CC BY
22
ЗДРАВООХРАНЕНИЕ ЮГРЫ:
опыт и инновации №4 2019
УДК 616.24-006
АНАЛИЗ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ МУТАЦИИ В ГЕНЕ ALK ПРИ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОМ РАКЕ ЛЕГКОГО У ПАЦИЕНТОВ БУ «ОКРУЖНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА» ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА -
ЮГРЫ
Берешкеева Л.В.,
биолог первой категории патологоанатомического отделения БУ «Окружная клиническая больница»
Хадиева Е.Д.,
к.м.н., заведующая патологоанатомическим отделением, врач-патологоанатом высшей категории
БУ «Окружная клиническая больница» Анучина И.В.,
врач-патологоанатом первой категории БУ «Окружная клиническая больница»
Персидский М.А.,
врач-патологоанатом первой категории БУ «Окружная клиническая больница»
Калинникова М.О.,
врач-патологоанатом высшей категории БУ «Окружная клиническая больница»
В статье авторы делятся первым опытом исследования, проведенного в патологоанатомическом отделении БУ «Окружная клиническая больница». Выявлено наличие транслокации в гене ALK у пациентов с аденокарциномой легкого, полученные данные сопоставлены с данными по миру в целом.
Ключевые слова: немелкоклеточный рак легкого, молекулярно-генетическое исследование, иммуногистохимическое исследование
Введение
Киназа анапластической лимфомы (ALK) является трансмембранным рецептором (тиро-зинкиназой), относящимся к суперсемейству инсулиновых рецепторов, и участвует в системе передачи сигналов в клетке. В норме протеин ALK экспрессируется в нервной ткани во время эмбриогенеза и регулирует пролиферацию нейронов. В ткани легкого протеин ALK определяется только в клетках периферической нервной системы. Данная рецепторная тирозинкиназа может приобретать онкогенные свойства вследствие мутации: реарранжировка (парацентрическая инверсия или реципрокная транслокация) гена ALK с соседними генами приводит к экспрессии химерного протеина, который теряет способность подчиняться физиологической регуляции и начинает непрерывно посылать пролиферативные сигналы. Основным партнером ALK (в 95% случаев) при перестройке участка хромосомы является ген EML4, хотя известны другие, более редкие, гены-партнеры, участвующие в транслокации. Установлено, что имеется не менее 9 вариантов химерного гена EML4-ALK.
В настоящее время признано, что транслокация в гене ALK является одним из доказанных механизмов онкогенеза при немелкокле-точном раке легкого (НМРЛ). Частота пере-
стройки ALK при НМРЛ, по разным данным, колеблется от 3 до 13 % в зависимости от исследуемой популяции, что соответствует возникновению ALK-ассоциированных раков легкого примерно у 45000 пациентов в мире в год. Подавляющее большинство реарранжи-ровок ALK обнаружено в образцах опухолей с железистой структурой — аденокарциномах, а не в плоскоклеточном или нейроэндокринном (мелкоклеточном) раке. В основном ALK-поло-жительные опухоли имеют некурящие или малокурящие больные. Важно, что транслокация гена ALK практически никогда не сопровождается мутациями генов EGFR, KRAS или HER2, поэтому ALK-позитивные опухоли считаются самостоятельным подтипом аденокарциномы легкого. Сочетания EML4-ALK с другими мутациями могут отражать гетерогенность опухоли и требуют дальнейших исследований. Основными сигнальными путями, которые участвуют в передаче сигнала, являются каскады PI3K/ ERK и RAS/MAPK, то есть те же, что участвуют в передаче сигнала EGFR.
Клиническая значимость перестроек ALK продемонстрирована различными клиническими исследованиями. Уже разработано несколько новейших препаратов — ингибиторов тиро-зинкиназ (ИТК), которые направлены на «выключение» белков — продуктов гена ALK. Они
РЕГИОНАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
используются для наиболее прицельной (тар-гетной) терапии рака. В связи с этим определение ALK-статуса при НМРЛ было признано принципиально важным для назначения терапии. Рекомендации по определению транслокации ALK имеются как в зарубежных руководствах, таких как NCCN Guidelines Non-small Cell Lung Cancer (Clinical Practice Guidelines in Oncology, v. 3.2016), так и в Клинических рекомендациях Минздрава РФ по раку легкого (с 2017 г.) Тест на наличие этой транслокации показан больным распространенным немелко-клеточным раком легкого с отрицательным статусом мутации в гене EGFR.
Первоначально в клинических испытаниях перестройка ALK исследовалась только методом FISH (флуоресцентная гибридизация in situ). Его можно применять на материале, прошедшем фиксацию в формалине и заливку парафином. Однако данный метод имеет некоторые недостатки. К ним относятся: минимальное разделение сигналов при внутрихромосомных перестройках (что чревато ложноположитель-ными результатами); затухание флуоресцентных сигналов с течением времени (что приводит к невозможности архивирования). Также данный метод требует дорогостоящей системы визуализации флуоресценции для интерпретации результата — флуоресцентного микроскопа.
Недавние исследования подтвердили, что иммуногистохимическое исследование (ИГХ) — это достаточно чувствительный и специфический метод для определения ALK-статуса. Оно является надежной альтернативой FISH, в частности, одобрено FDA. Интерпретация основана на световой микроскопии, которая более удобна для пользователя, а микропрепараты являются архивируемыми — при необходимости их можно просмотреть повторно, а также отправить на консультацию в другие медицинские центры. Уже разработаны ИГХ-тесты с первичными мо-ноклональными антителами к ALK-протеину. Клон D5F3 показал наилучшую чувствительность и специфичность в различных исследованиях, в том числе в системе внешней оценки контроля качества NordiQC (Дания) в 2017 году.
Материалы и методы
Были проанализированы образцы адено-карцином легкого в архивных гистологических блоках у 40 пациентов, находящихся на лечении
в онкологическом центре БУ «Окружная клиническая больница» в 2015-2018 годах. Выборка по полу, возрасту, статусу курения и наличию мутации в гене EGFR не производилась. После анализа обзорной гистологической окраски (гематоксилин-эозин) препараты подвергались иммуногистохимическому исследованию. Использовались антитела к ALK клона D5F3, система детекции продуктов окрашивания OptiView DAB IHC Detection Kit и набор для амплификации сигнала OptiView Amplification Kit. Процедура окрашивания выполнялась на автоматическом иммуногистохимическом стейнере Ventana BenchMark GX. Полученные препараты оценивались врачами-патологоанатомами по бинарной системе оценки результатов реакции: «позитивный» или «негативный» ALK-статус опухоли. Образцы, имеющие яркое гранулярное цитоплазматическое иммунное окрашивание опухолевых клеток (любая доля клеток), расценивались как «позитивные», отсутствие такового окрашивания расценивалось как «негативный» ALK-статус.
Результаты исследования
Нами было выяснено, что из обследуемой группы пациентов (n=40) 37 пациентов (92,5%) имеют «негативный» ALK-статус; 3 пациента (7,5%) имеют «позитивный» ALK-статус.
Выводы
Таким образом, частота встречаемости мутации в гене ALK при немелкоклеточном раке легкого у пациентов БУ «Окружная клиническая больница» ХМАО-Югры, по предварительным данным, составляет 7,5%. Для более тщательного анализа необходима большая выборка и дальнейшее исследование данной категории пациентов. В ближайшей перспективе планируется внедрение данного теста в повседневную практику для всех пациентов с аденокарцино-мами легкого, что позволит нуждающимся пациентам с перестройкой в гене ALK получать соответствующую таргетную терапию.
Литература
1. Демидова, И.А., Цепенщикова, Е.О., Баринов, А.А. и др. Определение перестроек гена ALK в селектированной популяции российских больных немелкоклеточным раком легкого // Злокачественные опухоли. — 2013. — №3. — С. 3-9.
2. Имянитов, Е.Н. Современные возможности тар-гетной терапии немелкоклеточного рака легких // Вестник московского онкологического общества. - 2013. - №11 (602). - С. 3-6.
3. Клинические рекомендации Минздрава РФ по раку легкого http://www.oncology.ru/association/ clinical-guidelines/2018/rak_legkogo_pr2018.pdf.
4. Программа RUSSCO «Совершенствование мо-лекулярно-генетической диагностики в Российской Федерации». Практическое руководство для врачей. www.cancergenome.ru.
5. Just, P-A, Cazes, A, Audebourg, A, et al. Histologic subtypes, immunohistochemistry, FISH or molecular screening for the accurate diagnosis of ALK-rearrangement in lung cancer: A comprehensive study of Caucasian non-smokers. Lung Cancer 2011, 76 (3) : 309-315.
6. Lindeman, LI, Gagle, PT, Beasley, MB et al. Molecular Testing Guideline for Selection of Lung Cancer Patients for EGFR and ALK Tyrosine Kinase Inhibitors. Guideline from the College of American Pathologists, International Association for the Study of Lung Cancer, and Association for Molecular Pathology. Arch Pathol Lab Med. 2013; 137 (6):828-60.
_ЗДРАВООХРАНЕНИЕ ЮГРЫ:
опыт и инновации №4 2019
7. Paik, HJ, Choi, CM, Kim, H et al. Screening of Anaplastic Lymphoma Kinase Rearrangement by Immunohistochemistry in Non-small Cell Lung Cancer. J Thor Oncol 2011; 6 (3) 266-472.
8. Sasaki, T, Rodig, SJ, Chirieac, LR, Janne, PA. The biology and treatment of EML4-ALK non-small cell lung cancer. Eur J Cancer 2010; 46:1773-1780.
9. Soda, M., Choi, Y.L., Enomoto, M., Takada, S., Yamashita, Y., Ishikawa, S. et al. Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer. Nature, 2007; 448(7153): 561-566.
10.Thunnissen, E, Bubbendorf, L, Dietel, M et al. EML4-ALK testing in non-small cell carcinomas of the lung: a review with recommendations. Virchows Arch. 2012;461 (3):245-257.
11.Webb, T.R., Slavish, J., George, R.E., Look, A.T., Xue, L., Jiang, Q. et al. Anaplastic lymphoma kinase: role in cancer pathogenesis and small-molecule inhibitor development for therapy. Expert Rev. Anticancer Ther. 2009; 9(3): 331-56.
12.Международные рекомендации NCCN Guidelines https://www2.tri-kobe.org/nccn/guideline/lung/ english/non_small.pdf.
© Берешкеева Л.В., Хадиева Е.Д., Анучина И.В., Персидский М.А., Калинникова М.О., 2019
УДК 616.24-002
ПРОЯВЛЕНИЕ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ТЕРРИТОРИАЛЬНОЙ (ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ) ПНЕВМОНИЕЙ СРЕДИ ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ Г. НЯГАНИ В ПЕРИОД 2014 - 2018 ГГ.
Шишигина Е.Л.,
врач - эпидемиолог БУ «Няганская городская детская поликлиника»
Внебольничная пневмония относится к числу наиболее распространённых острых инфекционных заболеваний и является актуальной проблемой современной медицины. По данным эпидемиологических исследований, показатель заболеваемости пневмонией колеблется в широком диапазоне и в среднем составляет 4,7-15 на 1000 человек. Установлено, что из 1000 детей ежегодно болеют пневмонией 5-8 человек.
Ключевые слова: внебольничная пневмония, вакцинация, пневмококковая инфекция
Пневмония является важнейшей отдельно взятой инфекционной причиной смертности детей во всем мире. В 2018 году от пневмонии умерло 808 694 детей в возрасте до 5 лет, что составляет 15% всех случаев смерти детей в возрасте до 5 лет во всем мире. При этом следует учитывать, что далеко не все случаи пневмонии попадают в официальную отчётность. Несмотря на совершенствующиеся методы
диагностики и лечения, смертность населения от пневмонии увеличивается. По оценке ВОЗ, она вызывает 1,2 млн смертей в год, более 40% смертей детей 0-5 лет. Между тем, многие вопросы эпидемиологии внебольничной пневмонии остаются недостаточно изученными, что препятствует организации качественного эпидемиологического надзора и контроля за этим заболеванием.
