CC BY
81
Al
SSM
УДК: 614.4:616.9:615.281.8 Код специальности ВАК: 14.02.02
АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ ПЕРВИЧНОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ВИЧ К АНТИРЕТРОВИРУСНЫМ ПРЕПАРАТАМ В ПРИВОЛЖСКОМ ФЕДЕРАЛЬНОМ ОКРУГЕ
Н. Н. Зайцева, О. В. Парфенова, О. Ю. Пекшева,
ФБУН «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной», Приволжский окружной центр по профилактике и борьбе со СПИД г. Нижний Новгород
Зайцева Наталья Николаевна - e-mail: [email protected]
Исследована распространенность мутаций первичной резистентности ВИЧ к антиретровирус-ным препаратам у ВИЧ-инфицированных 12 субъектов Приволжского федерального округа. Установлено отсутствие мутаций в генах RT и PR, ассоциированных с клинически значимой устойчивостью вируса к антиретровирусным препаратам. Выявление мутантных штаммов ВИЧ у нелеченых пациентов, не вошедших в целевую группу по анализу распространенности передающейся устойчивости ВИЧ (1,5%), свидетельствует о необходимости дальнейшего молеку-лярно-генетического мониторинга резистентности вируса, независимо от сроков заражения пациента.
Ключевые слова: антиретровирусная терапия, лекарственная устойчивость, антиретровирусные препараты, мутации, резистентные штаммы ВИЧ.
Prevalence of mutations of primary antiretroviral resistance in treatment-naive individuals with HIV from12 subjects of the Volga Federal District was investigated. Authors established lack of mutations in genes of Rt and PR which are bound to clinically important resistance of a HIV-1 to ART. Detection of HIV mutant strains in previously untreated patients who did not enter into target group on the analysis of abundance of the transferred resistance of HIV (1, 5%) testifies to need of further molecular and genetic monitoring of resistance of a virus, irrespective of terms of infection of the patient.
Key words: аntiretroviral therapy (ART); drug resistance; antiretroviral treatment;
mutations; HIV-1 drug resistance.
Введение
Изучение уровня первичной резистентности ВИЧ к антиретровирусным препаратам (АРВП) - важный и неотъемлемый этап надзора за распространением лекарственно устойчивых штаммов. Полученные данные необходимы для анализа передаваемой устойчивости вируса с целью минимизации ее распространения, а также своевременного планирования и принятия мер, предупреждающих циркуляцию резистентных штаммов [1, 2, 3].
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) определила три уровня распространенности первичной резистентности ВИЧ к АРВП [4, 5], каждый из которых предусматривает комплекс мер и организационных мероприятий для ограничения последствий негативного влияния резистентности вируса на организм пациента.
Для оценки распространенности первично устойчивых штаммов ВИЧ проводились различные исследования, определившие частоту передаваемой лекарственной устойчивости вируса в странах Западной Европы и США в диапазоне от 2 до 23% [6, 7, 8, 9, 10, 11], в РФ - не превышающую 5% [12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20], что соответствует низкому уровню ее распространенности.
В России, в отличие от других стран мира, не рекомендуется проведение массовых скрининговых тестирований на первичную резистентность ВИЧ к АРВП всех впервые выявленных и/или планирующих начать лечение ВИЧ-позитивных лиц. Целесообразным является проведение кросс-секционных исследований в регионах страны с опытом применения антиретровирусной терапии (АРВТ) более трех лет [1, 12].
Цель исследования: провести исследование уровня распространенности первичной резистентности ВИЧ к АРВП у ВИЧ-инфицированных пациентов из 12 регионов Приволжского федерального округа (ПФО) за семилетний период наблюдения (2008-2014 гг.).
Материал и методы
Проанализированы 114 образцов плазмы крови ВИЧ-позитивных пациентов, состоявших на диспансерном учете в территориальных центрах по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями республик Башкортостан, Марий-Эл, Мордовия, Удмуртия, Чувашия; Кировской, Нижегородской, Оренбургской, Пензенской, Самарской, Саратовской, Ульяновской областей, ранее никогда не получавших АРВТ. Исследования по идентификации мутаций, ассоциированных с резистентностью ВИЧ к АРВП, включали в себя определение нукле-отидных последовательностей генома вируса иммунодефицита человека при помощи тест-системы ViroSeqTMHIV-1 Genotyping System (Celera Diagnostic, Abbott Laboratories, США) методом секвенирования амплифицированных фрагментов гена pol ВИЧ-1, с использованием семи прай-меров, в комплекте с терминатором сиквенсовой реакции BigDye (Sequencing Module - BigDye v.3.1), на генетическом анализаторе ABI Prism 3100 «Applied Biosystems» (США). Обработку данных секвенирования, получение консенсусной последовательности и дальнейший анализ осуществляли с помощью аналитического программного обеспечения «ViroSeq HIV-1 Genotyping System Software» v.2.8 (Celera, США) и базы данных Стэнфордского университета (http://hivdb.stanford.edu) для определения профиля мутаций устойчивости ВИЧ к различным АРВП.
NK
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Полученные в работе результаты подвергались статистической обработке на базе интегрированного пакета прикладной программы Microsoft Office Excel 2010, с использованием методов вариационной статистики, корреляционно-регрессионного анализа, с вычислением средней ошибки (m). Оценку степени различия двух выборок проводили с помощью критерия Стьюдента (t). Выявленные различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты исследования
Согласно российским рекомендациям [1], в указанной группе пациентов лишь 49 человек соответствовали критериям включения в исследование по изучению распространенности первичной резистентности ВИЧ. У остальных пациентов (65 человек) присутствовали критерии исключения, связанные со сроками заражения, превышающими один год до момента исследования, и с числом клеток CD4 менее 500 кл/мкл на момент исследования. В этой связи образцы от этих пациентов были исключены из данной целевой группы.
Проведенный генетический анализ показал, что нуклео-тидные последовательности штаммов ВИЧ, выделенных из 49 образцов плазмы крови пациентов целевой группы наблюдения, не содержали мутаций в генах обратной транс-криптазы (RT) или протеазы (PR), ассоциированных с клинически значимой резистентностью вируса к АРВП. Среди выявленных замен ни одна из них не входила в перечень мутаций, определяющих наличие передаваемой лекарственной устойчивости вируса (http://cpr.stanford.edu/cpr.cgi).
Структура других мутаций, выявленных в гене RT ВИЧ у данной группы пациентов, представлена высокой частотой встречаемости полиморфизма A62V (40,8±7,0%), как известно, не формирующего фармакологическую резистентность вируса [21], и значительно меньшей (р<0,05) распространенностью замен T69N (2,0±0,1%) и V108I (4,1±0,2%). В гене PR ВИЧ спектр мутаций был представлен следующими позициями: M36I (8,2±0,4%), V77I (4,1±0,2%), L10I (4,1±0,2%), A71T (2,0±0,1%). Необходимо отметить, что по данным литературы замена M36I, возникшая у пациентов, не получавших ранее терапию, является предиктором мутации L90M, определяющей резистентность к нельфинавиру и саквинавиру [22, 23]. Таким образом, выявление вторич-
ных мутаций и мутаций полиморфизма у лиц из целевой группы наблюдения среди АРВТ-«наивных» пациентов свидетельствует о возможности потенциального действия выявленных замен на снижение эффективности терапии в дальнейшем.
Оставшаяся часть АРВТ-«наивных» лиц, не вошедших в целевую группу, была исследована в рамках оценки распространенности устойчивости вируса среди нелеченных пациентов, независимо от давности заражения. Такие данные, несмотря на определенную погрешность при анализе передающейся устойчивости в целевых группах, позволяют получить ценную информацию о циркуляции резистентных штаммов ВИЧ среди «наивных» пациентов, планирующих начало АРВТ [1, 24, 25].
Проведенными исследованиями установлено, что у одного пациента (1,5±0,3%) была выявлена замена G190S, определяющая высокий уровень устойчивости вируса к препаратам группы ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы - невирапину и эфавиренцу.
Рост числа ВИЧ-позитивных пациентов, получающих АРВТ в ПФО (рис.), способствует увеличению и уровня вторичной устойчивости вируса, и спектра замен, формирующих антиретровирусную резистентность ВИЧ [26]. Из этого можно сделать вывод о возрастании вероятности и частоты заражения мутантными вариантами популяции лиц, недавно инфицированных ВИЧ, что предполагает систематическое проведение подобных исследований с оценкой индикаторов раннего предупреждения появления резистентности ВИЧ к АРВП и пристальный анализ полученных результатов [1, 2, 12].
Заключение
Результаты молекулярно-генетического исследования показали отсутствие мутаций в генах RT и PR ВИЧ, ассоциированных с клинически значимой первичной резистентностью вируса к АРВП. Показатель распространенности мутаций передающейся устойчивости у АРВТ «наивных» лиц ПФО с давним сроком инфицирования составил 1,5%. Наличие мутантных штаммов ВИЧ у данной категории пациентов следует учитывать при назначении терапии и выборе индивидуальной схемы лечения.
РИС.
Динамика роста числа инфицированных ВИЧ, получающих АРВТ, в ПФО по годам (абс.).
Примечание: по оси абсцисс - годы наблюдения; по оси ординат -число инфицированных ВИЧ пациентов ПФО, получающих АРВТ (абс. значения).
ЛИТЕРАТУРА
1. Надзор за распространением штаммов ВИЧ, резистентных к антире-тровирусным препаратам: методические рекомендации. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2014. 58 с.
Nadzor za rasprostraneniem shtammov VICH, rezistentnykh k antiretrovirusnym preparatam: Metodicheskie rekomendatsii. M.: Federal'nyj tsentr gigieny i ehpidemiologii Rospotrebnadzora, 2014. 58s.
2. World Health Organization global strategy for the surveillance and monitoring of HIV drug resistance: an update. World Health Organization. 2012. 24 p. ISBN 978 92 4 150476 8.
3. World Health Organization HIV Drug Resistance Global Report. July 2012. available at: http: www.who.int/hiv/pub/drugresistance/report2012/en/ index.html.
4. HIV Drug Resistance Global Report [Электронный ресурс]. World Health Organization, 2012. - Режим доступа: http:www.who.int/hiv/pub/ drugresistance/report2012/en/index.html.
5. HIV drug resistance early warning indicators [Электронный ресурс]. -World Health Organization indicators to monitor HIV drug resistance prevention at antiretroviral treatment sites. - Режим доступа: http://apps.who.int/iris/bi tstream/10665/75186/1/9789241503945_eng.pdf?ua=1.
Al
SSM
6. Buckton A.J. HIV type-1 drug resistance in treatment-naive patients monitored using minotory species assays: a systematic review and meta-analysis. Journal Antivir Ther. 2011. V. 16 (1). Р. 9-16.
7. Ross L., Dix L., Wine B. et al. Changes in regional prevalence, clade and epidemiology of HIV-1 drug resistance mutations and clade among antiviral therary-naive patients in the United States (US) from 2000 to 2007. XVII International HIV Drugs resistance Workshop, 10-14 June. 2008. Abstract 146.
8. Clare L. et al. Prevalence and predictors of antiretroviral drug resistance in newly diagnosed HIV-1 infection. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2007. V. 59. Р. 517-524.
9. Gurta R.K. Jordan M.R., Sultan B.J. et al. Global trends in antiretroviral resistance in treatment-naive individuals with HIV after rollout of antiretroviral treatment in resourcelimited settings a global collaborative study and metaregression analysis. Lancet. 2012. № 380. P. 1250-1258.
10. Weinstock H. S., Zaidi I., Heneime W. et al. The epidemiology of antiretroviral drag resistance among drug-naive HIV-1- infected persons in 10 US cities. Journal of Infectious Diseases. 2004. V. 189 (12). P. 2174-2180.
11. Simonetti F.R., Lai1 A., Franzetti M. et al. Trends of epidemiological networks and primary resistance in ART-naive HIV1 individuals of a large Italian cohort over the 1997-2008 period. 6th IAS Conference on HIV Pathogenesis, Treatment and Prevention, Roma. 2011. Abstract TUPE 096.
12. Ладная Н.Н. Киреев Д.Е., Лопатухин А.Э., Куевда Д.А и др. Основные компоненты системы надзора за циркуляцией штаммов ВИЧ, резистентных к антиретровирусным препаратам, по рекомендациям ВОЗ / Сб. мат-лов VIII Всерос. науч.-практ. конф. с международным участием «Молекулярная диагностика-2014». М. 2014. Т. 1. С. 74-75.
Ladnaya N.N. Kireev D.E., Lopatukhin A.EH, Kuevda D.A i dr. Osnovnye komponenty sistemy nadzora za tsirkulyatsiej shtammov VICH, rezistentnykh k antiretrovirusnym preparatam, po rekomendatsiyam VOZ / Sb. mat-lov VIII Vseros. nauch.-prakt. konf. s mezhdunarodnym uchastiem «Molekulyarnaya diagnostika-2014». M. 2014. T. 1. S. 74-75.
13. Котова В.О., Балахонцева Л.А., Иванов А.Н., Троценко О.Е. Первичная резистентность ВИЧ к антиретровирусным препаратам у ВИЧ-инфицированных Дальневосточного федерального округа / Сб. мат-лов VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика-2010», М. 2010. Т. 1. С. 43-46.
Kotova V.O., Balakhontseva L.A., Ivanov A.N., Trotsenko O.E. Pervichnaya rezistentnost' VICH k antiretrovirusnym preparatam u VICH-infitsirovannykh Dal'nevostochnogo federal'nogo okruga/Sb. mat-lov VII Vserossijskoj nauchno-prakticheskoj konferentsii s mezhdunarodnym uchastiem «Molekulyarnaya diagnostika-2010», M. 2010. T. 1. S. 43-46.
14. Мусатов В.Б., Яковлев А.А., Тыргина Т.В., Ладная Н.Н. Прогностическое значение результатов генотипирования вирусов иммунодефицита человека, выделенных от больных первичной ВИЧ-инфекцией в 2009 и 2011 годах в Санкт-Петербурге. Вестник Санкт-Петербургского университета. Сер. 11: Медицина. Издательство: Санкт-Петербургский государственный университет. ISSN: 1818-2909. 2013. № 1. С. 171-178.
Musatov V.B., YAkovlev А.А., Tyrgina T.V., Ladnaya N.N. Prognosticheskoe znachenie rezul'tatov genotipirovaniya virusov immunodefitsita cheloveka, vydelennykh ot bol'nykh pervichnoj VICH-infektsiej v 2009 i 2011 godakh v Sankt-Peterburge. Vestnik Sankt-Peterburgskogo universiteta. Ser. 11: Meditsina. Izdatel'stvo: Sankt-Peterburgskij gosudarstvennyj universitet. ISSN: 1818-2909. 2013. № 1. S. 171-178.
15. Ладная Н.Н, Круглова. А.И., Богословская Е.В. Отчет о проведении порогового исследования по резистентности к АРВ препаратам в г.Москве и Московской области. Проект «Развитие стратегии лечения населения Российской Федерации, уязвимого к ВИЧ/СПИД и туберкулезу», финансируемый Глобальным фондом по борьбе со СПИДом, туберкулезом и малярией. М. 2006.
Ladnaya N.N, Kruglova. A.I., Bogoslovskaya E.V. Otchet o provedenii porogovogo issledovaniya po rezistentnosti k ARV preparatam v g.Moskve i Moskovskoj oblasti. Proekt «Razvitie strategii lecheniya naseleniya Rossijskoj Federatsii, uyazvimogo k VICH/SPID i tuberkulezu», finansiruemyj Global'nym fondom po bor'be so SPIDom, tuberkulezom i malyariej. M. 2006.
16. Петрова Л.В. Клинико-лабораторная характеристика ВИЧ-инфекции с учетом резистентности к антиретровирусным препаратам: автореф. дис. ... канд. мед.наук. Санкт-Петербург, 2008. 16 с.
Petrova L.V. Kliniko-laboratornaya kharakteristika VICH-infektsii s uchetom rezistentnosti k antiretrovirusnym preparatam: avtoref. dis.... kand. med. nauk. Sankt-Peterburg, 2008. 16 s.
17. Петрова Л.В., Дементьева H.E., Яковлев A.A. Проблема резистентности к антиретровирусным препаратам в терапии ВИЧ-инфекции и результаты ее определения у ВИЧ-инфицированных больных по материалам ГИБ № 3Q им. С.П. Боткина. Вестник Санкт-Петербургского университета. Сер. 11. Вып. 2. 2QQ8. С. 59-67.
Petrova L.V., Dement'eva N.E., YAkovlev A.A. Problema rezistentnosti k antiretrovirusnym preparatam v terapii VICH-infektsii i rezul'taty ee opredeleniya u VICH-infitsirovannykh bol'nykh po materialam GIB № 30 im. S.P. Botkina. Vestnik Sankt-Peterburgskogo universiteta. Ser. 11. Vyp. 2.2008. S. 59-67.
18. Суханова A^. Рудинский КИ., Богословская E^. и др. Полиморфизм протеазы и обратной транскриптазы у вариантов ВИЧ-1, доминирующих на территории 0-1Г Молекул. биол. 2QQ5. № 6. С. 934-941.
Sukhanova A.L. RudinskijN.I., Bogoslovskaya E.V. idr. Polimorfizmproteazyi obratnoj transkriptazy u variantov VICH-1, dominiruyushhikh na territorii SNG. Molekul. biol. 2005. № 6. S. 934-941.
19. Богословская E^., Шипулин ГА, Башкирова Л.Ю., Браславская С.И. и др. Распространенность первичной резистентности ВИЧ к антиретровирусным препаратам у ВИЧ-инфицированных в Москве и Московской области. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2QQ7. № 6. С. 39-42.
Bogoslovskaya E.V., SHipulin G.A., Bashkirova L.YU., Braslavskaya S.I. i dr. Rasprostranennost' pervichnoj rezistentnosti VICH k antiretrovirusnym preparatam u VICH-infitsirovannykh v Moskve i Moskovskoj oblasti. EHpidemiologiya i infektsionnye bolezni. 2007. № 6. S. 39-42.
20. Ладная H.H., Богословская E^., Суханова A^. и др. Распространенность штаммов ВИЧ, резистентных к антиретровирусным препаратам, передающихся от пациента к пациенту на территории шести субъектов России / Сб. трудов 6-й Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика - 2QQ7». Москва. 2QQ7. Т. 1. С. 121-123.
Ladnaya N.N., Bogoslovskaya E.V., Sukhanova A.L. i dr. Rasprostranennost' shtammov VICH, rezistentnykh k antiretrovirusnym preparatam, peredayush-hikhsya ot patsienta k patsientu na territorii 6 sub"ektov Rossii / Sb. trudov 6-j Vserossijskoj nauchno-prakticheskoj konferentsii s mezhdunarodnym uchastiem «Molekulyarnaya diagnostika - 2007». Moskva. 2007. T. 1. S. 121-123.
21. Казеннова E^., Лаповок ИА, Лага В.Ю., Васильев A^., Бобкова М.Р. и др. Eстeствeнныe полиморфизмы гена pol варианта ВИЧ IDU-A. ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2Q12. № 4. С. 41.
Kazennova E.V., Lapovok I.A., Laga V.YU., Vasil'ev A.V., Bobkova M.R. i dr. Estestvennye polimorfizmy gena pol varianta VICH IDU-A. VICH-infektsiya i immunosupressii. 2012. № 4. S. 41.
22. Johnson V.A., Brun-Vezinet F., Clotet B. et al. Update of the drug resistance mutations in hiv-1: Spring 2QQ8. Top HIV Med. 2QQ8. V. 16. Р. 62-68.
23. Johnson V.A. et al. Update of the drug resistance mutations in hiv-1: 2QQ7 Top HIV Med. 2QQ7. V. 15. Р. 119-125.
24. Казеннова E^., Лаповок ИА, Лебедев A^. и др. Aнaлиз резистентности ВИЧ в Приволжском федеральном округе Российской Федерации. ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2Q15. Т. 7. № 3. С. 56-66.
Kazennova E.V., Lapovok I.A., Lebedev A.V. i dr. Analiz rezistentnosti VICH v Privolzhskom federal'nom okruge Rossijskoj Federatsii. VICH-infektsiya i immunosupressii. 2015. T. 7. № 3. S. 56-66.
25. Зайцева H.H. Пекшева О.Ю., Парфенова О.В., Бутина Т.Ю., Кузнецова И.В. Современные молекулярно-генетические методы исследования в характеристике изолятов ВИЧ-1 инфицированных пациентов учреждений пенитенциарной системы. Медицинский альманах. 2Q15. № 5 (4Q). С. 148-151.
Zajceva N.N., Peksheva O.Ju., Parfenova O.V., Butina T.Ju., Kuznecova I.V. Sovremennye molekuljarno-geneticheskie metody issledovanija v harakteristike izoljatov VICh-1 inficirovannyh pacientov uchrezhdenij penitenciarnoj sistemy. Medicinskij al'manah. 2015. № 5 (40). S. 148-151.
26. Парфенова О.В., Пекшева О.Ю., Зайцева H.H. Мутации, определяющие резистентность ВИЧ к антиретровирусной терапии в ПФО в 2QQ8-2Q12 гг. Медицинский альманах. 2Q13. № 2 (26). С. 79-82.
Parfenova O.V., Peksheva O.Ju., Zajceva N.N. Mutacii, opredeljajushhie rezistentnost' VICh k antiretrovirusnoj terapii v PFO v 2008-2012 gg. Medicinskij al'manah. 2013. № 2 (26). S. 79-82.
