Альтерация mek-ir и Dyn-IR под воздействием электроакупунктуры Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ - 2005 - Т. ХП, № 2 - С. 86

В.Н. Дармограй, Ю.В. Карасева, В.Н.Морозов и др.

Литература

1. Wu J.,Deng Y.//Zheng Henan Med Univ Press.- 1997.-Р. 56.

2. Zheng N. et al. // J. Henan. Med. Univ.- 1997.- № 3.- P.118.

3. Wu J. // Acup Res.- 1983.- Vol. 2.- Р. 81-83.

4. ShiX., et al. // J. Henan. Med. Univ.- № 3.- Р. 236-238.

5. Ding Y. et al. // J. Henan Med. Univ.- 1994.- № 1.- Р.27-29.

6. Guo H.F. et al. // Neurosci. Lett.- 1996.- № 3.- Р. 163-166.

7. Martin J. et al. // J Neuroscience Res.- 1987.- № 1.- Р. 82.

8. Weisinger G. et al. // J. Biol. Chem.- 1992.- № 7.- Р. 4508.

УДК 615.84

АЛЬТЕРАЦИЯ MEK-IR И Dyn-IR ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ЭЛЕКТРОАКУПУНКТУРЫ

А . С . ЦОГОЕВ *

Эффект электроакупунктуры (ЭА) на MEK-IR и Dyn-IR в спинном мозге мыши и перитонеальных макрофагах изучали путем NADPT/NBT гистохимического анализа, РНК дот блот-тинга и situ гибридизации. Рост MEK-IR в макрофагах меньше, чем Dyn-IR. Альтерация МЕК и Dyn в спинном мозге и макрофагах при ЭА показывает влияние на нейроиммуномодуляцию.

20 BALB/С мышам (20-22 г) перитонеально ввели 1,0 мл стерильного 4% крахмала в нормальном физрастворе; после 48 ч их наблюдали в условиях фиксации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: основную группу (ОГ) с ЭА (1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки Цзусаньли за 15 мин., и контроль (КГ) без ЭА. Порог болевой чувствительности изучали до и после ЭА или фиксации путем К+-ионофореза. Для сбора перитонеальных макрофагов мышам ввели 1,0 мл физраствора перитонеально.

Спинной мозг, включая шейный и люмбальный отделы, был выделен и заморожен при -20°С, смешан с 0,1 мл физраствора, как тканевым гомогенизатором, затем суспензия спинного мозга была центрифугирована со скоростью 5000 об/мин при 4°С в течение 20 мин. 10 мкл супернатанта спинного мозга или суспензии макрофагов с концентрацией 1х105 клетки/мл были блот-тингированы на нитроцеллюлозную мембрану (NCM). Два вида высохших дот проб, один дот для каждого животного, инкубировались с поликлональными анти-МЕК (INC) и анти-Dyn (INC) сыворотками (1:1000 - свежее разведение) в течение ночи при температуре 4°С следом за инкубацией со вторым антителом (HRP-меченным стафилококковым протеином А), 1:40 свежеприготовленным раствором при 37°С 60 мин; DAB и Н2О2 были использованы как субстрат для получения цвета. Физраствор применяли для антител как негативный контроль. Протеин дот блоттинг техника - по [1, 2]. Дот блот сигналы сканированы 528 нм волнами на Shimadu TLC и статистически обработаны.

У особей № 1-3, 5, 10 был более выраженный анальгетиче-ский эффект. Уровень болевого порога поднялся в ОГ 0,38±0,04, (р<0.01), в КГ - 0.02±0.03(р>0.05) (табл.). Величина оптической плотности (OD) протеин дот блоттинга MEK-IR спинного мозга в ОГ была 33,41±3,52, что ниже, чем в КГ - 68.83±7.98, (р<0,01), негативно коррелируя с анальгетическим эффектом (р<0,05). OD протеин дот блоттинга Dyn-IR спинного мозга в ОГ (37,75±3,54) также была ниже, чем в КГ (65,46±4,42, р<0,05), негативно коррелируя с анальгетическим эффектом (г=-0,60, р<0,05). Разница спинальной MEK-IR в ОГ и КГ была 3,52±0,81, спинальной Dyn-IR - 3,38±0,95 (р<0,0005). Величина OD MEK-IR макрофагов в ОГ равна 65,93±8,81, в КГ - 35,12±5,52 (р<0,025), позитивно коррелируя с анальгетическим эффектом, г=0,.66, р<0,025. OD Dyn-IR макрофагов в ОГ - 10,38±1Д3, в КГ - 9,33±2,21 (р<0,005), позитивно коррелируя с анальгетическим эффектом (г=0,62, р<0,025). Разница MEK-IR макрофагов в КГ и ЭГ была 0,31±0,10, Dyn-IR макрофагов - 1,28±0,46 (р<0,025). Протеин дот блоттинг поддерживает натуральные свойства протеина за счет отсутствия

влияния фиксации и воздействия парафина в процессе подготовки образцов. Протеин дот блоттинг сигналы могут быть легко определены тонкослойным хромотографическим сканером и статистически проанализированы. Известно, что irMEK в спинномозговой жидкости пациентов возрастал на 36,7% после 2 Гц чрезкожной стимуляции, a irDyn повышался на 49% после 100 Гц воздействия. Генная экспрессия препроэнкефалина (ppENK) может быть стимулирована током частотой 2 Гц и 100 Гц; и что экспрессия протоонкогена c-fos в различных отделах головного мозга крыс может быть вызвана или 2 Гц или 100 Гц воздействием. В настоящем исследовании выявлено уменьшение MEK-IR и Dyn-IR в спинном мозге мыши, вызванное стимуляцией частотой 5 Гц, и доказано, что 5 Гц ЭА оказывает большее влияние на мышей, чем на крыс. Уменьшение спинальной irMEK было более значимым, чем спинальной irDyn, что предполагает меньшее высвобождение ir-Dyn, чем ir-MEK из спинного мозга под воздействием 5 Гц у мышей. Выявлена негативная корреляция между уменьшением ir-MEK и ir-Dyn и анальгетическим эффектом. В предыдущих исследованиях рецепторы МЕК, LEK возрастали после ЭА [4-5]. В настоящей работе MEK-IR и Dyn-IR возрастали в ОГ в сравнении с КГ в перитонеальных макрофагах, видимо, рецепторы для МЕК и Dyn могут увеличиваться под воздействием ЭА. MEK-IR и Dyn-IR включают иммунореактивность рецепторов, связанных с эндогенными лигандами (МЕК и Dyn) и цитоплазматическими ir-MEK и ir-Dyn. Возрастание MEK-IR было более значимым, чем Dyn-IR в плазме лиц с болевым синдромом после 2-4 Гц ЭА. Возрастание MEK-IR в макрофагах было меньше, чем Dyn-IR из-за слабого высвобождения из макрофагов irDyn, чем irMEK. МЕК и Dyn могут регулировать функции иммунных клеток [3]. Альтерация МЕК и Dyn в спинном мозге и макрофагах, вызванная ЭА, подтверждает, что последняя может влиять на нейроиммуномодуляцию.

Литература

1. Wu Jinglan, Ding Yi. Practical Protocols of Nonradioactive Molecular Biology Technique. Zhengzhou Henan Publication Press.- 1997.- Р. 56-67.

2. Zheng Naigang et al. // J. Henan. Med. Univ.-1996.- №1.- Р. 13-15.

3. Fan S. // Sheng Li Ko Hsuch Chin Chan.- 1987.-№3.- Р. 270-280.

4. Zheng N. et al. // World J. Acup-Mox.- 1998.- Vol. 8(4).-Р. 35-38.

5. Lee J H, Beitz A J. // Pain.- 1993.- Vol. 52(1).- Р. 11-28.

УДК 575.224.234

ВЗАИМОСВЯЗЬ АКУПУНКТУРНОЙ АНАЛЬГЕЗИИ С ГЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ iNOSmRNA И iNOS АКТИВНОСТЬЮ

А. С . ЦОГОЕВ*

Известно, что макрофаги являются одним из видов имму-нокомпетентных клеток и играют важную роль не только в не- и специфическом иммунитете, но также могут высвобождать биологические медиаторы, включая нейротрансмиттеры и цито-кинины. Установлено регулирующее влияние электроакупунктуры (ЭА) на генную экспрессию iNOS макрофагов[1]. В настоящей работе изучали взаимосвязь между генной экспрессией iNOS и анальгетическим эффектом. В опыте использовались: NADPT-NBT гистохимический анализ, иммуногистохимический анализ, РНК дот блоттинг, протеин дот блоттинг и situ гибридизация.

20 BALB/С мышей весом 20-22 г инъецировали перитонеально 1,0 мл стерильного 4% крахмала, растворенного в нормальном физрастворе; после 48 ч их наблюдали в условиях фиксации в течение 15 мин., разделив на 2 группы: ОГ, получившую электроакупунктуру (ЭА - 1,5 В, 5 Гц) в билатеральные точки «Цзусаньли» в течение 15 мин, и КГ без ЭА.

Порог болевой чувствительности определяли до и после ЭА или фиксации с помощью К+-ионофореза. Для сбора перитонеальных макрофагов каждой мыши вводился 1,0 мл физраствора. Генная экспрессия iNOS оценивали методами situ гибридизации [2] и РНК дот блоттинга [3]. Путем NADPN-NBT гистохимического анализа и протеин дот блоттинга изучали iNOS активность

Таблица

Альтерация уровня болевого порога

№ ..1 ..2... ...6.. ...7.. ...8.. ...9.. ...10.. . Z"

КГ +0.45 +0.6 +0.45 +0.23 +0.35 +0.3 +0.2 +0.3 +0.3 +0.55 +0.38

ОГ +0.10 +0.2 +0.05 +0.50 -0.25 +0.3 ...0.. ...0.. +0.1 +0.05 +0.22

*

Северо-Осетинская медицинская академия, Владикавказ

*Северо-Осетинская медицинская академия, Владикавказ