CC BY
195. Atkinson T.P., Balish M.F., Waites K.B. Epidemiology, clinical manifestations, pathogenesis and laboratory detection of Mycoplasma pneumoniae infections. FEMS Microbiol. Rev. 2008, 32 (6): 956-973.
6. Chalker VJ., Stocki T., Mentasti M. et al. Mycoplasma pneumoniae infection in primary careinves-tigated by real-time PCR in England and Wales. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2011, 30 (7): 915-921.
7. Dekeyser S., Bonnel C., Martinet A., Descamps D. Usefulness of PCR test for the management of a Mycoplasma pneumoniae outbreak in Bethune Hospital (Pas-de-Calais, France). Pathol. Biol. (Paris). 2011, 59 (2): 83-97.
8. Digeon M., Laver M., Riza J. Detection of circulating immune complexes in human sera by simlited assays with polyethylene glycol. J. Immunol. Meth. 1977, 16: 165-167.
9. Lenglet A., Herrador Z., Magiorakos A.P. et al. European Working Group on Mycoplasma pneumoniae surveillance. Rapid communications. Surveillance status and recent data for Mycoplasma pneumoniae infections in the European Union and European Economic Area. Euro Surveill. 2012, 17 (5) : pii=20075.
10. Uldum S.A., Bangsborg J.M., Gahrn-Hansen B. et al. Epidemic of Mycoplasma pneumoniae infection in Denmark, 2010 and 2011. Euro Surveill. 2012, 17 (5) : pii=20073.
11. Polkowska A., Harjunpää A., Toikkanen S. et al. Increased incidence of Mycoplasma pneumoniae infection in Finland, 2010 — 2011. Euro Surveill. 2012, 17 (5): pii=20072.
Поступила 27.02.14
Контактная информация: Горина Луиза Георгиевна,
123098, Москва, ул.Гамалеи, 18, .р.т. (499)190-43-68
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
Т.Н.Ильичева1, А.Г.Дурыманов1, О.В.Петрова1, А.В.Епанчинцева1, Ю.С.Чухров2, Ю.А.Гарбуз3, И.В.Безгодов4, К.В.Булутов5, Г.С.Архипов6, С.С.Самарский7, В.Б.Зиатдинов8, В.Ю.Ананьев9, В.Н.Михеев1, А.Б.Рыжиков1
АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИОННОГО ИММУНИТЕТА ЖИТЕЛЕЙ СУБЪЕКТОВ РФ К СЕЗОННЫМ И ВЫСОКОПАТОГЕННЫМ ШТАММАМ ВИРУСА ГРИППА
1ГНЦ «Вектор», п. Кольцово Новосибирской области, 2Центр гигиены и эпидемиологии в Кемеровской обл., Кемерово; 3в Хабаровском крае, Хабаровск; 4в Иркутской обл., Иркутск; 5в Республике Бурятия, Улан-Удэ; 6в Республике Алтай, Горно-Алтайск; 7в Сахалинской обл., Южно-Сахалинск; 8в Республике Татарстан, Казань; 9в Приморском крае», Владивосток
Цель. Определение уровня антител к социально значимым типам/серотипам вируса гриппа в сыворотках людей, проживающих в различных регионах России. Материалы и методы. 1525 образцов сыворотки крови, собранные в августе—декабре 2013 года в восьми регионах РФ, исследовали в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с антигенами, полученными из штаммов вируса гриппа A/California/07/09 (H1N1)pdm09, А/ Victoria/361/2011(H3N2), B/Brisbane/60/2008 (Victoria line), B/Massachusetts/2/2012 (Yamagata line), A/Commongull/Chany/2006 (H5N1), A/Anhui/01/2013 (H7N9). Результаты. Ни в одном образце сыворотки крови не было значимых титров в РТГА с антигенами А/ Н5 и А/Н7. Из всех 1525 образцов 788 (52%) были положительны с антигеном A(H1N1) pdm09; 734 (48%) взаимодействовали с антигеном А (H3N2); 1010 (66%) образцов были положительны с антигеном B/Victoria и 602 (39%) образца положительны с антигеном В/ Yamagata. Заключение. Учреждениям здравоохранения следует обратить внимание на корректировку профиля популяционного иммунитета в регионах для снижения социально-экономических потерь от сезонных эпидемий гриппа.
Журн. микробиол., 2014, № 6, С. 120—123
Ключевые слова: вирус гриппа А, вирус гриппа В, сыворотки крови людей, реакция торможения гемагглютинации
T.N.Ilicheva1, A.G.Durymanov1, O.V.Petrova1, A.V.Epanchintseva1, Yu.S.Chukhrov2, Yu.A.Garbuz3, I.V.Bezgodov4, K.V.Bulutov5, G.SArkhipov6, S.S.Samarsky7, V.B.Ziatdinov8, V.Yu.Ananiev9, V.N.Mikheev1, A.B.Ryzhikov1
ANALYSIS OF POPULATION IMMUNITY OF RESIDENTS OF RUSSIAN FEDERATION REGIONS AGAINST SEASONAL AND HIGHLY PATHOGENIC STRAINS OF INFLUENZA VIRUS
1State Scientific Centre «Vector», Koltsovo, Novosibirsk Region, 2Centre of Hygiene and Epidemiology in Kemerovo Region, Kemerovo; 3in Khabarovsk Region, Khabarovsk; 4in Irkutsk Region, Irkutsk; 5in the Republic of Buryatia, Ulan-Ude; 6in the Republic of Altai, Gorno-Altaysk; 7in Sakahalin Region, Yuzhno-Sakhalinsk; 8in the Republic of Tatarstan, Kazan; 9in Primorsky Region, Vladivostok, Russia
Aim. Determine the level of antibodies against socially significant types/serotypes of influenza virus in sera of individuals residing in various regions of Russia. Materials and methods. 1525 samples of blood sera collected in August—December 2013 in 8 regions of Russian Federation were studied in hemagglutination inhibition reaction (HAI) with antigens obtained from A/ California/07/09 (H1N1)pdm09, A/Victoria/361/2011(H3N2), B/Brisbane/60/2008 (Victoria line), B/Massachusetts/2/2012 (Yamagata line), A/Commongull/Chany/2006 (H5N1), A/ Anhui/01/2013 (H7N9) influenza virus strains. Results. None of the blood sera samples had significant HAI titers against A/H5 and A/H7 antigens. Of all the 1525 samples, 788 (52%) were positive with A(H1N1)pdm09 antigen; 734 (48%) reacted with A(H3N2) antigen; 1010 (66%) samples were positive with B/Victoria antigen and 602 (39%) samples were positive with B/Yamagata antigen. Conclusion. Healthcare institutions should pay attention to the correction of population immunity profile in regions for the reduction of social-economic losses from seasonal influenza epidemics.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 6, P. 120—123
Key words: influenza A virus, influenza B virus, human blood sera, hemagglutination inhibition reaction
Серологические исследования играют важную роль в различных аспектах надзора за гриппом, оценке эффективности гриппозных вакцин и иногда в диагностике гриппа, в особенности при появлении нового вируса в человеческой популяции.
РТГА остается наиболее широко используемым методом обнаружения штаммоспеци-фических антител к вирусу гриппа [6]. Этот метод впервые был предложен Hirst G.K., который обнаружил способность вирусов гриппа агглютинировать эритроциты петуха [5]. Демонстрация того, что иммунная сыворотка может ингибировать агглютинацию, привело к развитию РТГА с последующей модификацией Salk J.E. [8]. Считается, что титр сыворотки в РТГА 1:40, как правило, связан с 50% снижением риска развития заболевания в восприимчивой популяции [4] и может быть назван 50% защитным титром. В связи с этим, серологические исследования могут предоставить информацию об эффективности вакцинации, особенно в случае, если вакцинные штаммы не полностью соответствуют циркулирующим штаммам [3]. Как наиболее воспроизводимый и надежный метод, ВОЗ рекомендует использовать РТГА для проведения сероэпидемиологических исследований
[9].
Целью работы явилось определение уровня антител к социально значимым типам/ серотипам вируса гриппа в сыворотках людей, проживающих в различных регионах России.
В РТГА использовали антигены, представляющие собой вируссодержащую культураль-ную жидкость, инактивированную ß-пропиолактоном [9]. Для приготовления антигенов использовали штаммы вируса гриппа, полученные из СЦ ВОЗ (Атланта, США): А/ California/07/09 (H1N1)pdm09, A/Victoria/361/2011(H3N2), B/Brisbane/60/2008 (Vict.lin.),
B/Massachusetts/2/2012 (Yam.lin.), а также штамм A/Commongull/Chany/2006 (H5N1) и штамм А/Anhui/01/2013 (H7N9), полученный из СЦ ВОЗ (Гонконг, Китай).
Сбор образцов крови осуществлялся методом случайной выборки у людей разных возрастных групп (18 — 35 лет, 36 — 59 лет и 60 лет и старше), обратившихся за медицинской помощью в многопрофильные лечебно-профилактические учреждения, а также на станциях переливания крови. Забор крови осуществляли из периферической (локтевой) вены в объеме 5 мл с помощью одноразовых шприцев или одноразовых пластиковых систем (вакутайнеры), состоящих из контейнера с навинчивающейся на него одноразовой иглой и пробирки с плотно прилегающей пробкой и вакуумом внутри. Венозная кровь, полученная без антикоагулянтов, отстаивалась в пробирке при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка, затем пробирки помещали в холодильник на ночь. На следующий день отбирали сыворотку автоматической пипеткой в чистые пробирки и осветляли центрифугированием при 2000 — 3000 об/мин в течение 10 мин. Осветленную сыворотку отбирали пипеткой в чистую промаркированную пробирку.
Транспортировку образцов в ГНЦ ВБ «Вектор» осуществляли в термоконтейнере с хладоэлементами. Собранные образцы хранили до исследования при -20°С.
Наличие в сыворотках крови антител к разным типам/серотипам вируса гриппа тестировали по общепринятой методике в РТГА [9] к вирусу гриппа A/California/07/09 (H1N1) pdm09 и A/Victoria/361/2011(H3N2) с эритроцитами морской свинки, к штаммам вируса гриппа В — с эритроцитами петуха. РТГА с вирусами гриппа птиц A/Commongull/ Chany/2006 (H5N1) и А/А^ш/01/2013 (H7N9) ставили по методике, предложенной ВОЗ, в нашей модификации [1]. Перед работой все сыворотки были обработаны препаратом RDE (Denka Seiken), разрушающим неспецифические ингибиторы. Затем двукратные разведения сывороток смешивали с 4 ГАЕ антигена, инкубировали 60 мин при комнатной температуре, после чего в каждую лунку планшета добавляли равный объем 1% суспензии эритроцитов. Сыворотки считали положительными, если обратный титр антител был равен или больше 40.
Нами было исследовано 1525 образцов сыворотки крови на наличие антител к гемаг-глютинину вируса гриппа субтипов А/Н1N1pdm09, А/Н3Ю, А/Н5Ш, А/Н7Ш, В/Victoria и В/Yamagata.
Ни один образец не дал положительных результатов с антигенами А/Н5 и А/Н7. Результаты РТГА с антигенами А/Н1 pdm09, А/Н3, В/Victoria и В/Yamagata показали, что из 1525 сывороток крови 788 (52 %) образцов положительны к вирусу A/California/07/09 (H1N1), 734 (48 %) образцов положительны к вирусу A/Victoria/361/2011(H3N2), 1010 (66 %) образцов положительны к вирусу B/Brisbane/60/2008 (Vict.lin.) и 602 (39 %) образца положительны к вирусу B/Massachusetts/2/2012 (Yam.lin.). Кроме того, 168 (11 %) образцов в РТГА реагировали со всеми антигенами с обратным титром ниже 40, т.е. оказались отрицательными ко всем исследованным антигенам, а 199 (13 %) образцов были положительны со всеми антигенами.
В работе были исследованы сыворотки крови, собранные в 8 регионах России, преимущественно в Сибири и на Дальнем Востоке страны. Возрастная выборка несколько различалась по регионам, наиболее полно представлены возрастные группы до 35 лет и 36 — 59 лет (45,5 и 38,82% соответственно). Количество образцов в возрастной группе 60 лет и старше составило 16,66%, причем сыворотки крови от людей этой возрастной группы собраны, в основном, в Хабаровском и Приморском краях. Представительство возрастных групп в данном исследовании коррелирует с возрастной структурой населения России. Так, по данным Федеральной службы государственной статистики доля трудоспособного и моложе трудоспособного населения составляет 76,9% [10]. Так как сбор образцов крови в каждой области или крае проводился в условиях случайной выборки, то по рекомендациям ВОЗ при сборе не менее 600 образцов с равномерным представительством половых и возрастных групп полученные данные можно применить к стране или региону в целом [2]. В связи с этим, полученные результаты не только показывают количество положительных образцов среди сывороток, собранных в конкретном регионе, но и позволяют
делать вывод о состоянии популяционного иммунитета к социально значимым субтипам вируса гриппа в Сибири и на Дальнем Востоке.
Основной индекс репродукции инфекции Ro является мерой трансмиссивности патогена и определяется как среднее количество инфекций, генерируемых одним инфицированным человеком, среди полностью чувствительной популяции. Обычно штаммы сезонного вируса гриппа характеризуются значением основного индекса репродукции инфекции в диапазоне R0=1,3-1,5, в отличие от штаммов пандемического гриппа, для которых это значение достигает показателя R0=3. Расчеты показывают, что для сезонного гриппа, с основным индексом репродукции инфекции равным 1,5 и при уровне популяционного иммунитета к вирусу гриппа равном или выше 33%, развитие эпидемии маловероятно [7].
Полученные нами результаты показывают, что осенью 2013 года в четырех регионах РФ уровень сероположительных реакций оказался ниже 33% по одному или двум субтипам вируса гриппа. В Иркутской области доля серопозитивных лиц по антигену B/Y&magata составляет 18%, в Сахалинской области доля серопозитивных лиц по антигенам А/ H1N1pdm09 и A/H3 составляет 26 и 22% соответственно, в Приморском крае доля серо-позитивных лиц по антигенам A/H1N1pdm09 и В/Yamagata составляет 26 и 22% соответственно, в Республике Татарстан доля серопозитивных лиц по антигену A/H3 составляет 28% . В этих регионах следует обратить внимание на корректировку профиля популяционного иммунитета с учетом существующей угрозы возникновения эпидемии гриппа с преобладанием указанных выше субтипов вируса гриппа.
Полученные результаты будут полезны учреждениям здравоохранения при планировании мероприятий с целью снижения социально-экономических потерь от сезонных эпидемий гриппа.
ЛИТЕРАТУРА
1. Курская О.Г., Дурыманов А.Г., Шаршов К.А., Зайковская А.В., Шестопалов А.М., Ильичева Т.Н. Реакция торможения гемагглютинации для ретроспективной диагностики гриппа птиц у млекопитающих. Журн. микробиол. 2009, 5: 75-79.
2. Многоцелевые серологические обследования и банки эталонных сывороток ВОЗ. Серия техн. докл. ВОЗ, 1972, № 454.
3. Broberg E., Nicoll A. Amato-Gauci A. et al. Seroprevalence to influenza A(H1N1) 2009 virus — where are we? Clin. Vaccine Immunol. 2011, 18 (8): 1205-1212.
4. Hannoun C., Megas F., Piercy J. Immunogenicity and protective efficacy of influenza vaccination. Virus Res. 2004, 103: 133-138.
5. Hirst G.K. The agglutination of red cells by allantoic fluid of chick embryos infected with influenza virus. Science. 1941, 94 (2427): 22-23.
6. Katz J.M., Hancock K., Xu X. Serologic assays for influenza surveillance, diagnoses and vaccine evaluation. Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011, 9 (6): 669-683.
7. Riley S., Wu J.T., Leung G.M. Optimizing the dose of prepandemic influenza vaccines to reduce the infection attack rate. PLoS Med. 2007, 4 (6): e218. doi:10.1371/journal.pmed.0040218.
8. Salk J.E. Simplified procedure for titrating hemagglutinating capacity of influenza virus and the corresponding antibody. J. Immun. 1944, 49: 87.
9. WHO. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. WHO, 2011.
10. http://www.gks.ru/wps/wcm/connect/rosstat_main/rosstat/ru/statistics/publications/catalog/ doc_1140095700094.
Поступила 20.04.14
Контактная информация: Ильичева Татьяна Николаевна, д.б.н., проф., 630559, п. Кольцово, Новосибирская обл., р.т. (383)363-48-45
