CC BY
57
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ
Активность гонадотропного гормона в сыворотке жеребых кобыл Абай Г.1, Адилбеков Н.Ч.2, Калтаев А.Ж.3
'Абай Гаухар /Abay Gaukhar - кафедра биотехнологии, докторант, Южно-Казахстанский государственный университет имени М. Ауезова, г.Шымкент;
2Адилбеков Нургали Чимкентбаевич /Adilbekov Nurgali Chimkentbaevich - кандидат сельскохозяйственых наук, Юго-Западный научно-исследовательский институт растениеводства и животноводства, гАстана;
3 Калтаев Аскар Жорабекович /Kaltaev Askar Zhorabekovich - и.о. директора, Южно-Казахстанский областной филиал РГП на праве хозяйственного ведения, «Республиканская ветеринарная лаборатория», г.Шымкент
Аннотация: в статье приведены данные об изучении степени накопления общей гонадотропной активности в сыворотках жеребых кобыл, а также о гормональном статусе кобыл-доноров в зависимости от сроков жеребости.
Максимальный пик гонадотропной активности приходится на 65-й день жеребости, с последующей динамикой снижения активности. Следует также отметить, что с повышением концентрации гонадотропных гормонов в сыворотке крови снижаются коэффициенты стандартного отклонения и изменчивости их активности.
Abstract: in article data on studying of extent of accumulation of the general gonadotropny activity are provided in serums the zherebykh of mares, and also about the hormonal status of donor mares depending on terms of their zherebost.
The maximum peak of gonadotropny activity falls on the 65th day of a zherebost, with the subsequent dynamics of decrease in activity. It should be noted also that with concentration increase the gonadotropnyh of hormones in serum of blood decreases coefficients of a standard deviation and variability of their activity.
Ключевые слова: сыворотка жеребых кобыл, гормоны, гормональный статус, гонадотропин, жеребые кобылы.
Keywords: pregnant mare serum (PMS), hormones, hormonal status, gonadotropin, pregnant mares.
УДК:636.082.4.612.018
Исследования последнего десятилетия расширили знания в области анатомических и физиологических связей между гипоталамусом и гипофизом. Установлено регулирующее влияние подгуборья на гипофиз через портальную систему. Смысл механизма этого регулирующего влияния сводится к тому, что стимулирующее вещество, синтезируемое в гипоталамусе, поступает через портальную систему в кровь, а затем к клеткам передней доли гипофиза, возбуждая в них образование гонадотропных гормонов[9].
Основоположником отечественной ветеринарной эндокринологии М.М. Завадовским и его школой заложены основы применения гормональных препаратов для коррекции гормонального статуса у животных с целью регуляции воспроизводительной функции у самок сельскохозяйственных животных и лечения гинекологических болезней у них [2],[3].
Сыворотка крови жеребых кобыл (СЖК) является одним из гормональных препаратов, нашедших широкое практическое применение, как для лечения гипофункции яичников, так и повышения воспроизводительной функции у самок сельскохозяйственных животных[3].
Заготовка сыворотки жеребых кобыл осуществляется в период с 40-45 по 90-100 день жеребости, когда в ней содержится максимальное количество гонадотропных гормонов[5]. Однако, изменчивость выхода гонадотропных гормонов и его активности в препаратах, полученных из сыворотки крови у одних и тех же жеребых кобыл, очень высока и не всегда способствует получению положительных результатов.
Данный фактор значительно препятствует эффективному получению гонадотропных гормонов из исходного сырья и управлению процессом размножения у высокоценных генотипов гормональным методом. Это указывает на необходимость подробного изучения положительных и отрицательных причин, влияющих на гонадотропную активность СЖК. [6].
Исходя из вышеизложенного, необходимо изучить выход гонадотропной активности сыворотки жеребых кобыл.
Материалы и методы: Исследования проводились в лаборатории Юго-Западного научно-исследовательского института животноводства и растениеводства. Объектом исследований послужили кобылы-продуценты СЖК породы «джабе». Материалом исследования послужили: сыворотка жеребых кобыл, гонадотропин сыворотки жеребых кобыл.
Исследуемые животные были отобраны в частных крестьянских хозяйствах «Жанторе», «Жайлау» ЮжноКазахстанской области. В качестве доноров для получения СЖК отобраны 3-4-5-6-7-8-9-10 летние кобылы со сроками жеребости 40-45-50-55-60-65-70-75-80 дней, всего отобрано 16 голов жеребых кобыл с каждого возраста по две головы. Отобранные подопытные животные содержались в одинаковых условиях в течение всего периода опыта.
Гормональная диагностика жеребости кобыл проводилась на половозрелых самцах озерных лягушек длиной 10-17см. Озерная лягушка широко распространена на территории нашей Республики. Самцы отличаются от самок мозолями на внутренних пальцах передних конечностей и голосовыми мешками, резонаторами. Лягушек содержат в искусственных водоемах, имеющих участки суши. Перед постановкой реакций проверяют, чтобы в их моче не было спермиев. Для этого самца обертывают мокрой марлей, в клоаку на глубину 0,5 см вводят пастеровскую пипетку, берут каплю мочи и наносят ее на предметное стекло, накладывают покровное стекло и рассматривают под микроскопом. Отбирают самцов, в моче которых нет спермиев [2],[6].
Гонадотропин крови жеребых кобыл вызывает появление спермиев в моче самцов озерных лягушек. Реакцию считают положительной, если в поле зрения микроскопа обнаруживают спермии у двух из трех подопытных самцов; отрицательной, если спермиев нет у всех трех лягушек [1],[2].
Суммарную гонадотропную активность определяли с помощью биопробы, на инфантильных самках белых мышей массой 6-8 грамм в возрасте 17-21 дней. Для иммуноферментного определения фолликулостимулирующего гормона в препарате ГСЖК использовали набор «Гонадотропин ИФА-ФСГ/ЛГ», предназначенный для количественного определения концентрации ФСГ и ЛГ. Набор состоит из:
- двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммунобилизованными на внутренней поверхности лунок многоканальными антителами к ФСГ и ЛГ;
- конъюгат анти-ФСГ/ЛГ-пероксидаза;
- концентрированный буферный раствор для промывки лунок;
- раствор тетраметилбензидина;
- стоп-реагент;
- контрольная сыворотка с известным содержанием ФСГ и ЛГ.
Для получения крови от кобыл-доноров использовали специальные емкости из полиэтиленовой пленки толщиной 120-150 мкм и объемом 10 литров. Мешок двустенный, полностью герметизирован, для подготовки его к взятию крови в одном из углов делается ножницами разрез, куда вставляют стеклянную трубку, смонтированную с резиновой трубкой длиной 120-150 мм. На конце резиновой трубки монтируется специальная кровопускательная игла (стерильная) с мандреном. Перед использованием в мешок через разрез с помощью шприца вводится глюкозно-цитратный раствор следующего состава:
1. лимоннокислый натрий (3-х замещенный) 10 г [2],[3];
2.глюкоза 2,5 г;
3.сульфацил натрия (растворимый) 5 г;
4.риванол или фурациллин 0,05 г;
5.вода дистиллированная 100 г.
На каждый литр крови необходимо 35 мл раствора. Готовые для взятия крови емкости вместе с иглами и глюкозно-цитратным раствором облучают ультрафиолетом 20-30 мин.
Для получения гонадотропина традиционными методами из сыворотки крови жеребых кобыл осаждали балластные белки путем смешивания с этиловым спиртом с температурой 4-70С, разведенным 10М уксусной кислотой (А) и 4М уксуснокислым натрием (Б), взятыми в соотношении, масс. % А 15, 1-23, 5; Б 4,9-12,5; этиловый спирт остальное. Гонадотропин осаждают, смешивания центрифугат с охлажденным до 1-50С этиловым спиртом в соотношении 1: (1,25-1,50) в течение 1-2 ч. осадок растворяют в физиологическом растворе в коллоидной мельнице из расчета 1,0-1,5 кг сырой массы на 15-20 л. Стабилизируют добавлением 40-50 г/л аминоуксусной кислоты. Осветляют раствор сепарированием, проводят коррекцию рН до 7,6-7,8.
Статическая обработка экспериментальных данных проводилась по стандартным методикам на персональном компьютере [8].
Результаты исследований: Существует определенная закономерность в проявлении динамики накопления, пика и спада гонадотропной активности в сыворотке крови у жеребых кобыл на различны сроках беременности [4].
Во время проведения НИР была поставлена цель изучить степень накопления общей гонадотропной активности в 144-х моносыворотках, полученных от жеребых кобыл в разные периоды их жеребости (таблица 1).
Таблица 1.
Гонадотропная активность СЖК - в зависимости от сроков жеребости доноров
Сроки Число образцов крови Показатели
М +т колебания о+тг Оу+тсу
40 16 83,1 + 6,67 45,0-140,0 26,7 +4,71 32,1+5,67
45 16 161,9+ 10,24 90,0-220,0 40,9 +7,18 25,3+4,47
50 16 198,7+ 12,98 100,0-270,0 51,9 +9,17 26,1+4,61
55 16 220,6+ 10,80 120,0-270,0 43,2 +7,63 19.6+3,46
60 16 265,0+10,68 160,0-310,0 42,7 +7,54 16,1+2,84
65 16 284,4+ 6,31 240,0-320,0 25,2 +4,46 8,9+1,57
70 16 273,7+ 6,57 230,0-320,0 26,2 +4,63 9,6+1,70
75 16 260,6 + 9,86 170,0-300,0 39,4 +6,97 15,1+2,66
80 16 249,4 + 12,0 130,0-290,0 48,0+ 8,48 19,2+3,39
В среднем 144 221,9 + 5,95 45,0 -320,0 71,4 +4,20 32,1+1,89
Из приведенных данных таблицы видно, что накопление гонадотропного гормона в сыворотке жеребых кобыл в различные сроки жеребости имеет разную динамику, и распределились в следующем порядке:
- на 40 день жеребости гормональная активность в среднем составила 83,1 + 6,67 м.е., с колебанием 45-140м.е.;
- на 45 день жеребости гормональная активность в среднем составила 166,8+ 10,24 м.е., с колебанием 90-220 м.е.;
- на 50 день жеребости гормональная активность в среднем составила 198,7+ 12,98 м.е., с колебанием 100-270 м.е.;
- на 55 день жеребости гормональная активность в среднем составила 220,6+ 10,80 м.е., с колебанием 120-270 м.е.;
- на 60 день жеребости гормональная активность в среднем составила 265,0+10,68 м.е., с колебанием 160-310 м.е.;
- на 65 день жеребости гормональная активность в среднем составила 284,4+ 6,31 м.е., с колебанием 240-320 м.е.;
- на 70 день жеребости гормональная активность в среднем составила 273,7+ 6,57 м.е., с колебанием 230-320 м.е.;
- на 75 день жеребости гормональная активность в среднем составила 260,6 + 9,86 м.е., с колебанием 170-300 м.е.;
- на 80 день жеребости гормональная активность в среднем составила 249,4 + 12,0 м.е., с колебанием 130-290 м.е.
В среднем жеребости гормональная активность в среднем составила 221,9 + 5,95 м.е., с колебанием 45 -320 м.е.;
Первое взятие крови у кобыл продуцентов ГСЖК приходится на 40-й день жеребости во всех группах. В целом минимальная активность гонадотропных гормонов установлена в группе доноров со сроком жеребости 40 дней, активность в среднем составила 83,1 + 6,67 м.е. Образцы крови, полученные от доноров на 60-65 дни жеребости отличались высокой активностью и составили в пределах от 260,6 + 9,86 м.е. до 284,4+ 6,31 м.е. Сыворотки жеребых кобыл, полученные на 45-50 дней жеребости, по активности занимали промежуточное положение. В целом, максимум гонадотропной активности приходится на 65-й день жеребости, с последующей динамикой снижения активности. Следует также отметить, что с повышением концентрации гонадотропных гормонов в сыворотке крови снижается коэффициенты стандартного отклонения и изменчивости их активности.
Также был изучен гормональный статус кобыл-доноров в зависимости от сроков их жеребости. Сыворотки крови, полученные от кобыл-доноров с разными сроками жеребости по статусу между собой существенно отличались (диаграмма). Как видно из диаграммы, сыворотки жеребых кобыл, полученные на 40-й день жеребости, имели только низкий статус (100%). Препараты, полученные на 45-й день жеребости, имели средний статус (56,2%) и низкий статус (43,8%). От доноров со сроком жеребости 50-55 дней в основном получены препараты со средним статусом (62,5% и 56,2%).
Наиболее высокая активность гормонов наблюдалась в СЖК, полученной от доноров в период с 65-го по 80-й день жеребости, и составило от 75,0% до 93,7%. От доноров со сроком жеребости 60 дней получены гормональные препараты с высоким и средним статусом 68,8%, 31,2%.
Выводы: Таким образом, установлено, что на активность гонадотропина в сыворотке крови кобыл-доноров разных возрастов существенное влияние оказывает гормональный фон индивидуума и сроки их жеребости.
Индивидуальную гормональную особенность необходимо использовать как критерий гормональной характеристики кобылы-донора при взятии крови. При этом максимальный пик активности наблюдался на 60-75 день жеребости. Возраст жеребых кобыл не оказывает существенного влияния на активность в сыворотке крови. При этом с увеличением возраста наблюдается тенденция к снижению активности крови.
Литература
1. Логинов Р. О. Влияние различных факторов на биологическую активность гонадотропина сыворотки жеребых кобыл. Дубровицы, 2006.
2. Шаталов П.И. Гравогормон в животноводстве. Москва, 1975. с 3-7.
3. Меркулова М.В. Выделение, очистка гонадотропного гормона и разработка иммуноферментного набора для его определения в СЖК. Дубровицы 1997.
4. Федоров И.В. Динамика гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл под влиянием генетических факторов и окружающей среды. Уфа 2005. URL:http://earthpapers.net/dinamika-gonadotropnoy-aktivnosti-syvorotki-krovi-zherebyh-kobyl-pod-vliyaniem-geneticheskih-faktorov-i-okruzhayuschey-sr#ixzz3ACIXdk6w. (Дата обращения: 27.08.2014).
5. Бекетауов О., Алибаев Н.Н., Адилбеков Н. Биологические свойства СЖК в зависимости от дней жеребости донора-продуцента //Проблемы экологии, аридного кормопроизводства и животновотсва в Казахстане: матер. межд. науч.-практ. конф.-Шымкент: 2009. с.221-222.
6. Падучева А.Л. Гормональные методы повышения плодовитости сельскохозяйственных животных. Москва: Колос,1965. с35-43.
7. Шевелуха В.С. Сельскохозяйственная биотехнология. Москва: Высшая школа, 2003.-с.191-195.
8. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. Москва,1980.
9. Амарбаев. Ш.М. Биология ягнят многоплодных мясо-сальных овец. Алматы: Наука, 1975 с 6-10.
