CC BY
30
2-ое МЕСТО В КОНКУРСЕ НАУЧНЫХ РАБОТ МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ ПО ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИИ НОГР ЗА 2010 г.
РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ HLA-АНТИГЕНОВ I И II КЛАССА У ПАЦИЕНТОВ С АУТОИММУННЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ПЕЧЕНИ В СЕВЕРО-ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ
Мительглик У. А.
Кафедра гастроэнтерологии и диетологии СПбМАПО
Мительглик Ульяна Андреевна С.-Петербург, пр. «Динамо», д. 3 Тел./факс: 8 (812) 235 1093 Е-mail: [email protected]
Наличие у больных аутоиммунными заболеваниями печени (АИЗП) определенных аллелей ЫЬА является дополнительным диагностическим критерием. В мировой литературе отмечено, что имеются их некоторые популяционные различия. По результатам нашего исследования выявлено, что у больных АИЗП, проживающих в северо-западном регионе России, определяются ЫЬА-маркеры I и II класса, отличные от описанных для других популяций. Так, при аутоиммунном гепатите 1-го типа (АИГ) это А24(9), DQA1*0301, DQB1*0302; при первичном били-арном циррозе (ПБЦ) — А30(19), DR16(2), DQA1*0301, DQB1*0302, а также отрицательная ассоциация с DR11(5); при перекрестном синдроме АИГ с ПБЦ (АИГ/ПБЦ) — В35, DR14(6), DQA1*0301, DQB1*0603. Таким образом, необходима зональная модификация критериев диагностики данных заболеваний. Считается, что предрасположенность индивидуума к развитию АИЗП генетически детерминирована комплексом ЫЬА-антигенов с наличием как положительных, так и отрицательных ассоциаций с отдельными из них. Хорошо изучены и описаны в мировой литературе наиболее характерные ассоциации ЫЬА-антигенов I и II класса с данной группой заболеваний для европейской и североамериканской популяций. Для российской популяции, к сожалению, подобного рода исследования не проводились.
Целью нашего исследования явился анализ распространенности ЫЬА-антигенов I и II класса у пациентов с АИЗП, проживающих в северо-западном регионе России.
лабораторных и морфологических исследований. Группа контроля соответствовала попу-ляционной выборке и составила 100 человек.
Всем больным проводилось ЫЬА-типирование I и II класса. Определение ЫЬА-антигенов I класса проводилось в стандартном двухступенчатом микролим-фоцитотоксическом тесте по ТегазаИ (лимфоциты из периферической крови выделяли по методу Воуит). Учет результатов реакции проводился по числу погибших прокрашенных лимфоцитов. Типирование генов ЫЬА II класса ^В1, DQA1, DQB1) осуществлялось путем обратной дот-блот гибридизации продукта полимеразной цепной реакции (ПЦР) с панелью аллельспецифических оли-гонуклеотидных зондов, фиксированных на мембране. Использование нерадиоактивной ^^^ метки (биотин) и хромогенного субстрата щ (3,3', 5,5'-тетраметилбензидин) позволило детектировать результаты гибридизации в ходе цветной ферментативной реакции. Данный метод обеспечил «низкоразрешающее» типирование HLA-DRB1 гена (т. е. с точностью до «групповых специфичностей», или «групп аллелей»), а также типирование генов HLA-DQA1, DQB1 на уровне «высокого разрешения», т. е. с точностью до аллелей.
Статистическая обработка результатов проводилась методом хи-квадрат.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Были обследованы 54 больных с АИЗП, из них 18 — с АИГ, 22 — с ПБЦ, 14 — с АИГ/ПБЦ. Диагноз АИЗП устанавливался на основании данных анамнеза,
Распространенность антигенов ЫЬА I класса представлена в табл. 1. Выявлено достоверное увеличение частоты антигена А24(9) при АИГ по сравнению с группой контроля (0,5000 против 0,1200, р < 0,01). Среди больных ПБЦ и АИГ/ПБЦ частота
Г^.
О
СО
о
ЧАСТОТА АНТИГЕНОВ HLA I КЛАССА (А И В) У БОЛЬНЫХ АИЗП, RR АБС.
Антигены HLA I класса АИГ (n = 18) ПБЦ (n = 22) АИГ/ПБЦ (n = 14) Группа контроля (n = 100)
А1 0,2222 (4) 0,1818 (4) 0,1429 (2) 0,2200 (22)
1,08 0,85 0,70
А2 0,5000 (9) 0,4091 (9) 0,5714 (8) 0,5600 (56)
0,79 0,55 1,03
A3 0,1111 (2) 0,2273 (5) 0,5714 (8) 0,3400 (34)
0,3 0,61 2,52
А11 0 (0) 0,0455 (1) 0,1429 (2) 0,0800 (8)
0,74 2,18
А23(9) 0 (0) 0,0455 (1) 0,1429 (2) 0,0400 (4)
0,80 4,29
А24(9) 0,5000 (9) 0,1818 (4) 0,0714 (1) 0,1200 (12)
7,08** 1,72 0,79
А25(10) 0,1667 (3) 0,1364 (3) 0,2143 (3) 0,1200 (12)
1,6 1,28 2,10
А26(10) 0 (0) 0,1364 (3) 0,0714 (1) 0,0900 (9)
1,73 1,07
А29(19) 0 (0) 0,0909 (2) 0 (0) 0,0300 (3)
3,4
А30(19) 0,1111 (2) 0,1818 (4) 0 (0) 0,0400 (4)
3,25 5,22*
В7 0,2222 (4) 0,2273 (5) 0,1429 (2) 0,2500 (25)
0,92 0,94 0,60
В8 5 (27,8) 0,0909 (2) 0,1429 (2) 0,1300 (13)
2,64 0,80 1,30
В13 0,2222 (4) 0,1818 (4) 0,0714 (1) 0,1100 (11)
2,42 1,90 0,86
В14 0 (0) 0,0455 (1) 0,0714 (1) 0,0300 (3)
1,94 3,10
В18 0,1111 (2) 0,1818 (4) 0,2143 (3) 0,1600 (16)
0,78 1,25 1,56
В27 0,2778 (5) 0 (0) 0,2143 (3) 0,0800 (8)
4,44* 3,32
В35 0,3333 (6) 0,2273 (5) 0,5000 (7) 0,1900 (19)
2,17 3,42 4,18*
В41 0 (0) 0,1364 (3) 0,0714 (1) 0,0400 (4)
3,85 2,38
В44(12) 0,2222 (4) 0,0455 (1) 0,0714 (1) 0,1700 (17)
1,48 0,33 0,53
В49(21) 0,0556 (1) 0 (0) 0,0714 (1) 0,0200 (2)
3,38 4,38
В57(17) 0 (0) 0,1364 (3) 0,1429 (2) 0,0500 (5)
3,12 3,48
В60(40) 0,0556 (1) 0,2273 (5) 0,0714 (1) 0,0700 (7)
1,06 3,92 1,39
А1-В8 0,2222 (4) 0,0455 (1) 0,1429 (2) 0,0800 (8)
3,38 0,76 2,18 _
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск, * — достоверность различий (р) < 0,05; ** — р < 0,01.
его выявления была сопоставима с показателями контрольной группы. Для больных ПБЦ наиболее выраженное увеличение частоты встречаемости по сравнению с популяционным контролем отмечено для антигена А30(19) (0,1818 против 0,0400, р < 0,05).
Среди НЬА-В достоверно чаще при АИГ по сравнению с группой контроля выявлялся антиген В27 (0,2778 против 0,0800, р < 0,05). Также его частота увеличивалась при АИГ/ПБЦ (0,2143 против 0,0800 в популяции), а среди больных ПБЦ он не обнаружен. Кроме того, в группе больных АИГ/ПБЦ достоверно чаще встречался антиген В35 (0,5000 против 0,19000 в группе контроля, р < 0,05).
Антигены А1 и В8 встречались с частотой, сопоставимой с группой контроля. Однако отмечено недостоверное повышение частоты гаплотипа А1-В8 при АИГ (0,2222 против 0,0800 в группе контроля, RR = 3,38). При перекрестном синдроме носитель-ство данных антигенов наблюдалось только в форме гаплотипа А1-В8.
Учитывая ведущую роль НЬА-антигенов II класса в формировании генетической предрасположенности, наибольший интерес представляло изучение частоты встречаемости аллелей и групп аллелей локусов БЯ и DQ. Распределение групп аллелей HLA-DRB1 представлено в табл. 2.
При АИГ достоверно чаще отмечалось носи-тельство БЯВ1*04 по сравнению с популяционным
контролем (0,4400 против 0,1600, ЯЯ = 4,15, р < 0,025). Для больных ПБЦ было установлено достоверное повышение частоты встречаемости БЯВ1*08 и БЯВ1*16(2) (р < 0,01), в обоих случаях она составила 0,2273, а у здоровых 0,0400 и 0,0300 соответственно. Кроме того, при данной нозологии выявлена достоверно значимая отрицательная ассоциация с группой аллелей БЯВ1*11(5) (частота 0,0453 по сравнению с 0,2700 в группе контроля, р < 0,05).
В группе АИГ/ПБЦ обращает на себя внимание не только достоверное увеличение частоты встречаемости БЯВ1*14(6) (0,1429 против 0,0100 в группе контроля, р < 0,05), но и наиболее высокий уровень ЯЯ (13,27). Хотя частота выявления БЯВ1*03 во всех группах сопоставима с контрольной, ассоциация аллелей БЯВ1*03^А1*0501^В1*0201 определялась достоверно чаще (р < 0,025) у больных с АИГ (0,3889 по сравнению с контролем 0,0900, ЯЯ = 6,28).
При анализе распределения аллелей ло-куса DQA1 и DQB1 (табл. 3) установлено, что носительство аллели DQA1*0301 достоверно повышено во всех группах больных АИЗП. Для АИГ частота встречаемости данной аллели составила 0,5000 (р < 0,001), ПБЦ 0,2727 (р < 0,05), АИГ/ПБЦ 0,3571 (р < 0,025) по
25
■И
3 а
(L ЕЕ
8 •И
3 □
1Л
о
* s
с
С >■
2
и
а
>
V
X
а
Таблица 2
ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ ГРУПП АЛЛЕЛЕЙ DRB1, RR абс.
DRB1 АИГ (n = 18) ПБЦ (n = 22) АИГ/ПБЦ (n = 14) Группа контроля (п = 100)
01 0,2222 (4) 0,1364 (3) 0,2857 (4) 0,2200 (22)
1,08 0,63 1,50
03(17) 0,4444 (8) 0,1818 (4) 0,0714 (1) 0,2000 (20)
3,18 0,96 0,44
04 0,4444 (8) 0,2727 (6) 0,3571 (5) 0,1600 (16)
4,15** 2,01 2,96
07 0,2778 (5) 0,2727 (6) 0,2857 (4) 0,3200 (32)
0,86 0,83 0,9
08 0,0556 (1) 0,2273 (5) 0,0714 (1) 0,0400 (4)
1,84 6,74*** 2,38
11(5) 0,2222 (4) 0,0455 (1) 0,2143 (3) 0,2700 (27)
0,83 0,19 * 0,81
13(6) 0,0556 (1) 0,2273 (5) 0,2857 (4) 0,1700 (17)
0,41 1,94 2,04
14(6) 0 (0) 0,0455 (1) 0,1429 (2) 0,0100 (1)
4,63 13,27 *
15(2) 0,1111 (2) 0,1364 (3) 0,2143 (3) 0,2200 (22)
0,53 0,63 1,06
16(2) 0,0556 (1) 0,2273 (5) 0,0714 (1) 0,0300 (3)
2,39 8,76 *** 3,10 _
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск, * — р < 0,05; ** — р < 0,025; ***р < 0,01.
о о
ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ АЛЛЕЛЕЙ ЛОКУСА DQA1 И DQВ1, RR абс.
АИГ (n = 18) ПБЦ (n = 22) АИГ/ПБЦ (n = 14) Группа контроля (n = 100)
DQA1
0101 0,2222 (4) 0,0909 (2) 0,2857 (4) 0,1000 (10)
2,67 1,05 3,69
0102 0,1667 (3) 0,3182 (7) 0,2143 (3) 0,3000 (30)
0,52 1,12 0,70
0103 0 (0) 0,1364 (3) 0,2857 (4) 0,1200 (12)
1,94 1,27 3,03
0201 0,2778 (5) 0,3182 (7) 0,2857 (4) 0,1700 (17)
1,94 2,31 2,04
0301 0,5000 (9) 0,2727 (6) 0,3571 (5) 0,0900 (9)
9,63 *** 4,91* 5,58*
0401 0,1111 (2) 0,2273 (5) 0,0714 (1) 0,0600 (6)
2,20 4,57* 1,62
0501 0,5555 (10) 0,3636 (8) 0,2143 (3) 0,3200 (32)
2,60 1,24 0,64
DQB1
0201 0,5555 (10) 0,4091 (9) 0,1429 (2) 0,1900 (19)
5,16 * 2,94 0,84
0301 0,4444 (8) 0,1818 (4) 0,2857 (4) 0,1900 (19)
3,38 1,02 1,79
0302 0,2778 (5) 0,3182 (7) 0,2143 (3) 0,0400 (4)
8,74** 10,38** 6,53
0303 0 (0) 0,1364 (3) 0,2143 (3) 0,0700 (7)
2,24 3,79
0402 0,0556 (1) 0,2273 (5) 0,0714 (1) 0,1000 (10)
0,74 2,71 0,96
0501 0,2222 (4) 0,0909 (2) 0,2857 (4) 0,1900 (19)
1,30 0,51 1,79
0502 0 (0) 0,2273 (5) 0 (0) 0,0900 (9)
2,70
0503 0 (0) 0 (0) 0,1429 (2) 0,0500 (5)
3,47
0602 0,1667 (3) 0,1364 (3) 0,2143 (3) 0,2200 (22)
0,79 0,63 1,06
0603 0 (0) 0,1364 (3) 0,2857 (4) 0,0300 (3)
_ 5,00 11,94** _
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск; * — р < 0,05; ** — р < 0,01; ***р < 0,001.
CD CD
сравнению с популяционным контролем (0,0900). Помимо этого у больных ПБЦ достоверно чаще выявлялась аллель DQA1*0401 по сравнению со здоровыми (0,2273 и 0,0600 соответственно, р < 0,05).
Аллель DQB1*0201 достоверно чаще выявлялась при моноварианте АИГ, обеспечивая риск развития
заболевания 5,16 по сравнению с группой контроля. Частота встречаемости DQB1*0301 была резко повышена как при ПБЦ, так и при АИГ по сравнению с контролем (соответственно 0,2778 и 0,3182 против 0,400, р < 0,01).
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Согласно данным североамериканских [1-3] и европейских [4; 5] источников, среди НЬА-антигенов
I класса выявлены ассоциации с развитием АИГ и АИГ/ПБЦ для антигена В8, особенно гаплотипа А1-В8. Для азиатской и индийской популяций по данным мировой литературы [6] отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости антигенов В27 и В54 при АИГ, а для южноамериканского населения В14 [5]. Для ПБЦ положительных ассоциаций с НЬА-антигенами I класса не выявлено.
Среди групп аллелей HLA-DRB1 отмечается сходство для всех АИЗП в наличии носительства DR3 и DR4 у жителей Северной Америки и большей части Европы [1; 4; 7]. Однако в Италии, по данным Р. Мига1оп и соавт. [5], наблюдается преобладание DR3, особенно при АИГ, а в Центральной Америке и Японии — DR4 [1; 4; 8]. Кроме того, для жителей Центральной и Южной Америки выявлено наличие ассоциативной связи DR7 и DR13 с развитием АИГ, а в Индии и Центральной Азии — с DR1 [2; 3]. При ПБЦ в большинстве популяций отмечается повышение частоты встречаемости DR8 и DR2 [1; 4]. Для аллелей локусов DQA1 и DQВ1 при АИГ отмечена взаимосвязь с развитием заболевания для DQA1*0501 и DQВ1*0201, особенно при их сочетании [1; 4]. Для ПБЦ обнаружены ассоциации с аллелями DQA1*0401 и DQB1*0402 [4].
Согласно полученным нами данным, больные АИЗП, проживающие в северо-западном регионе, имеют некоторые различия в HLA-маркерах I и
II класса по сравнению с описанными в мировой литературе. Кроме того, все исследуемые группы имеют между собой значительные генетические отличия. Хотелось бы отметить, что ассоциации с группами аллелей, которые широко изучены и описаны для других популяций, выявлены только при АИГ ^В1*04) и ПБЦ ^В1*08). Причем частота DRB1*03 у больных ПБЦ и перекрестным синдромом была даже меньше, чем в популяци-онной выборке.
Так, наряду с хорошо известными для АИГ аллелями нами выявлено достоверное увеличение частоты встречаемости аллелей А24(9), DQA1*0301, DQB1*0302. При ПБЦ отмечено повышение частоты встречаемости не только DR8, но и А30(19), DR16(2), DQA1*0301 и *0401, DQB1*0302. Также выявлено, что DR11(5) играет протективную роль для данного заболевания. Интересно, что Р. Мига1оп и соавт. [5] для этой группы аллелей находили отрицательную ассоциацию с развитием ПБЦ. При АИГ/ПБЦ наблюдалось увеличение частоты выявления В35, DR14(6), DQA1*0301, DQB1*0603.
Таким образом, нами выявлено наличие ассоциативных связей с ранее не описанными в мировой литературе группами аллелей HLA-DRB1 — DRB1*16(2) для ПБЦ и DRB1*14(6) для АИГ/ПБЦ.
ВЫВОДЫ
Определенные аллели HLA являются дополнительными диагностическими критериями для АИЗП, в особенности для АИГ. Согласно полученным данным больные АИЗП, проживающие в северо-западном регионе России, имеют некоторые различия в HLA-маркерах I и II класса по сравнению описанными в мировой литературе. Выявлено достоверное увеличение частоты встречаемости следующих HLA-антигенов: 1) при АИГ — А24(9), В27, DR4, DQA1*0301, DQB1*0201 и *0302, ассоциации аллелей DRB1*03-DQA1*0501-DQB1*0201; 2) при ПБЦ — А30(19), DR8, DR16(2), DQA1*0301 и *0401, DQB1*0302, а также отрицательная ассоциация с DR11(5); 3) при АИГ/ПБЦ — В35, DR14(6), DQA1*0301, DQB1*0603.
Таким образом, необходимо использование выявленных HLA-маркеров для модификации дополнительных диагностических критериев АИЗП для данного региона.
25
■И
3 а
(L ЕЕ
8 •И
3 □
1Л
о
* s
с
С >■
2
и
а
>
V
X
а
ЛИТЕРАТУРА
1. CzajaA.J. Performance parameters of the diagnostic scoring systems for autoimmune hepatitis // Hepatology. — 2008. — Vol. 48, № 5. — P.
1540-1548.
2. Czaja A.J., Kruger M., Santrach P.J. Genetic distinctions between types 1 and 2 autoimmune hepatitis // Am. J. Gastroenterol. — 1997. — Vol. 92. — P. 2197-2200.
3. BittencourtP.L., GoldbergA.C., CancadoE.L. Genetic heterogeneity in susceptibility to autoimmune hepatitis types 1 and 2 // Am. J.
Gastroenterol. — 1999. — Vol. 94. — P. 1906-1913.
4. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. — М.: Анахарсис, 2005. — 176 с.
5. Muratori P., Czaja A.J., Muratori L. Genetic distinctions between autoimmune hepatitis in Italy and North America // World J. Gastroenterol. — 2005. — Vol. 11, № 12. — P. 1862-1866.
6. Amarapurkar D.N. HLA genotyping in type-I autoimmune hepatitis in Western India // J. Assoc. Physicians India. — 2003. — Vol. 51. — P. 967-969.
7. Beuers U.,Rust C. Overlap syndromes // Semin. Liver Dis. — 2005. — Vol. 25, № 3. — P. 311-320.
8. MullarkeyM., Stevens A., McDonnell W.M. Human leukocyte antigen class II alleles in Caucasian women with primary biliary cirrhosis // Tissue Antigen. — 2005. — Vol. 65. — P. 199-205.
