CC BY
33
Аграрный вестник Урала № 9 (88), 2011
Биология
АНАЛИЗ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНОТИПОВ БЬУ (ЕМУ, 0Р51) НА ТЕРРИТОРИИ НОВОСИБИРСКОЙ ОБЛАСТИ
И КРАСНОДАРСКОГО КРАЯ
Н. В. БАТЕНЁВА,
кандидат биологических наук, заведующая лабораторией молекулярной диагностики,
П. Н. СМИРНОВ,
доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой физиологии и биохимии,
И. В. МИХНОВИЧ, аспирант,
М. Б. ИСАКОВА,
студент, Новосибирский ГАУ
г. Новосибирск, ул. Добролюбова, д. 162, кв. 114; тел. (383)264-28-00;
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: вирус лейкоза крупного рогатого скота, генотипы, эндонуклеаза рестрикции, полимеразная цепная реакция, породы крупного рогатого скота, gp 51.
Keywords: bovine leukemia virus, polymerase chain reaction, genotypes, Restriction Enzyme, breeds of cattle, gp 51.
BLV (bovine leukemia virus, вирус лейкоза крупного рогатого скота), имеющий значительное распространение среди крупного рогатого скота разной породной и территориальной принадлежности, является далеко не однородным по своим генотипическим характеристикам, что представляет как общебиологическое, так и прикладное значение.
В организме хозяина хронически персистирующий вирус может претерпевать мутационные изменения, направленные на увеличение патогенности, на преодоление более эффективных защитных механизмов хозяина. Поэтому, наряду с генетическим статусом макроорганизма, во внимание необходимо принимать и генетическую изменчивость самого патогена, который, возможно, в процессе длительной персистенции способен изменять свою патогенность, в сторону как комменсализма, так и усиления патогенных свойств [Дробот, 2006].
Генетическая вариабельность BLV у инфицированного крупного рогатого скота достаточно хорошо охарактеризована R. Kettman et al. (1981); R. Z. Mamoun et al. (1990); J. Coulston et al. (1990); H. Fechner et al. (1997); D. Beier et al. (2001); M. Licursi et al. (2002); Y Asfaw еt al. (2005). На основании метода ПДРФ и ДНК секвенирования вируса лейкоза крупного рогатого скота классифицировано три подгруппы вируса — бельгийская, австралийская и японская [Mamoun et al., 1990; Beier et al., 2001; Molteni et al., 1996].
Цель и методика исследований.
Представлялось актуальным проведение целенаправленного исследования о распределении генотипов BLV по гену env у крупного рогатого скота двух территорий, характеризующихся своими географическими и породными (по районируемому в них скоту) особенностями.
Для этого методом «nested ПЦР» c праймерами на специфический участок env гена, кодирующего структурный белок BLV, были исследованы 400 проб крови, взятых от серопозитивных (РИД+) животных разной породной принадлежности из хозяйств Новосибирской области и Краснодарского края (табл. 1).
Результаты исследований.
Как видно из табл. 1., в некоторых образцах результаты ПЦР были отрицательными. Отсутствие сигнала в
Таблица 1
Анализ наличия провирусной ДНК (область гена env) BLV среди серопозитивных в РИД животных разной породной принадлежности
Порода крупного рогатого скота Кол-во животных РИД+ Кол-во животных РИД+ ПЦР+ Кол-во животных РИД+ ПЦР-
Черно-пестрый голштинизирован-ный скот 147 139 8
Красная степная порода 133 117 16
Айрширский скот 120 96 24
Всего 400 352 48
ПЦР у серопозитивных животных объясняется в литературе несколькими причинами, в том числе и отсутствием строгой комплементарности в области связывания с праймерами из-за мутационных изменений гена [Чичинина, 2005; Licursi et al., 2002]. Наибольшее количество животных с отсутствием сигнала в ПЦР (20 %) регистрировали среди айрширского скота.
Для анализа генотипической структуры популяции вируса по env гену методом случайной выборки была сформирована панель из ДНК 34 изолятов, показавших наличие провируса. Полученные в «nested ПЦР» ампликоны были гидролизованы эндонуклеазами рестрикции — Hae III, Bcl I (Ksp22), Pvu II. Определение генотипа вируса по env гену проводили согласно схеме, описанной в работе С. В. Чичининой и соавт. (2006).
Итак, по результатам рестрикции вышеуказанными эндонуклеазами мы зарегистрировали циркуляцию I и VI генотипов BLV на территории Новосибирской области. Эти данные согласуются с ранее описанными Е. В. Дробот (2006). На территории Краснодарского края, кроме этих двух генотипов, был обнаружен II генотип, который циркулировал на поголовье скота всех пород, районированных на данной территории.
Выводы.
Установлены различия циркуляции генотипов BLV в двух сравниваемых субъектах РФ по env гену (gp 51). Анализируя результаты наших исследований, можно сделать вывод о том, что в мире наиболее распространенным является именно VI генотип BLV (gp 51) [Sagata et al., 1985; Licursi et al., 2002; Дробот, 2006].
б
www. m-avu. narod. ru
