CC BY
153
ЕЮ
УДК 615.322:615.11:582
АКТУАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ ПИЖМЫ ОБЫКНОВЕННОЙ
А.в. Куркина, А.И. Хусайнова, ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава»
Куркина Анна Владимировна - e-mail: [email protected]
Обоснованы методологические подходы к стандартизации сырья и препаратов пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.), заключающиеся в определении суммы флавоноидов с использованием дифференциальной спектрофотометрии и Государственного стандартного образца цинарозида. Разработаны методики количественного определения содержания суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной и лекарственном средстве «Танацехола таблетки» (аналитическая длина волны 400 нм). Содержание суммы флавоноидов в образцах цветков пижмы обыкновенной варьирует в пределах 1,581,98%, в лекарственном средстве «Танацехол» - от 3,14% до 4,05% (в пересчете на цинарозид).
Ключевые слова: пижма обыкновенная, Tanacetum vulgare L., цветки, флавоноиды, цинарозид, лютеолин.
The methodological approaches to the standardization of Tanacetum vulgare L. drugs and preparations, which are consisted in determination of total flavonoids with using of the differential spectrophotometry and of state standard sample of cynaroside was developed. The methods of the quantitative estimation of the total flavonoids in the Tanacetum vulgare L. flowers and preparation «Tanacechol tablets» (analytical wave-length at 400 nm) was developed. The contents of the total flavonoids in the drugs of Tanacetum vulgare L. are varied with 1,58% to 1,98% and preparation «Tanacechol» - with 3,14% to 4,05% (calculated on the cynaroside).
Key words: Tanacetum vulgare L., flowers, flavonoids, cynaroside, luteolin.
Введение
Цветки пижмы обыкновенной (Тапасе^т vulgare L.) в виде различных лекарственных форм широко применяются в качестве противоглистных и желчегонных средств [1-4], однако вопросы химической стандартизации сырья и препаратов данного растения решены не в полной мере. В соответствии с Государственной Фармакопеей СССР XI издания (ст. 11), количественное определение суммы флавоноидов и фенолкарбоновых кислот осуществляют методом прямой спектрофотометрии буферного раствора упаренного спиртового извлечения пижмы обыкновенной цветков при длине волны 310 нм [5]. Обсуждаемая методика количественного определения достаточно длительна, трудоемка и требует работы с токсичным растворителем (дихлорэтан), а выбранная аналитическая длина волны не соответствует спектральным характеристикам анализируемых веществ. Аналогичные подходы используются и при анализе лекарственного средства «Танацехол» [6].
На наш взгляд, несмотря на сложный химический состав цветков пижмы обыкновенной, представленный такими группами биологически активных соединений, как эфирное
масло, флавоноиды, гидроксикоричные кислоты [1-4], стандартизацию сырья данного растения целесообразно осуществлять по флавоноидам. Именно флавоноиды, в первую
очередь, обусловливают желчегонные и гепатопротектор-ные свойства препаратов пижмы обыкновенной. По разным литературным источникам [1-4] флавоноиды цветков пижмы обыкновенной в основном представлены апигенином (5,7,41-тригидроксифлавон), акацетином (5,7-дигидрокси-41-метоксифлавон), лютеолином (5,7,31,41-тетрагидро-ксифлавон), цинарозидом (7-О-р^-глюкопиранозид 5,7,31,41-тетрагидроксифлавона), эупатилином (5,7-дигидрокси-6,31,41-триметоксифлавон), яцеидином (5,7,41-тригидрокси-3,6,31-триметоксифлавон), яцеозидином (5,7,41-тригидрокси-6,31-диметоксифлавон), близкими по своим спектральным характеристикам, в том числе в условиях комплексообразования с АІСІз [7]. Следовательно, для оценки качества сырья пижмы применим метод дифференциальной спектрофотометрии в присутствии АІСІз.
Целью настоящих исследований является разработка объективных унифицированных методик количественного определения содержания суммы флавоноидов в цветках
и лекарственном средстве
пижмы обыкновенной «Танацехол».
Материал и методы
Исследовали цветки пижмы обыкновенной, собранные в окр. г. Тольятти, села Нижнее Санчелеево Самарской области (июль 2008 г.), на фармакопейном участке Самарского ботанического сада (г. Самара, июль 2009 г.), а также про-мышленныеобразцысырья(ОАО«Красногорсклексредства») и лекарственного средства «Танацехола таблетки». Регистрацию УФ-спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena).
Результаты и обсуждение
С целью разработки методики количественного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной изучены условия экстракции целевых веществ из сырья данного растения. Сырье экстрагировали 40%, 70% и 96% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент 1:30, 1:50 и 1:100 в течение 30 мин., 45 мин., 60 мин., 90 мин. и 120 мин. Результаты данного исследования свидетельствуют, что оптимальными условиями экстракции сырья являются: экстрагент - 70% этиловый спирт, соотношение сырье-экстрагент - 1:50, время экстракции - 60 мин. (таблица 1). ТАБЛИЦА 1.
Зависимость полноты извлечения суммы флавоноидов из цветков пижмы обыкновенной от условий экстракции
№ п/п Экстрагент соотношение сырье:экстрагент Время экстракции, мин. содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье (в %)
1. 40% этиловый спирт 1 50 60 1,65±0,04
2. 70% этиловый спирт 1 50 45 1,56±0,03
3. 96% этиловый спирт 1 50 60 0,49±0,01
4. 70% этиловый спирт 1 50 30 1,18±0,04
5. 70% этиловый спирт 1 50 60 1,98±0,03
6. 70% этиловый спирт 1 50 90 1,96±0,03
7. 70% этиловый спирт 1 50 120 1,85±0,04
8. 70% этиловый спирт 1 30 45 1,46±0,03
9. 70% этиловый спирт 0,111 45 1,74±0,02
В ходе разработки методик количественного определения суммы флавоноидов изучены УФ-спектры водноспиртовых извлечений из цветков пижмы обыкновенной и раствора препарата «Танацехол». При этом использовали реакцию комплексообразования с раствором алюминия хлорида для исключения вклада в значение оптической плотности других групп соединений, в частности, гидрок-сикоричных кислот [8], обусловливающих характер кривой поглощения УФ-спектра раствора извлечения из цветков пижмы обыкновенной (рис. 1). Аналогичные спектральные характеристики имеет и спиртовый раствор лекарственного средства «Танацехол» (рис. 2). В этом случае наблюдается характерный батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов [7], который обнаруживается в УФ-спектре в виде максимума поглощения при
длине волны 400 нм. Это находит подтверждение в условиях дифференциальной спектрофотометрии: максимум поглощения при 400 нм (рис. 3).
Изучение УФ-спектров ГСО цинарозида показало (рис. 4 и 5), что раствор данного стандарта в присутствии алюминия хлорида имеет тот же максимум поглощения (400 нм). Следовательно, цинарозид может быть использован в методиках анализа в качестве ГСО. Это обстоятельство дает основание предложить в качестве метода количественного анализа дифференциальную спектрофотометрию с определением суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид. Использование для этих целей ГСО лютеолина, как это было в случае фармакопейной методики [5, 6], на наш взгляд, является нецелесо-образным, так как, во-первых, данное вещество практически не обнаруживается в цветках пижмы обыкновенной, а во-вторых - в сырье данного растения преобладающими компонентами являются флавоно-идные гликозиды, близкие по спектральным характеристикам к цинарозиду.
3
\
\
\
4
>-
РИс. 1. УФ-спектры растворов водно-спиртового извлечения из цветков пижмы обыкновенной: Обозначения: 1 - раствор извлечения из цветков пижмы обыкновенной; 2 - раствор извлечения из цветков пижмы обыкновенной с добавлением алюминия хлорида.
\Л
\\ /:
\\ V W
\ //"
, 1
200
Absorbance
[nm]
РИс. 2. УФ-спектр раствора лекарственного средства «Танацехол»: Обозначения: 1 - раствор препарата; 2 - раствор препарата с добавлением алюминия хлорида.
ЕЮ
РИС. 3. УФ-спектр раствора водно-спиртового извлечения из цветков пижмы обыкновенной (дифференциальный спектр).
200 250 300 350 400 450 [пт]
Absorbance
РИС. 4. УФ-спектр спиртового раствора ГСО цинарозида: Обозначения: 1 - раствор ГСО цинарозида; 2 - раствор ГСО цинаро-зида с добавлением алюминия хлорида.
РИс. 5. УФ-спектр раствора ГСО цинарозида (дифференциальный спектр).
В пользу выбора дифференциальной спектрофотометрии
свидетельствуют также данные УФ-спектра буферного раствора спиртового извлечения цветков пижмы обыкновенной (рис. 6), в котором максимум поглощения составляет 350 нм, хотя аналитическая длина волны (310 нм), используемая в фармакопейной методике, приходится на минимум в кривой поглощения.
РИС. 6. УФ-спектр буферного раствора спиртового извлечения цветков пижмы обыкновенной (ГФ СССР XI издания).
Методика количественного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 мин. Затем колбу закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр и охлаждают в течение 30 мин. Испытуемый раствор готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 95% этиловым спиртом (испытуемый раствор А). В качестве раствора сравнения используют раствор, приготовленный при тех же условиях, но без добавления алюминия хлорида (раствор сравнения А). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 400 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора ГСО цинарозида при длине волны 400 нм, приготовленного по аналогии с испытуемым раствором.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
І Ул і і
_ £)*/и0 *50*1*25*100*100 Ц,*т *25*1*25*(100-Ж),
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
Do - оптическая плотность раствора ГСО цинарозида;
т - масса сырья, г;
то - масса ГСО цинарозида, г;
W - потеря в массе при высушивании в процентах.
Примечание: приготовление раствора цинарозида стандартного образца. Около 0,02 г (точная навеска) цинарози-да помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 15-20 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А). 1 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора 95% этиловым спиртом до метки (испытуемый раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, который готовят следующим образом: 1 мл раствора А цинарозида помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки 95% этиловым спиртом (раствор сравнения Б).
Методика количественного определения суммы флаво-ноидов в лекарственном средстве «Танацехола таблетки». Около 0,1 г растертого в ступке препарата «Танацехола таблетки» (точная навеска) растворяют в мерной колбе вместимостью 25 мл в 20 мл 40% спирта этилового при перемешивании в течение 1 ч, доводят объем раствора 40% спиртом этиловым до метки и перемешивают (раствор А). Раствор А фильтруют через фильтр с «красной» полосой,
2 мл полученного фильтрата (раствор А) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки и перемешивают (раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, приготовленный при тех же условиях, но без добавления алюминия хлорида (раствор сравнения Б). Измерение оптической плотности проводят на спектрофотометре при длине волны 400 нм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора ГСО цинарозида при длине волны 400 нм, приготовленного по аналогии с испытуемым раствором.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинаро-зид и абсолютно сухой препарат в процентах (X) вычисляют по формуле:
_ Б*т0 *25*1*25*100*100 Б0*т *25*2*25* (100 - Ж)
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
Dо - оптическая плотность раствора ГСО цинарозида;
т - масса препарата, г;
то - масса ГСО цинарозида, г;
W - потеря в массе при высушивании в процентах.
Фармация
Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной с доверительной вероятностью 95% составляет ±3,90% (таблица 2), а в методике анализа лекарственного средства «Танацехола таблетки» ±3,16% (таблица 3).
ТАБЛИЦА 2.
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной
f Х S Р, % t (РЛ) дх Е, %
10 1,98 0,035 95 2,23 0,077 ±3,90
ТАБЛИЦА 3.
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Танацехола таблетки»
f Х S Р, % t (РЛ) дх Е, %
10 4,05 0,057 95 2,23 0,128 ±3,16
С применением разработанных методик проанализирован ряд образцов сырья пижмы и лекарственного средства «Танацехола таблетки». Показано, что содержание флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной варьирует в пределах от 1,58% до 1,98% (таблица 4). Содержание суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Танацехола таблетки» варьирует в пределах от 3,14 до 4,05%.
ТАБЛИЦА 4.
Содержание суммы флавоноидов в различных образцах цветков пижмы обыкновенной
№ п/п Характеристика образца сырья содержание суммы флаво-ноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье (в %)
1. ОАО «Красногорсклексредства» -сырье измельченное(пачки) 50 г 1,98±0,04
2. ОАО «Красногорсклексредства» -сырье-порошок (фильтр-пакеты) 1,5 г 1,88±0,03
3. Самарская обл. (окр. с. Нижнее Санчелеево, июль 2008 г.) 1,70±0,02
4. Самарская обл. (окр. г. Тольятти, июль 2008 г.) 1,58±0,03
5. Фармакопейный участок ботанического сада (г. Самара, июль 2009 г.) 1,80±0,04
Таким образом, разработанная методика количественного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной позволяет объективно оценивать качество
данного сырья. В качестве оптимального экстрагента выбран 70% спирт этиловый вместо экстрагента (95% спирт этиловый), используемого в фармакопейной методике. При этом обоснована целесообразность использования в методике анализа дифференциальной спектрофотометрии при длине аналитической длине волны 400 нм и ГСО цинарозида. На основании проведенных исследований нами рекомендовано введение нового числового показателя «Содержание флавоноидов» (не менее 1,5%) вместо используемого критерия в фармакопейной статье на цветки пижмы обыкновенной
ЕЮ
«Содержание флавоноидов и фенолкарбоновых кислот» (не
менее 2,5%). На наш взгляд, аналогичные методологические подходы целесообразно применять и для целей стандартизации лекарственного средства «Танацехол».
Выводы
1. Разработаны методологические подходы к стандартизации сырья и препаратов пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.), заключающиеся в определении суммы флавоноидов с использованием дифференциальной спектрофото-метрии и Государственного стандартного образца цинаро-зида.
2. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид (аналитическая длина волны 400 нм) в цветках пижмы обыкновенной с использованием в качестве экстрагента 70% этилового спирта в режиме однократной экстракции.
3. Содержание суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной варьирует в пределах от 1,58 до 1,98%, что позволяет рекомендовать новый числовой показатель «Содержание флавоноидов» (не менее 1,5%) вместо используемого критерия «Содержание флавоноидов и фенолкарбоновых кислот» (не менее 2,5%).
4. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в лекарственном средстве «Танацехола
таблетки», с использованием которой определено, что содержание суммы флавоноидов в данном препарате варьирует в пределах от 3,14 до 4,05% (в пересчете на цинарозид).
5. Ошибка единичного определения суммы флавоноидов в цветках пижмы обыкновенной с доверительной вероятностью 95% составляет ±3,90%, а в методике анализа лекарственного средства «Танацехола таблетки» ±3,16% .
Ел
ЛИТЕРАТУРА
1. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов.). 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ». 2007. 1239 с.
2. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава». 2009. 963 с.
3. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник. М.: Медицина. 2002. 656 с.
4. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Asteraceae (Compositae). СПб.: Наука, 1993. С. 190-192.
5. Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. Вып. 2. М.: Медицина. 1990. 400 с.
6. ФС 42-3116-95. Танацехол. М. 1995. 6 с.
7. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. The Systematic Identification of Flavonoids. Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlag. 1970. 354 p.
8. Куркин В.А., Авдеева Е.В. Проблемы стандартизации растительного сырья и препаратов, содержащих фенилпропаноиды. Фармация. 2009. Т. 57. № 1. С. 51-54.
