CC BY
13
СБОРНИК ТЕЗИСОВ
089-090
Материал и методы. Исследованию подвергались симпатические узлы, спинной мозг, интрамуральные ганглии тонкой кишки и гипоталамус молодых (2-3 месяца) и старых крыс (2-2,5 года) . Эксперименты проводились с соблюдением основных биоэтических правил . Выявление nNOS проводили при помощи иммуногистохимических методов, вестерн-блот-тинга
Результаты. Во всех возрастных группах nNOS-иммуноре-активные (ИР) нейроны отсутствуют в симпатических узлах . У молодых крыс две трети преганглионарных симпатических спинномозговых нейронов являются nNOS-ИР. Эта доля увеличивается у старых животных до 75-80% . В тонкой кишке в узлах подслизистого сплетения у молодых крыс наблюдались единичные nNOS-ИР нейроны, однако у старых крыс процент nNOS-ИР нейронов увеличивался до 27±1,9 . У старых животных процент nNOS-ИР нейронов и степень имму-нофлуоресценции к nNOS также достоверно увеличивались в ВМЯ и ДМЯ гипоталамуса .
Заключение. Таким образом, в старческом периоде nNOS экспрессирует большее число центральных и периферических нейронов автономной нервной системы по сравнению с молодыми животными Тем не менее, значение повышенной экспрессии nNOS у старых животных остается неясным .
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 19-15-00039) .
089 РЕЦИКЛИРОВАНИЕ СИНАПТИЧЕСКИХ ВЕЗИКУЛ У ТЕПЛОКРОВНЫХ И ХОЛОДНОКРОВНЫХ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО АЦИДОЗА
Мухамедзянов Р. Д., Зефиров А. Л.
Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия
mramild1975@ra
Эксперименты проводили на диафрагме мыши и кожно-грудинной мышце лягушки с использованием флуоресцентного метода Исследовали эффекты закисления цитоплазмы нервных окончаний (НО) на рециклирование синаптических везикул Уменьшение внутриклеточного рН достигали замещением 50% NaC1 во внеклеточном растворе на пропионат натрия
Показателем загрузки красителя в НО при эндоци-тозе синаптических везикул являлось характерное свечение НО Для того, чтобы сравнить эффективность эндоцитоза в контроле и при действии пропионата натрия, нужно, чтобы за время раздражения, освободилось одинаковое количество квантов медиатора, т к эффективность захвата красителя FM1-43 напрямую определяется интенсивностью процессов экзоцитоза синаптических везикул . Анализ кумулятивных кривых показал, что загрузку красителя следует производить следующим образом: если в экспериментах с закислением внутриклеточной среды стимулировать двигательный нерв с частотой 20 имп/с в течение 100 секунд, то в контроле понадобится стимуляция двигательного нерва в течение 70 сек, для выброса одинакового количества квантов медиатора
Результаты экспериментов показали, что интенсивность свечения как в НО мыши, так и в НО лягушки при действии пропионата натрия была достоверно выше по сравнению с контролем
Динамику экзоцитоза синаптических везикул при длительном высокочастотном раздражении можно оценить по выгрузке красителя (снижению флуоресценции) из предварительно загруженных FM1-43 НО .
В синапсах мыши, в контроле интенсивность свечения постепенно снижалась в течение первых 7 минут ритмической стимуляции до 28% исходного и далее больше не изменялось Оставшийся уровень яркости отражал свечение нервного волокна, в котором не наблюдались пятна показывающие наличие окрашенных синаптических везикул При закисле-нии цитоплазмы двигательных НО, интенсивность свечения
падала более плавно и через 7 минут раздражения составляла 67% исходного, и далее до конца стимуляции снижалась не значительно Однако визуально можно было наблюдать оставшиеся светящиеся пятна, которые указывали на наличие синаптических везикул не подвергшихся экзоцитозу
В контроле у лягушки снижение свечения происходило в две фазы — сначала в течение 2 мин, быстро до 70% исходного уровня, а затем более медленно К 20 минуте стимуляции интенсивность свечения падала до 28%, и отражала фоновое свечение "пустой" нервной терминали . При закислении цитоплазмы НО лягушки динамика снижения флюоресценции отличалась В начале ритмического раздражения интенсивность свечения снижалась очень медленно и в течение первых 2 минут падала только до 94%±5 . Затем интенсивность свечения падала немного быстрее и к 20 минуте раздражения составляло 66% исходного В нервных терминалях лягушки так же наблюдались светящие пятна, указывающие на наличие синаптических везикул не подвергшихся экзоцитозу
Сделано заключение, что внутриклеточный ацидоз двигательного нервного окончания ведёт к изменению рециклирования синаптических везикул Изменения эти существенно отличаются у теплокровных и холоднокровных животных, и связаны они с неодинаковым вкладом разных путей рециклирования синаптических везикул в общую картину секреции медиатора у теплокровных и холоднокровных животных
090 25-ГИДРОКСИХОЛЕСТЕРИН ПОДАВЛЯЕТ ЭФФЕКТЫ СТИМУЛЯЦИИ ИЗОПРОТЕРЕНОЛОМ БЕТА-АДРЕНОРЕЦЕПТОРОВ В ПРЕДСЕРДИЯХ МЫШИ Одношивкина Ю. Г.1, Хакимов И. Р.1, Трусов Н. А.1, Исмагилова Д. А.1, Зефиров А. Л.1,2, Петров А. М.2,3 ТБОУ ВПО Казанский ГМУ, Казань, Россия 2ГБОУ ВПО Казанский ГМУ, Институт Нейронаук, Казань, Россия
3Казанский институт биохимии и биофизики, Федеральный исследовательский центр "Казанский научный центр Российской академии наук", Казань, Россия zjubra@mail . ru
Основную роль в регуляции инотропной функции сердца играют бета-адренорецепторы (бета-АР) . Бета-АР способны взаимодействовать со многими сигнальными путями, разнонаправленно регулировать сократительный ответ В физиологических и патофизиологических условиях пути бета-адренер-гической сигнализации могут изменяться, что ведет к значительным "перестройкам" в деятельности сердца . Кроме того, бета-АР являются удобной фармакологической мишенью, так как бета-миметики и бета-блокаторы широко применяются в терапевтической практике сердечно-сосудистых патологий . Мы предполагаем, что один из эндогенных механизмов, влияющих на зависимую от бета-АР регуляцию, связан с окисленными производными холестерина (оксистеринами), которые образуются в ходе ферментативных и свободно-радикальных реакций . В частности, большой интерес вызывает 25-гидро-ксихолестерин (25-ГХ), который образуется практически во всех тканях под действием холестерин 25-гидроксилазы . При индукции врожденного иммунного ответа в макрофагах и дендритных клетках повышается экспрессия этого фермента, а образующийся в повышенных концентрациях 25-ГХ оказывает противовирусный эффект. Концентрация 25-ГХ может системно повышаться при сосудистых и нейродегене-ративных заболеваниях, сопряженных с воспалительными реакциями, в том числе при атеросклерозе
Целью исследования было оценить инотропную реакцию предсердий на аппликацию агониста бета-АР — изо-протеренола (ИЗО 10-100 нМ) в контроле и в условиях 15 мин аппликации 25-ГХ. Определить вклад разных подтипов бета-АР в этих эффектах . Регистрацию сократимости (Tissue Bath System с тензодатчикоми BIOPAC Systems, Inc), детекцию Са2+-транзиента (Fluo-4AM) и продукции оксида азота
091-092
СБОРНИК ТЕЗИСОВ
(DAF-FM) проводили на изолированных предсердиях белых нелинейных лабораторных мышей .
25-ГХ (1 мкМ) угнетает положительную инотропную реакцию предсердий на ИЗО и ослабляет вызванное ИЗО увеличение Са2+-транзиента и флуоресценции DAF-FM, отражающую продукцию оксида азота по сравнению с контрольными препаратами . В условиях блокирования бета-1-АР (0,3 мкМ CGP) и при селективной аппликации агониста бета2-АР — фенотерола (5-50 мкМ) 25-ГХ не имеет выраженного влияния на инотропные эффекты активации бета2-АР. В тоже время 25-ГХ значительно угнетает инотропную реакцию на ИЗО в условиях блокирования бета2-АР (0,2 мкМ ICI) и угнетает инотропную реакцию предсердий на агонист бета1-АР — добутамин (1-30 мкМ) . В условиях блокирования бетаЗ-АР (SR 1 мкМ) 25-ГХ утрачивал способность ослаблять инотропный эффект на ИЗО, в тоже время предсердия не реагировали на агонист бета-З-АР (0,01-1 мкМ BRL) . Таким образом, 25-ГХ подавляет эффекты стимуляции бета-АР, что опосредованно угнетением ответов, зависимых от бета1-АР и возможно затронут механизм, связанный с усилением сигнализации через бетаЗ-АР. Учитывая, что перестройка путей бета-адренергической сигнализации сопровождает развитие нарушений сердечной деятельности 25-ГХ может быть одним из звеньев механизма дисрегуляции сократимости сердца Раскрытие молекулярных механизмов, лежащих в основе действия 25-ГХ, и выявление мишеней создает предпосылки для создания новых терапевтических подходов для коррекции сердечно-сосудистых патологий .
091 ЭЛЕКТРОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ЛИМБИЧЕСКИХ СТРУКТУР МОЗГА В ФОРМИРОВАНИИ РАЗЛИЧНЫХ МОТИВАЦИЙ СТРЕССА
Пермяков А. А., Исакова Л. С.
Ижевская государственная медицинская академия, кафедра нормальной физиологии, Ижевск, Россия aa_permyakov@maiI . ru
Важным механизмом адаптации к стрессу является поведенческая реакция, в основе стратегии которой лежат стрес-согенные мотивации, формирующиеся в структурах лимби-ческой системы
Цель. Корреляционный анализ электрофизиологических показателей лимбических структур мозга и стрессогенных мотиваций у экспериментальных животных с различной стрессоустойчивостью
Материал и методы. В хронических опытах на крысах регистрировали биоэлектрическую активность гиппокампа, миндалевидного комплекса и гипоталамуса до и после стресса С помощью комплексного применения нескольких методов статистической обработки исследованы физиологические механизмы поведения и мотивации групповой и индивидуальной стресс-устойчивости экспериментальных животных и проведен корреляционный анализ с электрофизиологической активностью лимбических структур .
Результаты. До стресса электрическая активность исследуемых лимбических структур соответствовала классическим . После 10- и 20-дневного стресса, по сравнению с контролем, паттерн электрической активности гиппокампа и миндалевидного комплекса, в отличие от гипоталамуса значительно поменялся Степень синхронизации электрической активности после стресса изменилась разнонаправленно: в гиппокам-пальной нейросети произошло увеличение десинхронизации, а в нейросетях миндалевидного комплекса и гипоталамуса — усиление синхронизации
Основными взаимосвязанными факторами в поведении популяции экспериментальных животных в покое явились: исследовательская активность, тревожно-фобический дисбаланс и эмоциональность . В условиях стресса функциональное значение исследовательской активности определялось доминирующей мотивацией, которая формировалась на основе фонового эмоционального состояния животного: баланса страха и тревожности и реализовывалась в виде исследова-
тельской двигательной активности. Факторный анализ распределённых по степени стресс-устойчивости групп животных показал изменённый спектр переменных и специфический для каждой группы набор факторов, отличающийся от общей группы. Каждая из различных по степени стресс-устойчивости групп животных имела разное количество факторных связей и свой индивидуальный коррелированный набор поведенческих признаков, создающий специфический для каждой группы этологический профиль .
Корреляции между стрессогенными мотивациями и электрической активностью лимбических структур мозга показали, что формирование стресс-нейросети обусловлено индивидуальной принадлежностью каждого животного в группе стрессоустойчивости и стадией стресса
Заключение. Анализ полученных результатов позволил распределить экспериментальных животных по степени прогностической стрессоустойчивости на группы, и осуществить прогноз индивидуальной стресс-реактивности для каждого отдельного животного, а также выявить групповые и индивидуальные мотивации, формирующие стрессовое поведение и их нейрофизиологические механизмы в структурах лимби-ческой системы
092 ОСОБЕННОСТИ РЕГУЛЯЦИИ СЕРДЦА И ЖЕСТКОСТИ АРТЕРИАЛЬНЫХ СОСУДОВ В ВОЗРАСТНОМ АСПЕКТЕ
Пятин В. Ф.1, Арсенев А. В.1, Маслова О. А.1, Сергеева М. С.1, Захаров А. В.1, Какорина Е. П.2, Кузнецов П. П.3
'Самарский государственный медицинский университет, Самара, Россия
2Первый Московский государственный медицинский университет им . И . М . Сеченова, Москва, Россия 3ООО "Портал РАМН", Москва, Россия pyatin_vf@list.ru
Артериальную жесткость, определяемую по скорости распространения пульсовой волны, и уменьшение вариабельности сердечного ритма при заболеваниях человека являются факторами риска развития сердечно-сосудистой дисфункции. Однако нет четких представлений об указанных выше процессах у практически здоровых испытуемых разных возрастных групп, что было целью настоящей работы
Материал и методы. В исследовании участвовали 54 здоровых испытуемых (мужчин — 23, женщин — 31) трех возрастных групп: 18-25 лет (гр . I; n=18), 26-55 лет (гр . II; n=18), 56-76 лет (гр . III; n=18) . Исследование гемодинамики и вариабельности сердечного ритма проводили по стандартной методике с помощью сфигмоманометра VaSera VS-1000 (Fukuda Denshi, Japan) и пульсоксиметра ЭЛОКС-01 (ЗАО ИМЦ "Новые приборы", РФ) в исходных условиях и после выполнения упражнения "приседания" (30 в течение 1 мин) . Полученные данные описаны медианой и квартилями . Достоверность различий между возрастными группами рассчитана по критерию Kruskal-Wallis, связь изучаемых параметров с возрастом описана ранговым коэффициентом корреляции Spearman .
Результаты. Сравнение показателей ВСР до и после выполнения упражнения "приседания" выявило положительную корреляцию фактора возраста испытуемых с динамикой изменения стандартного отклонения (SDNN; R=0,476) и вариационного размаха (ВР; R=0,479) NN-интервала. Так, степень увеличения SDNN имела следующие особенности (H=8,668; p0=0,013) в возрастных группах: в гр . I SDNN увеличивается на 25 (16; 32) мс, в гр .II — на 44 (7; 60) мс, в гр . III — на 57 (33; 78) мс . После выполнения упражнения приседания нами выявлена отрицательная (R=-0,574) корреляционная связь между фактором возраста испытуемых и показателем p(HF) — удельный вклад высокочастотных волн (в диапазоне 0,15-0,40 Гц) в спектр колебаний NN-интервала . После выполнения упражнения "приседания" выявлены различия значений p(HF) между возрастными группами (H=18,203; p0=0,000): в гр . I p(HF) составляет 66% (59%; 76%), в гр . II — 55% (42%; 66%); в гр . III — 46% (40%; 52%) . Показатель плече-лодыжечной скорости распространения пульсовой волны
