CC BY
105ЕТ ЕР ПИАРНЫЙ
Врач
УДК:636.74.043.3:616.6
АНДРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИСПАНСЕРИЗАЦИЯ КОБЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ КИНОЛОГИЧЕСКОГО ЦЕНТРА
О.В.Перлецкая - аспирант; А.Н.Шестакова - кандидат биологических наук, доцент.
ФГОУ ВО«Вятская государственная сельскохозяйственная академия», г.Киров (Россия, 610017,
г.Киров, Октябрьский проспект, 133; е-таН:рег1еХ1ка]а@уап6ех.ги).
Целью данной работы являлась оценка гематологических показателей, ультразвуковых параметров репродуктивных органов и спермограммы кобелей при проведении андрологической диспансеризации. Андрологи-ческая диспансеризация собак проводилась в питомнике кинологической службы Министерства внутренних дел России по Кировской области в августе-сентябре 2016 года. В процессе диспансеризации кобелей применяли гематологические методы, ультразвуковое исследование половых органов кобелей, оценивали результаты спермограммы. Материалом исследования служили кобели-производители породы немецкая овчарка в возрасте 3-5 лет. Оценка спермы включала в себя определение объема, густоты, концентрации и рН, а также изучение активности и морфологии спермиев, вычисление процента живых и мертвых форм. В сыворотке крови определяли уровень общего белка, количество мочевины, креатинина, активность аланинаминотрасферразы (АЛТ) и щелочной фосфатазы, содержание тестостерона. С помощью ультразвукового сканера устанавливали размеры семенников и предстательной железы. При оценке, полученной спермы от кобелей, было установлено, что объём полученного эякулята в среднем составил 7,64±0,7 мл, а её концентрация - 0,25±0,01 млрд./мл. При детальной оценке спермиев на подвижность установили, что у 80% из них не было нарушений в липопротеидной оболочке, и она не пропускала красящее вещество в цитоплазму клеток, а у 20% - это свойство отсутствовало. В исследуемых образцах спермы численность патологических форм половых клеток в среднем не превышала 3,2%. Сперма кобелей имела слабокислую реакцию среды (6,4±0,01). По результатам наших исследований количество тестостерона у кобелей было невысоким (20,48±5,6 нмоль/л), а активность спермиев превышала средние нормативные значения (9,85±0,1 баллов). У кобелей немецкой овчарки размеры предстательной железы составляют 5,8 х 4,3 см, правого семенника - 5,4 х 2,7 и левого - 4,8 х 2,7 см. В периферической крови у кобелей немецкой овчарки содержится 12,5 х109/л лейкоцитов, 6,91х1012/л эритроцитов, 268х109/л тромбоцитов, общего белка 72,0 г/л, мочевины 6,6 ммоль/л, креатинина 108 мкмоль/л и тестостерона 20,4 нмоль/л. Активность аланинаминотрасферазы соответствует 32,0 Ед/л, а щелочной фосфатазы - 52,0 Ед/л.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: спермограмма, кобели-производители, тестостерон, предстательная железа.
Организация племенной работы в служебном собаководстве должна базироваться на особенностях физиологических процессов, от которых во многом зависит состояние репродуктивной функции животных. Основой разведения является воспроизводство численности служебных собак, улучшение их рабочих и экстерьерных качеств, что невозможно без наличия здоровых производителей [5,7].
Изучение эндокринологических и физиологических особенностей, а также качества спермы кобелей является одной из приоритетных составляющих при андрологическом обследовании. Знания о нормальном состоянии репродуктивной функции самцов и о концентрации основных гормонов в периферической крови обеспечивают понимание закономерных изменений этих факторов в соответствии с возрастом, физиологическим состоянием, условиями внешней среды, что в свою очередь является неотъемлемой частью племенного разведения. Проведение андрологической диспансеризации в питомниках служебных собак обеспечивает постоянство и непрерывность контроля за состоянием здоровья, а также за рабочей и воспроизводительной функциями кобелей-производителей [6]. Андрологическая диспансеризация племенных
кобелей-производителей должна представлять собой неотъемлемый комплекс плановых диагностических, лечебных и профилактических мероприятий, направленных на предупреждение, раннее выявление различных заболеваний. Поэтому оптимизировать работу в племенном собаководстве следует на основе изучения биологических особенностей организма собак посредством проведения андрологической диспансеризации, результаты которой необходимо учитывать при их естественном и искусственном осеменении [1].
Целью работы являлась оценка гематологических показателей, ультразвуковых параметров репродуктивных органов и спермограммы кобелей при проведении андрологической диспансеризации.
Материалы и методы. Андрологическая диспансеризация собак проводилась в питомнике Центр кинологической службы Управления Министерства Внутренних Дел России (ЦКС УМВД) по Кировской области в августе-сентябре 2016 года. В процессе диспансеризации кобелей применяли гематологические методы, ультразвуковое исследование половых органов кобелей, оценивали результаты спермограммы.
Материалом исследования служили кобели-производители породы немецкая овчарка в возрасте 3-5 лет.
Получение спермы проводили методом мастурбации (рис. 1) в присутствии суки, находящейся в стадии возбуждения полового цикла. Оценка спермы включала в себя определение объема, густоты, концентрации и рН, а также изучение активности и морфологии спер-миев, вычисление процента живых и мертвых форм. Густоту спермы и активность спермиев определяли визуальным методом с использованием микроскопа с применением столика Морозова. Концентрацию половых клеток определяли в счетной камере Горяева. Для вычисления процента живых и мертвых спермиев использовали окрашивание по Блюму[2-4].
Рис. 1. Получение спермы у кобеля-производителя.
Кровь для исследования получали перед утренним кормлением собак из вены сафена в стерильные вакуумные пробирки. Определение в крови уровня тестостерона проводилось методом ИФА (имунно-ферментный анализ) Определение в цельной крови гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, гематокрита и скорости оседания эритроцитов (СОЭ) осуществляли согласно общепринятым методикам. В сыворотке крови уровень общего белка, количество мочевины, креатинина, активность аланинаминотрас-ферразы (АЛТ) и щелочной фосфатазы оценивали на спектрофотометре «SPECOL-1500» (Австрия) с использованием стандартных наборов тестов «Vital». Размеры семенников (продольный и поперечный срез) устанавливали с использованием эхотомоскопа «РАСКАН»
ЭТС-Д-05П (С.-Петербург, 2011) с конвексным датчиком 3,5 С-60, частотой 5,0 МГц. УЗИ предстательной железы у кобелей проводили трансабдоминально. Собак фиксировали в положении лежа на спине, выстригали шерсть на одной стороне препуция перед краем лобковой кости. Перед сканированием кожу в области проекции простаты обрабатывали спиртом и наносили гель. Датчик располагали перпендикулярно поверхности кожи, ультразвуковой луч при этом направляли параллельно препуцию. Как только мочевой пузырь визуализировался, то передвигали датчик каудально к шейке пузыря и оттуда к предстательной железе.
Рис. 2. Ультразвуковое исследование семенников у кобеля немецкой овчарки.
При визуализации семенников размещали исследуемый орган в зоне фокусировки, для этого датчик устанавливали таким образом, чтобы один из семенников являлся буфером для другого (рис. 2).
Статистическую обработку полученного цифрового материала проводили методом вариационной статистики с использованием программы ASD на персональном компьютере в табличной матрице Microsoft Excel. При этом определяли среднюю арифметическую (М), ошибку средней арифметической (±m).
Результаты исследований. Данные по изучению показателей полученной спермы от кобелей представлены в таблице 1.
Таблица 1
Показатели качества спермы кобелей и размеры их предстательной железы и семенников (п=7)
Показатель Полученные данные Норма
Объем эякулята, мл 7,64±0,7 0,5-12
Концентрация спермиев, млрд/мл 0,25±0,01 0,1-1,0
Активность спермиев, балл 9,85±0,1 6-8
Живые спермии, % 80±0,1 более 70
Мертвые спермии, % 20±0,2 -
Патологические формы, % 3,2±0,80 не более 30
рН 6,4±0,01 6,3-6,7
Размер предстательной железы, см 5,8±0,16 х 4,3±0,2 -
Размер семенников, см правый семенник 5,45±0,19 х 2,7±0,1 левый семенник 4,8±0,14 х 2,7±0,1 Размеры зависят от породы и массы тела
ЕТЕРННЛРНЫЙ
При оценке, полученной спермы от кобелей, было установлено, что объём полученного эякулята в среднем составил 7,64±0,7 мл, а её концентрация - 0,25±0,01 млрд./мл. Активность половых клеток находилась выше верхних границ нормы на 1,85 балл. При детальной оценке спермиев на подвижность установили, что у 80% из них не было нарушений в липо-протеидной оболочке, и она не пропускала красящее вещество в цитоплазму клеток, а у 20% - это свойство отсутствовало (рис. 3). В исследуемых образцах спермы численность патологических форм половых клеток
в среднем не превышала 3,2%. Сперма кобелей имела слабокислую реакцию среды (6,4±0,01).
При проведении УЗИ-диагностики (рис. 4) предстательная железа у исследуемых кобелей представляла собой непарный паренхиматозный орган, с четкими очертаниями и ровным контуром. Паренхима простаты умеренно эхогенна и однородна, но имеет ровную структуру. Через середину добавочной половой железы проходят тонкие эхогенные полосы. Это представляет собой «воротное эхо», и считается, что оно вызвано наличием фиброзной ткани вокруг уретральной трубки.
Рис. 3. Спермии кобеля. Окраска Лейкодиф-200 (слева); окрашивание спермиев с использованием эозина/нигрозина (справа): (А) живой спермий не окрашен, (В) мертвый спермий окрашен.
Увеличение 100x16.
Рис. 4. Слева - предстательная железа кобеля-производителя немецкой овчарки, 5 лет. Визуализируются две доли простаты. Справа - семенник. В центре семенника визуализируется трабекула.
Семенник у клинически здоровых кобелей-производителей имел эллипсоидную форму, был гипоэхо-генен, эхоструктура его мелкозерниста и однородна, контуры ровные и четкие. В центре семенника визуализировалась трабекула в виде гиперэхогенной полоски (рис. 4, справа). Соотношение толщины тела придатка семенника к семеннику - 1:4-1:3. Было установлено, что эхогенность придатка семенника ниже эхогенности паренхимы самого семенника, эхоструктура однородна, головка округлая, с четкими ровными границами.
Результаты гематологических исследований представлены в таблице 2.
При оценке морфологических и биохимических показателей крови у кобелей-производителей (таблица 2) установили что, число лейкоцитов было в среднем на уровне 12,5 х109/л, эритроцитов - 6,91х1012/л,
тромбоцитов - 268х109/л. Скорость оседания эритроцитов составила 1,57 мм/ч, гематокрит равнялся 44,4%. В сыворотке крови у испытуемых производителей уровень общего белка был в среднем 72,0 г/л, мочевины - 6,6 ммоль/л, креатинина - 108 мкмоль/л и тестостерона - 20,4 нмоль/л. Активность аланинами-нотрасферазы находилась на уровне 32,0 Ед/л, а щелочной фосфатазы - 52,0 Ед/л.
Также в сыворотке крови было определено содержание гормона тестостерона. Считается, что превышение содержания тестостерона в крови приводит к снижению выработки спермы, уменьшению объема семенников, снижению числа активных спермиев. Однако, по результатам наших исследований, наблюдалась обратная картина, количество тестостерона было невысоким (20,48±5,6 нмоль/л), а активность
■M ЕТЕРКНАРНЫЙ
Врач
Таблица 2
Морфологические и биохимические показатели крови у разновозрастных кобелей (п=7)
Показатель Полученные данные Норма
Лейкоциты, х109/л 12,5±1,0 8,3-17,5
Гемоглобин, г/л 175±3,5 120-180
Эритроциты, х1012/л 6,91+0,14 5,2-8,5
СОЭ, мм/ч 1,57±0,3 2-6
Гематокрит, % 44,4+1,2 43-47
Тромбоциты, х109/л 268+20,6 200-500
Общий белок, г/л 72,0+2,7 50-80
Мочевина, ммоль/л 6,6 ±1,0 3,6-7,1
Креатинин, мкмоль/л 108,0+5,9 50-110
Аланинаминотрасфераза, Ед/л 32,0+6,1 10-60
Щелочная фосфатаза, Ед/л 52,0+11,8 30-100
Тестостерон, нмоль/л 20,48+5,6 34-35
спермиев превышала средние нормативные значения (9,85±0,1 баллов).
Заключение. Сперма кобелей-производителей породы немецкая овчарка характеризуется следующими показателями: объем эякулята 7,64 мл с кислотностью 6,4 и насыщенностью его половыми клетками 0,25 млрд/мл и их активностью 9,8 баллов; наличием 80 живых и 20% мертвых спермиев, а также 3,2% их патологических форм. У кобелей немецкой овчарки
Литература
размеры предстательной железы составляют 5,8 х 4,3 см, правого семенника - 5,4x2,7 и левого - 4,8x2,7 см. В периферической крови у кобелей немецкой овчарки содержится 12,5 х109/л лейкоцитов, 6,91х1012/л эритроцитов, 268x109/л тромбоцитов, общего белка 72,0 г/л, мочевины 6,6 ммоль/л, креатинина 108 мк-моль/л и тестостерона 20,4 нмоль/л. Активность ала-нинаминотрасферазы соответствует 32,0 Ед/л, а щелочной фосфатазы - 52,0 Ед/л.
1. Аллен, В.Э. Полный курс акушерства и гинекологии собак. - М.: ООО «Аквариум-Принт». - 2006. - 448с.
2. Белвуд, Б. Лабораторные процедуры. Техника проведения тестов и анализов / Б.Белвуд, М.Андросик-Кот-тон. - М.:Аквариум, 2014. - 142 с.
3. Гончаров, В.П. Основные показатели и оценка качества спермы производителей животных:методические указания / В.П.Гончаров. - М.:ФГОУ ВПО, 2003. - 19 с.
4. Данн, Д. Цитологические исследования у собак и кошек / Д.Данн. - М.: Аквариум, 2014. - 255 с.
5. Симпсон, Дж. Руководство по репродукции и неонтологии собак и кошек / Дж.Симпсон, Г.Ингланда. - М.: Софион, 2005. - 267 с.
6. Федотов, С.В. Совершенствование репродукции служебных собак в условиях ЦКС МВД России / С.В.Федотов // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. - 2014. - № 11 (121). - С. 116-120.
7. Фелдмен, Э. Эндокринология и репродукция собак и кошек / Э.Фелдмен, Р.Нелсон. - М.: Софион, 2008. - 1242 с.
ANDROLOGICAL CLINICAL EXAMINATION OF DOGS IN DOG TRAINING CENTER
Perletskaya O.V. - postgraduate fellow; Shestakova A.N. - Candidate of Biological Sciences.
Vyatka State Agricultural Academy, Kirov (e-mail: perletzkaja@yandex.ru).
The aim of this work was to evaluate hematological parameters, ultrasound parameters of the reproductive organs and semen of dog males at andrological examination. Andrological clinical examination of dogs held in the kennel dog service of the Russian Federation Ministry of Internal Affairs across Kirov region during August and September, 2016. Male dogs of German shepherd breed at the age of 3-5 years old were studied during the experiment. Semen
evaluation included determination of volume, density, concentration and pH, and sperm activity and morphology was studied by calculating the ratio of live and dead forms. The blood serum was studied for total protein, the amount of urea, creatinine, the activity of alaninaminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase levels of testosterone. Using ultrasonic scanner set the size of the testes and prostate was determined. The examination of the obtained sperm from the dogs showed that the volume of ejaculate on average was 7.64±0.7 ml, and its concentration was 0.25±0.01 billion/ml. A detailed assessment of sperm mobility determined that in 80% of sperm lipoprotein membrane was not damaged, and it prevented the dye to enter the cytoplasm of cells while 20% lacked this property. Of the investigated semen samples the number of pathological forms of germ cells on average was not higher than 3.2 per cent. The sperm had a slightly acid reaction medium (6.4±0.01). The research results showed that the level of testosterone in males was low (20.48±5.6 ymol/l), and the activity of the sperm cells was higher than the average normal values (9.85±0.1 points). In German shepherd dogs the prostate size is 5.8 x 4.3 cm, right testis is 5.4*2.7 and the left is 4.8 x 2.7 cm. In the peripheral blood of German shepherd dogs the number of leukocytes was 12.5x109/l, number of erythrocytes was 6.91x1012/l, number of platelets was 268x109/l, total protein was 72.0 g/l, urea was 6.6 mmol/l, creatinine was 108 ymol/l and testosterone was 20.4 ymol/l. Activity of alaninaminotransferase corresponded to 32.0 U/l, and alkaline phosphatase was 52.0 U/L.
KEYWORDS: semen analysis, male-producers, testosterone, prostate.
References
1. Allen, V.E. Polny kurs akusherstva i ginekologii sobak [A full course of dog obstetrics and gynecology]. - Moscow: LLC "Aquarium-Print". - 2006. - 448p.
2. Bellwood, B. Laboratory procedures. Techniques for conducting tests and analyses. / B. Bellwood, M. Andrasik-Catton: Moscow: Aquarium. - 2014. - 142 p.
3. Goncharov, V.P. Osnovniye pokazateli i otsenka kachestva spermy proizvoditeley zhivotnyh. Metodichesliye ukazaniya [Main parameters and evaluation of semen quality in production animals. Methodical guidelines]. - Moscow: 2003. - 19 p.
4. Dunn, D. Cytology in dogs and cats. - Moscow, 2014. - 255 p.
5. Simpson, G. Manual of reproduction and neonatology dogs and cats. / John.Simpson, G. England, Moscow: Sofian. - 2005. - 267 p.
6. Fedotov, S. V. Sovershenstvovaniye reproduktsii slzhebnyh sobak v usloviyah CKS MVD Rossii [Improvement of dogs reproduction in dog training centers of the Russian Federation Ministry of Internal Affairs / Bulletin of the Altai state agrarian University. - № 11 (121). - 2014. - P. 116-120.
7. Feldman E. Endocrinology and reproduction in dogs and cats. / Feldman E., R.Nelson, Moscow: Sofian. - 2008. - 1242 p.
