CC BY
32
УДК 579:591.111.7
Кравченко Н.О., кандидат ветеринарних наук® 1нститут сыьськогосподарськог мжробюлогп УААН, Чернте
ВПЛИВ НА ФАГОЦИТАРНУ АКТИВН1СТЬ КРОВ1 МАКРООРГАШЗМУ ФЕРМЕНТАТИВНО-УЛЬТРАЗВУКОВИХ Л1ЗАТ1В
АТИПОВИХ М1КОБАКТЕР1Й
Предстаелеш дат щодо еплиеу ферментатиено-ультразеукоеих л1зат1е атипоеих мтобактерш на фагоцитарну систему кроег крол1е.
Встаноелено, що ферментатиено-ультразеукое1 л1зати атипоеих мгкобактергй за концентрацп 0,1 мг/см3 достоегрно (р<0,05) стимулюють фагоцитарну актиетсть кроег лабораторних теарин та е не токсичними.
Ключовi слова: атипое1 мтобактерп, ферментатиено-ультразеукое1 л1зати, токсичтсть, фагоцитарна актиетсть.
Вступ. У системi лжувальних та профшактичних заходiв захворювань молодняку сшьськогосподарських тварин, що виникають на фош недостатньо сформовано! природно! резистентност та iмунолоriчно! реактивност оргашзму, важливим i актуальним завданням е корекцiя iмунного статусу макрооргашзму [1,2].
Вiдомо, що первинним етапом у розвитку iмунно! вiдповiдi макрооргашзму на вплив зовшшнього середовища е фагоцитарна система, яка здатна забезпечити зв'язок мiж кл^инними i гуморальними факторами захисту та мiж специфiчною i неспецифiчною резистентнiстю органiзму. Напевно речовини, яю найбiльшою мiрою стимулюватимуть макрофагальну систему органiзму будуть активiзувати i iншi ланки iмунiтету [3,4].
Найбшьш сильний стимулюючий ефект на фагоцитарну систему та антимжробну резистентшсть макроорганiзму порiвняно з iншими iмуностимуляторами виявляють речовини мiкробного походження [4,5].
У сучаснш ветеринарнiй практицi використовують велику кiлькiсть iмуностимулюючих засобiв, в тому чи^ i мiкробних, що рiзняться мiж собою за походженням, хiмiчною структурою, способом одержання та мехашзмом ди [6-9]. Бактерiальнi препарати можна роздшити на такi, що складаються з цiлих мiкробних кл^ин (БЦЖ), бактерiальних полiсахаридiв (пiрогенал, продигюзан), екстрактiв та рибосом мiкробних кл^ин (бронхомунал, рибомунiл), препаратiв кл^инно! стшки (бiостим, лактолен) та мiнiмальних компонента кл^инно! оболонки (мурамилдипептиди). Широкий вибiр препаратiв з клiтинних компонентiв мiкроорганiзмiв умотивований !х ефективною iмуностимулюючою дiею за умови недостатньо! активностi ферменив макрофагально! системи органiзму тварин до розщеплення цiлих клiтин бактерiй [3,5].
Однак, стримуючим фактором для широкого використання бактерiальних iмуностимуляторiв е поява тсля застосування бiльшостi з них небажаних
® Кравченко Н.О., 2010
158
реакцш: алерпчних, токсичних [5]. Тому пошуковi роботи з удосконалення та розробки нешкщливих, високоефективних, доступних та недорогих препараив тривають.
Метою дано! роботи було дослщити вплив ферментативно-ультразвукових лiзатiв атипових мжобактерш на фагоцитарну активнiсть кровi лабораторних тварин.
Матер1али 1 методи. Науково-дослiдна робота щодо встановлення впливу на фагоцитарну актившсть кровi лабораторних тварин ферментативно-ультразвукових лiзатiв атипових мжобактерш (ФУЛАМ) проводилась зi штамами мiкобактерiй, видiлених з проб бюлопчного матерiалу (лiмфатичних вузлiв, внутрiшнiх оргашв та молока велико! рогато! худоби) за методом Алжаево!. Культивування !х проводили на щiльному середовищi Левенштейна -Йенсена при 370С упродовж мкяця. Iдентифiкацiю видiлених мiкобактерiй проводили згщно методичних рекомендацiй по лабораторнiй дiагностицi туберкульозу (м. Омськ,1988). Для одержання лiзатiв атипових мiкобактерiй надтонко! дисперсност здiйснювали !х автоклавування за 2 атм. упродовж години, холодний ферментативний гiдролiз розчином лiзоциму та ультразвукову обробку на дезiнтеграторi УЗДН-А при 22 кГц [10].
Токсичшсть та реактогеншсть лiзатiв дослiджуваних атипових мжобактерш встановлювали за результатами внутрiшньошкiряних ш'екцш кролю у дозi 0,2 см3. Облж результатiв проводили шляхом спостереження за утворенням шфшьтраив та швидкктю !х розсмоктування упродовж десяти дiб.
Фагоцитарну активнiсть кровi лабораторних тварин дослщжували за загальновживаною методикою [11]. Задля цього формували групи кролiв, яким вводили дослiджуванi лiзати атипових мжобактерш пiдшкiрно у дозi 0,5 см3 на тварину, трьохразово, з штервалом 7 дiб .
Було поставлено два дослщи на кролях. У першому - дослiджували вплив ФУЛАМ рiзних штамiв на показники фагоцитарно! активност кровi за однаково! концентраций У другому дослiдi - вплив на макрофагальну систему кролiв одного штаму ФУЛАМ, але за рiзно! концентрацi!.
Результати дослщження. Видiленi з проб бюлопчного матерiалу штами мкобактерш (ДМ-13, ДЛ-4, РЯ, КТК) за результатами дослщження !х культурально-морфологiчних властивостей були вщнесеш за класифiкацiею Раньона до IV групи швидкорослих атипових мжобактерш.
З метою бiльш повного поглинання та розщеплення бактерiальних кл^ин ферментами макрофагально! системи макроорганiзму автоклавовану бактерiальну масу дослiджуваних штамiв атипових мжобактерш пiддавали ферментативнiй та ультразвуковш обробцi, пiсля чого у дослщах на лабораторних тваринах визначали вплив !х лiзатiв на фагоцитарну актившсть кровi лабораторних тварин.
У трьох дослщних групах тварин було встановлено тдвищення активностi полiморфноядерних лейкоцитiв (ПМЯЛ) кровi на 11-24 % вщ показникiв контрольно! групи тварин (рис.1).
159
Одepжанi peзyльтати пiдтвepджyють даш лiтepатypниx джepeл стoсoвнo iмyнoстимyлюючoï ди атипoвиx мiкoбактepiй.
□ кoнтpoль □ дoслiднi зразки
кoнтpoль ДМ-13 ДЛ-4 РЯ КТК
Ha3ea штампе aтипoвиx мiкoбaктepiй
Рис.1. Вплив Ha фaгoцитapну aктивнiсть ПМЯЛ kpoei лaбopaтopниx твapин ферментативно-ультразвукових лiзaтiв атипових мжобактерш
Вiдoмo, щo пpeдставники poдy Mycobacterium пpoдyкyють лeктинoпoдiбнi 61лки - peгyлятopи фiзioлoгiчниx пpoцeсiв, в тoмy числ1 i iмyнoгeнeзy, завись yбитиx на^ванням мiкoбактepiй тyбepкyльoзy вxoдить дo загальнoвизнанoгo кoмepцiйнoгo пpeпаpатy - ад'юванта Фpeйда. З oглядy на тe, щo мiкpoбнi кoмпoнeнти нepiдкo виявляють на макpoopганiзм peактoгeннy та тoксичнy д1ю пpoвeдeнo дoслiджeння впливу piзниx ^н^трацИ ФУЛАМ (0,75; 0,6; 0,5; 0,3; 0,2; 0,1 мг бактepiальнoï маси на1см3) за внутрпнньошюряних ш'екцш лабораторним тваринам (рис.2).
Рис.2. Рeaктoгeннa та токсична дiя ФУЛАМ на opгaнiзм кpoлiв
За peзyльтатами дoслiджeнь peактoгeннoстi та тoксичнoстi кoнцeнтpацiй 0,75; 0,6; 0,5 мг/см3 ФУЛАМ на мющ ввeдeння y кpoлiв виявлeнo пoчepвoнlння
160
та папули дiаметром до 20 мм, розсмоктування яких вщбувалося тзшше десятидобового термшу спостереження.
ФУЛАМ у концентрацп 0,3; 0,2; 0,1 мг/см3 викликали незначш почервоншня до 6 мм у дiаметрi, яю зникали на 5-6 добу.
При випробуванш фагоцитарно! активностi лейкоцита кровi лабораторних тварин (кролiв) за впливу безпечних концентрацп ферментативно-ультразвукових лiзатiв атипових мiкобактерiй виявлено достовiрне зростання (p < 0,05) показникiв фагоцитарно! системи у тварин дослщних груп.
Найбшьша рiзниця мiж показниками дослщних та контрольно! груп встановлена у тварин за введення ФУЛАМ у найменшш концентрацп (табл.1).
Таблиця 1
Показники фагоцитарно*! активного ПМЯЛ оргашзму лабораторних
тварин за впливу рiзних концентрацш ФУЛАМ (М± m, n=3)
Групи тварин Показники фагоцитарно! активносп
процент фагоцитозу фагоцитарний вдекс фагоцитарне число
Контрольна 14,6 ± 3,07 1,46 ± 0,3 10,2 ±0,8
I дослщна (ФУЛАМ 0,3мг/см3) 38,6 ± 3,89* 4,0 ± 0,3* 10,06 ± 0,77*
II дослщна (ФУЛАМ 0,2 мг/см3) 41,3 ± 3,86* 6,1 ± 0,26* 15,03 ± 1,77*
III дослщна ФУЛАМ 0,1 мг/ см3) 66,0 ± 9,2* 20,6 ± 3,25* 31,0 ± 0,77*
Примггка: *- р1зниця в1ропдна вщносно значень в1дпов1дного показника у контрольнш груш (p < 0,05)
Так, найбшьше достовiрне зростання проценту фагоцитозу понад 51% (p < 0,05), фагоцитарного шдексу на 19,4 одинищ (p < 0,05) та фагоцитарного числа - на 20,8 % (p < 0,05) спостер^алося у третш дослщнш групi тварин за впливу суспензш ФУЛАМ у концентрацп 0,1 мг/см3.
Висновки:
1.Ферментативно-ультразвуковi лiзати атипових мiкобактерiй, видiлених з бюлопчного матерiалу вiд велико! рогато! худоби, тдвищують активнiсть фагоцитарно! системи лабораторних тварин на 11 -24 % порiвняно з контролем.
2. Встановлено, що ФУЛАМ у концентращях 0,3; 0,2; 0,1 мг/см3 не спричиняють реактогенно! чи токсично! дп на макрооргашзм.
3. Найвищi показники активност ПМЯЛ кровi лабораторних тварин виявлеш за використання суспензп ФУЛАМ у концентрацп 0,1 мг/ см3.
Лоература
1. Криштофорова Б. Неонатологiя телят // Вет. Мед. Украши.- 1997.- № 2.- С.28-30.
161
2. Фукс П. Основш принципи лжування шлунково-кишкових захворювань молодняку сшьськогосподарських тварин // Вет. Мед. Укра1ни.-1997.- № 2. - С.10-13.
3. Пинегин Б.В., Андронова Т.М. Некоторые теоретические и практические вопросы клинического применения иммуномодулятора ликопида //Иммунология.- 1998.- № 4.- С.60-63.
4. Науменко В., Кладницька Л. Взаeмодiя клiтин у ходi розвитку iмунноl вiдповiдi // Вет. Мед. Укра1ни.-1997.- № 9.- С.10.
5. Ермолаева В. В., Вейсберг Г. Е. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды. - М.: Медицина,1996.- 186 с.
6. Влiзло В.В., Вщур О.1., Кичун 1.В. та шш1 Новi ефективш препарати для профiлактики i лжування захворювань у тварин/ "Ветеринарна медицина".-Мiжвiд. темат. наук. збiрник.- Вип.84.- Харкiв,2004.- С.169-173
7. Слободян В.И. Иммуномодуляция защитных факторов организма коров//Ветеринария. -2002. -№2. -С.29-34.
8. Кондрахин И.П., Мельник В.В., Лизогуб М.Л. Применение цитомединов при бронхопневмонии телят/ Ветеринария.- 2000.- №2. - С.39-40.
9. Зощенко В.,Ствак М., Школьський I. Тимоiндукiн: фiзикохiмiчнi та бюлопчш властивостi// Ветеринарна медицина Укра1ни .-1997.-№12.-С.19-34.
10. Гунчак В.М., Грималюк Б.Т., Чайковський Б.П. та шш1 Використання Ультразвукових технологш в фармаци./Науковий вкник ЛНУВМБТ iменi С.З. Гжицького. - 2008. - Том 10, №13(38) . - Частина 1. - С.60-66.
11. Дуглас С.Д., Кук П.Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике.-М.:Медицина, 1983. -С.152.
Summary
N.O. Kravchenko ,candidate ofveterinary sciences, Institute of agricultural microbiology UAAS THE INFLUENCE OF ENZYME-ULTRASONIC LISATS OF ATYPICAL MYCOBACTERIUM ON THE PHAGOCYTIC ACTIVITY OF MACROORGANISMS BLOOD
The influence of enzyme-ultrasonic lisats of atypical mycobacterium on rabbit s blood phagocytic system is shown.
It is established that enzyme-ultrasonic lisats of atypical mycobacterium in concentration of 0,1 mg/cm3 significantly (p > 0,05) stimulate blood cell phagocytic activity of laboratory animals and are not toxic.
Key words: atypical mycobacterium, enzyme-ultrasonic lisats, toxicity, phagocytic activity.
Стаття надшшла до редакцИ 9.04.2010
162
