Научная статья на тему 'Аналитические и клинические аспекты определения цистатина с в моче беременных'

Аналитические и клинические аспекты определения цистатина с в моче беременных Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

CC BY
125
80
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЦИСТАТИН С / БЕРЕМЕННОСТЬ / ПРЕЭКЛАМПСИЯ / ТУБУЛЯРНОЕ ПОВРЕЖДЕНИЕ ПОЧЕК / CYSTATIN C / PREGNANCY / PREECLAMPSIA / RENAL TUBULAR INJURY

Аннотация научной статьи по прочим медицинским наукам, автор научной работы — Трифонова Александра Николаевна, Островский О.В., Веровский В.Е., Карева А.А.

Рассчитаны аналитические характеристики иммунотурбидиметрического метода определения концентрации цистатина С в моче: предел обнаружения, предел количественного определения. Установлены границы референтного интервала концентрации цистатина С в моче беременных, равные 0,17-0,25 мг/л.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по прочим медицинским наукам , автор научной работы — Трифонова Александра Николаевна, Островский О.В., Веровский В.Е., Карева А.А.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

ANALYTICAL AND CLINICAL ASPECTS OF MEASURING URINARY CYSTATIN C LEVELS IN PREGNANT WOMEN

We assessed analytical characteristics of immunoturbidimetric determination of cystatin C levels in urine including the detection limit (LoD) and the limit of quantitation (LoQ). We have established the reference values for urinary cystatin C levels which are 0,17-0,25 mg/l.

Текст научной работы на тему «Аналитические и клинические аспекты определения цистатина с в моче беременных»

^^(gCT^rufa fedfW ^^

УДК 616.8-009.24

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИСТАТИНА С

В МОЧЕ БЕРЕМЕННЫХ

А. Н. Трифонова, О. В. Островский, В. Е. Веровский, А А. Карева

Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра клинической лабораторной диагностики, теоретической биохимии с курсом клинической биохимии

Рассчитаны аналитические характеристики иммунотурбидиметрического метода определения концентрации цистатина С в моче: предел обнаружения, предел количественного определения. Установлены границы референтного интервала концентрации цистатина С в моче беременных, равные 0,17—0,25 мг/л.

Ключевые слова: цистатин С, беременность, преэклампсия, тубулярное повреждение почек.

ANALYTICAL AND CLINICAL ASPECTS OF MEASURING URINARY CYSTATIN C

LEVELS IN PREGNANT WOMEN

A. N. Trifonova, O. V. Ostrovskiy, V. E. Verovskiy, A. A. Kareva

We assessed analytical characteristics of immunoturbidimetric determination of cystatin C levels in urine including the detection limit (LoD) and the limit of quantitation (LoQ). We have established the reference values for urinary cystatin C levels which are 0,17—0,25 mg/l.

Key words: cystatin C, pregnancy, preeclampsia, renal tubular injury.

Беременность, осложненная преэклампсией, приводит к увеличению как материнской, так и неонаталь-ной заболеваемости и смертности. Клинические проявления болезни чрезвычайно многообразны, протекать она может неделями до того как будет установлен диагноз. Существующие методы ранней диагностики риска развития заболевания (на сроке 11—14 недель) далеки от совершенства [4], в то время как своевременно не распознанный риск вносит в материнскую смертность значительную долю из-за не соответствующего клиническому случаю лечения.

В настоящее время определение содержания цистатина С в сыворотке (или плазме) крови признано как ценный подтверждающий тест при хронических заболеваниях почек [1, 2, 5]. Повышение уровня этого белка в сыворотке крови отмечается также при беременности (с особенностями при преэклампсии во 2—3 триместрах [6]). Однако данные о возможности использования этого маркера для ранней диагностики преэклампсии достаточно неоднозначны [8].

В норме, цистатин С практически полностью разлагается в почках после фильтрации и в моче содержится лишь в незначительных количествах (~0,1 мг/л), так же как и при гломерулярной дисфункции, в то время как при тубулярной дисфункции его содержание в моче может повышаться до (4,31 ± 3,85) мг/л. Однако данные о клинической значимости этого показателя также весьма неоднозначны [7, 9].

При определении цистатина С могут быть использованы 2 иммунохимических метода: турбидиметричес-кий (анализ проводится на обычных клинических биохимических анализаторах) и, более точный, нефеломет-рический (необходимо специальное оборудование) [10].

Это, наряду с высокой биологической вариабельностью показателя и асимметрией его распределения, вызывает также вопрос о значении диагностического порога при использовании того или иного способа определения цистатина С в моче.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Расчет аналитических характеристик иммунотур-бидиметрического метода определения концентрации цистатина С и исследование его содержание в моче беременных.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение концентрации цистатина С в моче иммунотурбидиметрическим методом [10] проводили с использованием коммерческого набора фирмы «DiaSys» для сыворотки крови. Измерения проводили через 1 сутки после калибровки прибора «Sapphire 400» (Hirose Electronic Systems, Japan). Для определения предела обнаружения согласно ГОСТ-Р-ИСО-11843-2-2007 (ПО1) использовали 6 разведений калибровочного раствора цистатина С («DiaSys») физиологическим раствором (I = 6, в диапазоне концентраций от 0,05 до 0,45 мг/л) в 5 приготовлениях (J = 5). При исследовании влияния матрицы калибровочный раствор разводили нативной или депротеинизированнй мочой. Депротеи-низированную мочу получали путем центрифугирования нативной мочи в пробирках «Vivaspin 15R 5000 MWCO» (Vivascience AG).

Для определения предела обнаружения согласно ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 (соответствует рекомендациям IFCC) в качестве «малых концентраций» использовали концентрации аналита 0,05 мг/л (ПО2) и 0,1 мг/л (ПОз). Все измерения проводились дважды (L и K = 2).

Определение содержания цистатина C проводили в утренней порции мочи беременных, полученных МУЗ «Женская консультация №1» г. Волгограда в течение 2 календарных недель при первом или плановом обращении. Характер течения беременности был прослежен в 60 случаях. Из них: 15 беременных I триместра (в последующем — преэклампсия у 3, без особенностей — 11); 24 беременных II триместра (в последующем — преэклампсия у 1, без особенностей — 21); 21 беременная III триместра (1 с диагнозом преэклампсия, без особенностей — 9). К анализу привлекались только результаты, полученные при первом обращении беременной в женскую консультацию в данном триместре.

Для определения параметров уравнения линейной регрессии и параметров распределения беременных по уровню цистатина C в моче (медиана, 2,5%, 25%, 75%, 97,5% квантили) использовали функции программы Excel.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Аналитические характеристики метода. Результаты исследования функции отклика метода приведены в табл. Поскольку коэффициент детерминации (R2) превышал 0,97, то для расчета предела обнаружения вполне применим метод ГОСТ-Р-ИСО-11843-2-2007 (ПО1). Результаты расчетов предела обнаружения по ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 (ПО2 и ПО3, табл.) для матриц, свободных от аналита, близки значениям ПО1.

Вместе с тем, значения, полученные при использовании в качестве матрицы нативной мочи, значительно выше. То есть, корректный расчет предела обнаружения по ГОСТ-Р-ИСО-11843-3-2007 возможен только тогда, когда возможно получить матрицу, свободную от аналита. Полученные оценки предела обнаружения для турбидиметрического метода (ПО1, табл.), в том числе для случая депротеинизированной мочи, были кратно больше значений, установленных для нефелометричес-кого метода (0,008 мг/л). Далее, в качестве порога обнаружения, использовали максимальное значение ПО1, полученное в условиях разведения калибратора нативной мочой (0,065 мг/л).

Анализ зависимости смещения измеренного значения показателя от приготовленного (В% = 100 * (С - С ) / С ) и коэффициента

v измеренная приготовленная' приготовленная' ~ ~ ~

вариации (КВ) от концентрации (рис. 1) показал, что при

концентрациях аналита 0,1 мг/л и выше В % не превосходит 5 %, а КВ % —15 %. Судя по характеру зависимости (рис. 1), значения КВ % становятся меньше 10 %, начиная с концентраций аналита ~ 0,17 мг/л, вне зависимости от типа матрицы.

35302520 1510 50-5-

Матрица Физиологический раствор -*-КВ% Депротеинизированная моча - О- КВ% 1 1 - В%

о

1 \ К

О Ч

р

Г 1

L] [ 3 '

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 Приготовленная концентрация, мг/л

Рис. 1. Зависимость смещения и коэффициента вариации метода от концентрации цистатина С

Исследование содержания цистатина С в моче беременных. Результаты измерения концентрации цистатина С в утренней порции мочи беременных женщин приведены на рис. 2.

Рис. 2. Распределение беременных по уровню цистатина С в моче с учетом диагноза в амбулаторной карте и триместра беременности. Особенности отдельных клинических случаев: А — анемия; П — пиелонефрит; Г — гломерулонефрит; "беременная без особенностей в анамнезе с повышенным уровнем цистатина С

Параметры зависимости Ю = a + Ь * С ) и пределы обнаружения (мг/л)

г г * измеренная приготовленная' г ^1 г* у '

иммунотурбидиметрического метода определения цистатина C в моче*

Матрица a (M ± m) b (M ± m) ПО1 ПО2 ПОэ

0,9% NaCl 0,005 ± 0,004 0,975 ± 0,016 0,036 0,043 0,044

Депротеинизированная моча 0,005 ± 0,004 1,00 ± 0,02 0,040 0,049 0,041

Нативная моча** 0,096 ± 0,007 0,979 ± 0,03 0,065 0,28 0,29

*R2 > 0,97 для всех 3 матриц;

"измеренный уровень аналита в образце, использованном для разведения калибратора (М ± т), (0,14 ± 0,01) мг/л.

^^^^ 122

Выпуск 4 (60). 2016

I^mpfö ©©СаГГГМЩ

Отметим, что при использованном нами сочетании оборудования и реагентов в 36 случаях (60 %) результат измерения оказался ниже установленного предела обнаружения. Однако параметры распределения для женщин без особенностей в течение беременности оказались близки к параметрам контрольных групп, полученным в других исследованиях [3, 9].

В противовес характеру динамики цистатина С в плазме или сыворотке крови, где рост содержания этого белка повышается во 2 и 3 триместрах, более высокие значения показателя были получены для мочи беременных 1 триместра. Несколько повышенные (выше 0,25 мг/мл) уровни белка были обнаружены только в 2 случаях: 1 — у беременной с диагнозом «пиелонефрит» и 1 — у беременной 3 триместра без особенностей в диагнозе. В целом же, уровень белка у женщин с преэклампсией и гломерулярным пиелонефритом находился в пределах, характерных для женщин с нормальным течением беременности (рис. 2). Это наблюдение полностью согласуется с данными литературы [3], где преэклампсия даже в тяжелых случаях (интерквартильный размах альбумина составлял 151—1164 мкг/мг креатинина) сопровождалась лишь незначительным статистически не достоверным повышением цистатина С в моче.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенной работы было установлено, что для беременных характерно увеличение содержания цистатина С в моче в 1 триместре. Получен референтный интервал цистатина С в моче для беременных, равный 0,17—0,25 мг/л. Следует отметить, что выдвинутая гипотеза о повышении уровня цистатина С в моче беременных с преэклампсией не оправдалась.

Нами не были найдены диагностически значимые различия по содержанию цистатина С мочи в группах беременных, следовательно, он не может быть использован в качестве маркера для ранней диагностики тубу-лопатий при преэклампсии.

ЛИТЕРАТУРА

1. Вельков В. В. // Лабораторная диагностика. — 2010. — № 4. — С. 54.

2. Каюков И. Г., Смирнов А. В. и др. // Нефрология. —

2012. — Т. 16, № 1. — С. 22—39.

3. Burwick R. M., Easter S. R., Dawood H. Y., et al. // Hypertension. — 2014. — Vol. 64. — P. 833—838.

4. Duhig K. E, Shennan A. H. // F1000Prime Reports. — 2015. — Vol. 10. — P.7—24.

5. Inker L. A., Schmid C. H., Tighiouart H., et al. // N. Engl. J. Med. — 2012. — Vol. 367(1). — P.20—29.

6. Farag M. K., Ragab H. M., Khaled R., et al. // Journal of Genetic Engineering and Biotechnology. — 2011. — Vol. 9. — P. 133—136.

7. Sang S. K., Sang H. S., In J. K., et al. // Diabetes Care. —

2013. — Vol. 36. — P. 656—661.

8. Kristensen K., Strevens H., Lindstrom V., et al. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. — 2008. — Vol. 68(7). — P.649—653.

9. Park M. Y., Choi S. J., Kim J. K., et al. // Nephrology. — 2013. — Vol. 18(4). — P.256—262.

10. Ristiniemi N., Savage C., Bruun L., et al. // Nephrol. Dial. Transplant. — 2012. — Vol.27. — P. 682—687.

Контактная информация

Трифонова Александра Николаевна — ассистент кафедры клинической лабораторной диагностики, Волгоградский государственный медицинский университет, e-mail: Aleksandra-ok@rambler.ru

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.