CC BY
73
УДК 619:616.986.7:579(517.56) АНТАГОНИСТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОБИОТИКА «САХАБАКТИСУБТИЛ» К ВОЗБУДИТЕЛЯМ ЛЕПТОСПИРОЗА М.П. Неустроев, д. вет. н., проф., Н.П. Тарабукина, д. вет. н., проф., А.М. Степанова, к. вет. н., С.И. Парникова, к. вет. н., С.Г. Петрова, к. вет. н., А.А. Баишев, к. вет. н. ГНУ ЯНИИСХ Россельхозакадемии Л.И. Иванова
Якутская республиканская вет.-испыт. лаборатория
Лептоспироз актуальной ветеринарной Использование ограничивается развития проявления
остается проблемой медицины. антибиотиков возможностью дисбактериозов и антибиотикорезистен-
тных штаммов лептоспир. В настоящее время установлены эффективность и перспективность применения пробиотиков против возбудителей различных
заболеваний. Учеными Якутского НИИСХ разработан пробиотик «Сахабактисубтил» на основе штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 и Bacillus subtilis ТНП-5. Установлена способность
пробиотика «Сахабактисубтил» вызывать лизис лептоспир 7 серологических групп. Способ может быть использован в ветеринарной и медицинской практике.
Ключевые слова: лептоспиры, серогруппы, патогенность, лизис, бактерии
В Российской Федерации инфекционных болезней является лептоспироз [1]
UDC 619:616.986.7:579(517.56) ANTAGONISTIC EFFECT OF PROBIOTIC
"SAKHABAKTISUBTIL" TO THE PATHOGENS OF LEPTOSPIROSIS
Neustroev M.P., Tarabukina N.P., Stepanova A.M. Parnikova S.I., Petrova S.G., Cand.
Cand. Vet.
Dr.Vet.Sci., Dr. Vet. Sci., Cand. Vet. Cand. Vet.
Vet. Sci.
РгаГ Prof. Sci. Sci. Sci.
Republican
Baishev A.A. SSI YSRIA
Ivanova L.I. ,Yakut Veterinary Testing Laboratory
Leptospirosis is an urgent problem of veterinary medicine. The use of antibiotics is limited by the possibility of dysbacterioses development and manifestation of antibiotic strains of Leptospira. Nowadays has been found an effective and promising of probiotics against of various diseases. of Yakut Scientific Institute of Agriculture probiotic
"Sakhabaktisubtil" based on strains of Bacillus subtilis bacteria TNP-3 and Bacillus subtilis TNP-5. It was еstablished capacity of probiotic "Sakhabaktisubtil" to cause Leptospira lysis of 7 serogroups. The method may be used in veterinary and medical practice.
application
pathogens
Scientists
Research
developed
Key words: Leptospira, serogroups, pathogenicity, lysis, bacteria
одной
из
распространенных сельскохозяйственных и диких животных Лептоспироз в Республике Саха (Якутия)
регистрируется с 2003 года [2] и в настоящее время имеет значительное распространение, особенно у лошадей табунного содержания.
Согласно действующей инструкции, при установлении лептоспироза больных животных изолируют и лечат антибиотиками, затем вакцинируют.
Известно, что использование антибиотиков вызывает дисбактериоз кишечника, снижает иммунобиологическую реактивность и иммуногенность вакцины, способствует появлению
антибиотикорезистентных штаммов лептоспир [3]. Нами установлено, что лептоспиры серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotiphosa, Hebdomadis, Sejroe, Icterohaeorrhagiae. Canicola - не чувствительны амоксиклаву, ампинициллину, гентамицину, левомицетину, нефазолину, нефотоксиму, цефтриаксону и эритромицину. Эти серогруппы лептоспир чувствительны только бициллину-5 и доксициклину. Следовательно, при назначении антибактериальных веществ необходимо предварительно установить чувствительность возбудителя лептоспироза к антибиотикам.
Нами разработано лекарственное средство «Сахабактисубтил» на основе штаммов бактерий Bac. subtilis ТНП-3 и Bac. subtilis ТНП-5. Препарат имеет регистрацию в РФ. Утверждена инструкция по применению при дисбактериозах животных (2006, 2012 гг.).
Штаммы бактерий Bac. subtilis ТНП-3 и Bac. subtilis ТНП-5 обладают выраженной антагонистической активностью в отношении условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (сальмонеллезы, кишечная палочка, бруцеллы, микобактерии, грибы), стимулируют микробиоценоз полезной микрофлоры (бифидо- и лактобактерии и других).
Установлены эффективность и перспективность пробиотика «Сахабактисубтил» в заготовке кормов (силосовании, сенажировании), профилактике и лечении гнойно-некротических ран, болезней органов дыхания, пищеварения, воспроизводства, при микотоксикозах, повышении иммунобиологической реактивности организма, нормализации микробиоценоза животных, в составе витаминных добавок, получении высококачественной продукции и производстве экологически безопасных удобрений из отходов животноводства и растениеводства, в качестве бактериальных удобрений для повышения плодородия мерзлотных почв и урожайности сельскохозяйственных культур, консерванта при заготовке сена, силоса и сенажа. Возможно использование их для восстановления нефтезагрязненных земель и медицинской практики [4]. Однако нет сведений об использовании бактерий Bacillus subtilis ТНП-3 и Bacillus subtilis ТНП-5 для борьбы с лептоспирозом животных и человека.
Исходя из вышеизложенного ставится цель - изучить антагонистические свойства пробиотика «Сахабактисубтил» по отношению к различным серогруппам лептоспир.
Материалы и методы
В качестве микробного препарата использовали пробиотик «Сахабактисубтил», представляющий равное сочетание штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП», депонированных в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (справки о депонировании от 6 февраля 2001 г., №180/15 №181/15).
Штаммы бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3» и «Bacillus subtilis ТНП-5» выращивали в мясопептонном агаре (рН 7,0-7,2) в течение 5-7 суток при 370С, затем суспензировали в равных соотношениях в
о
физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5х108 КОЕ в 1 мл; штаммы лептоспир серогрупп: Pomona, Tarassovi, Grippotiphosa, Hebdomadis, Sejroe, Icterohaeorrhagiae, Canicola (из диагностического набора)- выращивали в среде Уленгута в течение 1015 суток при 28-300С до концентрации 5х104 КОЕ в 1 мл.
В пробирки вносили 1 мл культуры разных серогрупп лептоспир (по 3 пробирки на каждую серологическую группу) и добавляли суспензию штаммов бактерий «Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП» в равных соотношениях в дозе 1 мл.
Контроль: в пробирки с культурой серогрупп лептоспир добавляли 1 мл стерильного физиологического раствора.
Учет результатов проводили через 12 дней инкубации при 28-300С. Мазки микроскопировали в темном поле при увеличении 40х7-10.
Результаты
Суспензия штамма бактерий Bac. subtilis ТНП-3 вызывает гибель 10-40 % различных серогрупп лептоспир. Суспензия штамма бактерий Bac. subtilis ТНП-5 подавляет жизнеспособность всех серогрупп лептоспир. Препарат «Сахабактисубтил», состоящий из равного сочетания штаммов бактерий Bac. subtilis ТНП-3 и Bac. subtilis ТНП-5, вызывает полный лизис всех групп лептоспир (табл.).
В пробирках без суспензии культуры штаммов бактерий «Bacillus subtilis» отмечали живые лептоспиры, то есть сохранение жизнеспособности лептоспир всех серогрупп.
Таким образом, пробиотик «Сахабактисубтил», состоящий из равного сочетания штаммов бактерий «Bac. subtilis ТНП-3-ДЕП» и «Bac. subtilis ТНП-5-ДЕП» (5х108 КОЕ мл), в питательной среде подавляет жизнеспособность и вызывает лизис патогенных лептоспир 7 серологических групп.
Таблица. - Влияние штаммов бактерий Bacillus subtilis на _жизнеспособность лептоспир _
№ Серогруппы лептоспир Контроль ТНП-3 ТНП-5 «Сахабактисубтил»
1 Pomona 100 % 40 % лизис лизис
2 Tarassovi 100 % 20 % лизис лизис
3 Grippotiphosa 100 % 20 % лизис лизис
4 Hebdomadis 100 % 40 % лизис лизис
5 Sejroe 100 % 40 % лизис лизис
6 Icterohaeorrhagiae 100 % 10 % лизис лизис
7 Canicola 100 % 40 % лизис лизис
Лабораторными исследованиями установлена устойчивость штаммов бактерий Bac. subtilis ТНП-3 и Bac. subtilis ТНП-5 к воздействию широкого ряда антибиотиков (канамицин, рифампицин, левомицетин, фуродоксин, ампициллин, неомицин, эриприм и киноэкс), малоустойчивость - цефуроксину, цефатоксину, цироперазину, гентамицину, чувствительность - ципрофлоксацину.
Следовательно, устойчивость пробиотика «Сахабактисубтил» к широкому ряду антибиотиков указывает на возможность применения его в сочетании с ними.
Испытание пробиотиков при инфекционных болезнях, в том числе при лептоспирозе, особенно важно при вступлении России в ВТО. Известно, что в европейских странах вводятся ограничения на использование антибиотиков в животноводстве.
Выводы
Способ подавления жизнеспособности и лизирования патогенных лептоспир может быть использован в ветеринарной и медицинской практике для разработки пробиотических препаратов в качестве лечебно-профилактических средств и обеззараживания объектов внешней среды при лептоспирозе.
По результатам НИР оформлено заявление о выдаче патента на изобретение РФ «Способ подавления жизнеспособности патогенных лептоспир».
Литература
1. Волков, Н.А. Эпизоотическая обстановка по ряду заразных болезней животных резко ухудшилась /Н.А. Волков // Веткорм, 2010. - №5. - С. 6-7.
2. Гласкович, М.А. Влияние кормовых антибиотиков на кишечный микробиоценоз сельскохозяйственных животных: краткий аналитический обзор /М.А. Гласкович, Е.А. Капитонова // Ученые записки УО ВГАВМ, 2010. - т.46. - вып. 1 ч.1. - С. 194-197.
3. Макарова, Л.И. Проблемы лептоспироза сельскохозяйственных животных в Республике Саха (Якутия) /Л.И. Макарова, А.А. Никитина // Сб. докладов Междунар. науч. практ. конф. Современные проблемы и инновационные тенденции развития аграрной науки (г. Якутск, 10 ноября 2010 г.), Якутск, 2010.-С.54-56.
4. Неустроев, М.П. Пробиотики из штаммов бактерий Bacillus subtilis в сельском хозяйстве /М.П. Неустроев, Н.П.Тарабукина, М.П. Федорова //Якутск, 2012. - 16 с.
