CC BY
21
Взаимосвязь FoxP3+ регуляторных Т-клеток с активностью заболевания и уровнем антител при раннем ревматоидном артрите
Авдеева А.С.1, Рубцов Ю.П.2, Дыйканов Д.Т.2, Попкова Т.В.1, Насонов Е.Л.13
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт ревматологии им. В.А. Насоновой», Москва, Россия; 2ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», кафедра биохимии и молекулярной медицины факультета фундаментальной медицины; 3ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России, кафедра ревматологии Института профессионального образования, Москва, Россия 1115522 Москва, Каширское шоссе, 34А; 2119192 Москва, Ломоносовский проспект, 31, корп. 5; 3119991 Москва, ул. Трубецкая, 8, стр. 2
1V.A. Nasonova Research Institute of Rheumatology, Moscow, Russia; department of Biochemistry and Molecular Medicine, Faculty of Fundamental Medicine, M.V. Lomonosov Moscow State University; 3Department of Rheumatology, Institute of Professional Education,
1.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of Russia, Moscow, Russia
134A, Kashirskoe Shosse, Moscow 115522; 231, Lomonosovsky Prospect, Build. 5, Moscow 119192; 38, Trubetskaya St., Build.
2, Moscow 119991
Контакты: Анастасия Сергеевна Авдеева; 9056249400@mail.ru
Contact:
Anastasia Avdeeva; 9056249400@mail.ru
Поступила 27.02.17
Цель — проанализировать взаимосвязь количества FoxP3+ регуляторных Т-клеток (Трег) с клинико-лабора-торными показателями активности заболевания и уровнем антител в группе пациентов с ранним ревматоидным артритом (РА).
Материал и методы. В исследование были включены 45 не получавших ранее терапии метотрексатом пациентов с ранним РА (критерии ACR/EULAR 2010 г.), в том числе 39 женщин; медиана возраста составила 52,0 [32,5; 57,5] года, длительность заболевания — 5 [4; 6] мес, DAS28 — 5,01 [4,18; 5,8]; 71,1% больных были позитивны по ревматоидному фактору (РФ) и 88,9% позитивны по антителам к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП). Относительное и абсолютное количество Трег (FoxP3+CD25+; CD152+surface; CD152+intracellular; FoxP3+CD127-; CD25+CD127-; FoxP3+ICOS+; FoxP3+CD154+; FoxP3+CD274+) определялось методом имму-нофлюоресцентного окрашивания и многоцветной проточной цитофлюориметрии. Контрольную группу составили 20 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными больными. Результаты и обсуждение. У 22 (48,9%) больных была высокая, у 20 (44,4%) - умеренная и у 3 (6,7%) - низкая активность патологического процесса по DAS28. У пациентов с ранним РА, по сравнению со здоровыми донорами, отмечалось более низкое процентное количество (ПК) FoxP3+CD25+ клеток, ПК и абсолютное содержание (абс.) FoxP3+ICOS+ клеток, ПК и абс. FoxP3+CD154+ и FoxP3+ CD274+ Т-клеток; p<0,05 во всех случаях. Регистрировалась отрицательная корреляционная взаимосвязь: ПК FoxP3+CD25+ с С-реактивным белком (СРБ) (r=-0,4); ПК CD152+intracellular с DAS28 (r=-0,35), СОЭ (r=-0,46), СРБ (r=-0,54); ПК FoxP3+CD127-с СРБ (r= -0,42); ПК CD25+CD127- с DAS28 (r=-0,38), SDAI (r=-0,41), CDAI (r=-0,36), СОЭ (r=-0,39), СРБ (r=-0,47); р<0,05 во всех случаях.
Среди серонегативных по РФ больных была выявлена более высокая ПК CD25+CD127-, ПК и абс. Foxp3+CD154+ и Foxp3+CD274+ Т-лимфоцитов.
Заключение. Представленные данные позволяют говорить о снижении количества и функциональной активности Трег при раннем РА, что ассоциируется с более высокой активностью заболевания, наличием системных проявлений болезни, а также сопровождается гиперпродукцией антител.
Ключевые слова: ранний ревматоидный артрит; активность заболевания; аутоантитела; регуляторные Т-лим-фоциты.
Для ссылки: Авдеева АС, Рубцов ЮП, Дыйканов ДТ и др. Взаимосвязь FoxP3+ регуляторных Т-клеток с активностью заболевания и уровнем антител при раннем ревматоидном артрите. Научно-практическая ревматология. 2017;55(3):245-251.
THE RELATIONSHIP OF FoxP3+ T REGULATORY CELLS TO DISEASE ACTIVITY AND ANTIBODY LEVELS IN EARLY RHEUMATOID ARTHRITIS Avdeeva A.S.1, Rubtsov Yu.P.2, Dyikanov D.T.2, Nasonov E.L.1, 3
Objective: to analyze the relationship of the count of FoxP3+ T regulatory cells (Tregs) to the clinical and laboratory parameters of disease activity and the levels of antibodies in a group of patients with early rheumatoid arthritis (RA). Subjects and methods. The investigation enrolled 45 patients with early RA (2010 ACR/EULAR criteria) who had not previously received treatment with methotrexate, including 39 women; median age was 52.0 [32.5; 57.5] years; disease duration, 5 [4; 6] months, DAS28 5.01 [4.18; 5.8]; 71.1% of the patients were rheumatoid factor (RF) positive and 88.9% were anti-cyclic citrullinated peptide positive. The relative and absolute counts of Treg (FoxP3+CD25+; CD152+surface; CD152+intracellular; FoxP3+CD127-; CD25+CD127-; FoxP3+ICOS+; FoxP3+CD154+; FoxP3+CD274+) were measured by immunofluorescence staining and multicolor flow cytometry. A control group consisted of 20 healthy donors who were matched for sex and age with the examined patients.
Results and discussion. DAS28 was high, moderate, and low in 22 (48.9%), 20 (44.4%), and 3 (6.7%) patients, respectively. As compared with the healthy donors, the patients with early RA were observed to have lower values in the percentage of FoxP3+CD25+ cells, in the percentage and absolute count of FoxP3+ICOS+ cells, in the percentage and absolute count of FoxP3+CD154+ and FoxP3+ CD274+ T cells; p<0.05 in all cases.
Negative correlation was recorded between the percentage of FoxP3+CD25+ and C-reactive protein (CRP) (r=-0.4); that of CD152+intracellular and DAS28 (r=-0.35), ESR (r=-0.46), CRP (r=-0.54); that of FoxP3+CD127 and CRP (r=-0.42); that of CD25+CD127 and DAS28 (r=-0.38), SDAI (r=-0.41), CDAI (r=-0.36), ESR (r=-0.39), CRP (r=-0.47); p<0.05 in all cases.
The patients who were seronegative for RF were found to have higher values in the percentage of CD25+CD127, in the percentage and absolute count of Foxp3+CD154+ and Foxp3+CD274+ T lymphocytes. Conclusion. The given data may indicate that the count and functional activity of Treg were decreased in early RA, which is associated with higher disease activity, the systemic manifestations of the disease and which is also accompanied by antibody hyperproduction.
Key words: early rheumatoid arthritis; disease activity; autoantibodies; T regulatory lymphocytes.
For reference: Avdeeva AS, Rubtsov YuP, Dyikanov DT et al. The relationship of FoxP3+ T regulatory cells to disease
activity and antibody levels in early rheumatoid arthritis. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology
Science and Practice. 2017;55(3):245-251 (In Russ.).
doi: http://dx.doi.org/10.14412/1995-4484-2017-245-251
FoxP3+ регуляторные Т-клетки (Трег) играют ключевую роль в иммунной системе благодаря подавлению гипериммунного ответа в отношении аутоантигенов, а также кишечных условно-патогенных микроорганизмов [1, 2]. В последние годы получены данные о способности Трег подавлять различные иммуновоспалительные реакции в ответ на широкий спектр физиологических и патологических стимулов, включая микроорганизмы, опухолевые клетки, аллогенные трансплантаты, клетки плода, а также при ожирении и атеросклеротическом поражении сосудов [2, 3]. Впервые эта роль была продемонстрирована у мышей, которые вследствие генетического дефекта с рождения лишены Трег, что приводило к развитию аутоиммунного гастрита, тиреоидита, диабета и воспалительных заболеваний кишечника [4]. Впоследствии во многих исследованиях было показано, что дефекты в CD4+CD25+Foxp3+ Трег способствуют развитию аутоиммунных заболеваний и что эти процессы можно предотвратить путем трансплантации функциональных Трег от здоровых животных больным [5]. Ведущую роль CD4+CD25+FOXP3+ Т-клеток в контроле иммунологической толерантности к собственным антигенам наглядно иллюстрируют врожденные наследственные заболевания человека, вызываемые мутациями в гене FOXP3 и проявляющиеся в развитии летального синдрома IPEX (Immunodysregulation, Polyendocrinopathy and Enteropathy, X-Linked), характеризующегося сахарным диабетом 1-го типа, тиреоидитом, тяжелой аллергией и воспалительным поражением кишечника, которые сочетаются с цитоки-новым «штормом» [6].
По современным представлениям, ключевую роль в развитии синовиального воспаления и суставной деструкции при ревматоидном артрите (РА) играют активированные CD4+ Т-лимфоциты. Распознавание аутоантигенов этими клетками способствует активации В-лимфоци-тов и макрофагов, а также усиливает продукцию цитоки-нов [7—10]. В настоящее время выделяют несколько субпопуляций эффекторных CD4+ Т-хелперов (Th), которые различаются в зависимости от набора продуцируемых ими цитокинов и спектра клеток-мишеней. Thl-клетки ответственны за клеточный иммунитет и участвуют в патогенезе аутоиммунных заболеваний, ТЪ2-клетки — поддерживают гуморальный иммунитет и, наряду с регуляцией иммуни-
Таблица 1 Общая клинико-иммунологическая характеристика пациентов, включенных в исследование (n=45)
Показатель Значение
Пол, мужчины/женщины, п 6/39
Возраст, годы, Ме [25-й; 75-й перцентили] 52,0 [32,5; 57,5]
Длительность заболевания, мес, 5 [4; 6]
Ме [25-й; 75-й перцентили]
Рентгенологическая стадия РА, !/!!/!!!/!У, п (%) 21 (46,7)/24 (53,3)/0/0
DAS28, Ме [25-й; 75-й перцентили] 5,01 [4,18; 5,8]
СОЭ, мм/ч, Ме [25-й; 75-й перцентили] 36,0 [18,0; 54,0]
СРБ, мг/л, Ме [25-й; 75-й перцентили] 12,1 [2,9; 37,4]
!дМ РФ, МЕ/мл, Ме [25-й; 75-й перцентили] 94,5 [17,8; 186,0]
Число РФ-позитивных, п (%) 34 (75,6)
АЦЦП, Ед/мл, Ме [25-й; 75-й перцентили] 105,0 [42,5; 230,6]
Число АЦЦП-позитивных, п (%) 40 (88,9)
тета к паразитам (гельминтам и простейшим), вовлечены в развитие аллергических заболеваний. ТЫ7-клетки обладают наиболее выраженным провоспалительным потенциалом и имеют ведущее значение в развитии коллаген-инду-цированного артрита и ряда других экспериментальных аутоиммунных заболеваний у лабораторных животных [11]. Негативную регуляцию Thl-, Th2- и ТЫ7-лимфоцитов осуществляют Трег.
В настоящее время в литературе представлено большое количество работ, посвященных оценке уровня и фенотипа Трег при РА как в периферическом кровотоке, так и в синовиальной жидкости [12—26], однако полученные в них данные весьма противоречивы и требуют дальнейшего уточнения. Полагают, что количественный дефект CD4+CD25+Foxp3+CD127- регуляторных клеток особенно характерен для раннего РА и ассоциируется с риском развития РА у бессимптомных пациентов, позитивных по антителам к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП) [27, 28].
Целью нашей работы являлась оценка взаимосвязи количества Трег с активностью заболевания и уровнем антител у пациентов с ранним РА.
Материал и методы
В исследование было включено 45 пациентов с ранним РА, соответствующим критериям Американской коллегии ревматологов / Европейской антиревматической лиги (ACR/EULAR) 2010 г., наблюдавшихся в ФГБНУ НИИР им. В.А. Насоновой в период с 2014 по 2016 г. Общая клинико-иммунологическая характеристика больных представлена в табл. 1. Как следует из таблицы, большинство больных были женского пола, среднего возраста, с ранней и очень ранней стадией заболевания (медиана длительности болезни составила 5 [4; 6] мес), серопозитивные по IgM ревматоидному фактору (РФ) и АЦЦП, имели высокую активность воспалительного процесса, I или II рентгенологическую стадию, I функциональный класс, до включения в исследование пациенты не получали базисных противовоспалительных препаратов (БПВП) и глюкокортикоидов. Всем больным в качестве первого БПВП был назначен метотрексат (МТ) в подкожной форме (методжект) в начальной дозе 10 мг/нед.
Определение СОЭ осуществляли стандартным международным методом по Вестергрену (норма <30 мм/ч). Сывороточную концентрацию С-реактивного белка (СРБ) и IgM РФ измеряли иммунонефелометрическим методом на анализаторе BN ProSpec (Siemens, Германия). Нормальный уровень СРБ в сыворотке крови составлял <5,0 мг/л. По инструкции фирмы-изготовителя за верхнюю границу нормы IgM РФ была принята концентрация, равная 15,0 МЕ/мл. Количественное определение АЦЦП в сыворотке крови проводили методом иммуно-ферментного анализа с помощью коммерческого набора реагентов (Axis-Shield, Великобритания; верхняя граница нормы — 5,0 Ед/мл).
Мононуклеарные клетки выделяли из цельной крови в градиенте плотности фикола, затем окрашивали на различные поверхностные и внутриклеточные маркеры (FoxP3+CD25+; CD152+surface; CD152+intracellular; FoxP3+CD127-; CD25+CD127-; FoxP3+ICOS+; FoxP3+CD154+; FoxP3+CD274+), фиксировали и анализировали методом многоцветной проточной цитофлюо-
риметрии на анализаторе BD LSR Fortessa (Becton Dickinson). Контрольную группу составили 20 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными пациентами. Нормальные значения различных субпопуляций Трег в крови здоровых доноров составили: процентное количество (ПК) FoxP3+CD25+ от 3,7 до 9,8%, абсолютное содержание (абс.) от 0,03 до 0,11 на 109/л; ПК CD152+surface - 0,13-4,9%, абс. 0,00006-0,0018 на 109/л; ПК CD152+intracellular -36,3-89,8%, абс. - 0,00003-0,00108 на 109/л; ПК FoxP3+CD127- - 3,2-8,5%, абс. - 0,03-0,096 на 109/л; ПК CD25+CD127- - 3,9-9,7%, абс. - 0,03-0,09 на 109/л; ПК FoxP3+ICOS+ - 7,0-27,5%, абс. - 0,002-0,019 на 109/л; ПК FoxP3+CD154+ - 0,39-3,25%, абс. 0,0001-0,0019 на 109/л; ПК FoxP3+CD274+ 0,47-3,43%, абс. - 0,00016-0,00334 на 109/л.
Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета программ Stаtistica 10.0 (StatSoft, США), включая общепринятые методы параметрического и непараметрического анализа. Для параметров, распределение которых отличалось от нормального, при сравнении двух групп использовали критерий Ман-на-Уитни, а при сравнении трех и более групп - критерий Краскела-Уоллиса, результаты представлены в виде медианы (Ме) с интерквартильным размахом [25-й; 75-й перцентили]. Корреляционный анализ проводился по методу Спирмена. Различия считались статистически значимыми при p<0,05.
Результаты
Среди включенных в исследование больных медиана DAS28 составила 5,01 [4,2; 5,8], при этом у 22 (48,9%) пациентов регистрировалась высокая, у 20 (44,4%) - умеренная и у 3 (6,7%) - низкая активность патологического процесса. Медиана SDAI составила 22,8 [17,0; 28,7] и CDAI - 20,0 [15,0; 26,0]. Повышенный уровень СРБ регистрировался у 30 (66,7%), а СОЭ - у 26 (57,8%) больных.
В группе раннего РА, по сравнению со здоровыми донорами, регистрировалось более низкое ПК FoxP3+CD25+ клеток (5,53 [4,09; 6,48] и 6,92 [5,84; 7,96]%), ПК и абс. FoxP3+ICOS+ клеток (6,91 [2,14; 11,47] и 10,83 [9,27; 13,7]%; 0,0035 [0,0013; 0,0067] и 0,0068 [0,0039; 0,009] 109/л), ПК и абс. FoxP3+CD154+ клеток (0,47 [0,19; 0,83] и 1,51 [1,12; 2,08]%; 0,0002 [0,00009; 0,0005] и 0,00087 [0,00047; 0,0014] 109/л) и FoxP3+ CD274+ Т-клеток (0,63 [0,34; 1,49] и 1,94 [1,16; 2,25]%; 0,0003 [0,0002; 0,00065] и 0,001 [0,0006; 0,0016] 109/л; p<0,05 во всех случаях).
Была установлена положительная корреляционная взаимосвязь между: ПК CD4+ и CDAI (r=0,4; p=0,04), абс. CD4+ и CDAI (r=0,4; p=0,03), HAQ (r=0,46; p=0,04). Регистрировалась отрицательная корреляционная взаимосвязь между: ПК FoxP3+ CD25+ и СРБ (r=-0,5; p=0,026), ПК CD152+intracellular и СРБ (r=-0,53; p=0,023), ПК FoxP3+CD127- и СРБ (r= -0,65; p=0,02), ПК CD25+CD127- и DAS28 (r=-0,64; p=0,016) ПК CD25+CD127- и SDAI (r=-0,6; p=0,03), ПК CD25+CD127- и CDAI (r=-0,6; p=0,03), ПК CD25+CD127- и СОЭ (r=-0,59; p=0,032), ПК CD25+ CD127- и СРБ (r=-0,63; p=0,02).
Затем все пациенты были разделены на две группы в зависимости от исходной активности патологического процесса: первую группу составили больные с высокой
воспалительной активностью: (DAS28 >5,1, SDAI >26, CDAI >22), а вторую — с умеренной и низкой. Среди пациентов первой группы регистрировалось более низкое ПК CD25+CD127- Трег по сравнению с больными второй группы (5,1 [4,9; 5,6] и 6,9 [6,4; 7,9]; р<0,05; рис. 1). Также мы оценили различия в уровнях Трег у пациентов с РА в зависимости от наличия системных проявлений заболевания. При наличии системных проявлений РА (п=7) регистрировалось более низкое ПК FoxP3+CD127- клеток (4,23 [2,76; 5,4] и 6,4 [4,9; 7,3]) и CD25+CD127- клеток (5,05 [3,52; 5,1] и 6,63 [5,6; 7,9]; р<0,05 во всех случаях; рис.2).
Среди пациентов, включенных в исследование, преобладали больные, позитивные по РФ и/или АЦЦП. У большинства пациентов — 31 (68,9%) — выявлялись повышенные уровни и РФ, и АЦЦП, 8 (17,8%) — были позитивны по АЦЦП и негативны по РФ и 4 (8,8%) — негативны по РФ и АЦЦП. Мы проанализировали уровни субпопуляции Трег у пациентов в зависимости от различного спектра антител в сыворотке крови. Среди сероне-гативных по РФ больных было выявлено более высокое ПК CD25+CD127-, ПК и абс. Foxp3+CD154+ и Foxp3+CD274+ Т-лимфоцитов (табл. 2, рис. 3). Достоверной разницы между группами, позитивными и негативными по АЦЦП, выявлено не было, вероятно, в связи с малым числом негативных по АЦЦП больных.
Также была выявлена отрицательная корреляционная взаимосвязь между уровнем ^М РФ и ПК Foxp3+CD274+ Т-лимфоцитов (г=-0,4; р=0,003).
Обсуждение
При анализе уровня Трег нами было выявлено снижение ПК CD4+FoxP3+CD25+ Трег в группе пациентов с ранним РА по сравнению со здоровыми донорами. В литературе представлены противоречивые данные об уровне Трег в синовиальной жидкости и периферической крови при РА. В подавляющем большинстве исследований указывается на увеличение содержания Трег в синовиальной
12 11 10
9
oj 8
Б
о
£ 7 2
о
о
^ 6
~Т"о"Т
о
"Т"6""Г
[j°Li.L о
i j°i i iq ! Ö ! ОоО О о
о jcjcj
о
о
Группа 1
Группа 2
Рис. 1. Относительное количество CD25+CD127- Т-лимфоцитов в группах пациентов в зависимости от активности заболевания
а 12
10
^ 8 (-41 и
Системные проявления отсутствуют
□ Ме
Наличие системных Системные проявления Наличие системных
проявлений отсутствуют проявлений
I | 25-й; 75-й перцентили ^ Мт-тах
Рис. 2. ПК FoxP3+CD127- клеток (а) и CD25+CD127- клеток (б) в группах больных в зависимости от наличия системных проявлений заболевания
6
4
2
0
жидкости пациентов с РА [12—20], однако данные об уровне данной клеточной субпопуляции в периферической крови противоречивы. Выявлено как уменьшение ПК циркулирующих Трег [13, 18, 21, 22], так и его увеличение [14, 23] или отсутствие отличий по уровню Трег клеток от здоровых доноров [12, 15, 16, 20, 23—26] или пациентов с остеоартритом [19]. Вероятно, подобное несоответствие связано со сложностью в выделении данной клеточной субпопуляции из общего пула Т-лимфоцитов в связи с отсутствием универсального поверхностного маркера Трег. В более ранних исследованиях Трег определяли как CD4+CD25+ лимфоциты и не оценивали экспрессию FoxP3 [12—16, 26]; G. Han исоавт. [23] отметили, что среди CD25+ клеток встречаются FoxP3- Т-лимфоци-ты, которые не являются регуляторными; вероятно,
с этим может быть связано завышенное количество Трег в периферической крови при РА, продемонстрированное в ряде исследований. Как уже отмечалось выше, уровень Трег в синовиальной жидкости пациентов с РА значительно повышен; также многочисленные публикации продемонстрировали сохранение супрессорного эффекта данных клеток in vitro, тем не менее воспалительная среда сустава может заметно снижать их активность. При этом на экспериментальных моделях, а также у пациентов с ревматическими заболеваниями была продемонстрирована потеря способности Трег ингибировать синтез интерлей-кина 6 (ИЛ6) и интерферона у (ИФНу) эффекторными клетками при сохранении способности ограничивать их пролиферацию [29, 30]. Рядом авторов представлены данные о резистентости эффекторных клеток (Тэфф) при РА
Таблица 2 Уровни субпопуляций Трег у серопозитивных и серонегативных по IgM РФ больных, Me [25-й; 75-й перцентили]
Субпопуляции Трег Серопозитивные по IgM РФ пациенты (n=32) Серонегативные по IgM РФ пациенты (n=13) р
ПК CD4+ 46,6 [38,9; 49,4] 39,9 [30,1; 45,1] Нд
абс. CD4+ на 109/л 0,9 [0,69; 1,1] 0,6 [0,4; 0,9] Нд
ПК FoxP3+CD25+ 5,5 [4,6; 6,9] 6,02 [4,01; 6,9] Нд
абс. FoxP3+CD25+ на 109/л 0,05 [0,03; 0,06] 0,04 [0,03; 0,06] Нд
ПК CD152+surface 0,7 [0,24; 1,7] 0,37 [0,12; 2,2] Нд
абс. CD152+surface на 109/л 0,0003 [0,0001; 0,0008] 0,0002 [0,00006; 0,001] Нд
ПК CD152+intracellular 65,8 [47,0; 75,7] 56,4 [47,9; 67,3] Нд
абс. CD152+intracellular на 109/л 0,0005 [0,00007; 0,001] 0,0009 [0,00008; 0,007] Нд
ПК FoxP3+CD127- 5,2 [4,4; 7,3] 6,54 [5,9; 8,5] Нд
абс. FoxP3+CD127- на 109/л 0,05 [0,03; 0,07] 0,05 [0,05; 0,06] Нд
ПК CD25+CD127- 5,9 [5,1; 7,1] 7,9 [7,2; 8,4] 0,04
абс. CD25+CD127- на 109/л 0,05 [0,04; 0,07] 0,06 [0,03; 0,07] Нд
ПК FoxP3+ICOS+ 4,1 [1,9; 9,9] 11,8 [6,9; 12,8] Нд
абс. FoxP3+ICOS+ на 109/л 0,002 [0,001; 0,005] 0,007 [0,004; 0,008] Нд
ПК FoxP3+CD154+ 0,3 [0,2; 0,7] 1,2 [0,7; 1,2] 0,02
абс. FoxP3+CD154+ на 109/л 0,0001 [0,00009; 0,0004] 0,0007 [0,0004; 0,0007] 0,01
ПК FoxP3+CD274+ 0,4 [0,3; 0,7] 1,49 [1,25; 2,2] 0,009
абс. FoxP3+CD274+ на 109/л 0,0002 [0,0001; 0,0004] 0,0008 [0,0007; 0,001] 0,007
Примечание. Нд- разница между группами не достоверна.
FITC-CD127- PE-CD2S+
7,9%
' -■ ' Ч'"Ч-' ' 'ГЧ'Т-^
« II* it* «•" w*
CD274
F1TG-CD127- PE-CD25*
5.9%
J
Рис. 3. Относительные уровни Трег в группах серонегативных (а) и серопозитивных (б) по IgM РФ пациентов с ранним РА
к супрессии Трег. Е. Wehrens и соавт. [31] продемонстрировали снижение подавления активности Т-лимфоцитов, выделенных из синовиальной жидкости пациентов с юве-нильным ревматоидным артритом (ЮРА), Трег. Авторы установили, что этот эффект не связан с функциональным дефектом самих Трег, так как они подавляли активность Тэфф периферической крови; вместе с тем Тэфф, выделенные из воспаленного сустава, в меньшей степени реагировали на супрессорные стимулы Трег. Авторы сделали предположение, что подобный эффект, возможно, связан с гиперактивацией протеинкиназы В/с-ак в Тэфф под влиянием провоспалительных цитокинов — ИЛ6 и фактора некроза опухоли а (ФНОа), а также установили, что блокирование данного фермента восстанавливало чувствительность Тэфф к ингибирующим эффектам Трег. Еще одним механизмом резистентности эффекторных клеток может служить нарушение чувствительности этих клеток к PD-1 сигнализации, что было продемонстрировано А. Яар^рои1ои и соавт. [32] при культивировании клеток здоровых доноров в присутствии синовиальной жидкости пациентов с РА.
В нашей работе была установлена взаимосвязь между активностью РА и уровнем Трег в периферическом кровотоке. Так, среди пациентов с высокой активностью патологического процесса регистрировался более низкий уровень CD25+CD127- Трег, а также была выявлена отрицательная корреляционная взаимосвязь числа FoxP3+CD25+, CD152+intrace11u1ar и CD25+CD127- Трег с клинико-лабораторными показателями активности РА. В литературе представлены противоречивые данные о взаимосвязи количества Трег с активностью заболевания и уровнями острофазовых показателей. Так, в ряде работ выявлена обратная корреляционная взаимосвязь между DAS28 и ПК циркулирующих Foxp3+ Трег [16, 21, 22]. С другой стороны, среди пациентов с высокой активностью заболевания авторы регистрируют высокое содержа-
ние CD25+Foxp3+ Т-клеток [21, 25]. В синовиальной ткани пациентов с РА F. Behrens и соавт. [33] отметили прямую взаимосвязь между T-bet/FoxP3 mRNA и DAS28. Также рядом авторов была продемонстрирована обратная взаимосвязь СОЭ и концентрации СРБ с уровнем Трег, хотя другие исследователи подобной взаимосвязи не обнаружили [17, 18, 22, 23].
Основной особенностью аутоиммунных ревматических заболеваний является продукция широкого спектра аутоантител, которая может быть связана или с непрерывной пролиферацией короткоживущих плазматических клеток, или с активацией долгоживущих плазматических клеток, образующихся в зародышевых центрах периферических лимфоидных органов [34, 35]. Большая часть дол-гоживущих плазматических клеток мигрируют в костный мозг и окончательно дифференцируются в антителопро-дуцирующие плазматические клетки [36]. Уровень этих клеток в очень малой степени зависит как от проводимого лечения БПВП, так и от анти-В-клеточной терапии [37-39]. В ряде недавних работ было показано негативное влияние Трег на активацию В-лимфоцитов, опосредованное перфорин/гранзим-цитотоксической активностью [40-42]. В экспериментах in vitro была выявлена обратная корреляционная взаимосвязь между активностью Трег и концентрацией антител. На экспериментальной модели коллаген-индуцированного артрита, а также на модели артрита у BALB/c мышей было установлено снижение уровня антител при адоптивном переносе Трег от здоровых животных к больным [43, 44]. E. Jang и соавт. [45] на мышиной модели аутоантитело-зависимого артрита (K/BxN), который развивался у животных, дефицитных по FoxP3, показали подавляющее влияние Трег на долго-живущие плазматические клетки селезенки. В своей работе мы продемонстрировали отрицательную корреляционную взаимосвязь между уровнем IgM РФ и содержанием Foxp3+CD274+ Т-лимфоцитов, а также более низкий
уровень CD25+CD127-, Foxp3+CD154+ и Foxp3+CD274+ Т-лимфоцитов в группе серопозитивных по IgM РФ пациентов с РА. Сходные результаты были получены L. Hunt и соавт. [46] в группе из 103 АЦЦП-позитивных пациентов. Авторами было выявлено снижение уровня Трег у 35,8% больных из этой группы. Напротив, K. Janssen и соавт. [47] никакой зависимости между уровнем антител и содержанием Трег в периферическом кровотоке пациентов с РА не выявили.
Многие авторы полагают, что количественный дефект CD4+CD25+Foxp3+CD127- клеток особенно характерен для раннего РА и ассоциируется с риском развития РА у бессимптомных пациентов, позитивных по АЦЦП [27, 28]. L. Hunt и соавт. [46] проанализировали риск развития РА в группе 103 АЦЦП-позитивных пациентов без признаков синовита. Прогрессирование заболевания отмечалось у 46,6% больных, причем у подавляющего большинства - в течение первых 12 мес. Авторы проанализировали три прогностические модели, включающие клинические и лабораторные данные, для определения наиболее информативных предикторов прогрес-сирования заболевания. Из лабораторных параметров анализировался уровень наивных Т-лимфоцитов (CD4+CD45Ra+), клеток, связанных с воспалением (CD45RBbrightCD45RA+CD62L-), и уровень Трег (CD4+CD25+Foxp3+CD127-). Использование только клеточных маркеров (совместно все три субпопуляции) оказалось информативным (AUC - 0,75), однако имело низкую чувствительность (28,6-45,2%). Наиболее ин-
формативным являлось совместное использование клеточных и клинических данных (AUC — 0,79), причем вклад именно клеточных маркеров в информативность данной модели был очень значительным. Напротив, K. Janssen и соавт. [47] взаимосвязи между развитием РА и исходным уровнем Трег не обнаружили, что, возможно, было связано с небольшой численностью группы обследованных больных (n=34).
Таким образом, представленные данные демонстрируют снижение уровня и функциональной активности Трег при раннем РА, что ассоциируется с более высокой активностью заболевания, наличием системных проявлений болезни, а также сопровождается гиперпродукцией антител. Мониторирование уровня Трег, наряду с другими параметрами, может быть информативным для прогнозирования развития РА у бессимптомных пациентов, что позволит выявить группы риска и своевременно начать адекватную терапию.
Прозрачность исследования
Исследование не имело спонсорской поддержки. Авторы несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и других взаимоотношениях
Все авторы принимали участие в разработке концепции статьи и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за статью.
ЛИТЕРАТУРА
1. Быковская СН, Насонов ЕЛ. Роль дефектов иммуносупрессии в развитии аутоиммунных заболеваний. Научно-практическая ревматология. 2005;43(4):81-4 [Bykovskaya SN, Nasonov EL. Role of immunosupression defects in the development of autoimmune diseases. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2005;43(4):81-4 (In Russ.)]. doi: 10.14412/1995-44842005-623
2. Sakaguchi S, Yamaguchi T, Nomura T, Ono M. Regulatory T cells and immune tolerance. Cell. 2008;133(5):775-87.
doi: 10.1016/j.cell.2008.05.009
3. Zeng H, Chi H. The interplay between regulatory T cells and metabolism in immune regulation. Oncolmmunology. 2013;2(11):e26586. Epub 2013 Oct 21. doi: 10.4161/onci.26586
4. Lahl K, Loddenkemper C, Drouin C, et al. Selective depletion of Foxp3+ regulatory T cells induces a scurfy-like disease. J Exp Med. 2007;204(1):57-63. doi: 10.1084/jem.20061852. Epub 2007 Jan 2.
5. Buckner JH. Mechanisms of impaired regulation by CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells in human autoimmune diseases. Nat Rev Immunol. 2010;10:849-59.
doi: 10.1038/nri2889
6. Wildin RS, Freitas A. IPEX and FOXP3: clinical and research perspectives. JAutoimmun. 2005;25 Suppl:56-62.
doi: 10.1016/j.jaut.2005.04.008
7. Насонов ЕЛ, Каратеев ДЕ, Балабанова РМ. Ревматоидный артрит. В кн.: Насонов ЕЛ, Насонова ВА, редакторы. Ревматология: Национальное руководство. Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2008. С. 290-331 [Nasonov EL, Karateev DE, Balabanova RM. Rheumatoid arthritis. In: Nasonov EL, Nasonova VA, editors. Revmatologiya: Natsional'noe rukovodstvo [Rheumatology: National guidelines]. Moscow: GEOTAR-Media; 2008. P. 290-331].
8. Firestein G. Evolving concepts of rheumatoid arthritis . Nature. 2003;423:356-61. doi: 10.1038/nature01661
9. Cope A.T cells in rheumatoid arthritis. ArthrRes Ther. 2008;10 Suppl 1:S1. doi: 10.1186/ar2412
10. Choy E. Selective modulation of T cell co-stimulation: a novel mode of action for the treatment of rheumatoid arthritis. Clin Exp Rheumatol. 2009;27:510-8.
11. Steward-Tharp S, Song Y, Siegel R, O'Shea J. New insights into T cells biology and T cells directed therapy for autoimmunity inflammation and immunosuppression. Ann NY Acad Sci. 2010;1183:123-48. doi: 10.1111/j.1749-6632.2009.05124.x
12. Cao D, Malmstrom V, Baecher-Allan C, et al. Isolation and functional characterization of regulatory CD25brightCD4+ T cells fromthe target organ of patients with rheumatoid arthritis. Eur J Immunol. 2003;33:215-23. doi: 10.1002/immu.200390024
13. Cao D, van Vollenhoven R, Klareskog L, et al. CD25+CD4+ regulatory T cells are enriched in inflamed joints of patients with chronic rheumatic disease. Arthr Res Ther. 2004;6:R335-R346. doi: 10.1186/ar1192
14. Van Amelsfort JMR, Jacobs KMG, Bijlsma JWJ, et al. CD4+CD25+ regulatory T cells in rheumatoid arthritis: differences in the presence, phenotype, and function between peripheral blood and synovial fluid. Arthritis Rheum. 2004;50:2775-85.
doi: 10.1002/art.20499
15. Mottonen M, Heikkinen J, Mustonen L, et al. CD4+ CD25+ T cells with the phenotypic and functional characteristics of regulatory T cells are enriched in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis. Clin ExperImmunol. 2005;140:360-7.
doi: 10.1111/j.1365-2249.2005.02754.x
16. Liu M-F, Wang C-R, Fung L-L, et al. The presence of cytokine-suppressive CD4+CD25+ T cells in the peripheral blood and synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis. Scand J Immunol. 2005;62:312-7. doi: 10.1111/j.1365-3083.2005.01656.x
17. Cao D, Borjesson O, Larsson P, et al. FOXP3 identifies regulatory CD25brightCD4+ T cells in rheumatic joints. Scand J Immunol. 2006;63:444-52. doi: 10.1111/j.1365-3083.2006.001755.x
18. Jiao Z, Wang W, Jia R, et al. Accumulation of FoxP3-expressing CD4+CD25+ T cells with distinct chemokine receptors in synovial fluid of patients with active rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatol. 2007;36:428-33. doi: 10.1080/03009740701482800
19. Moradi B, Schnatzer P, Hagmann S, et al. CD4+CD25+/highCD127low/- regulatory T cells are enriched in rheumatoid arthritis and osteoarthritis joints — analysis of frequency and phenotype in synovial membrane, synovial fluid and peripheral blood. Arthritis Res Ther. 2014;16: R97.
doi: 10.1186/ar4545
20. Dejaco C, Duftner C, Klauser A, Schirmer M. Altered T-cell subtypes in spondyloarthritis, rheumatoid arthritis and polymyalgia rheumatic. Rheumatol Int. 2010;30:297-303. doi: 10.1007/s00296-009-0949-9
21. Sempere-Ortells JM, Perez-Garcia V, Marin-Alberca G, et al. Quantification and phenotype of regulatory T cells in rheumatoid arthritis according to disease activity Score-28. Autoimmunity. 2009;42:636-45. doi: 10.3109/08916930903061491
22. Kawashiri S-Y, Kawakami A, Okada A, et al. CD4+CD25(high)CD127(low/-) Treg cell frequency from peripheral blood correlates with disease activity in patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol. 2011;38:2517-21.
doi: 10.3899/jrheum.110283
23. Han GM, O'Neil-Andersen NJ, Zurier RB, Lawrence DA. CD4+CD25high T cell numbers are enriched in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis. Cell Immunol. 2008;253:92-101. doi: 10.1016/j.cellimm.2008.05.007
24. Lin SC, Chen K-H, Lin C-H, et al. The quantitative analysis of peripheral blood FOXP3-expressing T cells in systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis patients. Eur J Clin Invest. 2007;37:987-96. doi: 10.1111/j.1365-2362.2007.01882.x
25. Ji L, Geng Y, Zhou W, Zhang Z. A study on relationship among apoptosis rates, number of peripheral T cell subtypes and disease activity in rheumatoid arthritis. Int J Rheum Dis. 2016;19:167-71. doi: 10.1111/1756-185X.12211
26. Dombrecht EJ, Aerts NE, Schuerwegh AJ, et al. Influence of antitumor necrosis factor therapy (Adalimumab) on regulatory T cells and dendritic cells in rheumatoid arthritis. Clin Exper Rheumatol. 2006;24:31-7.
27. Lawson CA, Brown AK, Bejarano V, et al. Early rheumatoid arthritis is associated with a deficit in the CD4+CD25high regulatory T cell population in peripheral blood. Rheumatology (Oxford). 2006;45(10):1210-7. doi: 10.1093/rheumatology/kel089
28. Hensor RMA, Hunt L, Patmar R, et al. Predicting the evaluation of inflammatory arthritis in ACPA-positive individuals: can T-cell subset help? Ann Rheum Dis. 2014;73 Suppl 1:A14.
doi: 10.1136/annrheumdis-2013-205124.32
29. Ehrenstein MR, Evans JG, Singt A, et al. Compromised function of regulatory T cells in rheumatoid arthritis and reversal by anti-TNFa therapy. J Exp Med. 2004;200(3):277-85.
doi: 10.1084/jem.20040165. Epub 2004 Jul 26.
30. McGovern JL, Nguyen DX, Notley CA, et al. Th17 cells are restarained by T reg cells via the inhibition of interleukin-6 in patients with rheumatoid arthritis responding to anti-tumor necrosis factor antibody therapy. Arthritis Rheum. 2012;64(10):3129-38. doi: 10.1002/art.34565
31. Wehrens EJ, Mijnheer G, Duurland CL, et al. Functional human regulatory T cells fail to control autoimmune inflammation due to PKB/c-akt hyperactivation in effector cells. Blood. 2011;118:3538-48. doi: 10.1182/blood-2010-12-328187
32. Raptopoulou AP, Bertsias G, Makrygiannakis D, et al. The programmed death 1/programmed death ligand 1 inhibitory pathway is up-regulated in rheumatoid synovium and regulates peripheral T cell responses in human and murine arthritis. Arthritis Rheum. 2010;62:1870-80. doi: 10.1002/art.27500
33. Behrens F, Himsel A, Rehart S, et al. Imbalance in distribution of functional autologous regulatory T cells in rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis. 2007;66:1151-6. doi: 10.1136/ard.2006.068320
34. Kim CH, Rott LS, Clark-Lewis I, et al. Subspecialization of CXCR5+ T cells: B helper activity is focused in a germinal center-localized subset of CXCR5+ T cells. J Exp Med. 2001;193:1373-81. doi: 10.1084/jem.193.12.1373
35. Odegard JM, Marks BR, DiPlacido LD, et al. ICOS-dependent extrafollicular helper T cells elicit IgG production via IL-21 in systemic autoimmunity. J Exp Med. 2008;205:2873-86.
doi: 10.1084/jem.20080840
36. Radbruch A, Muehlinghaus G, Luger EO, et al. Competence and competition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell. Nat Rev Immunol. 2006;6:741-50. doi: 10.1038/nri1886
37. Slifka MK, Antia R, Whitmire JK, Ahmed R. Humoral immunity due to long-lived plasma cells. Immunity. 1998;8:363-72.
doi: 10.1016/S1074-7613(00)80541-5
38. Hoyer BF, Moser K, Hauser AE, et al. Short-lived plasmablasts and long-lived plasma cells contribute to chronic humoral autoim-munity in NZB/Wmice. J Exp Med. 2004;199:1577-84.
doi: 10.1084/jem.20040168
39. Silverman GJ, Weisman S. Rituximab therapy and autoimmune disorders: prospects for anti-B cell therapy. Arthritis Rheum. 2003;48:1484-92. doi: 10.1002/art.10947
40. Zhao DM, Thornton AM, DiPaolo RJ, Shevach EM. Activated CD4+CD25+ T cells selectively kill B lymphocytes. Blood. 2006;107:3925-32. doi: 10.1182/blood-2005-11-4502
41. Iikuni N, Lourenco EV, Hahn BH, La Cava A. Cutting edge: regulatory T cells directly suppress B cells in systemic lupus erythematosus. J Immunol. 2009;183:1518-22. doi: 10.4049/jim-munol.0901163
42. Grossman WJ, Verbsky JW, Barchet W, et al. Human T regulatory cells can use the perforin pathway to cause autologous target cell death. Immunity. 2004;21:589-601. doi: 10.1016/j.immu-ni.2004.09.002
43. Seo SJ, Fields ML, Buckler JL, et al. The impact of T helper and T regulatory cells on the regulation of anti-double stranded DNA B cells. Immunity. 2002;16:535-46. doi: 10.1016/S1074-7613(02)00298-4
44. Morgan ME, Sutmuller RP, Witteveen HJ, et al. CD25+ cell depletion hastens the onset of severe disease in collagen-induced arthritis. Arthritis Rheum. 2003;48:1452-60. doi: 10.1002/art.11063
45. Jang E, Cho W, Cho M, et al. Foxp3+ Regulatory T Cells Control Humoral Autoimmunity by Suppressing the Development of Long-Lived Plasma Cells. J Immunol. 2011;186:1546-53.
doi: 10.4049/jimmunol.1002942
46. Hunt L, Hensor EM, Nam J, et al. T cell subsets: an immunologi-cal biomarker to predict progression to clinical arthritis in ACPA-positive individuals. Ann Rheum Dis. 2016;75:1884-9.
doi: 10.1136/annrheumdis-2015-207991
47. Janssen K, Westra J, Chalan P, et al. Regulatory CD4+ T-Cell Subsets and AntiCitrullinated Protein Antibody Repertoire: Potential Biomarkers for Arthritis Development in Seropositive Arthralgia Patients? PLoS ONE 2016;11(9):e0162101.
doi: 10.1371/journal.pone.0162101PLoS
