CC BY
97
УДК 615.32:547.9+543.544
АКТУАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ МАКЛЕЙИ
© Е.С. Артамонова, В.А. Куркин
ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Росздрава», ул. Чапаевская, 89, Самара, 443099 (Россия)
E-mail: vakur@samaramail.ru
К лекарственным растениям, обладающим противовоспалительными, антимикробными и регенерирующими свойствами, относятся виды маклейи. Несмотря на многолетний опыт применения травы маклейи в медицинской практике (препарат сангвиритрин), проблема стандартизации данного сырья остается актуальной. В разделах «Качественные реакции» (ФС 42-2666-89 «Трава маклейи») и «Подлинность» (ФС 42-2444-98 «Сангвиритрин») не используются такие современные методы анализа, как тонкослойная хроматография (ТСХ) и УФ-спектроскопия, нашедшие в последнее время широкое применение в методиках качественного анализа. С целью усовершенствования методов анализа сырья и препаратов маклейи нами были разработаны методики качественного анализа с использованием ТСХ и спектрофотометрии.
Введение
В медицинской практике с целью профилактики и лечения различных заболеваний широко используются противовоспалительные, антимикробные и регенерирующие лекарственные средства растительного происхождения. К лекарственным растениям, обладающим данным спектром действия, относятся различные виды маклейи - Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde, Macleaya cordata (Willd.) R.Br. (сем. Маковые - Papa-veraceae), в траве которой содержатся изохинолиновые алкалоиды (около 1,2%), причем среди них основными являются сангвинарин и хелеритрин (на их долю приходится до 80-90% от суммы алкалоидов). В сырье содержатся также алкалоиды протопин, криптопин, аллокриптопин [1]. Сумма бисульфатов сангвинарина и хелерит-рина составляет лекарственный препарат сангвиритрин, нашедший применение в дерматологии, стоматологии, гинекологии и неврологии [1, 2]. Вследствие высокого содержания этих алкалоидов в траве маклейи сердцевидной и маклейи мелкоплодной данное растение рекомендовано для получения сангвиритрина. Данный препарат обладает широким спектром антимикробной активности, ингибируя развитие грамположи-тельных и грамотрицательных бактерий, дрожжеподобных и мицелярных грибов, патогенных простейших. В числе положительных качеств отмечают высокую эффективность, хорошую переносимость, отсутствие общетоксических и местнораздражающих свойств, отсутствие явления резистентности даже при длительном применении [3]. В настоящее время официнальными лекарственными формами сангвиритрина являются
0,2% водно-спиртовой раствор, 1% линимент и таблетки по 0,005 г для получения 0,1-0,001% водных растворов. В ММА им. Сеченова разработана технология получения губки коллагеновой с сангвиритрином сан-гвикол, применяемой в качестве раневого покрытия для лечения инфицированных и ожоговых ран, язв различной этиологии [4]. Актуальность данных исследований определяется тем, что в разделах «Качественные реакции» (ФС 42-2666-89 «Трава маклейи») и «Подлинность» (ФС 42-2444-98 «Сангвиритрин») не используются такие современные методы анализа, как тонкослойная хроматография (ТСХ) и УФ-спектроскопия, нашедшие в последнее время широкое применение в методиках качественного анализа.
Цель данных исследований - разработка более объективных методик качественного анализа сырья и препаратов маклейи.
* Автор, с которым следует вести переписку.
Экспериментальная часть
Объект исследования - образцы травы маклейи, культивируемой в Самарской области (п. Антоновка, ЗАО «Самаралектравы») и в Ботаническом саду Самары; водно-спиртовые извлечения из воздушно-сухой травы маклейи; препарат сангвиритрин и Государственный стандартный образец (ГСО) сангвиритрина.
Методики качественного анализа травы маклейи
1. ТСХ-анализ. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром І мм. Около І г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,0І. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 45 мин. Затем колбу закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через фильтр (красная полоса) и охлаждают в течение 30 мин (извлечение из травы).
На стартовую линию пластинки «Сорбфил ПТСХ-ПА-УФ» (Россия) наносят микропипеткой 0,02 мл извлечения и 0,02 мл раствора ГСО сангвиритрина. Пластинку высушивают на воздухе в течение 5 мин, затем помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ-этанол (9 : І) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 9 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе в течение 5 мин. Пластинку просматривают в УФ-свете при длине волны 254 и Збб нм до и после обработки хроматограммы реактивом Драгендорфа. При этом на хроматограмме на уровне пятен ГСО сангви-ритрина обнаруживаются два пятна с величиной Rf около 0,7 (сангвинарин) и 0,б (хелеритрин), имеющих соответственно оранжевую и желтую окраску в видимом свете и ярко-оранжевую и ярко-желтую флуоресценцию при просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны Збб нм, а также кирпично-красную и желтую окраску при проявлении реактивом Драгендорфа (рис. І). Допускается также наличие других пятен.
Аналогично проводили исследование раствора сангвиритрина, нанося на стартовую линию пластинки «Сорбфил ПТСХ-ПА-УФ» (Россия) микропипеткой 0,02 мл 0,І% раствора сангвиритрина в 70% этаноле.
2. УФ-спектроскопия. І мл полученного извлечения (ТСХ-анализ) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% этиловым спиртом (раствор А). 5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% этиловым спиртом (испытуемый раствор Б). В качестве раствора сравнения используют 70% этанол. Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра Specord 40 (Analytik Jena) в кювете с толщиной слоя І0 мм в диапазоне длин волн от І90 до 700 нм.
Рис. 1. Хроматограмма извлечения из травы маклейи (хлороформ-этанол, 9 : 1). 1 - извлечение из травы маклейи, культивируемой в Ботаническом саду Самары;
2 - извлечение из травы маклейи, культивируемой в
п. Антоновка Самарской обл. (ЗАО «Самаралектравы»);
3 - р-р сангвиритрина; 4 - р-р ГСО сангвиритрина
Обсуждение результатов
Использующиеся в нормативной документации на сырье маклейи качественные реакции являются общими реакциями на группу алкалоидов, что, на наш взгляд, не может быть доказательством содержания характерных алкалоидов изучаемого растения. Использование ГСО сангвиритрина в методе ТСХ позволяет достоверно идентифицировать сангвинарин и хелеритрин (Я около 0,7 и 0,6 соответственно), содержащиеся в извлечении из травы маклейи.
Изучение УФ-спектров раствора ГСО сангвиритрина показало, что данный раствор имеет следующие максимумы поглощения: 272, 321, 399 нм (рис. 2).
УФ-спектр извлечения из травы маклейи имеет следующие максимумы поглощения: 273, 283, 324 нм (рис. 3). Следовательно, данные характеристики, а именно: максимумы поглощения около 270 и 320 нм можно использовать для качественной и количественной идентификации сырья и препаратов маклейи.
Рис. 2. УФ-спектр раствора ГСО сангвиритрина
Рис. 3. УФ-спектр извлечения из травы маклейи
Выводы
1. Обоснована целесообразность использования ТСХ и УФ-спектроскопии для определения подлинности сырья и препаратов маклейи.
2. Разработана методика качественного анализа сырья травы маклейи с использованием ТСХ-анализа и ГСО сангвиритрина путем обнаружения двух доминирующих компонентов: сангвинарина (Rf около 0,7) и хелеритрина ((Rf около 0,6).
3. Разработана методика качественного анализа сырья травы маклейи с использованием УФ-спектроскопии путем установления характерных максимумов поглощения.
Список литературы
1. Куркин Б.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара, 2004. 1180 с.
2. Ьичканова С.А., Габриэлян Н.И., Чубарова А.Ь., Крутикова Н.М. Применение сангвиритрина для профилактики раневой инфекции у кардиохирургических больных // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Российского национального конгресса. М., 2001. С. 221.
3. Ьичканова С.А. Клинические исследования антимикробного растительного препарата сангвиритрин // Фармация. 2003. Т. 52. №2. С. 31-34.
4. Истранова Е.Ь., Чернова С.Ь., Абоянц Р.К., Барсуков А.А., Истранов Л.П. Сангвикол - новая лекарственная форма сангвиритрина // Фармация. 2002. Т. 51. №4. С. 27-29.
Поступило в редакцию б мая 2007 г.
