CC BY
184
АЛЛЕРГЕННЫЕ СВОЙСТВА НОВОГО ГУМИНОВОГО ПРЕПАРАТА - ГУМАТА КАЛИЯ АКВА М.В. Беседин О.А. Ратных, В.И. Беляев, И.А. Никулин
Аннотация. Новый гуминовый препарат - гумат калия аква (энерген LK) не об-ла
дает аллергенными свойствами при накожной аппликации, нанесении на конъюнктиву глаза, не вызывает сенсибилизации и гиперчувствительности.
Ключевые слова: гумат калия аква, аппликация, кожа, конъюнктива, морские свинки, белые крысы, сенсибилизация, аллергенные свойства.
Важным резервом повышения продуктивности животных являются кормовые добавки биологически активных веществ, получаемых из сапропеля, бурого угля, торфа, так называемые гуматы. Гуминовые препараты содержат комплекс биологических и минеральных веществ: аминокислоты, макро- и микроэлементы, гу-миновые соединения, витамины группы В, ферменты. Простота технологии получения гуматов предполагает перспективность внедрения указанных природных препаратов в ветеринарии и животноводстве.
Исследования Беркович с соавт. (2003), Г. Тупикова с соавт. (2004), А.М. Самотина с соавт. (2010) свидетельствуют о том, что гумат натрия, гувитан, лигфол и другие препараты на основе гуминовой кислоты оказывают стимулирующее действие на рост и развитие организма животных, положительно влияют на окислительно-восстановительные процессы, проявляют адап-тогенные свойства, обладают широким спектром лечебно-профилактических возможностей. Однако широкое применение гуминовых препаратов в ветеринарии и животноводстве сдерживается недостаточностью данных по лечебно-профилактическим свойствам, влиянию указанных веществ на физиологическое состояние, го-меостаз и резистентность организма, продуктивность животных и качество получаемой при этом продукции. Кроме того, в литературе практически нет конкретных данных по фармако-токсикологическим параметрам различных гуматов, и в частности, по возможной способности гума-тов вызывать аллергию у человека и животных.
Целью наших исследований являлось определение аллергенных свойств нового гуминового препарата -гумат калия аква (ГКА, энерген LK).
Система испытаний лекарственного препарата на аллергенность включала в себя несколько методов ал-лергодиагностики in vivo и in vitro, с помощью которых можно выявить различные типы гиперчувствительности.
В опыте методом накожных аппликаций использовали трех морских свинок массой тела 250-300 г, имеющих крупные белые пятна на боках туловища. Исследуемый препарат наносили в чистом виде по 3 капли на выстриженный участок кожи боковой поверхности туловища размером 2х2 см, в течение 20 дней. За 2 дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки кожных проб. Данный опыт провели для того, чтобы выявить опасность развития неаллергического контактного дерматита.
По окончании срока наблюдения установлено, что накожные аппликации энергена в течение 20 дней подряд в объеме 0,1 мл на 4 см2 кожного покрова не вызывают раздражающего действия - повреждений кожи в виде эритемы или ее отеков.
Для исследования сенсибилизирующего действия препарата при пероральном введении с последующими кожными тестами был проведен опыт на 5 морских свинках массой тела 250-300 г. Животных разделили на
2 группы: контрольная и опытная. Животным контрольной группы (2 свинки) задавали внутрь 1-2 капли физ. раствора в течение 30 дней, делали накожные аппликации физ. раствора на 10, 15, 30 дни.
Трех свинок опытной группы сенсибилизировали путем введения энергена LK по 1-2 капли в течение 30 дней. Тестирование сенсибилизирующих свойств препарата проводили на 10, 15 и 30 дни от начала его введения, нанося препарат в контрольные дни. Реакцию кожи учитывали по шкале оценки проб.
В эксперименте установлено, что 20-кратная аппликация энергена не вызывает явлений сенсибилизации (гиперемии, отека кожи, десквамации).
Опыт по конъюнктивальной пробе был проведен на
3 морских свинках массой тела 250-300 г: одна свинка взята в качестве контроля, две - опытные. Сенсибилизация в опытной группе осуществлялась перорально по 1-2 капле препарата в течение 10 дней. Оценку аллерги-зирующих свойств энергена проводили на 10 день. Для постановки пробы 1 каплю чистого препарата вводили глазной пипеткой под верхнее веко подопытным и контрольным морским свинкам, во второй глаз (контрольный) вводили 1 каплю воды. Реакции учитывали через 15 мин (быстрая реакция) и через 24-48 часов (гиперчувствительность замедленного типа) и оценивали по появлению раздражающего эффекта (гиперемия, лак-римация, выделения, отек век).
В конце опыта при визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз морских свинок установлено, что энерген LK не вызывает раздражения конъюнктивы после закапывания.
Оценка аллергенных свойств препарата по реакции дегрануляции тучных клеток (РДТК) проведена на 8 белых крысах массой 250-300 г, разделенных на три группы: 1 группа - контрольная (2 крысы); 2 группа позитивного контроля (2 крысы), которым вводили в качестве эталонного аллергена перорально по 2 капле 0,2% раствора формалина ежедневно в течение 10 дней; 3 группа - опытная (4 крысы), животным которой назначали внутрь энерген в терапевтической дозе 30мл/кг ежедневно в течение 10 дней. На 10 день осуществляли убой всех животных, брали кровь для подсчета лейкоцитов и выведения лейкоформулы и получили тучные клетки для постановки прямой РДТК.
По результатам реакции установлено, что процент реагирующих клеток в контроле составляет 8%, в опытной группе - 9%, т.е. не превышает допустимых 10%. В группе позитивного контроля было 39% реагирующих клеток. Следовательно, при постановке РДТК не выявлено выраженной аллергической реакции сенсибилизи-
рованных животных на исследуемый препарат, РДТК -отрицательная.
Выявлению сенсибилизации к фармакологическим средствам может способствовать также оценка таких показателей, как увеличение абсолютного числа лейкоцитов или относительного количества эозинофилов и базофилов. Поэтому мы осуществляли исследование данных показателей.
Установлено, что в крови крыс, которых сенсибилизировали, задавая гумат калия аква, исследуемые показатели находились в пределах физиологической нормы. Не выявлено характерного для аллергической реакции увеличения общего количества лейкоцитов или относительного количества эозинофилов и базофилов. Так, у крыс, которым задавали препарат, при подсчете общего количества лейкоцитов в крови данный показатель не выходил за границы физиологической нормы и составил 9,95±0,78 •109/л.
Базофилы - клетки, участвующие в иммунологических реакциях аллергического типа, при исследовании мазков крови крыс, получавших препарат, обнаружены не были. Зафиксировано незначительное увеличение количества эозинофилов (клеток, которые участвуют в аллергических реакциях) по отношению к контролю - на 5,6%, но данный показатель также не выходил за пределы физиологической нормы. Прочие морфологические показатели крови крыс, сенсибилизированных энергеном КК, находились в пределах физиологической нормы.
В результате исследований аллергенных свойств препарата можно сделать следующие выводы.
1. Накожные аппликации энергена в течение 20 дней подряд в объеме 0,1 мл на 4 см2 кожного покрова не вызывают раздражающего действия (повреждений кожи в виде эритемы или ее отеков) и не приводят к развитию неаллергического контактного дерматита.
2. Нанесение энергена на 10, 15 и 30 дней не вызывает аллергического ответа у экспериментальных животных. Гиперчувствительности к препарату не возникает.
3. Оценка аллергизирующего действия энергена при конъюнктивальной пробе не показала наличия сенсибилизации морских свинок при учете реакции через 15 мин (быстрая реакция) и через 24, 48 часов (гиперчувствительность замедленного типа).
4. При постановке РДТК не выявлено выраженной аллергической реакции сенсибилизированных животных на исследуемый препарат. РДТК - отрицательная. При анализе морфологических показателей крови крыс, получавших энерген в течение 10 дней, выяснено, что увеличения абсолютного числа лейкоцитов или относительного количества эозинофилов и базофилов не происходит, данные показатели находились в пределах физиологической нормы.
Список использованных источников
1 Беркович, А. Лигфол - адаптоген стресс-корректор нового поколения. Повышение продуктивного здоровья животных / А. Беркович, В. Бузлама, Н. Мещеряков. - Воронеж: Кварта, 2003.- 148 с.
2 Гуминовые препараты в животноводстве и ветеринарии / А.М. Самотин, В.И. Беляев, И.А. Никулин и др. - Воронеж, 2010. - 89 с.
3 Тупиков, Г. Гуматы - высокоэффективные кормовые добавки / Г. Тупиков, А. Косолапова, Э. Смышляев // Молочное и мясное скотоводство. - 2004.- №7.- С. 25-26.
Информация об авторах
Беседин Михаил Васильевич, кандидат биологических наук, заведующий кафедрой терапии и акушерства ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».
Ратных Ольга Александровна, соискатель кафедры терапии и фармакологии ФГБОУ ВПО «Воронежский ГАУ».
Беляев Василий Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник ВНИВИФиТ.
Никулин Иван Алексеевич, доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Воронежский ГАУ» ianiku-lin@yandex.ru
