CC BY-ND
17
28
ЗНиСО
май №5 (242)
Наш сегодняшний опыт типирования личности студента позволяет сказать, что даже в той системе группового обучения в макрогруппах можно продуктивно решить многие проблемы интертипного общения с высоким коэффициентом полезного действия.
Залогом тому служит многолетний опыт организации малых студенческих групп с четкой структуризацией межличностных отношений не только в среде студенчества, но и в линейке отношений: студент—преподаватель, давно и продуктивно реализуемый в зарубежных вузах. Это на сегодня единственный путь, который поможет поднять и уровень преподавания, и престиж высшего образования.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Жижин К.С. Экспресс-диагностика подсознания. Ростов н/Д: Феникс, 2006. ^
Змеев С.И. Становление андрагогики: развитие теории и технологии обучения взрослых: Автореф. дис. ... д-ра пед. наук. М., 2000.
Keirsey D.,Bates M. Please Understand Me. Character and p Temperament Types. Gnoseology Books Ltd.,1984. —
Контактная информация:
Горбачева Наталия Анатольевна, тел.8 (495) 952-59-82, e-mail: [email protected]
Contact information:
Gorbachevа Natalia, phone: 8 (495) 952-59-82, e-mail: [email protected]
-V-
АНАЛИЗ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭКСТРЕМАЛЬНОЙ ТЕМПЕРАТУРЫ НА ПОЛУФАБРИКАТ ВАКЦИНЫ ЧУМНОЙ ЖИВОЙ В РАЗЛИЧНЫЕ СРОКИ ХРАНЕНИЯ ГОТОВОГО ПРЕПАРАТА
Д.А. Будыка, А.А. Фисун, Н.В. Абзаева, Г.Ф. Иванова, Л.С. Катунина
ANALYSIS OF THE EFFECT OF EXTREME TEMPERATURE ON THE HALF-FINISHED PRODUCT OF THE LIVE PLAGUE VACCINE IN VARIOUS PERIODS OF STORAGE OF THE FINISHED PREPARATION
D.A. Budyka, A.A. Fisun, N.V. Abzayeva, G.Ph. Ivanova, L.S. Katunina
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Потеря определенного процента жизнеспособности в течение первого года хранения вакцины чумной живой способствует накоплению нежизнеспособного «балласта» и уменьшению имму-ногенного эффекта расчетной дозы препарата. Предложен способ стабилизации количества жизнеспособных клеток препарата вакцины за счет «отбраковки» ослабленных или неполноценных особей путем выдерживания образцов полуфабриката при повышенной температуре (37±1) °С в течение 24 ч.
Ключевые слова: вакцина чумная живая, жизнеспособность, экстремальная температура, отмирание, термостабильность, глубина анабиоза.
The loss of certain percent of viability during the first year of storage of the live plague vaccine promotes accumulation of inviable «ballast» and reduction of immunogenic effect of the calculated dose of the preparation. The way to stabilize the number of viable calls in the vaccine preparation at the expense of the «cull» of weakened or defective individuals by keeping samples of the half-finished product at the raised temperature of (37±1) °
Keywords: live plague vaccine, viability, extreme temperature, die-off, thermostability, depth of anabiosis.
Одним из основных свойств качества препарата вакцины чумной живой является жизнеспособность или процент живых микробных клеток в соотношении к общей оптической плотности. Данный показатель определяет качество готового препарата — количество доз в ампуле, и, соответственно, иммуногенность. Жизнеспособность вакцины является довольно вариабельным признаком и колеблется от 25 до 50 % в готовом препарате.
Более интенсивная гибель чумного микроба происходит в первые 3—4 месяца хранения готового препарата и связана, по-видимому, с отмиранием неполноценных, частично травмированных в процессе лиофилизации клеток, или тех клеток, процессы жизнедеятельности в которых нарушены в силу различных обстоятельств [2].В процессе отмирания жизнеспособных клеток в период срока годности препарата вакцины происходит накопление «балласта» в виде нежизнеспособной биомассы. Причем отмершие клетки могут быть как морфологически неизменными, так и с дефектами клеточных стенок и цитоплазматических
г-Ь
мембран. Эффект повреждаемости при лиофили-зации был неоднократно описан в литературных источниках, что позволило отметить высокую степень корреляции уменьшения показателей повреждаемости в экспериментальных образцах чумных вакцин, где была снижена концентрация микробных клеток в ампуле, или изменен температурный режим культивирования с (27±1) °С на (21±1) °С [1, 3].
Важное значение имеют исследования, посвященные отработке объективного показателя живых клеток в дозе вакцины в процессе производства и использования. В связи с этим необходимо определение истинного показателя жизнеспособности в препарате, что позволит наиболее оптимально рассчитать иммунизирующие дозы для различных способов введения препарата в течение срока годности. Для получения заданного результата перед определением жизнеспособности предлагается «отбраковывать» наименее слабые и поврежден -ные микробные клетки путем воздействия на полуфабрикат экстремальной температуры.
май № (242)
29
Таблица. Анализ основных показателей качества, интегрированных с жизнеспособностью исследованных образцов полуфабриката вакцины, подвергнутой экспериментальному температурному воздействию
Группа Серия Жизнеспособность, % Термостабильность, сут. Потеря в массе при высушивании, %
исходная через 1 год хранения при воздействии 1 (37±1) °С в течение
12 ч 24 ч 36 ч 48 ч
I 5-10 38,4±1,5 25,5 ± 1,7 24,6 ± 1,6 23,4 ± 0,2 15,7 ± 1,4 5,8 ± 0,3 6,7 3,5
6-10 33,4 ± 0,6 25,5 ± 1,4 22,3 ± 0,7 20,7 ± 0,2 13,9 ± 0,9 2,9 ± 0,3 6,9 3,8
7-10 34,8 ± 3,2 27,0 ± 1,3 25,7 ± 0,6 22,9 ± 0,3 14,2±1,6 9,4 ± 2,3 7,0 2,5
М±т 35,5 ± 1,5 26,0 ± 0,5 24,2 ± 1,0 22,3 ± 0,8 14,6 ± 0,6 6,0 ± 1,9 6,9 ± 0,1 3,7 ± 0,4
II 8-10 49,3±1,1 29,2 ± 6,5 28,5 ± 1,3 27,3 ± 1,1 23,9 ± 2,1 20,0 ± 9,8 17,9 1,8
9-10 45,8 ± 2,0 35,1 ± 2,9 33,8 ± 0,5 31,0 ± 1,7 27,2±1,8 22,6 ± 4,1 15,7 1,3
10-10 40,0 ± 1,3 30,9 ± 3,0 29,3 ± 1,2 28,4 ± 1,1 20,0 ± 0,6 17,6 ± 0,2 13,6 1,5
12-10 43,3 ± 0,8 34,5 ± 1,5 32,1 ± 0,4 31,0 ± 0,6 24,7 ± 2,5 12,1±1,6 16,1 1,2
13-10 42,6±1,2 32,9 ± 5,8 31,8 ± 1,9 31,5 ± 0,8 27,5 ± 2,7 21,5 ± 0,1 20,2 2,0
М±т 44,2±1,6 32,5 ± 1,1 31,1 ± 1,0 29,8 ± 0,8 24,7 ± 1,4 18,8±1,9 16,7 ± 1,1 1,6 ± 0,2
Цель исследования: изучение влияния экстремальной температуры на полуфабрикат препарата вакцины чумной после опая ампул и перед подсчетом числа иммунизирующих доз для более точного определения количества жизнеспособных клеток, оставшихся в препарате.
Материалы и методы. Исследовали коммерческие образцы вакцины, выращенные в культиваторе на плотных питательных средах поверхностным методом в 2010 г.
Ампулы после опая выдерживали при (37±1) °С в течение 12, 24, 36 и 48 ч. Контрольные образцы воздействию экстремальной температуры не подвергались. Определение жизнеспособности проводили культуральным методом через 1 год хранения образцов при (4±2) °С (срок наблюдения) при сроке годности препарата 3 года. Определение термостабильности и потери в массе при высушивании проводили согласно требованиям нормативной документации на препарат [6]. Статистическую обработку проводили по общепринятой методике [4].
Результаты и обсуждение. Анализ основных показателей качества, интегрированных с жизнеспособностью исследованных образцов полуфабриката вакцины, выпущенной в 2010 г., подвергнутой экспериментальному температурному воздействию, позволил условно разделить их на 2 группы (табл.).
К I группе можно отнести серии 5, 6 и 7 со сходными качественными характеристиками. Исходный показатель жизнеспособности колеблется от 33,4 до 38,4 %, а через год хранения в условиях «холодовой цепи» процент живых клеток в этих сериях падает до 25,5—27,0 %, что соответствует нижней границе регламентированной нормы. Кроме того, данные серии обладают относительно невысокой термостабильностью — до 10 сут. (НД регламентирует не менее 4 сут.), более высокой влажностью — 2,5—3,8 % (при норме до 4 %). При воздействии экстремальной температуры на эти серии уже через 12 ч происходит снижение жизнеспособности ниже 25,0 %, а через 48 ч данный показатель падает ниже 10,0 %.
Быстрое отмирание живых клеток можно объяснить тем, что в препарате после лиофилизации осталось относительно большое количество влаги, в том числе и свободной, что способствует худшей сохранности живых клеток из-за меньшей глубины анабиоза [4, 6].
Ко II группе относятся серии препарата, обладающие не только достаточно высокой исходной жизнеспособностью (40,0 % и выше), но и с более низким содержанием влаги, что позволяет образцам иметь высокую термостабильность (от 13 до 20 сут.). Отмирание живых клеток в данных сериях происходит медленнее, и к 24 ч выдерживания при экстремальной температуре количество жизнеспособных особей остается на уровне 30,0 %, что соответствует падению жизнеспособности через год хранения в условиях «холодовой цепи». Через 36 ч средняя жизнеспособность вакцинных образцов составила около 25,0 %; и только после 48-часового воздействия количество живых клеток снизилось ниже регламентированных норм.
Таким образом, воздействие экстремальной температуры(37±1) °С на полуфабрикат препарата вакцины чумной живой позволяет произвести «отбраковку» неполноценных, недостаточно жизнеспособных клеток. Образцы с термостабильностью ниже 10 сут., невысокими показателями жизнеспособности (ниже 40,0 %) и потерей в массе при высушивании выше 3,0 % не следует подвергать экстремальному воздействию и необходимо использовать в первую очередь. Те серии вакцины, которые обладают более высокими показателями жизнеспособности (выше 40 %) и термостабильности (не менее 13 сут.) при влажности 2,0 % и менее следует выдерживать при (37±1) °С в течение 24 ч и реализовать на протяжении срока годности.
Данный прием с последующим определением реального числа живых клеток в дозе препарата позволит уменьшить количество вводимого при иммунизации «балласта» и купировать его имму-нодепрессивный эффект и аллергизацию прививаемых.
30
ЗНиСО
май №5 (242)
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Абзаева Н.В., Будыка Д.А., Бондаренко А.И., Иванова Г.Ф., Руднев С.М., Гостищева С.Е., Фисун А.А. Электронно-микроскопическая характеристика клеточных элементов вакцинной суспензии в чумной вакцине EV в зависимости от условий культивирования, концентрации микробов и ее объема в ампуле: Сборник материалов I Всероссийского конгресса по инфекционным болезням (2009 г., 30 марта — 1 апреля). Москва. С. 4. Будыка Д.А., Бондаренко А.И., Абзаева Н.В. Морфоме-трические показатели микробных клеток Yersinia pestis EV в зависимости от температуры культивирования и их устойчивость в процессе лиофилизации вакцины чумной живой: Сб. мат. Х Межгос. научно-практ. конф. государств-участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (2010 г., 5—6 октября). Ставрополь, 2010. С. 250. Еременко Ю.Д., Бывалов А.А., Пименов Е.В. Особенности жирно-кислотного состава клеток Yersinia pseudotuberculosis, выращенной на плотной питательной среде при различных температурах //Проблемы особо опасных инфекций. 2005. № 1 (89). С. 41—43. Осадчая А.И., Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А. Влияние некоторых факторов на криорезистентность и сохране-
ние жизнеспособности при лиофилизации Bacillus subtilis //Биотехнология. 2002. № 3. С. 45—54.
5. Фармакопейная статья предприятия 42-8654-07 «Вакцина чумная живая, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций». Ставрополь, 2007. 16 с.
6. Фисун А.А., Будыка Д.А., Бондаренко А.И., Абзаева Н.В., Гостищева С.Е., Иванова Г.Ф., Корнилов Е.В., Когот-кова О.И., Зуенко А.А. Взаимосвязь показателя термостабильности вакцины чумной живой с количеством нежизнеспособных клеточных элементов (балласта) в высушенном препарате в процессе хранения: Сб. мат. Х Межгос. научно-практ. конф. государств-участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (2010 г., 5—6 октября). Ставрополь, 2010. С. 275.
Контактная информация:
Будыка Дмитрий Александрович тел.: 8(652) 26-20-50, e-mail.: [email protected]
Contact information: Budyka Dmitry, phone.: 8(652) 26-20-50, e-mail.: [email protected]
-V-
РОЛЬ ТЕМПЕРАТУРЫ В РЕАЛИЗАЦИИ АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
Ю.В. Сизова, И.Я. Черепахина, Е.В. Сизова, В.В. Балахнова
THE ROLE OF TEMPERATURE IN THE IMPLEMENTATION ANTILYSOZYMIC ACTIVITY OF VIBRIO CHOLERAE
Г-Ь
U.V. Sizova, I.J. Cherepakhina, E.V. Sizova, V.V. Balahnova
ФКУЗ « Ростовский-на-Дону противочумный институт» Роспотребнадзора
Представлены результаты изучения антилизоцимной активности холерных вибрионов и зависимость ее от температурного фактора. Показано, что среди изученных штаммов преобладают высокие и средние показатели, а среди сальмонелл — низкие показатели, что свидетельствует о родовых различиях, характеризующих АЛА, и роли данной активности в жизнедеятельности холерных вибрионов.
Ключевые слова: холерный вибрион, персистенция, антилизоцимная активность, температура
We presented results of study on antilizotsimnoy activity ofV. cholerae and its dependence on the temperature factor. It is shown that among the studied strains dominate the high and average, and of Salmonella — low rates, indicating that the generic differences, that characterize of the ALA, and the role of this activity in the life of V. cholerae.
Keywords: Vibrio cholerae, persistence, antilizotsimnaya activity, temperature.
Продолжающаяся более пятидесяти лет седьмая пандемия холеры Эль Тор, появление в 1992 г. холерного вибриона О139 серогруппы, выделение в течение последних 20 лет атипичных штаммов с повышенной вирулентностью обусловили проведение масштабных исследований по изучению генотипа и фенотипа данного возбудителя, в том числе с целью анализа его патогенного потенциала. Однако механизмы персистенции холерных вибрионов в организме человека и объектах окружающей среды, ее регуляция, характер фенотипи-ческих проявлений признаков, характеризующих сохранение и переживание V. cholerae в различных экосистемах, изучены мало. Как известно, персистенция — механизм, способствующий длительному переживанию бактерий в организме млекопитающих и объектах окружающей среды, и позволяющий им координированно перестраивать работу клетки для адаптации к меняющим-
ся условиям [4]. У ряда микроорганизмов перси-стенция имеет важное патогенетическое значение в инфекционном процессе, и ее показатели могут быть использованы в медицинской практике в диагностике заболеваний и прогнозировании носительства [3]. Важным является изучение способности холерных вибрионов персистировать в объектах окружающей среды.
Одним из достаточно охарактеризованных факторов персистенции микроорганизмов является антилизоцимная активность [1]. Лизоцим является одним из ведущих компонентов неспецифической защиты у беспозвоночных, насекомых и растений, в том числе обитающих в водных эпи-топах [1]. Способность бактерий специфически инактивировать лизоцим была определена как антилизоцимная активность. На примере стафилококков было показано, что динамика экспрессии факторов патогенности коррелировала с
