CC BY
6Mezhdunarodnogo nauchno-prakticheskogo simpoziuma. FGOU VPO "Saratovskij GAU" im. N.I. Vavilova. Saratov. 2011. S. 260-269.
7.Korolev B.A., Sidorova K.A. Patologija organizma zhivotnyh pri tehnogennyh vozdejstvijah. Tjumen', 2003.
8.Kuznecov V.D., Korotaeva O.A. Ketoz vysokoproduktivnyh korov: terapija i profilaktika // Vestnik Tjumenskoj gosudarstvennoj sel'skohozjajstvennoj akademii. 2007. № 1. S. 94-96.
9.Kumskij, SH.A. Bolezni organov pishhevarenija. Uchebnoe posobie / SH.A. Kumskij /Pod red. SH.A. Kumskij. - M.: Kolos 2006.-563 s.
10.Nechaev A.V. Diagnostika, lechenie i profilaktika smeshhenija sychuga u vysokoproduktivnyh korov v uslovijah OOO «SHPK «Ol'ginskij OP Novokurovskoe» //Vsbornike: Aktual'nye problemy agrarnoj nauki i puti ih reshenija 2015. S. 197-200.
11.Pontjushenko N. Levostoronnee smeshhenie sychuga u korov ZHivotnovodstvo Rossii. 2008. № 1. S. 39-42.
12.Samolovov A.A., Lopatin S.V Smeshhenie sychuga - bolezn' vysokoproduktivnyh molochnyh korov// Sibirskij vestnik sel'skohozjajstvennoj nauki. 2010. № 5. S. 79-84.
13.Sivkov G.S., i dr. Zashhita krupnogo rogatogo skota ot patogenov // Metodicheskie rekomendacii / Otvetstvennyj za vypusk V.N. Domackij. Tjumen', 2010.
14.Sintjurev O.K., Plahotnik A.V., Glazunova L.A. Primenenie i jeffektivnost' ul'trazvukovoj diagnostiki pri smeshhenii sychuga u krupnogo rogatogo skota V sbornike: Perspektivy ustojchivogo razvitija APK. Sbornik materialov Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. Omsk, 06 ijunja 2017 g. S. 183-188.
15.Sintjurev O.K., Plahotnik A.V., Glazunova L.A. Rasprostranenie smeshhenija sychuga u krupnogo rogatogo skota v OOO "ZapSibHleb-Iset'" i ego profilaktika V sbornike: Perspektivy ustojchivogo razvitija APK Sbornik materialov Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. Omsk, 06 ijunja 2017 g. S. 179-182.
УДК 619:636.4:636.087.8
АНАЛИЗ МУТАГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ЛАБОРАТОРНОГО ОБРАЗЦА МИКРОКАПСУЛИРОВАННОГО ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА «ЭНЗИМСПОРИН»
НА ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
ГОРОБЕЦ Александр Юрьевич, аспирант кафедры физиологии и химии имени профессора А.А. Сысоева, 128x160@mail.ru
ТРУБНИКОВ Денис Владимирович, канд. биол. наук, доцент, denadmiral@mail.ru Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова ТРУБНИКОВА Елена Владимировна, д-р биол. наук, профессор, Курский государственный университет,&_е@Ш.т
Целью исследования являлось изучение мутагенной активности препарата лабораторного образца микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин», изготовленного в научно-производственной лаборатории малого инновационного предприятия ООО «ИННОТЕХ». Объект исследования: микрокапсулированный пробиотический препарат «Энзимспорин» (опытный образец микрокапсулированного пробиотического препарата), в состав которого входят Bacillus subtilis ВКПМ В-314, Bacillus licheniformis ВКПМ В-8054, Bacillus subtilis (Bacillus natto) ВКПМ В-12079, имеющие порошкообразную форму, состоящую из частиц, заключенных в полимерную оболочку. В качестве метода исследования был использован тест на индукцию хромосомных повреждений in vivo у млекопитающих, и проведен учёт числа хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих в опытах на самцах крыс (при однократном внутрибрюшинном введении) и на обоеполых крысах (при пролонгированном введении в течение 5 суток). В качестве негативного контроля был использован 1%-й крахмальный клейстер. В качестве позитивного контроля был использован Циклофосфан. Исследование проведено на лабораторных крысах линии Wistar, на самцах и самках средней массой 250,44 ± 20,99 г; количество: 54 самца, 12 самок. Животные содержались при 12-часовом световом режиме в условиях свободного доступа к воде и пище. Подопытные крысы были разделены на три большие группы. Количество клеток с хромосомными аберрациями в группе животных, получавших исследуемый препарат в суточной субтоксической дозе (десятикратная терапевтическая), составило 1,43±0,98, что статистически не отличалось от данных в группе отрицательного контроля (1,86±1,07 клеток), и значимо отличалось от показателей в группе положительного контроля
© Горобец А. Ю., Трубников Д. В., Трубникова Е. В., 2019г.
Вестник РГАТУ, № 1 (41), 2019
С^-
(14,29±1,98). Был сделан вывод, что лабораторный образец микрокапсулированного пробиотическо-го препарата «Энзимспорин» не обладает мутагенной активностью в тесте на индукцию хромосомных мутаций.
Ключевые слова: крысы, лабораторные животные, микрокапсулирование, пробиотик, мутагенность, серии опытов, хромосомы
Введение
В настоящее время в промышленном животноводстве и ветеринарной медицине широко используются различные препараты пробиотиков, содержащих кишечную микрофлору. Интерес к применению пробиотических препаратов вызван тем, что, как правило, они действительно обладают высокой биологической активностью, повышают резистентность организма, усиливают процессы метаболизма, нормализуют пищеварение, активны в профилактике кишечных патологий у животных [5].
Анализ данных литературы показывает, что при описании эффектов, которые оказывают различные пробиотические препараты на организм животных, исследователи выделяют, главным образом, нормализацию кишечного микробиоценоза, защиту от инфицирования условно-патогенной микрофлорой, улучшение процессов пищеварения и иммунного статуса [3].
Известно, что препарат, применяемый в качестве кормовой добавки, должен быть безопасен для животных. Одним из критериев безопасности является отсутствие мутагенной активности, то есть разработанный препарат не должен вызывать хромосомных повреждений клеток животных.
Работа выполнялась в рамках договора гранта между малым инновационным предприятием ООО «Инновационные технологии» (г. Курск) и ФГБУ «Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере» (Фонд содействия инновациям) (г. Москва) по теме «Разработка технологии изготовления, изготовление и испытание микрокапсулированного пробиотиче-ского препарата для животных».
Описание выполняемой работы
Для изучения мутагенности лабораторного образца микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин», изготовленного в научно-практической лаборатории ООО «ИННО-ТЕХ», был использован тест на индукцию хромосомных повреждений in vivo у млекопитающих, и проведен учёт числа хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих в опытах на самцах крыс (при однократном внутрибрюшин-ном введении) и на обоеполых крысах (при пролонгированном введении в течение 5 суток).
Заказчиком являлось Общество с ограниченной ответственностью «ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ» (305041, Российская Федерация, г. Курск, проспект Победы, д. 14, оф. 160). Соисполнителем по данному виду работ являлось ФГБОУ ВО «Курский государственный университет». Исследование проводилось на базе НИЛ «Генетика», адрес: 305000, г. Курск, ул. Радищева, д. 33. Ответственный исполнитель исследования канд. мед. наук, ст. научн.сотрудник НИЛ «Генетика»
А.С. Белоус.
Тестируемым веществом являлся лабораторный образец микрокапсулированного пробиотиче-ского препарата «Энзимспорин». Готовая форма препарата: порошкообразная субстанция желтоватого цвета, диаметр капсул преимущественно 0,1-1,0 мм. Условия хранения: в сухом, тщательно защищенном от света месте, при температуре не выше 20° С. Химическая чистота/активность тестируемого вещества считается равной 100% до тех пор, пока не будет доказано обратное.
В качестве негативного контроля был использован 1%-й крахмальный клейстер.
В качестве позитивного контроля был использован Циклофосфан. Действующее вещество: Циклофосфан* (Cyclophosphamide*), Cyclophosphamidum (род. Cyclophosphamide. Химическое название ^^бис(2-Хлорэтил) тетрагидро-2Н-1,3,2-оксазафосфорин-2-амин-2-оксид. Это белый кристаллический порошок. Растворим в воде: 40 г/л; мало растворим в спирте, бензоле, этиленгликоле, четыреххлористом углероде, диоксане; трудно растворим в эфире и ацетоне. Молекулярная масса - 279,10.
Схема эксперимента Исследование проведено на лабораторных крысах линии Wistar, на самцах и самках. Одно из испытуемых лабораторных животных представлено на рисунке 1. Средняя масса 250,44 ± 20,99 г. Количество: 54 самца, 12 самок; питомник лабораторных животных «Столбовая» РАМН от ООО «ИННОТЕХ».
Рис. 1 - Лабораторная крыса линии Wistar
В соответствии с техническим заданием эксперименты проводили на самцах и самках лабораторных крыс - вид Rattus Norvegicus, линия Wistar, по 7 и 8 особей в каждой контрольной и экспериментальной группах. Животные содержались при
12-часовом световом режиме в условиях свободного доступа к воде и пище.
В течение эксперимента снижения физического состояния у экспериментальных животных не наблюдалось, и в этой связи вынужденной эвтаназии in extremis после введения анализируемых доз не проводилось. Животных во всех группах подвергали эвтаназии на 2-й день исследования, примерно через 24 часа после введения последней дозы - при однократном введении, или на пятый день, через 5-6 часов после введения последней дозы -при пятикратном введении.
Все животные наблюдались два раза в день в период самого эксперимента. Физические обследования проводились примерно за одну неделю до рандомизации, во время рандомизации, в день исследования 0 и в день запланированной эвтаназии. Индивидуальные веса тел регистрировались в день исследования 0.
Эвтаназию крыс проводили методом наркотизации эфиром.
Тушки убитых животных передавались по акту приемки-передачи для утилизации в ФГБОУ ВО «Курская государственная сельскохозяйственная академия» им. И.И. Иванова. Методология эксперимента
В первой серии испытуемый препарат в дозе, соответствующей суточной терапевтической для человека (группа СТ 1) и в субтоксической дозе (группа СС 1) вводили однократно только самцам с фиксацией клеточного материала костного мозга через 24 ч после введения.
Во второй серии исследуемый препарат в дозе, соответствующей суточной терапевтической для человека, вводили самцам и самкам ежедневно на протяжении 5 суток (группа СТ 5). Фиксацию клеточного материала осуществляли примерно через 6 ч после последнего введения.
Негативным контролем являлся 1%-й крахмальный клейстер.
В качестве позитивного контроля был использован Циклофосфан производства Россия ОАО «Биохимия», г. Саранск, в дозе 20 мг/кг при однократном внутрибрюшинном введении для групп СТ 1 и СС 1 и пятикратном (пять дней) для СС 5.
После приготовления и анализа цитогенетиче-ских препаратов делали заключение на основе результатов сравнения экспериментальных и опытных групп.
Перед исследованием твердое порошкообразное испытуемое вещество - лабораторный образец микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин» смешивали с водой, добиваясь суспендированного состояния, в пропорции 1:5. Процесс приготовления препарата представлен на рисунке 2.
Процедура тестирования
Подопытные крысы были разделены на три большие группы:
I группа - самцы - для анализа мутагенной индукции при однократном введении (суточная тера-
певтическая доза - СТ 1).
Анализ эффекта от орального введения суточной терапевтической дозы из расчета 280мг/кг проводили на трех подгруппах:
а) лабораторный образец микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин» в концентрации 280 мг/кг;
б) 1%-й крахмальный клейстер (крахмальный клейстер), 280 мг/кг;
в) Циклофосфан в дозе 20 мг/кг.
II группа - самцы - для анализа мутагенной индукции при однократном введении (суточная субтоксическая доза - СС 1).
Анализ эффекта от орального введения субтоксической (десятикратная суточная терапевтическая) дозы 2800 мг/кг в сутки проводили на трех подгруппах:
а) лабораторный образец микрокапсулирован-ного пробиотического препарата «Энзимспорин» в концентрации 2800 мг/кг;
б) 1%-й крахмальный клейстер (крахмальный клейстер), 2800 мг/кг;
в) Циклофосфан в дозе 20 мг/кг.
Фиксацию клеточного материала в обеих группах проводили через 24 ч после введения для костного мозга.
III группа - самцы и самки - для анализа мутагенной индукции при 5-тидневном введении суточной терапевтической дозы 280 мг/кг в сутки (СТ 5).
Анализ проводили также в трех подгруппах:
а) лабораторный образец микрокапсулирован-ного пробиотического препарата «Энзимспорин» в концентрации 280 мг/кг - самцы и самки;
б) 1%-й крахмальный клейстер (крахмальный клейстер), 280 мг/кг - самцы и самки;
в) Циклофосфан в дозе 20 мг/кг - самцы и самки.
Фиксацию клеточного материала проводили через 6 ч после последнего введения препарата.
Схема эксперимента с учетом дат его реализации представлена в таблице 1.
Рис. 2 - Приготовление препарата для эксперимента
Вестник РГАТУ, № 1 (41), 2019 tj-
Таблица. 1 - Схема эксперимента по изучению мутагенности лабораторного образца микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин»
№ крысы стёкла начало выведение анализ
I группа. Орально. 21 крыса
I. Суточная терапевтическая доза (СТ 1) 21 42 19.03.18 20.03.18 28.03.201809.04.2018
1.1. ЭНС 280 мг/кг/сутки 7 14
1.2.1%-й крахмальный клейстер 280 мг/ кг/сутки 7 14
1.3. Циклофосфан 20 мг/кг/сут 7 14
Костный мозг. Выведение через 24 часа после введения тестеров
II группа. Орально однократно. 21 крыса
II. Субтоксическая доза (х10 суточная терапевтическа) (СС 1) 21 42 21.03.18 22.03.18 28.03.201809.04.2018
2.1. ЭНС 2800 мг/кг/сутки 7 14
2.2. 1%-й крахмальный клейстер 2800 мг/кг/сутки 7 14
2.3. Циклофосфан 20 мг/кг/сут 7 14
Костный мозг. Выведение через 24 часа после введения тестеров
III группа. Внутрибрюшинно. 1 раз/день. 5 дней. 24 крысы (4+4)
III. Суточная терапевтическая доза (СТ 5) 12+12 48 23.03.18 27.03.18 28.03.201809.04.2018
3.1. ЭНС 280 мг/кг/сутки 4+4 16
3.2. 1%-й крахмальный клейстер 280 мг/кг/сутки 4+4 16
3.3 Циклофосфан 20 мг/кг/сут 4+4 16
Костный мозг. Выведение через 6 часов после последнего введения
Препараты: по 2 стекла от каждого животного; Анализ: по 100 метафаз от каждого животного
Приготовление и анализ цитогенетических препаратов
Выделение клеток и приготовление препаратов для цитогенетического анализа (два стекла от каждого животного) проводили стандартизировано в соответствии с общепринятыми методиками для приготовления цитогенетических препаратов клеток костного мозга млекопитающих; окрашивали, шифровали препараты. Анализировали по 100 метафаз от каждого животного. В анализ брали округлые метафазные пластинки без наложений хромосом с модальным числом 42 (41-43) - для крыс. Единицей наблюдения являлось каждое экспериментальное животное; учитывались количество клеток с аберрациями, количество аберраций, в том числе хроматидного (фрагменты, обмены) и хромосомного (фрагменты, обмены) типов. Геномные мутации (анеуплоидия, полиплоидия) не учитывали, поскольку наиболее информативным показателем влияния мутагенов являются хромосомные аберрации. Пробелы (гэпы) также включали в число аберраций. Регистрировали все типы хромосомных аберраций, доступные для анализа при равномерном окрашивании хромосом (дицентрики, центрические кольца, парные и одиночные фрагменты). При микроскопическом исследовании метафазных пластинок придерживались критерия отбора и анализа препаратов, изложенных в работах Бочкова Н.П. и др. и Заха-
рова А.Ф.и др.
Цитогенетические методы
Для проведения цитогенетических исследований использовали костный мозг, полученный из бедренных, большеберцовых костей и локтевых костей экспериментальных животных, который вымывался небольшим количеством физраствора и помещался в стерильные флаконы, после чего доставлялся в генетическую лабораторию. Препараты хромосом получали прямым методом без культивирования [4]. Сама процедура приготовления цитогенетических препаратов проводилась в специальном боксовом помещении по следующей рабочей схеме.
Костный мозг отмывали сменой физраствора №С1 после центрифугирования и ресуспендиро-вания дважды, доводя объем в каждом случае до 10 мл, выдерживая в термостате при температуре 37° С по полтора часа. Обработку клеточных культур и приготовление препаратов метафазных хромосом осуществляли с применением ряда последовательных методических процедур: кол-хицинизации, гипотонизации культур, фиксации клеток смесью этилового спирта с ледяной уксусной кислотой (фиксатор Корнуа, спирт:уксусная кислота - 3:1), нанесении клеточной взвеси на предметные стекла [1]. Перед второй отмывкой добавляли колхицин в конечной концентрации 0,5 мкл/мл. Затем центрифугировали в течение
10 минут при 1000 оборотов в минуту, убирали надосадочную жидкость и ресуспендировали осадок. Далее к нему добавляли предварительно нагретый до 37° С гипотонический раствор (0,55%-й раствор KCl). Гипотонизация проводилась в термостате в течение 30 минут. Далее клетки центрифугировали, удаляли надосадочную жидкость, осадок ресуспендировали и подвергали фиксации. В качестве фиксирующей смеси использовали этанол и ледяную уксусную кислоту в соотношении 3:1. Первую фиксацию проводили при температуре - 10° С в течение 20 минут. Затем фиксатор сменяли 2-3 раза с промежуточным центрифугированием. Показателем завершенности фиксации служила бесцветность, прозрачность клеточной суспензии. Полученную взвесь раскапывали на охлажденные химически чистые предметные стекла.
После высушивания препараты маркировали и до окраски хранили при комнатной температуре [2].
Микроскопирование препаратов проводилось с помощью микроскопа «ZEISS» (увеличение окуляра 10, увеличение объектива 90).
Статистические анализы
Каждое среднее значение было представлено стандартным отклонением (S.D.), количеством животных (N), используемых для вычисления среднего значения. При сравнительном анализе был использован расчет критерия Манна-Уитни и уровня статистической значимости для него. Из-за использования значительных цифр и различных соглашений округления, присущих используемым типам программного обеспечения, средства и стандартные отклонения сводных и отдельных таблиц могут незначительно отличаться. Поэтому использование сообщаемых индивидуальных значений для вычисления последующих параметров или средств в некоторых случаях приводит к незначительным отклонениям от тех, которые перечислены в таблицах данных отчета.
Уровень статистической значимости принимали за р<0,05.
Методика приготовления препаратов
Методика приготовления препаратов с указанием способа введения и доз введения представлена в таблице 2.
Таблица 2 - Расчет экспериментальных доз вводимых препаратов
Вещество Доза Животные (N)
I. Суточная терапевтическая доза (280 мг/кг), самцы. Орально однократно (СТ 1)
1.1. ЭНС 280 мг/кг/сут 7
1.2. - контроль. 1%-й Крахмальный клейстер 280 мг/кг/сут 7
1.3 + контроль. Циклофосфан 20 мг/кг/сут 7
II. Суточная субтоксическая доза (х10 суточная терапевтическая), самцы. Орально однократно (СС 1)
2.1. ЭНС 2800 мг/кг/сут 7
2.2. - контроль. 1%-й крахмальный клейстер 2800 мг/кг/сут 7
2.3. + контроль. Циклофосфан 20 мг/кг/сут 7
III. Суточная терапевтическая доза 5 дней. самцы и самки. Орально 1 раз в день (СТ 5)
3.1 ЭНС 280 мг/кг/сут 4+4
3.2. - контроль. 1%-й крахмальный клейстер 280 мг/кг/сут 4+4
3.3. + контроль. Циклофосфан 20 мг/кг/сут 4+4
Условия эксперимента Количество клеток на 100 исследованных клеток Количество клеток с хромосомными повреждениями Уровень значимости (р1, р2, р3) **
Гепы Одиночные фрагменты Двойные фрагменты Обмены Клетки с МП*
СТ 1
ЭНС 700 2,14± 0,77 1,29± 0,42 0,14± 0,14 0,86± 0,26 0,00± 0,00 1,71±1,11 р1=0,788 р2=0,001 р3=0,002
- контроль. 1%-й крахмальный клейстер 700 2,57± 0,72 1,57± 0,43 0,14± 0,14 1,57± 0,48 0,29± 0,18 1,86±1,35
+ контроль. Циклофо-сфан 700 28,14± 1,28 13,57± 1,25 1,43± 0,20 7,29± 0,68 2,43± 0,48 14,14±1,77
Табл. 3 - Результаты оценки цитогенетической активности кормовой добавки - лабораторного образца микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин» - в тесте по учету хромосомных аберраций в клетках костного мозга
Вестник РГАТУ, № 1 (41), 2019
С^-
_Продолжение таблицы 3
СС 1
ЭНС 700 3,29± 0,87 1,14± 0,34 0,00± 0,00 1,29± 0,42 0,29± 0,18 1,43±0,98 р1=0,535 р2=0,002 р3=0,002
- контроль. 1%-й крахмальный клейстер 700 3,71± 0,78 1,71± 0,47 0,00± 0,00 1,29± 0,29 0,00± 0,00 1,86±1,07
+ контроль. Циклофо-сфан 700 27,00± 1,50 14,14± 0,94 0,86± 0,34 9,29± 0,57 1,57± 0,37 14,29±1,98
СТ 5
ЭНС 800 5,38± 0,65 1,88± 0,23 0,25± 0,16 1,38± 0,18 0,38± 0,18 2,25±0,71 р1=0,913 р2=0,001 р3=0,001
- контроль. 1%-й крахмальный клейстер 800 5,38± 1,51 1,25± 0,41 0,00± 0,00 1,13± 0,35 1,13± 0,35 0,00± 0,00
+ контроль. Циклофосфан 800 76,63±1,91 32,63± 2,36 2,63± 0,32 25,75± 1,82 2,63± 0,50 36,38±3,02
* - клетки с множественными (более 5 на метафазу) повреждениями
** р1, р2 и р3 - уровни статистической значимости для сравнения количества клеток с хромосомными повреждениями в группе «ЭНС» и группе «- контроль. 1%-й крахмальный клейстер»; группе «ЭНС» и группе «+ контроль. Циклофосфан» и в группе «- контроль. 1%-й крахмальный клейстер» и группе «+ контроль. Циклофосфан», соответственно.
Как видно из представленных данных, среднее количество клеток с хромосомными повреждениями в группе крыс, получавших лабораторный образец микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин» при однократном вну-трибрюшинном введении терапевтической дозы, составило 1,71±1,11; в группе отрицательного контроля этот показатель был равен 1,86±1,35 клеток, статистически значимых различий при этом не обнаружено (р1=0,788). Статистически значимые различия обнаруживаются при анализе среднего количества клеток с аберрациями в группе положительного контроля (Циклофосфан), где оно составило 14,14±1,77, и двумя другими рассматриваемыми группами. При сравнении в паре группа «ЭНС» и группа «+ контроль. Циклофосфан» р2=0,001, а в группе «- контроль. 1% крахмальный клейстер» и группе «+ контроль. Циклофосфан» значения р3 составило 0,002.
Количество клеток с хромосомными аберрациями в группе животных, получавших исследуемый препарат в суточной субтоксической дозе (десятикратная терапевтическая), составило 1,43±0,98, что статистически не отличалось от данных в группе отрицательного контроля (1,86±1,07 клеток), р1=0,5з5 и значимо отличалось от показателей в группе положительного контроля (14,29±1,98), при р2=0,002. Статистически значимые различия были показаны также и при сравнении данных групп отрицательного и положительного контроля между собой (р3=0,002).
Для анализа мутагенной индукции при 5-тид-невном введении суточной терапевтической дозы тестируемого препарата (СТ 5) показатель количества аберрантных клеток в группе тестируемого вещества «ЭНС» составил 2,25±0,71,
что также статистически значимо не отличалось от показателей в группе отрицательного контроля (2,00±1,51) и статистически значимо отличалось от данных положительного контроля (36,38±3,02) , при р1=0,913 и р2=0,001, соответственно. Статистически значимые различия были обнаружены также, как и в предыдущих сравнениях, между показателями для группы отрицательного и положительного контролей (р3=0,001).
Заключение
Лабораторный образец микрокапсулированного пробиотического препарата «Энзимспорин» не обладает мутагенной активностью в тесте на индукцию хромосомных мутаций и последующем учете хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих, что говорит о его биологической безопасности на хромосомном уровне и возможности использования в качестве кормовой добавки при выращивании сельскохозяйственных животных. При этом можно сделать вывод, что генетическая безопасность препарата сохраняется не только в рекомендуемой дозе для разных видов сельскохозяйственных животных - 3,0 г на голову в сутки, но и в дозах, значительно превышающих рекомендуемые.
Список литературы
1. Залетаева Т.А. Современные методы хромосомного анализа в клинико-цитогенетических исследованиях / Т.А. Залетаева, Н.П. Кулешов, Д.В. Залетаев, О.Б. Барцева; Рос. мед. акад. последип. образования. - М.: Медицина, 1994. - 68 с.
2. Карпишенко А.И. Медицинская лабораторная диагностика: программы и алгоритмы: справочник / под ред. А.И. Карпишенко. - СПб.: Интермедика, 1997. - 304 с.: ил.
3. Тараканов Б.В. Механизмы действия проби-
отиков на микрофлору пищеварительного тракта организма животных /Б.В. Тараканов// Ветеринария. - 2000. - № 1. - С.47-54.
4. Хромосомы человека: атлас / А.Ф. Захаров, В.А. Бенюш, Н.П. Кулешов, Л.И. Барановская;
АМН СССР. - М.: Медицина, 1982. - 264 с. с ил.
5. Mohnl De M. Poultry production: How probiotics can play a role /M. De Mohnl // Poutly International. - 2001. - V. 50. - №9. - P.18-19.
ANALYSIS OF MUTAGENE ACTIVITY OF THE EXPERIMENTAL MODEL OF MIROENCAPSULATED PROBIOTIC PREPARATION "ENZYMESPORINE"
ON LABORATORY ANIMALS
Gorobets Alexandr Yu., aspirant of the department of physiology and chemistry Named after professora A.A. Sysoyev, Kursk state agricultural academy Named after I.I. Ivanov, 128x160@mail.ru
Trubnikov Denis V., candidate of biological Sciences, Associate Professor, Kursk state agricultural academy Named after I.I. Ivanov, denadmiral@mail.ru
Trubnikova Elena V., doctor of biological sciences, professor, Kursk state university, tr_e@list.ru
The aim of nvestigation has been survey the mutagene activity of the experimental model of the microencapsulated probiotic preparation, which was made in scientific production laboratory of small innovative company of LLC "INNOTEKH". The object of the investigation is microencapsulated probiotic preparation "Enzymesporine" ("The experimental model of the microencapsulated probiotic preparation"), which was made in scientific production laboratory LLC "INNOTEKH", which "consists" Bacillus subtilis VKPM V-314, Bacillus licheniformis VKPM V-8054, Bacillus subtilis (Bacillus natto) VKPM V-12079, which have "powder-like" form, "which consists" of parts which inclosed in polymer shell. By way of research method there was used a test for the induction of chromosomal damage in vivo in mammals and counted the number of chromosomal aberrations in cells of mammalian bone marrow in experiments on male rats (for a single intraperitoneal injection) and on bisexual rats (for prolonged injection for 5 days). As negative control was used 1% starch paste. As positive control was used Cyclophosphan. The research was conducted on laboratory rats of Wistar line, on males and females. The average weight is 250.44±20.99 g. Amount: 54 males, 12 females. The animals were kept under a 12-hour light regime with free access to food and water. Experimental rats were divided into three big groups. The number of cells with chromosomal aberrations in the group of animals treated with the test preparation in a daily subtoxic dose (tenfold therapeutic) was 1.43±0.98, which was not statistically different from the data in the negative control group (1.86±1.07 cells), and significantly different from those in the positive control group (14.29±1.98). It was concluded that the experimental model of the microencapsulated probiotic preparation "Enzymesporine" does not have mutagenic activity in the test for the induction of chromosomal mutations.
Key words: rats, laboratory animals, microencapsulation, probiotic, mutagenicity, series of experiences, chromosomes
Litetratura
1. Tarakanov B.V. Mekhanizmy deystviya probiotikov na microfloru pishevaritelnogo trakta organisma zhivotnykh/B.V. Tarakanov//Veterinariya - 2000 - №1. - S. 47-54
2. Kromosomy cheloveka: atlas / A.F. Zakharov, V.A. Benyush, N.P. Kuleshov, L.I. Baranovskaya; AMN SSSR. - M.; Meditsina, 1982. - 264 s. s il.
3. Zaletaeva T.A. Sovremenniye metody khromosomnogo analiza v kliniko-tsitogeneticheskikh issledovaniyah / T.A. Zolotareva, N.P. Kuleshov, D.V. Zaletaev, O.B. Barceva; Ros. med. akad. posledip. Obrazovaniya. - M.: Medicina, 1994. - 68 s.
4. Karpishenko A.I. Meditsinskaya laboratornaya diagnostika: programmy i algitmy: spravochnik /pod der. A.I. Karpishenko. - SPb.: Intermedika, 1997. 304 s.:il.
5. Mohnl De M. Poultry production: How probiotics can play a role /M. De Mohnl// Poutly International. -2001. - V. 50. - №9. - P.18-19.
