CC BY
54
УДК 616025.-002.954.2;576.807.7
Н.В. Фоменко', В.А. Рар', Т.И. Епихина', О.В. Мельникова2, Н.Я. Черноусова2
ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИТЕЛ К BORRELIA BURGDORFERI SENSU LATO И ANAPLASMA PHAGOCYTOPHILUM У БОЛЬНЫХ, ГОСПИТАЛИЗИРОВАННЫХ С ДИАГНОЗОМ КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ
1Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск) 2Муниципальная инфекционная клиническая больница № 1 (Новосибирск)
Проведено выявление антител к Borrelia burgdorferi sensu lato в крови 176 больных, госпитализированных с лихорадочным, состоянием, развившимся, после присасывания клещей, антитела выявлены в 61 случае. В группе больных с диагнозом, клещевой энцефалит. (КЭ) антитела к боррелиям выявлены в 40,3 % случаев. Кроме того, в крови. 96 лихорадящих больных проведено выявление антител к
A. phagocytophilum, антитела выявлены, в 4 случаях, причем, в 2 случаях антитела выявлены, у больных с диагнозом КЭ.
Ключевые слова: боррелиоз, анаплазмоз, клещевой энцефалит
DETECTION OF ANTIBODIES AGAINST BORRELIA BURGDORFERI SENSU LATO AND ANAPLASMA PHAGOCYTOPHILUM IN PATIENTS HOSPITALIZED WITH TICK-BORNE ENCEPHALITIS
N.V. Fomenko1, V.A.Rar1, T.I. Epikhina1, O.V. Mel'nikova2, N.Ya. Chernousova2
institute of Chemical Biology and Fundamental Medicine, Novosibirsk 2Municipal Infectious Clinical Hospital N 1, Novosibirsk
The antibodies against Borrelia burgdorferi sensu lato were revealed, in 61 of 176 blood samples of patients hospitalized, with tick-borne febrile illnesses. In the group of patients with tick-borne encephalitis (TBE) the antibodies against Borrelia were detected, in 40,3 % of cases. Moreover the detection of antibodies against Anaplasma phagocytophilum was performed in 96 blood samples of patients with fever. Specific antibodies were revealed, in 4 cases of patients with fever including 2 cases of patients with TBE diagnosis.
Key words: Borrelia, Anaplasma, tick-borne encephalitis
ВВЕДЕНИЕ
Таежные клещи Ixodes persulcatus являются переносчиками вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) и боррелий комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.). Помимо этого в I. persulcatus выявлен возбудитель гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ) — внутриклеточные грам-отрицательные бактерии Anaplasma phagocytophilum [4, 5, 10]. ГАЧ широко распространен в США, где до 2004 г. было отмечено более 2,5 тыс. случаев заболевания [13], в Европе зарегистрировано около 70 случаев заболевания.
В Новосибирской области в клещах I. persulcatus и мелких млекопитающих выявлены два вида боррелий: B. afzelii и B. garini. Кроме того, при тестировании сывороток больных, госпитализированных с диагнозом КЭ, положительные титры антител к белкам боррелий обнаружены в 35,7 % случаев [12]. На территории Новосибирской области ДНК A. phagocytophilum обнаружена в 2,4 % клещей I. persulcatus и в 4,2 % образцах крови мелких млекопитающих [9]. Выявление A. phagocytophilum в клещах и мелких млекопитающих свидетельствует о потенциальной опасности заражения. В России серологически подтвержденные случаи заболевания ГАЧ отмечены на территории Пермской [14] и Иркутской [1] областей, на Алтае [10], а также на Дальнем Востоке [11].
Присутствие в одном клеще нескольких возбудителей приводит к возникновению смешанных форм заболевания [2, 9]. На территории Новосибирской области смешанную инфекцию клещевого энцефалита (КЭ) и иксодового клещевого борре-лиоза (ИКБ), выявленного только по эритемным формам, отмечают в 10—13% от числа заболевших КЭ [2]. Наличие в одном клеще нескольких возбудителей приводит к риску развития смешанной инфекции, что значительно усложняет диагностику, лечение, а также может приводить к более тяжелым формам заболевания.
Целью нашего исследования было выявление антител к B. burgdorferi s.l. и A. phagocytophilum в крови больных, госпитализированных в весеннее-летний эпидемиологический период с диагнозом КЭ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследованы образцы крови пациентов муниципальной инфекционной клинической больницы № 1 г. Новосибирска, госпитализированных в мае-августе 2004 — 2006 гг. с подозрением на КЭ. Основными критериями отбора проб крови было наличие факта присасывания клеща и повышение температуры выше 38,5 °С. Время, прошедшее от присасывания клеща до момента забора крови составило от 1 до 35 дней. На присутствие антител к
B. burgdorferi s.l. исследовано 176 проб крови, взятой в первый день госпитализации до проведения этиотропной терапии. На присутствие антител к
A. phagocytophilum проанализировано 96 образцов крови, забранной в мае-августе 2006 г. Диагноз КЭ был установлен на основании эпидемиологического анамнеза, клинических симптомов и по результатам лабораторных тестов. Иммуноферментный анализ (ИФА) проводили с использованием коммерческих наборов ВектоВКЭ, («Вектор-Бест», Новосибирск). Все больные в зависимости от клинических проявлений были разделены на 3 группы. Группу 1 (62 человека) составили больные с подтвержденным диагнозом КЭ, группу 2 (7 человек)
— больные со смешанной инфекцией (КЭ и ИКБ эритемная форма) и группу 3 (107 человек) — пациенты, у которых диагноз КЭ не подтвердился.
Кровь объемом 9 мл собирали в пробирки «Vacuette»-K3E с 0,5 М ЭДТА (Австрия). Выявление антител к B. burgdorferi s.l. проведено методом РНИФ по ранее описанной методике [8, 12]. Диагностически значимыми считали титры IgM 1:10 и выше, и 1 : 40 и выше при использовании поливалентного коньюгата. Выявление антител к
A. phagocytophilum проведено с применением наборов ГАЧ-IgM и ГАЧ-IgG (Омникс, Санкт-Петербург). Диагностически значимыми считались титры 1 : 100 и выше, в соответствии с рекомендациями производителя.
Статистическая обработка результатов выполнена с использованием общепринятых методов статистического анализа.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Из 176 обследованных лихорадящих больных антитела к B. burgdorferi s.l., в диагностически значимых титрах выявлены в 35 % случаев, диагноз КЭ был поставлен в 39,2 % случаях. Патогномоничным признаком ИКБ является мигрирующая эритема (МЭ), возникающая в месте присасывания клеща. Наличие МЭ при ИКБ значительно облегчает постановку диагноза, в то время как диагностика бе-зэритемных форм затруднена. К особенностям бе-зэритемной формы ИКБ относят более раннее и частое поражение органов на фоне выраженного общеинфекционного синдрома.
В группе больных с диагнозом КЭ (1 группа) антитела к боррелиям в диагностически значимых титрах выявлены в 25 (40,3 %) случаях (табл. 1). Показано, что при обследовании больных КЭ в Свердловской и Томской областях, циркуляция антител к боррелиям выявлена в 36,5 и 40 % случаев соответственно [5, 7]. У больных с микст-инфекцией КЭ и ИКБ эритемная форма (2 группа) антитела выявлены в 4 случаях (57,1 %) (табл. 1).
У 107 больных, госпитализированных с острым лихорадочным состоянием после присасывания клещей и не подтвердившимся в дальнейшем диагнозом КЭ, антитела к боррелиям выявлены в 32 (29,9%) случаях (табл. 1). Выявление безэритем-ных форм ИКБ отмечено и в соседних областях, так в Кемеровской области, безэритемные формы
выявлены в 32 %, а в Томской области — в 60 % случаев от общего числа госпитализированных с подозрением на КЭ [6, 7].
Ранее было показано, что развитие иммунного ответа на антигены ВКЭ и B. burgdorferi s.l. у больных с микст-инфекцией отличается от иммунного ответа при моноинфекции КЭ или ИКБ. Образование антител к ВКЭ при ассоциированной инфекции происходит быстрее, а к боррелиям — замедляется [3]. В нашем исследовании значения титров проти-воборрелиозных антител в 1 и 3 группах отличались. При использовании поливалентного коньюгата выявлено что, в 1 группе антитела с титрами 1 : 160 и выше детектированы только в 2 случаях, тогда как в
3 группе — в 11 случаях. Показано, что в группе больных с КЭ (1 группа), достоверно чаще (F = 5,5, v2 = 25, p < 0,05) выявляются антитела в титрах 1 : 80, в то время как для больных с не подтвердившимся диагнозом КЭ (3 группа) преобладающими являются более высокие титры антител. Достоверного отличия между выявлением антител у больных КЭ и у больных с неподтвердившимся диагнозом КЭ не выявлено. При безэритемной форме ИКБ образование антител класса IgM как правило отмечается со второй недели болезни. Выявление серопозитивных сывороток на первой неделе болезни может говорить как о протекании заболевания в данный момент, так и о предшествовавшем контакте с возбудителем. Для предотвращения развития хронических форм ИКБ таким больным требуется проведение дополнительного обследования.
У лихорадящих больных, госпитализированных после присасывания клеща в эпидемиологический период 2006 г., кроме выявления противо-боррелиозных антител было проведено выявление антител к A. phagocytophilum. Из 96 исследованных образцов антитела к A. phagocytophilum выявлены в 4 (4,2 %) случаях: IgG антитела с титрами 1 : 100, 1 : 200 и 1 : 400 и IgM антитела с титром 1 : 100. Схожий процент (2,99%) серопозитивных сывороток больных, госпитализированных после присасывания клеща, отмечен в Иркутской области, в то же время в Пермской области у 16,4 % пациентов были обнаружены антитела к ГАЧ [14].
В Европе и США диагноз ГАЧ считается подтвержденным при выявлении возрастающего в
4 раза титра антител, изоляции возбудителя ГАЧ на питательные среды или выявлении ДНК
A. phagocytophilum. В данной работе сыворотки были исследованы ретроспективно, поэтому динамика изменения титра антител не была исследована. Несмотря на малое число людей перенесших ГАЧ (во всех странах, кроме США), число людей с серопозитивными сыворотками достаточно велико. В европейских странах у 2 — 30 % людей были выявлены антитела к A. phagocytophilum [17], в США — у 11 — 15% [16], в Монголии — у 2 — 5% [15]. Высказывались различные предположения относительно причин столь высокого уровня серопозитивности, который может быть обусловлен бессимптомными случая-
Таблица 1
Выявление антител к боррелиям комплекса B. burgdorferi s.l.
Титры антител Группа
1 2 3
ZIg 1:160 2 11
IgM 1:20 и более (3,2 %) (10,3 %)
ZIg 1:80 7 1 5
IgM 1:20 (11,3 %) (14,4 %) (4,7 %)
ZIg 1:40 16 3 16
IgM 1:10 (25,8 %) (42,8 %) (14,9 %)
ZIg -отр 37 3 75
IgM -отр (59,7 %) (42,8 %) (70,1 %)
Всего 62 7 107
ми заболевания [13], либо инфицированием людей непатогенными штаммами. Кроме того, низкие титры антител могут быть обусловлены неспецифической перекрестной реакцией [16].
Несмотря на четкую клиническую картину каждой инфекции (КЭ и ИКБ) в остром периоде они имеют много общего: данные эпидемиологического анамнеза, общеинфекционный и катаральный синдромы, вегетативные проявления. Инфицирование анаплазмами, как правило, не сопровождается патогномоничными симптомами. Общими с КЭ и ИКБ также являются данные эпидемиологического анамнеза и полиморфизм клинической симптоматики. Для острой фазы ГАЧ характерны тромбоцитопения, лейкопения, повышенный уровень печеночных ферментов (аминот-рансферазы) и С-реактивного белка. Микст-инфекции, как правило, протекают клинически тяжелее, длительнее, могут сопровождаться различными осложнениями, кроме того, возможно развитие прогредиентного течения заболевания, которое может быть связано с персистенцией одного или обоих возбудителей [9, 7]. В нашем исследовании ИКБ (эритемная и безэритемная форма) выявлена у 32 больных КЭ (46,4 %), в двух случаях (2,9 %) антитела класса IgG к ГАЧ выявлены у больных с КЭ. Одновременное выявление КЭ, ИКБ и ГАЧ отмечены в Пермской области, где микст-инфекция ГАЧ и ИКБ выявлена в 10 %, а ГАЧ и КЭ только в 0,6 % случаев от числа исследованных [14].
Таким образом, показано, что у больных, госпитализированных с подозрением на клещевой энцефалит, серологически верифицируется не только КЭ, но так же выявляются антитела к
B. burgdorferi s.l. и A. phagocytophilum. Противо-боррелиозные антитела достаточно часто выявляются как у больных с подозрением КЭ, так и у больных с не подтвердившимся в дальнейшем диагнозом КЭ. Для своевременного обнаружения моно-и микст-инфекций ИКБ целесообразно проводить обследование больных в первые дни болезни наряду с КЭ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Дифференциальная экспресс-диагностика и экстренная специфическая профилактика
трансмиссивных клещевых инфекций в городе Иркутске / И.В. Козлова, В.И. Злобин, М.М. Вер-хозина, М.А. Хаснатинов // Бюллет. сиб. мед. — 2006. — Приложение № 1. — С. 154— 160.
2. Иерусалимский А.П. Клещевой энцефалит / А.П. Иерусалимский. — Новосибирск, 2001. — 58 с.
3. Избранные вопросы состояния клеточных факторов резистентности при клещевых природно-очаговых микст-инфекциях / Н.П. Пирогова, М.Р. Карпова, В.В. Новицкий, А.П. Зима и др.// Бюллет. сиб. мед. — 2006. — Приложение № 1. —
С. 144-153.
4. Изучение генетического разнообразия анап-лазм и эрлихий в паразитарных системах юга Западной Сибири и Урала / В.А. Рар, Н.Н. Ливанова,
В.В. Панов, В.Б. Астанин и др. // Бюллет. сиб. мед.
— 2006. — Приложение № 1. — С. 116-120.
5. Клиническая характеристика клещевого энцефалита при его сочетании с Лайм-боррелио-зом / М.Л. Амосов, О.М. Лесняк, Р.Г. Образцова,
В.Г. Мельников и др. // Вопр. вирусол. — 2000. — №3. — С. 25 — 28.
6. Клинические варианты Лайм-боррелиоза в Кемеровской области / Л.Н. Кравчук, Э.И. Корен-берг, М.И. Калинин, В.А. Сысолятин // Мед. пара-зитол. — 1993. — № 1. — С. 29 — 30.
7. Клинические проявления и дифференциальный диагноз иксодовых клещевых боррелиозов / Л.В. Лукашова, А.В. Лепехин, Н.Г. Жукова, М.Н. Добкина и др. // Бюллет. сиб. мед. — 2006. — Приложение № 1. — С. 99—105.
8. Коренберг Э.И. Методические указания по эпидемиологии, диагностике, клинике и профилактике болезни Лайма / Э.И. Коренберг, В.А. Насонова. — М., 1991.
9. Коренберг Э.И. Микст-инфекции, передающиеся иксодовыми клещами: современное состояние проблемы / Э.И. Коренберг // Успехи. совр. биол. — 2003. — №5. — С. 455 — 486.
10. Новые данные о выявлении эрлихий и анаплазм в иксодовых клещах в России и Казахстане / С.Н. Шпынов, Н.В. Рудаков, В.К. Ястребов, Г.Н. Леонова и др. // Мед. паразитол. — 2004. — №2. — С. 10—14.
11. Первый случай гранулоцитарного эрлихи-оза на Дальнем Востоке Российской Федерации /
Ю.Н. Сидельников, О.Ю. Медянников, Л.И. Иванов, Н.И. Здановская // Клин. мед. — 2003. — №81.
- С. 67-68.
12. Фоменко Н.В. Детекция ДНК боррелий комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato в крови больных иксодовыми клещевыми боррелиозами / Н.В. Фоменко, Е.В. Романова, О.В. Мельникова, Н.Я. Черноусова и др. // Клин. лаб. диагн. — 2003.
- № 12. — С. 49 — 50.
13. Bakken J.S. Clinical diagnosis and treatment of human granulocytotropic anaplasmosis / J.S. Bakken, J.S. Dumler // Ann. N.Y. Acad. Sci. — 2006. — № 1078.
- P. 236 — 247.
14. Human granulocytic anaplasmosis: risk in the Cisural region, Russia / M.V. Afanasieva, N.N. Vorobyeva, E.I. Korenberg, V.I. Frizen // Int.
J. Med. Microbiol. — 2006. — №296, Suppl. 1. — P. 167- 168.
15. Serological evidence for tick-borne encephalitis, borreliosis, and human granulocytic anaplasmosis in Mongolia / G. Walder, E. Lkhamsuren, A. Shagdar, J. Bataa et al. // Int. J. Med. Microbiol. — 2006. — №296, Suppl. 1. — P. 69 — 75.
16. Seroprevalence of antibodies that react with Anaplasma phagocytophila, the agent of human granulocytic ehrlichiosis, in different populations in Westchester County, New York / M.E. Aguero-Rosenfeld, L. Donnarumma, L. Zentmaier, J. Jacob et al. // J. Clin. Microbiol. — 2002. — № 40. — P. 2612 — 2615.
17. Strle F. Human granulocytic ehrlichiosis in Europe / F. Strle // Int. J. Med. Microbiol. — 2004.
— №293, Suppl. 37. — P. 27 — 35.
