CC BY
116
REVIEWS
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 615.31.03:616-056.43-078.33
Невская Л.В., Лавренчик Е.А., Жданова М.Ю. АЛЛЕРГЕНЫ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ
ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России, 127051, Москва, Российская Федерация
В настоящее время примерно 30-40 % населения земного шара страдают различными аллергическими заболеваниями, в основе которых лежит специфическая реакция организма (гиперчувствительность) на аллергены. Для диагностики и лечения аллергических заболеваний используются препараты аллергенов. Первоначально препараты аллергенов поступали только из природных источников - пыльцы, растений, шерсти (эпителия) животных, домашней пыли, пищевых продуктов и др. Сейчас известно более нескольких сотен белковых последовательностей аллергенов, что позволило создать большое количество рекомбинатных белков аллергенов. Рекомби-нантные аллергены используются в аллергодиагностике и иммунотерапии аллергических заболеваний. Широкое распространение получило применение рекомбинантных аллергенов в диагностических наборах на основе таких методов иммуноанализа, как ИФА или REAST, а также в молекулярной диагностике. Первые рекомбинантные ал-лерговакцины появились более 15 лет назад. Проведённые клинические исследования показали, что по терапевтической эффективности эти препараты не уступают коммерческим, но исследования по оценки эффективности и безопасности аллерговакцин на основе рекомбинантных белков ещё не закончены. Рекомбинантные аллергены рекомендованы в качестве стандартов для определения аллергенной активности, для стандартизации и валида-ции методов на основе ИФА. Результаты научных исследований с использованием рекомбинантых аллергенов расширили наши знания о структуре и свойствах аллергенов, позволили создать классификацию, основанную на их структурной гомологии и перекрестной реактивности.
Ключевые слова: аллергены; рекомбинантные аллергены; рекомбинантные белки; аллергенные компоненты;
аллергодиагностика; иммунотерапия; аллерговакцины; стандартизация аллергенов; гомологичные группы.
Для цитирования: Невская Л.В., Лавренчик Е.А., Жданова М.Ю. Аллергены на основе рекомбинантных белков. Иммунология. 2018; 39(4): 239-242. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-4-239-242
NevskayaL.V., LavrenchikE.I., ZhdanovaM.Yu. ALLERGENS BASED ON RECOMBINANT PROTEINS
Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products, Moscow, 127051, Russian Federation
About 30-40 % of the world's population suffer from various allergological diseases, which are based on a specific reaction of the body (hypersensitivity) to allergens. For the diagnosis and treatment of allergic diseases, allergen preparations are used. Initially, allergen preparations were obtained only from natural sources-plant pollen, animal hair (epithelium), domestic dust, food, etc. Now more than a few hundred protein allergen sequences are known, which made it possible to create a large number of recombinant allergen proteins. Recombinant allergens are used as novel products in allergodiag-nosis and immunotherapy of allergic diseases. The use of recombinant allergens in diagnostic kits based on immunoassay methods such as ELISA or REAST, as well as in molecular diagnostics, is widely used. The first recombinant products has appeared over 15 years ago. Clinical studies showed that therapeutic efficacy of these drugs is not inferior to commercial, but studies assessing the efficacy and safety of Allergology based on recombinant proteins is still not finished. Recombinant allergens are recommended as standards for the determination of allergenic activity and for the standardization and validation of ELISA-based methods. The results of research conducted using recombinant allergens have expanded our knowledge of the structure and properties of allergens, allowed to create a classification based on their structural homology and cross reactivity.
Keywords: allergens; recombinant allergens; recombinant proteins; allergenic ingredients; allergy diagnostics; immunotherapy; products; standardization of allergens; homologous group.
For citation: Nevskaya L.V., Lavrenchik E.I., Zhdanova M.Yu. Allergens based on recombinant proteins. Immunologiya. 2018; 39(4): 239-242. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-4-239-242
For correspondence: Nevskaya Larisa Valer 'evna, Chief expert of Immunology Laboratory, Testing Centre for Evaluation of MIBPs' Quality, candidate of Biological Sciences, e-mail: [email protected]
Information about authors:
Nevskaya L.V., http://orcid.org/0000-0001-5371-8532 Lavrenchik E.I., http://orcid.org/ 0000-0001-7341-4237 Zhdanova M.Y., http://orcid.org/0000-0002-3980-1580
conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Acknowledgments. The study had no sponsorship.
Received 31.05.18 Accepted 16.08.18
Для корреспонденции: Невская Лариса Валерьевна, канд. биол. наук, главный эксперт лаборатории иммунологии Испытательного центра экспертизы качества МИБП, E-mail: [email protected].
ОБЗОРЫ
введение
Примерно 30-40 % населения земного шара страдают различными аллергологическими заболеваниями, в основе которых лежит специфическая реакция организма (гиперчувствительность) на аллергены. Прогнозируется, что рост числа пациентов с разными видами аллергии будет неуклонно расти из-за экологических проблем и глобального потепления [1]. Для диагностики и лечения аллергических заболеваний, используются препараты аллергенов. Первоначально препараты аллергенов поступали только из природных источников
- пыльцы растений, шерсти (эпителия) животных, домашней пыли, пищевых продуктов и т. п. Они представляют собой комплекс отдельных аллергенов или аллергенных компонентов, которые делятся на главные (основные, мажорные) и второстепенные (минорные). Главным аллергеном считается тот, на который реагируют более 50 % сенсибилизированных пациентов [2].
Современное развитие биологических наук и успехи молекулярной биологии привели к появлению большой группы лекарственных и диагностических препаратов, созданных методами генной инженерии - биотехнологии. Действующим веществом в генно-инженерных препаратах являются биологически активные вещества пептидной природы, одни из которых - рекомбинантные аллергены, распознаваемые аллергенспецифическими антителами и Т-клеточными рецепторами. В 1988 г. была открыта структура ДНК, кодирующая главный аллерген аллергенного комплекса, выделяемого из клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus
- Der p I [3]. Первые рекомбинантные (г) аллергенные компоненты - rDer p I, rDol m 5 (главный аллерген из яда пятнистой осы-шершня - Dolichovespula maculata) и rBet vi (главный аллерген из пыльцы березы) были получены с помощью генетически трансформированных штаммов Escherichia coli. В результате проведённых за последние 30 лет исследований определено несколько сотен белковых последовательностей аллергенов, что позволило создать большое количество ре-комбинатных белков аллергенов [4], которые нашли применение в аллергодиагностике и иммунотерапии аллергических заболеваний.
Использование рекомбинантных аллергенов в аллер-годиагностике. Для диагностики аллергических заболеваний рекомбинантые аллергены применяются как в in vivo, так и в in vitro тестах. Известно, что серии одного и того препарата аллергена, предназначенного для диагностики in vivo, изготовленного из природного сырья, неоднородны по содержанию аллергенных компонентов, что может привести к неоднозначным результатам [5, 6]. Некоторые исследователи с целью нивелирования этих недостатков предлагают добавлять к природным экстрактам рекомбинантные аллергены
[7, 8].
Широкое распространение получило применение рекомбинантных аллергенов в диагностических наборах на основе таких методов иммуноанализа, как ИФА [9] или REAST-реверсивный аллергосорбентный тест («capture» REAST) с использованием биотинилированных жидкофазных моно- и микст-аллергенов. Отличие «capture» REAST от классических вариантов ИФА состоит в том, что для выявления аллергенспецифических IgE используется двухстадийная последовательность их связывания. На первой стадии исследуемые образцы, содержащие аллергенспецифические IgE в лунках микропланшета, инкубируют с растворами био-тинилированных аллергенов, поверхность которых покрыта мышиными моноклональными антителами к IgE человека. Если в пробе имеется IgE, специфичный к конкретному био-тинилированному аллергену, то происходит одновременное связывание IgE с аллергеном и с моноклональными антителами к IgE человека. На второй стадии в лунки добавляется конъюгат стрептавидин-пероксидазы, который связывается с
комплексом биотин-аллерген-специфические-^Е-антитела-моноклоналдьные антитела. Во время инкубации с раствором хромогена (обычно используют тетраметилбензидин - ТМБ) в субстратном буфере происходит окрашивание раствора [10].
В России фирмой «АлкорБио» (Санк-Петербург) создана тест-система на основе реверсивного аллергосорбентного иммуноанализа, в состав которой входят в том числе рекомбинантные аллергены собственной разработки [11, 12]. Результаты оценки специфичности и чувствительности тест-системы «АллергоИФА-специфические IgE» («АлкорБио»), в сравнении с референтной тест-системой «ImmunoCAP System» (Phadia), показали её высокую специфичность (91100 %) и чувствительность (92-100 %) [13].
Метод молекулярной диагностики с использованием биочипов позволяет определить сенсибилизацию к аллергенам у пациента на молекулярном уровне [14]. Технология чипов с аллергенами внедрена в коммерческий продукт ImmunoCAP Immuno Solid-Phase Allergen Chip (ISAC) шведской фирмой Phadia. Аллергочип ImmunoCAP ISAC использует технологию мультиплексного анализа: на микрочип методом ультраточного дозирования нанесены 112 антигенов, в том числе основные клинически значимые видоспецифичные и перекрестно-реактивные маркёры. Для тестирования требуется всего 30 мкл сыворотки или плазмы крови пациента. В настоящее время развитие проекта ISAC финансируется ЕС с целью повышения количества аллергенов на чипе от 112 до 176, из которых 127 являются рекомбинантными аллергенами [15]. С помощью молекуляной диагностики проводится определение сенсибилизирующего профиля как к главным, так и к второстепенным аллергенным компонентам, что позволяет определять индивидуальный для конкретного пациента состав аллерговакцин [16]. В Институте молекулярной биологии (ИМБ) РАН разработан прототип тест-системы -аллергобиочип с использованием технологии трёхмерных гидрогелевых биочипов, позволяющий проводить иммобилизацию как рекомбинантных аллергенов, так и очищенных природных экстрактов. Результаты сравнения прототипа с тест-системой на основе REAST и мульплексным аллерго-сорбентным тестом показали, что аллергобиочип можно использовать для мульплексного скрининга широкой панели специфических IgE-антител к аллергенам и их компонентам [17].
рекомбинантные аллергены в иммунотерапии аллергических заболеваний. Коммерческими лечебными препаратами аллергенов или аллерговакцинами для специфической иммунотерапии на сегодняшний день являются препараты на основе природных экстрактов. Первые реком-бинантные аллерговакцины появились более 15 лет назад. Проведённые клинические исследования показали, что по терапевтической эффективности эти препараты не уступают коммерческим [18, 19]. Препараты на основе рекомбинант-ных аллергенов изучали на разных фазах клинических испытаний (см. таблицу).
Как видно из табл. 1 наиболее изученными являются препараты на основе рекомбинантного белка rBet v 1. Проведены все фазы клинических исследований на более чем 2000 пациентах, которые получали или сублингвальную, или подкожную иммунотерапию. Необходимо отметить, что исследования по оценке эффективности и безопасности аллерговакцин на основе рекомбинантных белков ещё не закончены [32]. И хотя пока коммерческие препараты лечебных рекомбинант-ных аллергенов отсутствуют, но в перспективе на их основе предлагается создавать лечебные препараты с индивидуальным комплексом аллергенных компонентов [33].
Применение рекомбинантных аллергенов в качестве стандартов. Одной из важнейшим мер по обеспечению качественных препаратов аллергенов является их стандартизация. Стандартизация позволяет производителю гарантировать ста-
Клинические испытания лечебных препаратов аллергенов на основе рекомбинантных белков
Рекомбинант- Фаза кли- Иммунотерапия Число Литера-
ный белок нических паци- турный
испытаний ентов источник
Пыльца березы
rBet v 1, 2 Фаза 0 Сублингвальная, внутрикожные инъекции 30 [20]
rBet v 1 Фаза 1 Подкожные инъекции 124 [21]
rBet v 1 Фаза 2 Подкожные 134 [22]
инъекции 51 [23]
Сублингвальная 485 [24]
rBet v 1 Фаза 3 Подкожные инъекции 800 [25]
Сублингвальная 483 [26]
Пыльца тимофеевки
rPhl p 1, rPhl p Фаза 2 Подкожные 62 [27]
2, rPhl p 5a, rPhl инъекции
p 5b, rPhl p 6
Phl p 1, Phl 2, 71 [28]
Phl p 5, Phl p 6
Шерсть или эпителий кошки
rFel d 1 Фаза 1 Инъекции в лимфатиче ские узлы 20 [29]
Арахис
rAra h 1, 2 Фаза 0 Ректальное применение 10 [30]
Карп
rCyp c 1 Фаза 1/2 Подкожные инъекции 16 [31]
бильность аллергенной активности препарата и её соответствия указанным дозам [34-37]. В рамках проекта CREATE (development of certified reference materials for allergenic products and validation of methods for their quantification) [38] два рекомбинантных аллергена - главные аллергены из пыльцы березы (rBet vi) и из пыльцы тимофеевки (rPhl p5) - рекомендованы в качестве стандартов для определения аллергенной активности, для стандартизации и валидации методов на основе ИФА [39]. Рекомбинантые аллергены в качеств стандартов также применяются для определения аллергенного состава (аллергенного профиля) природных экстрактов.
Использование рекомбинантных аллергенов в изучении свойств и структуры молекул позволило создать классификацию аллергенов, основанную на их структурной гомологии и перекрестной реактивности [33, 35]. Это позволило экстраполировать данные, полученные при изучении свойств одного репрезентативного аллергена, на группу аллергенов, относящихся к одной гомологичной группе. Результаты исследований по качеству, безопасности и эффективности могут экстраполироваться частично с репрезентативного аллергена на остальные аллергены той же гомологичной группы. Исследования по безопасности необходимо проводить только для репрезентативного аллергена, для других аллергенов, входящих в одну гомологичную группу, требуются постмаркетинговые отчёты. Перечень и состав гомологичных групп представлен в Приложении 1 Руководства Европейского агентства лекарственных средств (ЕАЛС, European Medicines Agency - EMEA) по лекарственным средствам [35]. Кроме того, рекомбинантные аллергены необходимы для изучения свойств природных аллергенов, которые могут быть только в малых количествах [40].
REVIEWS
Заключение
Таким образом, использование рекомбинантных аллергенов позволило повысить точность и качество аллергоди-агностики. Клинические исследования показали, что эффективность иммунотерапии с помощью рекомбинантных аллерговакцин сопоставима с их природными аналогами. Ре-комбинантные аллергены применяются для стандартизации лекарственных препаратов аллергенов. Результаты научных исследований с использованием рекомбинантых аллергенов расширили наши знания о структуре и свойствах аллергенов, позволили создать классификацию, основанную на их структурной гомологии и перекрёстной реактивности.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕрАТУрА (пп. 1-10, 13—15, 18—35, 38—40 см. в REFERENCES)
11. Павлов А.В., Сейлиева Н.А. Мухортых О.Ю., Стефанов В.Е. Получение и оценка свойств рекомбинантного аналого мажорного аллергена пыльцы березы Bet v 1. Российский аллергологический журнал. 2012; 3: 7-13.
12. Сейлиева Н.А., Верлыго Е.А. Получение и свойства аллергоком-понентов белка яйца. В сб. Клиническая иммунология и аллергология - междисциплинарные проблемы. Казань; 2014: 237-8.
16. Мокроносова М.А., Коровкина Е.С. Компонентная диагностика - новая эра в клинической аллергологии. Терапевтический архив. 2013; 10: 4-9.
17. Смолдовская О.В., Волошин С.А. Фейзханова Г.У. b и др. Применение мультиплексного флуоресцентного иммуноанализа на биочипах для скрининга в аллергодиагностики: сопоставление результатов с тест-системами MAST-CLA и ALLERG-O-LIQ. Иммунология. 2015; 36(6): 358-62.
36. Солдатов А.А., Медуницын Н.В., Авдеева Ж.И., Бондарев В.П., Миронов А.Н. Препараты лечебных аллергенов, проблемы и пути повышения качества, безопасности и эффективности. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2013; (4): 31-7.
37. Невская Л.В. Лавренчик Е.А. Жданова М.Ю. с соавт. Международный опыт стандартизации препаратов аллергенов. Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017; 17(4): 222-9.
references
1. Pawankar R., Canonica G.W., Holgate S.T., Lockey R.F. Allergic Diseases as a Global. Public Health Issue. White Book on Allergy (World Allergy Organization (WAO)). 2011; 11-20.
2. Allergen nomenclature. Bulletin of WHO. 1994; 72 (2): 797-806.
3. Thomas W.R., Stewart G.A., Simpson R.I., et al. Cloning and expression of DNA coding for the major house dust mite allergen Der p I in Escherichia coli. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1988; 85: 127-9.
4. Curin M., Garib V., Valenta R. Single recombinant and purified major allergens and peptides how they are made and how they change allergy diagnosis and treatment. Ann. Allergy Asthma Immunol. 2017;119: 201-9.
5. Akkerdaas J.H., Wensing M., Knulst A.C., Aalberse R.C., Hefle S.L., van Ree R. In vitro and in vivo characterization of hazelnut skin prick test extracts. Arb Paul Ehrlich Inst Bundesamt Sera Impfstoffe. Frankf A.M. 2003; 87-95.
6. Kespohl S., Maryska S., Zahradnik E., Sander I., Brüning T., Raulf-Heimsoth M. Biochemical and immunological analysis of mould skinprick test solution: current status of standardization. Clin. Exp. Allergy. 2013; 43: 1286-96.
7. Lundberg M., Chen Z., Rihs H.P., Wrangsjö K. Recombinant spiked allergen extract. Allergy. 2001; 56: 794-5.
8. Andersson K., Ballmer-Weber B.K., Cistero-Bahima A., et al. Enhancement of hazelnut extract for IgE testing by recombinant allergen spiking. Allergy. 2007; 62: 897-904.
9. https://inbio.com/elisa-kits.
ОБЗОРЫ
10. http://www.phadia.eom/7/2/ImmunoCAP-Allergens.
11. Pavlov A.V., Salieva N., Mukhortykh O.Yu., Stefanov V.E. Obtaining and evaluating analog to the recombinant major allergen of birch pollen Bet v 1. Rossiyskiy allergologicheskiyzhurnal. 2012; 3: 7-13. (in russian)
12. Salieva N.A. Vertigo E.A. production and properties of allergiamentes protein eggs. In St. Clinical immunology and Allergology -interdisciplinary problems may 14-17. [Klinicheskaya immunologiya i allergologiya - mezhdistsiplinarnye problemy, may 14-17]. 2014; Kazan: 237-8. (in Russian)
13. http://www.alkorbio.ru/allergodiagnostika0/sravnitelnayaharakter-istikatestsistemiallergoifaspetsificheskieigeoookompaniyaalkorbioi-immunocapfirmiphadia.html/
14. Villalta D., Tonutti E., Bizzaro N., et al. Recommendations for the use of molecular diagnostics in the diagnosis of allergic diseases. Eur. Ann. Allergy Clin. Immunol. 2018; 50 (2): 52-9.
15. Lupinek C., Wollmann E., Baar A., et al Advances in allergen-mi-croarray technology for diagnosis and monitoring of allergy: the MeDALL allergen-chip. Methods. 2014; 66:106-19.
16. Mokronosova M. A., Korovkina E. S. Component diagnostics - a new era in clinical Allergology. Therapeutic archive. 2013; 10: 4-9. (in Russian)
17. Smoldovskaya O.V., Voloshin S.A. Feyzkhanova G.U., et al. Application of multiplex fluorescent immunoassay on biochips for screening in allergodiagnostics: comparison of the results with test systems MAST-CLA and ALLERG-O-LIQ. Immunologiya. 2015; 6: 358-62.
18. Valenta B., Linhart I., Swoboda1 V. Niederberger Recombinant allergens for allergen-specific immunotherapy: 10 years anniversary of immunotherapy with recombinant allergens. Allergy. 2011; 66: 775-83.
19. Ferreira F., Wolf M., Wallner M. Molecular approach to allergy diagnosis and therapy. YonseiMed. J. 2014; 55: 839-52.
20. Pauli G., Purohit A., Oster J.P., de Blay F., Vrtala S., Niederberger V. et al. Comparison of genetically engineered hypoallergenic rBet v 1 derivatives with rBet v 1 wild-type by skin prick and intradermal testing: results obtained in a French population. Clin. Exp. Allergy. 2000; 30: 1076-84.
21. Niederberger V., Horak F., Vrtala S., Spitzauer S., Krauth M.T., Valent P. et al. Vaccination with genetically engineered allergens prevents progression of allergic disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004; 101(suppl 2): 14677-82.
22. Pauli G., Larsen T.H., Rak S., et al. Efficacy of recombinant birch pollen vaccine for the treatment of birch-allergic rhinoconjunctivitis. J. Allergy Clin. Immunol. 2008; 122: 951-60.
23. Klimek L., Bachert C., Lukat K.F., Pfaar O., Meyer H., Narkus A. Allergy immunotherapy with a hypoallergenic recombinant birch pollen allergen rBet v 1-FV in a randomized controlled trial. Clin. Transl. Allergy. 2015; 5: 28.
24. Nony E., Bouley J., Le Mignon M., et al. Development and evaluation of a sublingual tablet based on recombinant Bet v 1 in birch pollen-allergic patients. Allergy. 2015; 70: 795-804.
25. Rak S. Clinical results with a hypoallergenic recombinant birch
pollen allergen derivative. 2009. Presented at 27th Congr., EAACI. 2009; Warsaw: 6-10.
26. Larenas-Linnemann D. Oralair Birch, A recombinant major birch pollen allergen tablet for sublingual immunotherapy of allergic rhinitis caused by birch pollen. Curr. Opin Investig Drugs. 2010;11: 586-96.
27. Cromwell O. Allergen-specific immunotherapy with recombinant grass pollen allergens. J. Allergy Clin. Immunol. 2005; 116: 608-13.
28. Zieglmayer P., Focke-Tejkl M., Schmutz R., Lemell P., Zieglmayer R., Weber M. et al. Mechanisms, safety and efficacy of a B cell epitope-based vaccine for immunotherapy of grass pollen allergy. EBioMedicine. 2016; 11: 43-57.
29. Senti G., Crameri R., Kuster D., et al. Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections. J. Allergy Clin. Immunol. 2012; 129: 1290-6.
30. Wood R.A., Sicherer S.H., Burks A.W, et al. A phase 1 study of heat/ phenol-killed, E. coli -encapsulated, recombinant modified peanut proteins Ara h 1, Ara h 2, and Ara h 3 (EMP-123) for the treatment of peanut allergy. Allergy. 2013; 68: 803-8.
31. Jongejan L., van Ree R., Poulsen L.K. Hypoallergenic molecules for subcutaneous immunotherapy. Expert Rev. Clin. Immunol. 2016; 12: 5-7.
32. Jutel M., Kosowska A., Smolinska S. Allergenimmunotherapy: past, present, and future. Allergy Asthma Immunol. Res. 2016; 8: 191-7.
33. Tscheppe A., Breiteneder H. Recombinant Allergens in Structural Biology, Diagnosis, and Immunotherapy Int. Arch. Allergy Immunol. 2017; 172: 187-202.
34. Cramery R. Allergy vaccines: dream and reality. Expert Rev. Vaccines. 2007; 6(6): 991-9.
35. Committee for medicinal products for human use, guideline on allergen products: production and quality issues. European Medicines Agency; London: 2008. Available from: http://www.emea.europa.eu.
36. Soldatov A.A., Medunitsyn N.V., Avdeeva Z.I., Bondarev V.P., Mironov A.N. Medicinal allergen preparations, problems and ways to improve quality, safety and efficiency. Vedomosti nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya. 2013; (4): 31—7. (in Russian)
37. Nevskaya L.V., Lavrenchik E.I., Zhdanova M.Yu., Fadeykina O.V., Kapitanova VK. International practice of standardization of allergen products. Biopreparaty. Profilaktika, diagnostika, lechenie. 2017; 17 (4): 222—9. (in Russian)
38. 38. Chapman M.D., Fereira F., Villalba M., et al., The European Union CREATE Project: A model for international standardization of allergy diagnostics and vaccines. J. Allergy Clin. Immunol. 2008; 122 (5): 882-9. Vieths S., Barber D., Chapman M. et al Establishment of recombinant major allergens Bet v 1 and Phl p 5a as Ph. Eur. Reference standards and validation of ELISA methods for their measurement. Pharmeuropa Bio&SN 2012; 118-34.
39. Mas S., Boissy P., Monsalve R.I., Cuesta-Herranz J. et al. A recombinant Sal k 1 isoform as an alternative to the polymorphic Allergen from Salsola kali pollen for allergy diagnosis. Int. Arch. Allergy Immunol. 2015; 167: 83-93.
Поступила 31.05.18 Принята в печать 16.08.18
