помощи - смерть [10].
Целью данной работы является изучение противоаллергической активности настоев травы череды трехраздельной, травы череды олиственной и противоаллергического сбора на модели системного анафилактического шока, индуцированного соединением 48/80 in vivo.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектами исследования являлись настои травы череды трехраздельной, травы череды олиственной, а также противоаллергического сбора на основе травы череды, травы фиалки и листьев березы в соотношении 2 : 2 : 1. Выбор компонентов осуществляли исходя из известных прописей противоаллергических сборов и данных об иммуномодулирующем действии
лекарственного растительного сырья при аллергии [2, 11].
Настои из травы исследуемых видов череды и сбора получали согласно методике, изложенной в общей статье Государственной фармакопеи Республики Беларусь «Настои, отвары, чаи» [12]. Полученные настои упаривали. Сухой остаток растворяли в воде очищенной, объем которой рассчитывали таким образом, чтобы получить исследуемые дозы для внутрижелу-дочного введения в объеме 0,1 мл. Выбор доз осуществляли исходя из литературных данных о противоаллергической активности других видов череды [8].
Изучение специфической активности проводили на беспородных мышах-самцах массой 18-22 г. Животные были получены из питомника «Рапполово» РАМН (Ленинградская область, Всеволожский район). Животные содержались в виварии ВГМУ в соответствии с установленными требованиями [13-14]. В работе соблюдены требования гуманного обращения с экспериментальными животными [14]. Постановка экспериментального исследования с использованием лабораторных животных соответствовала рекомендациям Конвенции Совета Европы по охране позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, Директиве Совета ЕЭС от 24.11.1986 и рекомендациям FELASA Working Group Report, Надлежащей лабораторной практикой [15-17].
Изучение противоаллергической активности проводили на модели системного анафилактического шока, индуцированного соединением 48/80 in vivo [6-8]. Опытных животных делили на группы, по 5 особей в каждой. Группе «плацебо» за час до моделирования системной анафилаксии внутри-желудочно вводили воду очищенную. Исследуемые группы - из расчета на три дозы каждого средства - получали настои в дозах 400, 200 и 100 мг/кг соответственно. Группе сравнения инъекционно вводили раствор натрия кромогликата в дозе 50 мг/кг. Через час после введения исследуемых проб животным инъекционно вводили 10 мг/кг раствора соединения 48/80. Подсчитывали число выживших животных в каждой группе через час после инъекции. Интенсивность анафилактического шока выражали в индексах по Weigle [18], который рассчитывали по уравнению (1):
, (1)
N + Nl +N1+Ni + N 4
где AI - анафилактический индекс, N - число животных, у которых наступала смерть, N - число животных, у которых развивалась тяжелая анафилактоидная реакция, N2 - число животных, у которых развивалась умеренная анафилактоидная реакция, N3 - количество животных, у которых развивалась слабая анафилактоидная реакция, N4 - животные, у которых не было анафилактоидной реакции.
У животных, которые погибали от анафилактоидной реакции («анафилактического шока»), на завершающей стадии отмечался паралич задних конечностей, которые вытягивались в каудальном направлении (к хвосту). При сильно выраженной анафилактоидной реакции после наступления угнетенного состояния отмечалось исчезновение реакции на внешние раздражения. Вызываемая соединением 48/80 анафилактоидная реакция у мышей в слабо и умеренно выраженной форме характеризовалась вначале резким возбуждением (возможно связано с болью и зудом в месте инъекции), затем резким угнетенным состоянием животного. При этом при слабой форме угнетенное состояние наблюдалось 5-10 минут, при умеренной форме - около 30 минут [5, 18].
В качестве средства сравнения использовали раствор натрия кромогликата как вещества, наиболее близкого по структуре к веществам травы видов череды - фла-воноидам, основным компонентом среди которых является гликозид лютеолина (рисунок 1) [19].
Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы «Statistica Advanced 10.0». Для сравнения результатов использовали непараметрический критерий Кра-скела-Уоллиса.
РЕЗУЛЬТАТЫИ ОБСУЖДЕНИЕ
Было отмечено, что у группы «плацебо» летальность после введения соединения 48/80 составила 80%, одно животное находилось в состоянии умеренной анафи-лактоидной реакции. Анафилактический индекс в данном случае составил 3,6 (таблица; рисунок 2).
Рисунок 1 - Структурные формулы лютеолина (А) и натрия кромогликата (Б)
Таблица - Антианафилактическая активность настоев травы череды трехраздельной, травы череды олиственной и противоаллергического сбора
Исследуемый объект Доза, Количество погибших животных Количество выживших животных
мг/кг ^ ^ ^ ^
400 0 0 0 1 4
Настой травы череды трехраздельной (ЧТ) 200 0 0 0 1 4
100 0 0 0 2 3
400 0 0 0 1 4
Настой травы череды олиственной (ЧО) 200 0 0 0 1 4
100 0 0 1 1 3
400 0 0 0 1 4
Настой противоаллергического сбора 200 0 0 0 1 4
100 0 0 0 2 3
Натрия кромогликат (НК) 50 1 0 0 0 4
«Плацебо» (вода очищенная) - 4 0 1 0 0
Примечание: N -тяжелая анафилактоидная реакция, N2 -умеренная анафилактоидная реакция, N -слабая анафилактоидная реакция, N -не было анафилактоидной реакции.
Рисунок 2 - Анафилактический индекс настоев травы череды трехраздельной, травы череды олиственной и противоаллергического сбора
В группах, получавших настой травы череды трехраздельной, отмечалась 100% выживаемость животных. В группе, получавшей 400 мг/кг настоя, у одного животного отмечалась слабо выраженная анафилак-тоидная реакция, у остальных животных
данная реакция не отмечалась (таблица). Анафилактический индекс в этой группе составил 0,2. Аналогичные данные были получены для группы, получавшей настой в дозе 200 мг/кг. При внутрижелудочном введении настоя в дозе 100 мг/кг слабо вы-
раженная анафилактоидная реакция отмечалась у двух животных, анафилактоидной реакции у других животных группы не отмечено. Анафилактический индекс составил 0,4. Анафилактические индексы для всех групп, получавших настой травы череды трехраздельной, статистически значимо (р<0,05) отличались от контроля.
Среди животных, получавших настой травы череды олиственной, отмечалась 100% выживаемость. Среди животных, получавших 400 мг/кг настоя, слабо выраженная анафилактоидная реакция отмечалась у одного, для остальных признаки данной реакции отмечены не были. У животных, получавших 200 мг/кг настоя травы череды олиственной, получены аналогичные данные. Анафилактический индекс в этих группах составлял 0,2. При внутрижелудочном введении животным настоя травы череды олиственной в дозе 100 мг/кг у одного животного отмечалась слабо выраженная анафилактоидная реакция, еще у одного - умеренная анафилакто-идная реакция. Анафилактический индекс составил 0,6. Во всех случаях анафилактические индексы статистически значимо (р<0,05) отличались от контроля.
В группах, получавших настой противоаллергического сбора, также отмечалась 100% выживаемость животных. Слабо выраженная анафилактоидная реакция отмечалась у одного животного в группе, получавшей 400 мг/кг настоя сбора, а также в группе, получавшей 200 мг/кг настоя сбора. При дозе 100 мг/кг слабо выраженная анафилактоидная реакция отмечалась у двух животных. У остальных животных данная реакция не отмечалась. Анафилактический индекс составлял 0,2 (200 и 400 мг/кг) и 0,4 (100 мг/кг) и статистически значимо (р<0,05) отличался от контроля.
Предварительное введение животным раствора натрия кромогликата приводило у четырех животных к отсутствию реакции на введение соединения 48/80, одно животное погибло, анафилактический индекс составил 0,8.
Таким образом, настои исследуемых видов череды и противоаллергического сбора в указанных дозах оказывают выраженное антианафилактическое действие. При этом статистически значимых отличий в выраженности данного действия для исследуемых средств не выявлено (р>0,05). Для исследуемых средств также не отме-
чено статистически значимых отличий от средства сравнения - натрия кромогликата (p>0,05).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Изучена противоаллергическая активность настоев травы череды трехраздель-ной, травы череды олиственной и противоаллергического сбора на модели системного анафилактического шока, индуцированного соединением 48/80 in vivo. Показано, что настои видов череды и противоаллергического сбора в исследуемых дозах оказывают выраженное антианафилактическое действие, статистически значимо не отличающееся от такового для средства сравнения - натрия кромогликата.
Исходя из данных, трава череды олиственной может быть рекомендована как лекарственное растительное сырье с противоаллергической активностью наряду с травой череды трехраздельной. В качестве противоаллергического средства также может быть рекомендован сбор на основе травы череды, травы фиалки и листьев березы.
SUMMARY
N. V. Karazhan, G. N. Buzuk ANTIANAPHYLACTIC ACTIVITY OF INFUSION OF BUR-MARIGOLD HERB SPECIES AND ANTIALLERGIC SPECIES
It is shown that infusions of Bidens tripartita herb, Bidens frondosa herb and antiallergic species based on bur-marigold herb, violet herb and birch leaves in doses of 100, 200 and 400 mg/kg have the expressed anti-anaphylactic effect. This effect was not significantly different from that of the reference drug - sodium cromoglycate. Bidens frondosa herb was recommended as medicinal herb with antiallergic activity together with Bidens tripartita herb. As an antiallergic agent the species on the basis of bur-marigold herb, violet herb and birch leaves can be used.
Keywords: bur-marigold herb, antiallergic species, compound 48/80, anaphylactic shock.
ЛИТЕРАТУРА
1. Смирнова, О. В. Фитоиммуноте-рапия аллергических заболеваний / О. В. Смирнова, Ю. Н. Деркач, Н. С. Гурина // Иммунология, аллергология, инфектоло-
гия. - 2010. - №2. - С. 81-86.
2. Сысоева, Т. В. Фармакогностиче-ское изучение ЛРС с противоаллергическим действием с целью создпния на его основе лекарственных препаратов: дис. ... канд. фарм. наук: 14.04.02 / Т. В. Сысоева. - Пермь, 2011. - 192 с.
3. Васильева, Н. В. Механизмы воздействия инвазионной Bidens frondosa L. на аборигенные виды череды / Н. В. Васильева, В. Г. Папченков // Российский Журнал Биологических Инвазий. - 2011. -№ 1. - C. 15-21.
4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р. У Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО "Издательство "Медицина", 2005. - 832 с.
5. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) испытанию иммуномодулирующего действия фармакологичесуких средств / Утверждено Министерством здравоохранения Республики Беларусь 18.02.1999 г., №140-9812. - Минск, 1999. - 37 с.
6. Antiallergic activity of Aristolochia bracteolate Lank in animal mogel / H. R. Chitme [et al.] // Indian j ournal of experimental biology. - 2010. - Vol. 48. - P. 46-52.
7. Antiallergic and antiinflammatory properties of the ethanolic extract from Gleditsia sinensis / Y. Dai [et al.] // Biol. Pharm. Bull. - 2002. - Vol. 9. - P. 1179-1182.
8. Horiuchi, M. Antiinflammatory and antiallergic activity of Bidens pilosa L. var. radiatа Scherff / M. Horiuchi, Y. Seyama // Journal of Health Science. - 2006. - Vol. 52. №6. - P. 711-717.
9. Paton, W. D. M. Compound 48/80: a potent histamine liberator / W. D. M. Paton // Brit. J. Pharmacol. - 1951. - №6. - Р. 499-508.
10. Шихнебиев, Д. А. Диагностика и лечение больных с аллергическими и иммунодефицитными заболеваниями (краткое пособие для врачей и студентов) / Д. А.Шихнебиев, М. З.Саидов, Л. М.Джалилова. - Махачкала, 2005. - 124 с.
11. Бузук, Г. Н. Фитосборы в профилактике и лечении заболеваний / Г. Н. Бузук, Н. С. Гурина. - Витебск, 2004. - 133 с.
12. Государственная фармакопея Республики Беларусь. Т. 2. Контроль качества вспомогательных веществ и лекарственного растительного сырья / Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении
// Под общ. ред. А.А. Шерякова - Молодеч-но : Победа. - 2008. - 472 с.
13. СанПиН 2.1.2.12-18-2006 «Устройство, оборудование и содержание экспериментально-биологических клиник (вивариев)» : Постановление Главного государственного санитарного врача Республики Беларусь от 31 октября 2006 года № 131.
14. Юденко, О. А. Положение о порядке использования лабораторных животных в научно-исследовательских работах и педагогическом процессе Витебского государственного медицинского университета и мерах по реализации требований биомедицинской этики / О. А. Юденко, Т. В. Буй-нова. - Витебск: ВГМУ, 2010. - 36 с.
15. European Convention for the Protection of Vertebrate Animals for Experimental and Other Scientific Purposes. - Strasbourg, Council of Europe. - 18.03.1986. - 51 p.
16. Council Directive on the Approximation of Laws, Regulations and Administrative Provisions of the Member States Regarding the Protection of Animal Used for Experimental and Other Scientific Purposes. - 24.11.1986.
17. Надлежащая лабораторная практика: Технический кодекс установившейся практики (ТКП) 125-2008 (02040): постановление Министерства здравоохранения Республики Беларусь, 28 мар. 2008 г., №56 // Эталон - Беларусь [Электронный ресурс] / Нац. центр правовой информ. Респ. Беларусь. - Минск, 2008.
18. Противоаллергические свойства этил-3-(8-фтор-2-метил-2,3,4,5-тетрагидро-пиридо[4,3-Ь]индол-5-ил)-пропионата диги-дрохлорида / А. В. Иващенко [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - №3. - С. 28-30.
19. Сараф, А. С. Флавоноиды - как потенциальные противоаллергические соединения (обзор) / А. С. Сараф, Э. Т. Оганесян // Химико-фармацевтический журнал. -1991. - №2. - С. 4-8.
Адрес для корреспонденции:
210023, Республика Беларусь, г. Витебск, пр. Фрунзе, 27, УО «Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет», кафедра фармакогнозии с курсом ФПК и ПК, тел. раб.: 8 (0212) 37-09-29, Корожан Н. В.
Поступила 16.01.2015 г.
