CC BY
7
Мамаризаев А.А. ассистент кафедры хирургии и урологии Андижанский государственный медицинский институт Научный руководитель: Рустамов У.М., к.м.н.
доцент
Андижанский государственный медицинский институт
АКТИВАЦИЯ SRD5A2 СВЯЗАНА СО СНИЖЕНИЕМ ЭКСПРЕССИИ
5-А-РЕДУКТАЗЫ 2 ТИПА ПРИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ ГИПЕРПЛАЗИИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Аннотация. В настоящее время в качестве методов лечения ДГПЖ используются выжидательная тактика, лекарственная терапия и хирургическое вмешательство 6. Большинство пациентов получают медикаментозную терапию, в основном включающую а-адреноблокаторы и ингибиторы 5-а-редуктазы (5-АРИ), когда впервые возникают СНМП 7. Однако, только 5-АРИ эффективно уменьшают размер простаты примерно на 20-30% за 4-6 месяцев., который имеет более высокое сродство к рецепторам андрогенов (AR). Снижение концентрации ДГТ в простате вызывает апоптоз и некроз АР-зависимых клеток и, в конечном счете, уменьшает размер простаты 8, 9. Финастерид и дутастерид являются двумя основными препаратами 5-АРВ, нацеленными на различные изотипы 5-АР. Финастерид специфически ингибирует SRD5A2, в основном экспрессирующийся в простате.
Ключевые слова: SRD5A2, адреноблокаторы, простата, ингибитор, 5-альфа редуктаза.
Mamarizaev A.A. assistant
Department of Surgery and Urology Andijan State Medical Institute Scientific adviser: Rustamov U.M., candidate of medical sciences
associate professor Andijan State Medical Institute
SRD5A2 ACTIVATION IS ASSOCIATED WITH A DECREASED EXPRESSION OF 5-A-REDUCTASE TYPE 2 IN BENIGN PROSTATE
HYPERPLASIA
Annotation. The current treatment options for BPH are expectant management, drug therapy, and surgery 6. Most patients receive medical therapy, mainly a-blockers and 5-a-reductase inhibitors (5-ARIs), when LUTS
first occurs 7. However, only 5-APIs are effective in reducing the size of the prostate by about 20-30% in 4-6 months., which has a higher affinity for androgen receptors (AR). A decrease in DHT concentration in the prostate causes apoptosis and necrosis of AP-dependent cells and ultimately reduces the size of the prostate 8, 9. Finasteride and dutasteride are the two main 5-ARV drugs that target different isotypes of 5-AR. Finasteride specifically inhibits SRD5A2, which is mainly expressed in the prostate.
Key words: SRD5A2, blockers, prostate, inhibitor, 5-alpha reductase.
Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) гистологически характеризуется аберрантной пролиферацией эпителиальных и стромальных клеток в переходной зоне предстательной железы 1. Заболеваемость ДГПЖ увеличивается с возрастом; примерно у 50% мужчин в возрасте 50 лет и более чем у 80% мужчин в возрасте 80 лет наблюдаются патологические проявления ДГПЖ 2, 3. Характер разрастания предстательной железы указывает на то, что примерно у 25% мужчин клинические симптомы ДГПЖ разовьются в течение жизни 4. ДГПЖ ухудшает состояние качество жизни пожилых мужчин из-за симптомов нижних мочевыводящих путей (СНМП), включая мочеиспускание и задержку мочи 1, 5.
В предыдущих исследованиях сообщалось о значительной вариабельности экспрессии белка SRD5A2 в образцах ДГПЖ, и 10-36,5% образцов ДГПЖ не экспрессировали белок SRD5A2.
Материалы и методы
Иммуногистохимию (ИГХ) проводили, как описано ранее Lin et al. 9. Вкратце, срезы образцов инкубировали с антителом против SRD5A2 (Novus Biological Inc., Centennial, CO, USA, NBP1-46510) в соответствии с рекомендациями производителя в концентрации 1:1500. Отрицательные контроли использовались на протяжении всего протокола иммуноокрашивания. Три репрезентативные области из каждого образца были случайным образом выбраны под 40-кратным увеличением для оценки иммунореактивности двумя патологами мочеполовой системы. Сотню клеток, выбранных случайным образом из эпителия, вручную подсчитывали в каждом репрезентативном срезе. Каждую клетку оценивали по шкале от 0 до 3 в соответствии с интенсивностью окрашивания. Затем для каждого образца была создана визуальная оценка в диапазоне от 0 до 300. Оценка от 0 до 100 была определена как слабая экспрессия, а оценка от 101 до 300 — как сильная экспрессия.
Полученные результаты
Экспрессия SRD5A2 различается в разных тканях и клетках ДГПЖ. Для оценки экспрессии SRD5A2 в различных тканях предстательной железы было собрано в общей сложности 59 образцов ДГПЖ. Иммуногистохимическое окрашивание показало, что SRD5A2
экспрессировался в основном в эпителиальных клетках переходной зоны предстательной железы, а небольшое количество SRD5A2 экспрессировалось в стромальных клетках, что согласуется с предыдущими исследованиями 6, 7, 18. В нашем исследовании SRD5A2 выраженность варьировала у разных пациентов. Восемь случаев (13,6%) ДГПЖ показали отрицательную экспрессию SRD5A2, 17 случаев (28,8%) показали слабую экспрессию и 34 случая (57,6%) показали сильную положительную экспрессию. Экспрессия SRD5A2 в ВРН-1 и RWPE-1, двух классических клеточных линиях эпителия предстательной железы, была обнаружена с помощью вестерн-блоттинга.
не имела различий в тканях ДГПЖ с разной экспрессией SRD5A2.
Чтобы проверить, может ли miR-1199-5p регулировать экспрессию SRD5A2, мы трансфицировали миметики miR-1199-5p в клетки RWPE-1, которые сильно экспрессировали SRD5A2, и ингибиторы miR-1199-5p в клетки ВРН-1, которые слабо экспрессировали SRD5A2. qRT-PCR и вестерн-блоттинг использовали для обнаружения изменений в уровнях мРНК SRD5A2 и экспрессии белка, соответственно, после трансфекции. Мы обнаружили, что экспрессия мРНК (рис. 3А) и белка SRD5A2 (рис. 3В) значительно снизилась после трансфекции клеток RWPE-1 миметиками miR-1199-5p. Тогда как экспрессия белка SRD5A2 была значительно повышена в клетках ДГПЖ-1 после трансфекции ингибитором miR-1199-5р. Транзиторная трансфекция миметиков miR-1199-5p и репортеров дикого типа 3'UTR SRD5A2 в клетки 293Т выявила значительное снижение люминесценции, чего не наблюдалось в мутантной версии репортера (рис. 3Д). Эти результаты подтвердили, что miR-1199-5p может связываться с 3'UTR SRD5A2 и ингибировать его экспрессию.
Было также обнаружено влияние финастерида на жизнеспособность BPH-1 и RWPE-1 после трансфекции миметиков и ингибиторов miR-1199-5р с помощью проточной цитометрии. Как мы сообщали ранее, финастерид не индуцировал апоптоз ДГПЖ-1, что показало снижение экспрессии SRD5A2 9. Однако увеличение экспрессии SRD5A2 в клетках ДГПЖ-1 посредством трансфекции ингибитора миР-1199-5р не приводило к развитию финастерида. (100 мкМ) чувствительность в клетках ДГПЖ-1 (рис. 3F). Примечательно, что финастерид (100 мкМ) способствовал апоптозу RWPE-1 и подавлял экспрессию SRD5A2 посредством трансфекции miR-1199-5p, имитирующей ингибирование прогрессирования апоптоза (рис. 3G). Различные выражения AR могут объяснить это явление. В частности, клетки RWPE-1 экспрессируют AR, тогда как клетки ВРН-1 лишены AR 22, 23. Таким образом, эти данные указывают на то, что miR-1199-5p может снижать экспрессию SRD5A2 и влиять на апоптоз клеток предстательной железы.
Использованные источники:
1. Tong Y, Zhou R-Y. Review of the Roles and Interaction of Androgen and Inflammation in Benign Prostatic Hyperplasia. Mediators Inflamm. 2020; 2020:7958316. doi:https://doi.org/10.1155/2020/7958316.
2. Chughtai B, Forde JC, Thomas DDM, et al. Benign prostatic hyperplasia. Nat Rev Dis Primers. 2016;2:16031. doi:https://doi.org/10.1038/nrdp.2016.31.
3. Xiao H, Jiang Y, He W, et al. Identification and functional activity of matrix- remodeling associated 5 (MXRA5) in benign hyperplastic prostate. Aging. 2020;12(9):8605-21. doi:https://doi.org/10.18632/aging.103175.
4. Brennen WN, Isaacs JT. Mesenchymal stem cells and the embryonic reawakening theory of BPH. Nat Rev Urol. 2018;15(11):703-15. doi:https://doi. org/10.1038/s41585-018-0087-9.
5. Ma J, Gharaee-Kermani M, Kunju L, et al. Prostatic fibrosis is associated with lower urinary tract symptoms. J Urol. 2012;188(4):1375-81. doi:https://doi. org/10.1016/j.juro.2012.06.007.
