CC BY
48
УДК 615.076.9:615.919
АНАЛЬГЕЗИРУЮЩЕЕ ВЛИЯНИЕ ЯДА ГЮРЗЫ MACROVIPERA LEBETINA, НА КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ ПЕРИТОНИТОМ В ТЕСТЕ «КОРЧЕЙ»
Кульбекова Ю.Е., Кульбеков Е. Ф.
Пятигорский медико-фармацевтический институт, г. Пятигорск, Российская Федерация.
Аннотация: Исследовали резорбтивное влияние нативных и гретых ядов гюрзы среднеазиатской подвид кавказская (Macrovipera lebetina). У крыс была создана модель экспериментального асептического перитонита (0,75% раствор уксусной кислоты). Были регистрированы спазмы мышц живота (корчи - количество в течение 15 минут). Установлено, что нативный яд при внутримышечном введении в концентрациях 1/20 LD50 и 1/50 LD50 оказывает выраженное анальгетическое воздействие. Нагревание яда до 55оС в тех же концентрациях приводило к исчезновению у них анальгезирующего действия. Ключевые слова: модель in vivo, яд гюрзы (Macrovipera lebetina), анальгетическая активность.
Яды змей и, в частности, гюрзы среднеазиатской (Macrovipera 1еЬейпа) подвид кавказский давно используется в практической медицине. Широкое применение имеют препараты местного действия (випросал). Яды змей используют при иммунизации животных для получения противоядий (антикобра, антигюрза). Значительный интерес представляет исследование специфического резорбтивного действия яда змей, выращенных в условиях серпентария. Такое действие после парентерального введения яда изучено не достаточно глубоко и обещает интересные перспективы.
Целью нашего исследования была попытка выявления специфического резорбтивного действия яда гюрзы у крыс с моделированным воспалительным процессом брюшной полости. Конкретными задачами исследования были выявления оптимальных доз и условий использования яда. Основная гипотеза исследования заключается в предположении, что небольшие концентрации нативного и гретого яда будут оказывать резорбтивное анальгетическое действие, при этом у гретых ядов будет устранена провоспалительная активность.
Методы и конкретные условия исследования.
Исследование проводили на крысах линии Вистар обоего пола массой 200-250 г.
Моделирование раздражения брюшины проводили путём внутрибрюшинного введения раздражающего агента 0,75% раствора уксусной кислоты (0,1 мл на 10 г массы животного) [1]. Данный метод можно использовать как модель экспериментального перитонита. В результате у животного возникали перитовисцераль-ные боли и сокращения абдоминальной мускулатуры -корчи. Количество корчей подсчитывали в течение 15 минут после введения уксусной кислоты [2].
Дозу яда подбирали исходя из проведенного по стандартной методике определения летальной дозы для 50% животных - LD50 (острая токсичность LD50 на-тивного яда = 2,2 мг/кг, острая токсичность LD50 гретого яда = 20,6 мг/кг).
Гретый яд получали путем 30 минутного выдерживания на водяной бане при 55оС колбы с ядом, растворенным в физрастворе. Смысл нагревания заключался в предположении о денатурации провосполительных ферментов змеиного яда и термостабильности его анальгезирующих компонентов.
Животных разделили на 6 групп по 7 учётных особей в каждой.
Каждой группе за 15 минут до введения уксусной кислоты вводили в заднюю поверхность бедра внутримышечно 0,1 мл ниженазванных веществ.
1 группа - животные, получавшие физраствор (0,9% №СТ).
2 группа - животные, получавшие диклофенак 5 мг на кг массы.
3 группа - животные, получавшие нативный яд в дозе 1/20 LD50.
4 группа - животные, получавшие нативный яд в дозе 1/50 LD50.
5 группа - животные, получавшие гретый яд 1/20 LD50.
6 группа - животные, получавшие гретый яд 1/50 LD50.
Затем наблюдали и подсчитывали число корчей в течение следующих 15 минут.
Результаты исследования подвергли статистической обработке, исключив из каждой группы 2 крысы
—--—
Журнал включен в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК
с минимальным и максимальным числом корчей за 15 минут.
Выраженных патологических реакций и заметных морфологических изменений в местах инъекций на-тивных и гретых ядов в выбранных концентрациях не
наблюдали. Результаты исследования и стандартной статистической обработки по ^критерию Стьюдента для несвязанных выборок представлены в таблице 1 и на рисунке 1.
Таблица 1
Количество корчей (специфических сокращений абдоминальной мускулатуры) крыс за 15 минут.
Группы крыс
Статистические показатели Физраствор Диклофенак 5 мг/кг Нативный яд 1/20 LD50 Нативный яд 1/50 LD50 Гретый яд 1/20 LD50 Гретый яд 1/50 LD50
1 2 3 4 5 6
М Среднее арифметическое: 49,4 17,4 17,8 21,2 48,4 49,4
Суммы квадратов отклонений 17,2 13,2 6,8 38,2 23,2 5,2
а среднее квадратическое отклонение 2,07 1,82 1,3 3,09 2,41 1,14
т ошибка репрезентативности 0,93 0,83 0,58 1,38 1,08 0,51
доверительные границы средних арифметических М±Ш 17,2± 2,60 17,4± 2,32 17,8± 1,62 21,2± 3,86 48,4± 3,02 49,4± 1,43
^критическое 2,8
t критерий стьюдента по физраствору ^критическое 2,8 - 26 29 16.9 0,7 0
Физраствор Диклофенак Нативный ад Нативный яд Гретыйяд Гретый ад Бмг/кг 1/201Л550 1/Б01_050 1/201_ОБО 1/501_ОБО
Рис. 1. Средние арифметические количества корчей за 15 минут и их доверительные границы М±1т в группах крыс с моделью экспериментального перитонита
Из таблицы 1 и рисунка 1 видно, что статистически достоверные отличия от контрольной группы имеются в группах получавших диклофенак и нативные яды. Гретые яды по своему действию на количество корчей за 15 минут практически не отличались от контрольной группы.
Полученные результаты свидетельствуют о наличии у нативного яда гюрзы, использованного в концентрациях 1/20 LD5o и 1/50 LD5o выраженного обезболивающего действия. Критериям эффективности при скрининге НПВС считается снижение болевой реакции не менее чем на 50% [3]. Для нативного яда в концентрации 1/20 от LD50. этот показатель составлял
69%, а в концентрации в концентрации 1/50 от LD50 -57%.
Максимальным анальгезирующим действием обладает нативный яд в концентрации 1/20 LD50 (3 группа). Снижение концентрации яда до 1/50 от LD50 (4 группа) достоверно в сравнении с 3 группой 0=4,1) снижало противоболевое действие, повышая регистрируемое число корчей. Количество корчей самопроизвольно снижается во времени, что не позволило оценить длительность действия нативных ядов как анальгетиков. После нагревания яд практически полностью теряет свою анальгезирующую активность при резорбтивном действии.
Данные обстоятельства позволяют предположить, что в сложном природном объекте - яде имеются термолабильные компоненты, обладающие выраженной обезболивающей активностью. Механизм анальгезирующего действия этих компонентов может быть аналогичным механизму действия диклофенака и опосредована опиоидными рецепторами, о чем свидетельствует то, что этот эффект блокируется налоксо-ном [4]. Не исключено опосредованное иммунной системой противовоспалительное действие низких концентраций яда, аналогичное действию тималина [5].
Выводы. Нативный яд гюрзы среднеазиатской (Macrovipera 1еЬейпа) подвид кавказский, при резорб-тивном действии в концентрациях 1/20 LD50 и 1/50
LD5o оказывает выраженное анальгетическое воздействие на крыс сопоставимое с действием диклофенака при моделировании экспериментального перитонита.
Попытка снижения раздражающего
провоспалительного эффекта путем нагревания ядов приводит к исчезновению обозболивающего эффекта.
Изучение резорбтивного действия змеиного яда представляет перспективное направление современной фармакологии, но требует тщательного подбора доз и способов обработки нативных ядов для устранения нежелательных в конкретной патологии эффектов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бондаренко, Д.А., In vivo модели для изучения аналь-гетической активности / Д.А. Бондаренко, И.А. Дьяченко, Д.И. Скобцов, А.Н. Мурашев // Биомедицина. 2011. - № 2.-С. 84-94.
2. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с.
3. Шварц Г. Л. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: методические указания по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов / Г.Л. Шварц, Р.Д. Сюбаев. М., - 2000 г. - 236 с.
4. Bjorkman R.L., Hedner T., Hallman K.M. et al. (1992) Localization of the central antinociceptive effects of diclofenac in the rat. Brain. Res., 590: 66-73.
5. Кульбеков, Е.Ф. Гепатопротекторное действие тималина и суспензии красного костного мозга при экспериментальном токсическом гепатите у мышей / Е.Ф. Кульбеков, Ю.Е. Кульбекова, Р.С. Данилов // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 3. - Режим доступа: www.science-education.ru/103-6388.
VENOM OF THE MACROVIPERA LEBETINA HAS ANALGESIC RESORPTIVE EFFECT IN RATS WITH EXPERIMENTAL PERITONITIS IN THE WRITHING TEST
Kulbekova U.E., Kulbekov E.F.
Рyatigorsk Medical Pharmaceutical Institute of Volgograd Medical State University of the Ministry of Health Care of Russia
Annotation: In rats investigated the resorptive effect of natural and heated venoms Viper Central Asian subspecies of the Caucasian (Macrovipera lebetina). In the rat was established model of aseptic experimental peritonitis (0.75% acetic acid solution). Were registered spasms of abdominal muscles (the "writhes" - number of for 15 minutes). It was establishes that natural snake venom after intramuscular injection in concentrations 1/20 from LD50 and 1/50 from LD50 has a pronounced analgesic effect. If the snake venoms in the same concentration were been subjected to heating to 55°C, they lost analgesic effect.
Key words: poison of a viper Central Asian (Macrovipera lebetina), in vivo models, resorptive effect, analgesic activity.
REFERENCES
1. In vivo models of studying of analgetic activity D.A. Bondarenko, I.A. Dyachenko, D.I. Skobtsov, A.N. Murashev, Bi-omedicine № 2, 2011, 84-94.
2. Rukovodstvo po provedeniju doklinicheskih issledovanij lekarstvennyh sredstv. Chast' pervaja / Pod red. A.N. Mironova. — M.: Grif i K, 2012. — 944 s.
3. Shvarc G.L. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (dok-linicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv: metodicheskie ukazanija po izucheniju novyh nesteroidnyh pro-tivovospalitel'nyh preparatov / G.L. Shvarc, R.D. Sjubaev. M., -2000 g. - 236 s.
4. Bjorkman R.L., Hedner T., Hallman K.M. et al. (1992) Localization of the central antinociceptive effects of diclofenac in the rat. Brain. Res., 590: 66-73
5. Kul'bekov, E.F. Gepatoprotektornoe dejstvie timalina i suspenzii krasnogo kostnogo mozga pri jeksperimental'nom toksicheskom gepatite u myshej / E.F. Kul'bekov, Ju.E. Kul'bekova, R.S. Danilov // Sovremennye problemy nauki i obra-zovanija. - 2012. - № 3. - Rezhim dostupa: www.science-educa-tion.ru/103-6388.
