CC BY
22
ORIGINAL ARTICLE
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018
УДК: 616.419-007.17-008.6:576.32/.36.083.3
Дудина Г.А. 1, Донецкова А.Д. 2, Литвина М.М.2, Митин А.Н. 2
АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ИЗОФОРМ МОЛЕКУЛЫ FOXP3 РЕГУЛЯТОРНЫМИ Т-КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОМ СИНДРОМЕ
1ГБУЗ МКНЦ им. А.С. Логинова ДЗМ, 111123, Москва, Российская Федерация;
2ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России, 115478, Москва, Российская Федерация.
Выполнена оценка численности регуляторных Т-клеток и уровня экспрессии изоформ молекулы FOXP3 в периферической крови пациентов с миелодиспластическим синдромом на ранней и поздней стадии развития заболевания. В обеих группах выявлено двукратное снижение общего числа регуляторных Т-клеток в основном за счёт уменьшения численности регуляторных Т-клеток, экспрессирующих молекулу FOXP3, лишённую экзона 2. Обсуждена возможная связь выявленных нарушений с ослаблением супрессорной функции регуляторных Т-клеток и риском развития аутоиммунных осложнений при миелодиспластическом синдроме.
Ключевые слова: FOXP3; изоформы; регуляторные Т-клетки человека; миелодиспластический синдром; проточная цитометрия.
Для цитирования: Дудина Г.А., Донецкова А.Д., Литвина М.М., Митин А.Н. Анализ экспрессии изоформ молекулы FOXP3 регуляторными Т-клетками периферической крови при миелодиспластическом синдроме. Иммунология. 2018; 39(2-3): 123-128. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-2-3-123-128
Dudina G.A. ', Donetskova A.D. 2, Litvina M.M. 2, Mitin A.N. 2
ANALYSIS OF FOXP3 ISOFORMS EXPRESSION BY REGULATORY T CELLS FROM PERIPHERAL BLOOD IN MYELODYSPLASTIC SYNDROMES
1 Loginov Moscow Clinical Center of the Moscow Health Department, 111123, Moscow, Russian Federation;
2 National Research Centre «Institute of Immunology» FMBA of Russia, 115478, Moscow, Russian Federation
We have analyzed the absolute number of regulatory T cells and the level of FOXP3 isoform expression in peripheral blood of patients with early-stage and late-stage myelodysplastic syndrome. A twofold decrease in the number of regulatory T cells was shown in both groups, mainly due to amount reduction of regulatory T cells expressing FOXP3 molecule lacking exon 2. We discuss the possible association of revealed disorders with reduced suppressor function of regulatory T cells and risk of autoimmune complications in patients with myelodysplastic syndrome.
Keywords: FOXP3; isoforms; human regulatory T cells; myelodysplastic syndromes; flow cytometry.
For citation: Dudina G.A., Donetskova A.D., Litvina M.M., Mitin A.N. Analysis of FOXP3 isoforms expression by regulatory T cells from peripheral blood in myelodysplastic syndromes. Immunologiya. 2018; 39(2-3): 123-128. DOI: http://dx.doi. org/10.18821/0206-4952-2018-39-2-3-123-128
For correspondence: Mitin Alexander, head of the division of the state research center "Institute of immunology", E-mail: mitin@inbox.ru.
conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. This research was supported by Celgene International Holdings Corporation..
Received 18.11.17 Accepted 16.12.17
Миелодиспластический синдром (МДС) - гетерогенная группа заболеваний, обусловленных клональными нарушениями стволовых клеток, с характерным признаком периферической цитопении вследствие неэффективного гемопоэза на фоне нормальной или повышенной клеточности костного мозга. Клинические проявления, течение и исход МДС весьма разнообразны, а медиана выживаемости варьирует от 5 лет до 6 мес [1]. Учитывая разнообразие симптоматики и
Для корреспонденции: Митин Александр Николаевич, заведующий подразделением ГНЦ «Институт иммунологии», E-mail: mitin@inbox.ru.
сложность прогнозирования течения и исхода заболевания, были разработаны универсальные прогностические системы, определяющие степень риска для различных групп пациентов с МДС. Тем не менее, их постоянно пытаются усовершенствовать.
Так, предполагая активное участие иммунной системы в патогенезе МДС, закономерными выглядят попытки в качестве прогностических критериев использовать определённые показатели иммунитета, в частности, количество регуляторных Т-клеток (Трег). Участием Трег в патогенезе МДС можно в какой-то мере объяснить связь данного заболевания как с аутоиммунными нарушениями [2], так и с опухолевой трансформацией [1], полагая при этом, что ослабление функ-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ции Трег ведёт к нарушению контроля за чрезмерным иммунным ответом, а избыточная супрессия иммунного ответа - к нарушению иммунного надзора за опухолевым ростом.
Большая часть проведённых исследований связывает повышение количества Трег с неблагоприятным прогнозом при МДС [3-6]. Несмотря на сходный вывод, данные о численности Трег при МДС весьма противоречивы. Это, вероятно, обусловлено различиями в протоколах подготовки образцов и алгоритмах гейтирования при цитометрическом анализе
[7], на что косвенно указывает различие показателей Трег в группах возрастного контроля.
Также предпринимались попытки использовать функциональные характеристики Трег в качестве прогностического критерия при МДС. Было показано, что повышение численности Трег с фенотипом эффекторных Т-клеток коррелирует с неблагоприятным прогнозом течения МДС - трансформацией в острый миелобластный лейкоз и низкой выживаемостью
[8]. Однако полученные результаты, возможно, являются не столько прогностическим критерием, сколько отражением определённой стадии заболевания.
Рассматривая функциональные характеристики Трег в качестве прогностического критерия при МДС, необходимо учитывать, что основным регулятором дифференцировки и функционирования Трег является транскрипционный фактор FOXP3 [9], и особенности экспрессии этой молекулы должны оказывать существенное влияние на функцию Трег. При изучении молекулярной структуры FOXP3 установлено, что у человека вследствие альтернативного сплайсинга образуются 4 варианта мРНК и соответственно 4 изоформы молекулы FOXP3: полная молекула (FOXP3-FL); с делецией экзона 2 ^ОХР3А2); с делецией экзона 7 (ГОХР3А7); и с одновременной делецией экзонов 2 и 7 (ГОХР3А2А7) [10-12]. Была выявлена функциональная значимость регионов, кодируемых данными экзонами. Экзон 2 кодирует домен молекулы FOXP3, ответственный за связывание транскрипционных факторов семейства RORa и RORyt [13,14]. Одной из функций этих факторов является индукция дифференцировки ТЫ7-клеток, обладающих провоспалительными свойствами. Экзон 7 кодирует последовательность, ответственную за димеризацию молекулы FOXP3, и его отсутствие нарушает супрессорную функцию Трег [12, 15]. Важной особенностью молекул FOXP3 с делецией продуктов экзонов 2 и 7 является их преимущественная локализация внутри ядра, что обусловлено утерей последовательностей, отвечающих за экспорт из ядра, расположенных в областях, кодируемых экзонами 1/2 и 6/7 [16]. Также было показано, что при активации наивных CD4+CD25- Т-клеток экспрессия FOXP3 определяется в основном в цитоплазме в отличие от преимущественной локализации внутри ядра у CD4+CD25+ Трег [16]. С точки зрения функционирования FOXP3 в качестве транскрипционного активатора и супрессора [17], представляется весьма важным его нахождение внутри ядра. Следовательно, можно предположить, что именно молекула FOXP3A2, обладающая супрессорной функцией и располагающаяся преимущественно в ядре, является основной изоформой, определяющей функциональную активность Трег
Учитывая неоднозначность имеющихся данных о численности Трег, их потенциально важную роль в патогенезе МДС, а также функциональные отличия экспрессируемых изоформ молекулы FOXP3, мы решили оценить не только численность и долю Трег при данном заболевании, но и уровень экспрессии изоформ молекулы FOXP3, отличающихся по наличию экзона 2, у пациентов с МДС на разных стадиях развития заболевания.
Материал и методы
В исследование включены 55 пациентов с МДС (табл. 1). Они были разделены на группы ранней и поздней стадии МДС (Р-МДС и П-МДС). В группу Р-МДС вошли пациенты,
набравшие меньше 1,5 баллов по Международной прогностической бальной системе (IPSS - International Prognostic Scoring System), в группу П-МДС - пациенты, набравшие больше 1,5 баллов. Группа Р-МДС - 27 человек (15 женщин, 12 мужчин), медиана возраста - 71,5 (64-76) года. Группа П-МДС - 28 человек (12 женщин, 16 мужчин), медиана возраста -68,5 (63-73) года. Группа возрастного контроля - 26 человек (15 женщин, 11 мужчин), медиана возраста - 72 (48-79) года. Таким образом, характеристики пациентов по возрасту и полу были близки между собой и соответствовали группе возрастного контроля. Все пациенты имели гемотрансфузи-онную зависимость. Степень гемотрансфузионной нагрузки колебалась от 2-3 до 5-6 доз эритроцитарной массы в месяц. Исследование проводили до назначения гипометилирующей или цитостатической терапии.
Материалом для исследования служила периферическая кровь. Забор крови производили в пробирки с антикоагулянтом. Клетки подсчитывали на гемоанализаторе по общепринятой методике. Выделение мононуклеаров периферической крови (МНПК) и последующий анализ выполняли в течение последующих 6 ч.
МНПК выделялись центрифугированием в градиенте плотности фиколла (1,077 г/см3). Клетки суспензировали в PBS с 1 % BSA и 0,01 % NaN3, затем инкубировали с моно-клональными антителами (МАТ) к поверхностным маркерам в том же буфере в течение 30 мин при 4°С, после чего отмывали и пермеабилизировали в течение 40 мин буфером «Foxp3 Fixation/Permeabilization Buffer» (eBioscience) согласно методическим указаниям фирмы. Клетки отмывали и инкубировали в течение 90 мин при 4°С в темноте с МАТ против FOXP3, снова отмывали и сразу (без фиксации) анализировали на проточном цитометре. Учитывая минорность фракции Трег, для уменьшения ошибки анализировали не менее 2^105 клеток, попадающих в гейт лимфоцитов. Лазерную цитометрию клеток осуществляли на проточном цитометре BD FACSCanto™ II (Becton Dickinson) в стандартном режиме. Анализ данных проводили с помощью программного обеспечения FlowJo.
Таблица 1
Характеристика пациентов с МДС
Показатель
n=55
%
Пол
Мужчины Женщины
Вариант МДС (ВОЗ) РА 5q-РАКС РЦМД РАИБ-1 РАИБ-2 Кариотип Нормальный Ненормальный* IPSS Низкий
Промежуточный-1 Промежуточный-2 Высокий Возраст, годы
27
28
14 3 2 10 10 16
32 23
13
14 10 18
69(64-75)
49 51
25 5 4 18 18 29
58 42
24
25 18 33
Примечание. * - описание изменений кариотипа приведено в тексте.
ORIGINAL ARTICLE
Comp-PE-A:: FOXP3-150D_E4 Comp-PE-A:: FOXP3-150D_E4
Рис. 1. Алгоритм гейтирования при цитометрическом анализе регуляторных Т-клеток на примере МНПК из группы возрастного контроля (мужчина 74 года).
а - лимфоциты среди МНПК периферической крови, б-г - выставление FOXP3+ гейтов по CD3-клеткам, заведомо не экспрессирующим молекулу FOXP3: CD3"-клетки среди лимфоцитов (б); выставление FOXP3(PCH101)+ гейта по CD3-клеткам (в); выставление FOXP3(150D/E4)+ гейта по CD3" клеткам (г).
д-ж - определение Трег, экспрессирующих различные изоформы молекулы FOXP3: CD4+Т-клетки среди лимфоцитов (д); CD25+FOXP3(PCШ01)+-все Трег среди CD4+ Т-клеток (е); FOXP3(150D/E4)+- FOXP3-FL Трег среди всех Трег (ж).
Сплошные стрелки показывают алгоритм гейтирования. Прерывистые двойные стрелки показывают соответствие выставленных гейтов для CD3" и СБ3+4+-клеток.
Использовали МАТ, меченные различными флуорох-ромами - FITC (флуоресцеина изотиоцианат), PE (фи-коэритрин), APC (алофикоцианин), PerCP-eFluor710 (перидинин-хлорофилл-протеин^1иог710) и PE-Cy7 (фикоэритрин-цианин 7). Использовали следующее сочетание МАТ фирмы «eBioscience» (препараты для изотипи-ческих контролей той же фирмы): CD3-PE-Cy7, CD4-FITC, CD25-PerCP-eFluor710, FOXP3(PCH101)-APC, FOXP3(150D/ E4)-PE. Особенностью данной методики является специфичность МАТ против молекулы FOXP3. МАТ клона PCH101 распознают эпитоп молекулы FOXP3, кодируемый экзо-ном 1, иначе говоря, все изоформы молекулы, а МАТ-клона 150D/E4 - эпитоп, кодируемый экзоном 2, т. е. только молекулы FOXP3-FL и FOXP3A7. При сочетании данных МАТ их
одновременное связывание с клеткой указывает на наличие в клетке целой молекулы РОХР3, а при связывании только МАТ клона РСН101 - на экспрессию в клетке только изоформ, лишённых экзона 2. Алгоритм гейтирования для определения Трег, экспрессирующих различные изоформы молекулы РОХР3, представлен на рис. 1, а,— д-ж. В качестве отрицательного контроля при выставлении гейтов для РОХР3+-клеток использовали субпопуляцию СБ3-клеток, заведомо не экспрессирующую молекулу РОХР3 (см. рис. 1, —а-г).
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием методов непараметрического анализа. Показатели представляли в виде Ме (Ь-И), где Ме - медиана, Ь - нижний квартиль, Н - верхний квартиль. Для сопоставления двух групп по количественным призна-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
лейкоциты лимфоциты CD4+ T-клетки
Рис. 2. Численность клеточных популяций в периферической крови пациентов с МДС (нормализованные по отношению к контрольной группе данные).
кам использовали непараметрический ^-критерий Манна-Уитни. Различие групп считали статистически значимым при p<0,05. Обработку выполняли в программном пакете StatSoft Statistica 7.0.
результаты и обсуждение
Исследованы 55 пациентов с верифицированным диагнозом МДС в соответствии с критериями классификации ВОЗ новообразований кроветворной и лимфоидной тканей от 2008 г. (табл. 1). Из них 14 пациентов с рефрактерной анемией (РА), 3 - с изолированной делецией длинного плеча 5-й хромосомы (5q-), 2 - c рефрактерной анемией с кольцевыми сидеробластами (РАКС), 10 - с рефрактерной цитопенией с мультилинейной дисплазией (РЦМД), 10 - с рефрактерной анемией с избытком бластов 1-го типа (РАИБ-1), 16 - с РАИБ-2. У 32 пациентов отсутствовали изменения кариоти-па, 23 имели следующие хромосомные аномалии: 3 пациента - 5q-, 2 - 7q-, 2 - 20q-, 2 - Y-, 9 - патологию двух хромосом, 5 - более трёх клональных перестроек кариотипа. Согласно системе IPSS, пациенты соответствовали группам низкого риска - 13, промежуточного-1 риска - 14, промежуточного-2 риска - 10, и высокого риска - 18 человек.
Для проведения сравнительного анализа пациенты из групп низкого и промежуточного-1 риска были объединены в группу МДС ранней стадии (Р-МДС), а из группы промежуточного-2 и высокого риска - в группу МДС поздней стадии (П-МДС). Сразу отметим, что все полученные показатели для групп Р-МДС и П-МДС не имели статистически значимых отличий, поэтому далее в тексте достоверность отличий упоминается только в контексте сравнения с группой возрастного контроля.
В обеих исследуемых группах при сравнении с группой возрастного контроля в периферической крови наблюдалось
снижение абсолютного количества лейкоцитов, лимфоцитов и CD4+ Т-клеток (табл. 2), что является характерным признаком МДС. Однако в отличие от имеющихся литературных данных об увеличении численности Трег при определённых формах МДС [3-6], нами зафиксировано более чем двукратное снижение абсолютного количества Трег в обеих группах (табл. 3). К Трег мы относили только клетки с фенотипом CD3+CD4+CD25+FOXP3+. Экспрессия FOXP3 в данном случае определялась по связыванию клеток с МАТ клона PCH101 (рис. 1, е), выявляющим все молекулы FOXP3. Снижение количества Трег было пропорционально уровню лейкопении и несколько более выраженным, чем уровень снижения числа лимфоцитов и всех CD4+ Т-клеток, что наглядно представлено на графике с нормализованными по отношению к контрольной группе данными (рис. 2). Более выраженный уровень снижения численности Трег по сравнению со всеми CD4+ Т-клетками обусловлен уменьшением доли Трег среди CD4+ Т-клеток (табл. 4). При этом снижение процента Трег является статистически достоверным только в группе Р-МДС, что позволяет предположить более высокую вероятность развития аутоиммунных нарушений при МДС именно в группе Р-МДС. В целом же снижение численности Трег при МДС независимо от группы риска отражает общее снижение количества клеток костно-мозгового происхождения на периферии и является признаком нарушения гемопоэза.
Предполагая, что при нарушении лимфопоэза как части гемопоэза может страдать не только количество, но и функция клеток, мы исследовали Трег по уровню экспрессии изо-форм молекулы FOXP3, которые, как мы уже отмечали ранее, обладают разными функциональными свойствами. При этом нами было показано достоверное снижение численности Трег как экспрессирующих полную молекулу FOXP3 (FOXP3-FL Трег), так и экспрессирующих исключительно молекулу FOXP3, лишённую экзона 2 (FOXP3A2 Трег). Данные представлены в табл. 3. Однако снижение количества FOXP3A2 Трег в периферической крови было более выраженным, чем снижение количества FOXP3-FL Трег, что наглядно представлено на графике с нормализованными по отношению к контрольной группе данными (рис. 3), и обусловлено достоверным повышением доли FOXP3-FL Трег (см. табл. 4). Каких-либо отличий по данным показателям между группами Р-МДС и П-МДС нами не выявлено. Основываясь на полученных данных и ранее проведённых исследованиях по изучению функциональных свойств различных изоформ молекулы FOXP3 [12-16], можно предположить, что функциональная активность Трег при МДС ослаблена ввиду по-
Таблица 3
Абсолютное количество регуляторных Т клеток (106 клеток/л) в периферической крови пациентов с МДс и здоровых людей из группы возрастного контроля
Группа Трег FOXP3 FL Трег FOXP3A2 Трег
Доноры 29,8 (23, 3-40,2) 9,9 (7,2-14,6) 18,9 (15,3-25,9)
Р-МДС 13,6 ** (7,9-19,9) 5,2* (2,9-10,5) 7,3** (4,8-11,8)
П-МДС 12,6 ** (8,0-17,3) 5,2** (3,1-7,6) 7,3**(5,0-9,4)
Т а б л и ц а 2
абсолютное количество клеточных популяций (10' клеток/л) в периферической крови пациентов с МДС и здоровых людей из группы возрастного контроля
Группа
Лейкоциты
Лимфоциты
CD4+ Т-клетки
Контроль 6,15 (5,4-7,7) Р-МДС 3,1** (2,0-3,9) П-МДС 2,6** (1,7-3,9)
2,0 (1,7-2,4) 1,2** (0,9-1,5) 1,1* (0,8-2,1)
Примечание. Здесь и в табл. 3, 4: * - p<0,05.
0,8 (0,6-1,0) 0,4** (0,3-0,6) 0,4** (0,2-0,6) ** - p<0,001.
Таблица 4
Относительные показатели Трег периферической крови пациентов с МДС и здоровых людей из группы возрастного контроля (%)
Группа Доля Трег среди CD4+ Т клеток Доля Трег, экспрессирующих FOXP3-FL
Доноры 4,1 (3,4-4,3) 34,3 (25,9-40,0)
Р-МДС 3,1* (1,8-4,7) 44,6** (36,9-54,8)
П-МДС 3,6 (2,8-5,8) 42,4** (30,6-49,8)
ORIGINAL ARTICLE
FOXP3-FL Трег
FOXP3A2 Трег
Рис. 3. Численность Трег в периферической крови пациентов с МДС, экспрессирующих FOXP3-FL иFOXP3Л2 (нормализованные по отношению к контрольной группе данные).
вышения доли FOXP3-FL Трег и снижения РОХР3Л2 Трег.
Косвенно на связь функциональной активности с экспрессией изоформ молекулы FOXP3 указывают показатели экспрессии FOXP3-FL и FOXP3Л2 при дифференцировке тимоцитов [18], при множественной миеломе [19] и при хронических воспалительных заболеваниях кишечника [20]. В этих работах использовали аналогичную методику определения экспрессии изоформ молекулы FOXP3 с применением МАТ-клонов РСН101 и 150Б/Е4.
Так, при дифференцировке в тимусе по мере созревания доля предшественников Трег, экспрессирующих FOXP3-FL, уменьшалась с 65% у дубль-положительных Трег до 33% у сингл-положительных СБ4+ Трег [18], т. е. функциональное созревание Трег в тимусе сопровождалось накоплением FOXP3Л2.
Дальнейшее накопление FOXP3Л2 Трег, возможно, характерно для онкологических заболеваний. Так, у первичных пациентов с множественной миеломой в периферической крови отмечался двукратный рост числа Трег, основной вклад вносили FOXP3Л2 Трег, доля которых достоверно превышала уровень контроля даже в случае достижения ремиссии и нормализации общего количества Трег, что указывало на патогенетическую роль этой изоформы при множественной миеломе [19] и, возможно, на её более выраженную по сравнению с FOXP3-FL функциональную активность.
Обратную ситуацию наблюдали при изучении хронических воспалительных заболеваний кишечника. При исследовании мезентериальных лимфатических узлов кишечника пациентов с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом при общем увеличении количества Трег обнаружено, что все Трег экспрессировали обе изоформы молекулы FOXP3 [20] или, используя терминологию настоящей статьи, можно сказать, что отсутствовали FOXP3Л2 Трег Хотя изначально авторы предполагали, что ТЫ7-поляризация иммунного ответа при хронических воспалительных заболеваниях кишечника может быть обусловлена накоплением FOXP3Л2 Трег ввиду их неспособности связывать RORYt, но, по всей видимости, способность молекулы FOXP3Л2 накапливаться в ядре играет более важную роль при супрессии иммунного ответа, чем неспособность ограничивать экспрессию ГЬ-17.
Таким образом, данные по уровню экспрессии изоформ молекулы FOXP3 настоящего исследования указывают на промежуточное в функциональном отношении положение Трег при МДС между воспалительными (аутоиммунными) заболеваниями и нормой и явно противоположное множественной миеломе. При этом ещё раз отметим, что исследования по
оценке экспрессии изоформ молекулы FOXP3 при хронических заболеваниях кишечника [20] выполнены не на МНПК, а на лимфоцитах мезентериальных лимфатических узлов.
Заканчивая обсуждение полученных результатов, нельзя не затронуть вопрос об имеющемся противоречии наших данных о численности Трег при МДС с ранее полученными данными. Возможно, что помимо различий в протоколах подготовки образцов и алгоритмах гейтирования при цито-метрическом анализе, наше исследование отличалось по способу оценки полученных результатов. Мы не пытались увязать отдельные флуктуации показателей численности Трег, которые у нас также имелись, с прогнозом заболевания, а взяли за основу уже имеющуюся систему оценки IPSS при разделении пациентов на группы и показали общую для всех групп тенденцию к снижению численности и, возможно, функциональному ослаблению Трег Полученные же ранее результаты, несомненно, указывают на неблагоприятный прогноз дальнейшего развития заболевания при повышении численности Трег, однако являются, скорее, частным случаем, а не общей тенденцией, и обусловлены гетерогенностью заболеваний, объединённых под общим названием МДС, и которые зачастую являются вторичными иммунодефицита-ми, обусловленными нарушениями гемопоэза в изменённой костно-мозговой нише. Патогенез и клиника при этом определяются характером развивающейся дисплазии и, как следствие, нарушением тонких взаимодействий между клетками костно-мозгового происхождения, в особенности относящимися к иммунной системе. Вектор этих нарушений определяется тем, какое звено дифференцировки было изначально затронуто. Возможно, что детальное изучение механизмов, лежащих в основе патогенеза МДС, приведёт к вычленению отдельных заболеваний с характерной клиникой и исходом.
Финансирование. Исследование выполнено при финансовой поддержке Селджен Интернешнл Холдингз.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-17, 20 см. REFERENCES)
18. Митин А.Н., Литвина М.М., Шарова Н.И., Селиваненко В.Т., Мартаков М.А., Латышев С.В., Ярилин А.А. Экспрессия фактора FOXP3 и соотношение его изоформ в T-клетках на разных стадиях дифференцировки. Иммунология. 2012; 33(4): 172-6.
19. Митин А.Н., Литвина М.М., Митина Т.А, Голенков А.К., Ярилин А.А. анализ экспрессии молекулы FOXP3 и ее изоформ CD4+ Т-клетками периферической крови при различных формах течения множественной миеломы методом проточной цитоме-трии. Иммунология. 2014; 35(44): 215-9.
REFERENCES
1. Gangat N., Patnaik M.M., Tefferi A. Myelodysplastic syndromes: Contemporary review and how we treat. Am. J. Hematol. 2016; 91(1):76-89.
2. Braun T., Fenaux P. Myelodysplastic Syndromes (MDS) and autoimmune disorders (AD): cause or consequence? Best Pract. Res. Clin. Haematol. 2013; 26(4): 327-36.
3. Kordasti S.Y., Ingram W., Hayden J., Darling D., Barber L., Afzali B. et al.CD4+CD25hJ8h Foxp3+ regulatory T cells in myelodysplastic syndrome (MDS). Blood. 2007; 110 (3): 847-50.
4. Hamdi W., Ogawara H., Handa H., Tsukamoto N., Nojima Y., Murakami H. Clinical significance of regulatory T cells in patients with myelodysplastic syndrome. Eur. J. Haematol. 2009; 82 (3): 201-7.
5. Kotsianidis I., Bouchliou I., Nakou E., Spanoudakis E., Margaritis D., Christophoridou A.V. et al. Kinetics, function and bone marrow trafficking of CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells in myelodysplastic syndromes (MDS). Leukemia. 2009; 23 (3): 510-8.
6. Kahn J.D., Chamuleau M.E., Westers T.M., Van de Ven P.M., van Dreunen L., van Spronsen M. et al. Regulatory T cells and progenitor B cells are independent prognostic predictors in lower risk myelo-dysplastic syndromes. Haematologica. 2015; 100(6): e220-2.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
7. Balaian E., Schuster C., Schonefeldt C., Germing U., Haase D., Tuve S. et al. Selective expansion of regulatory T cells during lenalido-mide treatment of myelodysplastic syndrome with isolated deletion 5q. Ann. Hematol. 2016; 95 (11): 1805-10.
8. Mailloux A.W., Sugimori C., Komrokji R.S., Yang L., Maciejewski J.P., Sekeres M.A. et al. Expansion of effector memory regulatory T cells represents a novel prognostic factor in lower risk myelodysplas-tic syndrome. J. Immunol. 2012; 189(6): 3198-208.
9. Sakaguchi S., Yamaguchi T., Nomura T., Ono M. Regulatory T cells and immune tolerance. Cell. 2008; 133(5): 775-87.
10. Smith E.L., Finney H.M., Nesbitt A.M., Ramsdell F., Robinson M.K. Splice variants of human FOXP3 are functional inhibitors of human CD4+ T-cell activation. Immunology. 2006; 119(2): 203-11.
11. Kaur G., Goodall J.C., Jarvis L.B., Hill Gaston J.S. Characterisation of Foxp3 splice variants in human CD4+ and CD8+ T cells - Identification of Foxp3delta7 in human regulatory T cells. Mol. Immunol. 2010; 48(1-3): 321-32.
12. Chae W.J., Henegariu O., Lee S.K., Bothwell A.L. The mutant leu-cine-zipper domain impairs both dimerization and suppressive function of Foxp3 in T cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006; 103(25): 9631-6.
13. Du J., Huang C., Zhou B., Ziegler S.F. Isoform-specific inhibition of ROR alpha-mediated transcriptional activation by human FOXP3. J. Immunol. 2008; 180(7): 4785-92.
14. Ichiyama K., Yoshida H., Wakabayashi Y., Chinen T., Saeki K. et al. Foxp3 inhibits RORgammat-mediated IL-17A mRNA transcription
through direct interaction with RORgammat. J. Biol. Chem. 2008; 283(25): 17003-8.
15. Mailer R.K., Falk K., Rotzschke O. Absence of leucine zipper in the natural FOXP3Delta2Delta7 isoform does not affect dimerization but abrogates suppressive capacity. PLoS One. 2009; 4(7): e6104.
16. Magg T., Mannert J., Ellwart J.W., Schmid I., Albert M.H. Subcellular localization of FOXP3 in human regulatory and nonregulatory T cells. Eur. J. Immunol. 2012; 42(6): 1627-38.
17. Zheng Y., Josefowicz S.Z., Kas A., Chu T.T., Gavin M.A., Rudensky A.Y. Genome-wide analysis of Foxp3 target genes in developing and mature regulatory T cells. Nature. 2007; 445(7130): 936-40.
18. Mitin A.N., Litvina M.M., Sharova N.I., Selivanenko V.T., Marta-kov M.A., Latyshev S.V. Yarilin A.A. FOXP3 expression and its isoform ratio during T cells differentiation. Immunologiya. 2012; 33(4): 172-6. (in Russian)
19. Mitin A.N., Litvina M.M., Mitina T.A., Golenkov A.K., Yarilin A.A. Flow cytometry analysis of FOXP3 and its isoforms expression by CD4+ T cells from peripheral blood in various forms of multiple myeloma. Immunologiya. 2014; 35(44): 215-9. (in Russian)
20. Lord J.D., Valliant-Saunders K., Hahn H., Thirlby R.C., Ziegler S.F. Paradoxically increased FOXP3+ T cells in IBD do not preferentially express the isoform of FOXP3 lacking exon 2. Dig. Dis. Sci. 2012; 57(11): 2846-55.
Поступила 18.11.17 Принята в печать 16.12.17
ИММУНОПАТОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК: 579.862.1:579.122].083.3
Чекнёв С.Б., Вострова Е.И., Сарычева М.А., Ефремова И.Е., Бабаянц А.А.
БЕЛОК А STAPHYLOCOCCUS AUREUS КАК ФАКТОР, УЧАСТВУЮЩИЙ В ОБМЕНЕ КАТИОНОВ МЕТАЛЛОВ И СПОСОБСТВУЮЩИЙ ФОРМИРОВАНИЮ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ БАКТЕРИЙ
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, 123098, Москва, Россия
Показано, что белок А S.aureus хелатирует катионы металлов и снижает в 1,3 - 1,66 раза (р < 0,001 - 0,05) выработку клетками периферической крови человека интерлейкина-1р (ИЛ-1Р), ИЛ-6, ИЛ-10 и фактора некроза опухоли а, которая индуцируется катионами меди и цинка. Обсуждается способность белка А S.aureus реализовать противовоспалительные свойства и участвовать в формировании благоприятных условий для персистенции бактерий в организме хозяина.
Ключевые слова: белок А S.aureus; обмен металлом; воспаление.
Для цитирования: Чекнёв С.Б., Вострова Е.И., Сарычева М.А., Ефремова И.Е., Бабаянц А.А. Белок А Staphylococcus aureus как фактор, участвующий в обмене катионов металлов и способствующий формированию противовоспалительного микроокружения бактерий. Иммунология. 2018; 39(2-3): 128-133. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-2-3-128-133
Cheknev S.B., Vostrova E.I., Sarycheva M.A., Efremova I.E., Babajanz A.A.
STAPHYLOCOCCUS AUREUS PROTEIN A AS FACTOR INVOLVED IN METAL EXCHANGE AND INDUCING FORMATION OF ANTI-INFLAMMATORY MICROENVIRONMENT OF THE BACTERIA
N.F.Gamaleya National Research Centre for Epidemiology and Microbiology of the Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russia
It has been shown that S.aureus protein A bound metal ions and 1.3-1.66 times (p<0.001-0.05) reduced production by human peripheral blood cells of interleukin-1p (IL-1P), IL-6, IL-10 and tumor necrosis factor а which was induced with copper or zinc ions. S.aureus protein A capability of exerting anti-inflammatory properties and of promoting formation of favorable state for bacterial persistence within the host was discussed.
Для корреспонденции: Чекнёв Сергей Борисович, д-р мед наук, E-mail: cheknev@gamaleya.org.
