Анализ распределения y-str гаплотипов в выборке из 150 человек с учетом этнической принадлежности для мужского населения Московской области с использованием Всемирной справочной базы данных yhrd Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

ДНК использованы значения аллельных частот исследованных локусов, определенные в ФГБУ «РЦСМЭ» Минздрава России для выборки населения Российской Федерации (n = 1000) с применением консервативной поправки, рекомендованной NRC II (США, 1996). Для расчета вероятности по Y-хромосоме использована консервативная оценка частоты гаплотипа Y-хромосо-мы по международной базе данных YHRD (Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences, Берлин, Германия). Наши случаи из практики:

• В препаратах ДНК из некоторых биологических следов на вещественных доказательствах была установлена принадлежность конкретному лицу с определенной вероятностью, но были и препараты ДНК, имеющие смешанный характер; учитывая это, а также для повышения доказательственного значения экспертного вывода, была проведена молекулярно-генетическая идентификация с помощью полимеразной цепной реакции и флуоресцентной детекции аллельных вариантов полиморфных локусов Y-хромосомы и установлена вероятность того, что мужской компонент смеси произошел от определенного мужчины.

• По факту пропажи человека было возбуждено уголовное дело, с места происшествия были изъяты вещественные доказательства со следами крови. Для проведения молекулярно-генетической экспертизы был предоставлен образец крови родного брата пропавшего мужчины, и нами была проведена мо-лекулярно-генетическая идентификация с помощью полимеразной цепной реакции и флуоресцентной детекции аллельных вариантов полиморфных локусов Y-хромосомы и установлена вероятность того, что следы крови могли произойти от пропавшего мужчины, образец крови родного брата которого был исследован нами.

ВЫВОДЫ

Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности и целесообразности молекулярно-гене-тического исследования объектов, имеющих смешанный характер, установления родства, а также для повышения доказательственного значения экспертного вывода с помощью полимеразной цепной реакции и флуоресцентной детекции аллельных вариантов полиморфных локусов Y-хромосомы.

■ АНАЛИЗ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ У-STR

ГАПЛОТИПОВ В ВЫБОРКЕ ИЗ 150 ЧЕЛОВЕК С УЧЕТОМ ЭТНИЧЕСКОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ ДЛЯ МУЖСКОГО НАСЕЛЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВСЕМИРНОЙ СПРАВОЧНОЙ_БАЗЫ_ДАННЫХУ1№Р Т. А. Смагина, В. В. Рындин

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)

• Аннотация: Работа посвящена исследованию распределения STR-маркеров Y-хромосомы биологических образцов с целью внесения результатов во всемирную «Справочную базу данных STR-гаплотипов Y-хромосомы» (YHRD: Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database).

• Ключевые слова: молекулярно-генетиче-ское исследование, справочная база данных STR-гаплотипов Y-хромосомы, гаплотип ДНК Y-хромосомы

ВВЕДЕНИЕ

В связи с довольно широким внедрением в экспертную практику определения генотипических признаков (гапло-типов) ДНК Y-хромосомы возникает необходимость повышения идентификационной значимости такого вида исследований, то есть повышения значений вероятности генетической идентичности объектов на основе совпадения гаплотипов Y-хромосомы. Расчет этой вероятности основан на значениях базы данных YHRD (Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database). Чем более широкой является выборка исследованных гаплотипов в базе, тем более высокое значение вероятности, выраженное в процентах, можно получить при подсчете результата по каждой конкретной экспертизе. Если в базе данных, полученной при применении для исследования набора реактивов AmpFlSTR® Yfiler™ PCR Amplification Kit (Applied Biosystems), имеются данные на 109 137 гаплотипов Y-хро-мосомы, то для нового набора AmpFlSTR® Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystem) база данных включает 8184 гаплотипа.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованию подвергались заведомо пригодные для исследования образцы биологического материала от известных лиц (кровь, буккальный эпителий) по экспертизам и из архива отдела. Выделение ДНК проводили на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System (Applied Biosystems, США) с использованием специализированного набора реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit® (Applied Biosystems, США). Анализ матричной активности препаратов ДНК проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием системы количественной энзиматической амплификации ДНК Quantifiler® Duo DNA Quantification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицирован-ных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкцией фирмы-изготовителя.

Продуктивность полимеразной цепной реакции регистрировали в режиме реального времени с использованием специализированного амплификатора ABI PRISM 7500 Sequence Detection System и программного обеспечения SDS software v. 1.0 (Applied Biosystems, США).

Типирование полиморфных STR-локусов проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием энзиматической амплификации 25-локусной системы AmpFlSTR® Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкциями фирмы-изготовителя. Продукты полимеразной цепной реакции фракционировали электрофоретически с использованием системы капиллярного электрофореза ABI PRISM 3500 (Applied Biosystems, США).

Полученные электрофореграммы анализировали с использованием штатного программного обеспечения GeneMapper ID-X (Applied Biosystems, США) и устанавливали индивидуальные аллельные варианты полиморфных локусов Y-хромосомы исследуемых объектов. Анализ полученных данных про-

водился с учетом предположительной этнической принадлежности лиц, которым принадлежали биологические образцы, а именно - славянской группы и лиц предположительно среднеазиатского происхождения. Полученные результаты анализировали при помощи базы данных YHRD (Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database).

ВЫВОДЫ

Для повышения информативности молекулярно-ге-нетического исследования и обеспечения существенного увеличения доказательного значения получаемых результатов, а также для получения статистически более достоверных результатов, необходимо дальнейшего расширения и пополнение базы данных YHRD (Y-Chromosome STR Haplotype Reference Database).

■ ЗНАЧЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ РЕФЛЕКТОРНОЙ СМЕРТИ В СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ ПРАКТИКЕ

Е. Л. Грязнова

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)

• Аннотация: Статья посвящена значению гистологического метода исследования при диагностике рефлекторной смерти. Анализ изученного практического и теоретического материала позволяет делать выводы о характерной морфологии миокарда при данном виде смерти.

• Ключевые слова: рефлекторная смерть, субсегментарные контрактуры, «полосы пересокращения», фуксиноррагия, окраска ГОФП

ВВЕДЕНИЕ

«Рефлекторная остановка сердца», «рефлекторная смерть» (по М. И. Авдееву, 1977) - это случаи внезапной смерти, возникающей в результате травматического воздействия на рефлексогенные зоны тела человека, с характерной клиникой умирания, без специфических морфологических признаков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Рефлекторный механизм остановки сердца специфичен, не всегда сопровождается видимыми повреждениями тканей в месте травматического воздействия. Отсутствие повреждений не исключает «рефлекторной смерти», но затрудняет судебно-медицинскую диагностику. Иногда удается документировать вовлечение нервных образований в зону травмы. В основе механизма остановки сердца при резком раздражении нервных образований, иннерви-рующих сердце, лежат фатальные аритмии. Во всех случаях «чистой» рефлекторной смерти наблюдается различной продолжительности период умирания, который по своей клинике укладывается в состояние коллапса. Морфологические изменения в организме пострадавшего характеризуют острое расстройство гемодинамики, отражающее стереотипную реакцию организма на внешний раздражитель, являются компенсаторной реакцией на повреждающий фактор и гипоксию, не являются специфичными. Их выраженность зависит от пре- и агонального периода умирания, но не достигает изменений, наблюдаемых при шоке. Гистологическим исследованием обычно обнаруживаются признаки перераспределения крови, острые дис-циркуляторные нарушения. Прицельно, с использованием дополнительных окрасок, исследуется сердце. Кусочки

заключаются в парафин, срезы окрашиваются гематоксилином и эозином, ГОФП (гематоксилином, основным фуксином и пикриновой кислотой). Гистологические препараты исследуются с помощью световой обычной микроскопии. Выявляются сердечные мышечные волокна, находящиеся в различной степени сокращения, а также пучки резко расслабленных извитых мышечных волокон. Характерным для всех случаев рефлекторной смерти является наличие фуксиноррагии мышечных волокон (окрашивание саркоплазмы кардиомиоцитов ГОФП в красно-коричневый цвет) необычно большого числа субсегментарных полос сокращения, выявлявшихся в большинстве кар-диомиоцитов. Характерно плотное расположение полос пересокращения в различных отделах миокарда. Таким образом, распространенность (плотность) и выраженность контрактурных повреждений кардиомиоцитов, формирование «полос пересокращения» во многих п/з исследуемого миокарда может явиться базовой поддержкой морфологии рефлекторной остановки сердца. То есть количественная характеристика начинает приобретать качественный характер: распространенность, плотность, относительная равномерность выраженной фуксиноррагии, контрактурных повреждений кардиомиоцитов характерны для рефлекторной остановки сердца.

ВЫВОДЫ

• СМЭ-диагностика внезапной смерти, обусловленной травмой рефлексогенных зон тела, по одной морфологической картине затруднительна. Решение вопросов, интересующих следствие, возможно лишь на основе комплексного подхода с учетом обстоятельств причинения травмы рефлексогенных зон тела, клинического проявления травмы, обнаруженной морфологии.

• В случаях внезапной смерти, возникающей в результате травматического воздействия на рефлексогенные зоны тела человека, необходимо прицельно исследовать миокард с использованием дополнительных окрасок для выявления фуксиноррагии, контрактурных повреждений кардиомиоцитов.

• Относительно равномерная распространенность, выраженность фуксиноррагии, субсегментарных контрактур в различных отделах миокарда желудочков и межжелудочковой перегородки, наличие «полос пересокращения» в большей части полей зрения исследованного миокарда являются характерными для рефлекторной остановки сердца.

ЗНАЧЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ИССЛЕДОВАНИЯ В ОПРЕДЕЛЕНИИ ДАВНОСТИ ПОВРЕЖДЕНИЯ МЯГКИХ ТКАНЕЙ

И. А. Фролова

• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно), кафедра судебной медицины ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского

• Аннотация: Доклад посвящен проблеме определения давности повреждений.

• Ключевые слова: давность повреждения, кровоизлияние, воспаление, лейкоцитарная реакция, гемосидерофаги, пролиферация, резорбция

ВВЕДЕНИЕ

Вопрос об определении давности возникновения повреждений в мягких тканях и внутренних органах является одним из наиболее важных в судебной медицине.