CC BY
29
на достоверный рост относительного содержания В-лимфоцитов (Р<0,001), их абсолютное количество оказалось низким (Р<0,001 но отношению к гоеим сравниваемым группам).
Необходимо отметить также особенности гуморального ответа при "волнообразном" течении .строго вирусного гепатита В. Так, при высоком значении показателя ^М (Р<0,01 и по сравнению :: здоровыми, и с группой АНВУ), концентрация была очень низкой (Р<0.001). Кроме того, при сохранении контрольного уровня поглотительной :пособности фагоцитов наблюдалось значительное угнетение их функциональной активности по данным хемилюминесценции (Р<0,001 по отно-
шению к контролю и к группе АНВУ). Следовательно. на фоне уменьшения способности фагоцитов больных данной группы к презентации антигенов страдает формирование специфического
I фоти во в иру с но го иммун итета.
Таким образом, характер изменений иммунного статуса больных при типичном варианте течения острого вирусного гепатита В обусловливает развитие адекватного противовирусного ответа, тогда как "волнообразный" вариант объясним, по-видимому, "дефектностью" иммунной системы макроорганизма, не обеспечивающей купирование инфекционного процесса.
FEATURES OF THE IMMUNE STATUS OF PATIENTS WITH DIFFERENT VARIANTS OF COURSE OF ACUTE VIRUS HEPATITIS «B»
E.P. Tikhonova, E.V. Shtopel, G.V. Bulygin, N.I. Kamzalakova (Krasnoyarsk State Medical Academy)
The comparative analysis of immune system links condition of 62 patients with moderately grave acute virus hepatitis «B» in its different variants of course was conducted. The features of immune status of patients with typical course of acute virus hepatitis "B" cause an adequate antiviral immune response. On the other ?:de. the wave-like course of disease is caused by a defect of macroorganism's (human's) immune system, which can not stop an infection process.
Литература
1 Змызгова А.В. Интерферонотерапия вирусных гепатитов / Пособие для врачей. - М.: Медицина, 1999. - 109 с.
2 Змызгова А.В. Клиническое значение иммуноде-фицигных состояний у больных вирусным гепатитом В // Тер. архив. - 1992. - №2. - С. 18-20.
3. Ивашкин В.Т., Мамаев С.Н., Буеверов А.О. и пр. Механизмы иммунного "ускользания" при вирусных гепатитах // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2000. -№5. - С.7-13.
4 Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. - СПб: Теза,
1998,- 325 с.
5. Учайкин В.Ф., Нисевич Н.И., Чередниченко Т.В. Вирусные гепатиты у детей. -М.: Медицина, 1994. -304 с.
6. Шерлок 111, Дули Дж. Заболевания печени и желчных пугей // Пер. с англ. - М.: Ботар Медицина,
1999. - 864 с.
7. De Soli P., Lippa S., Lixxarru G. Whole blood chemiluminescence: a new technical approach to assess oxygen-dependent microbial activity of granulocytes Hi. Clin. Lab. Autom. - 1983. - Vol.3. -P.391-400.
8. Manchini G., Carbonara A.O., Heremas J.F. Immunochemical quantitation of antigens by single radical immunodiffusion // Immunochemistry. - 1965. -Vol.2. -P.235-254.
9. Simple method of circulating immune complex / V.Haskova, J.Kaslik, J.Richa et al. // Z. Immun. Forsch. - 1978. - Bd. 154. -S.399-406.
е ЗАДОРОВА Ю.В., КУРТАСОВА Л.М. -УДК 616.248-053.2
ВОЗРАСТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МЕТАБОЛИЗМА ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК У ДЕТЕЙ С АТОНИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Ю. В. Задорова, Л.М. Куртасова.
Красноярская государственная медицинская академия, ректор - акад. РАЕН, ВШ, д.м.н., проф. В.И. Прохоренков, кафедра клинической иммунологии, зав. - проф. Г.В. Булыгин)
Резюме. Биолюминесцентным методом изучены уровни активности НАД(Ф) - зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у 74 детей в возрасте от 1 года до 11 лет с атопической бронхиальной астмой в период клинической ремиссии. Установлена зависимость характера и выраженности изменений исследуемых ферментов от возраста детей и давности заболевания. Отмечено, что в период клинической ремиссии показатели активности изучаемых энзимов не восстанавливаются до параметров здоровых детей. Данное обстоятельство указывает на необходимость проведения дифференцированной метаболической иммунореабилитации у данной категории больных.
В настоящее время не вызывает сомнения факт, что основой формирования аллергического воспаления при атонической бронхиальной астме являются нарушения иммунного гомеостаза [2,3].
При этом, учитывая, что все модуляторы функциональной активности лимфоцитов, основного структурно-функционального элемента иммунной системы, прежде всего изменяют метаболизм клетки, переключая субстратные потоки с одного метаболического пути на другой, влияя на энергетические н синтетические процессы, нарушения иммунной системы не могут не иметь метаболической основы.
Так, обнаружена активация ферментов гликолиза н иентозофосфатного цикла в лимфоцитах ирн развитии реакции бласттрансформации. Доказана зависимость экспрессии на лимфоцитах крови СИ и СЦа;'1" - антигенов от внутриклеточной концентрации аденозина и аденозиндифосфорной кислоты [6,10]. Установлено, что у людей с врожденной ферментоиатией но глюкозо-6-фосфатдегндрогеназе скорость реакции бласттрансформации лимфоцитов значительно замедляется [4].
Высокую значимость в поддержании функциональной активности иммунокомиетентных клеток имеют глутатион и ферменты глутатионо-вого метаболизма. Обнаружено, что глутатион может непосредственно модулировать пролиферацию Т-лимфоцитов [12]. Метаболическую роль глутатиона и ферментов глутатионового обмена также связывают с антиоксидантными процессами. Предполагается, что синтез и восстановление глутатиона через глутатионредуктазу обеспечивает полноценные эффекторные функции естественных киллеров [8].
В связи с высокой значимостью метаболических процессов в проявлении функциональной активности иммунокомиетентных клеток, выполняющих важную роль в развитии 1§ Е-зависимого
аллергического воспаления представляется целесообразным исследование внутриклеточного обмена в лимфоцитах крови у больных атонической бронхиальной астмой.
Целью данного исследования явилось изучение метаболической активности лимфоцитов крови у детей с атонической бронхиальной астмой в различных возрастных группах.
Материалы и методы
Обследованы 74 больных в возрасте от 1 года до 11 лет со стабильным течением легкой степени тяжести атонической бронхиальной астмы. Базисная терапия проводилась только кромонами. Тяжесть оценивалась ио рекомендациям Национальной программы "Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика" (1997). У всех обследованных больных дебют заболевания наблюдался в первые 3 года жизни. Больные были распределены на три возрастные группы: младшая группа (1-3 года) - 20 чел., средняя группа (4-6 лет) - 30, старшая группа (7-11 лет) - 24. Исследования проводились в период клинической ремиссии. Контрольную группу составили 80 практически здоровых детей аналогичного возраста. В течение 2-х месяцев, предшествующих обследованию, дети не болели и не получали профилактических прививок.
Выделение общей фракции лимфоцитов из периферической крови осуществляли ио общепринятому методу в градиенте плотности фиколла -верографина. Затем осуществляли биолюминес-центное определение активности глюкозо-6-фос-фатдегндрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфат-дегндрогеназы (ГЗФДГ), лактатдегндрогеназы (ЛДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), малик-фермента (НАДФМДГ), НАД и НАДФ - зависимых глутаматдегидрогеназ (НАДГДГ и НАДФГДГ), НАД и НАДФ - зависимых изоцитратдегидроге-наз (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ), глутатионредук-тазы (ГР). Для исследования использовали фер-
Таблнца 1.
Активность НАД (Ф) - зависимых дегидрогеназ (мкЕ) в лимфоцитах крови у вольных атопической бронхиальной астмой в возрасте 1-3 года (К4±т)
Показатели Средние величины изучаемых показателей
Здоровые (л=20) Больные (л=20) Р
Г6ФДГ 2,09+0,16 10,83± 1,14 Р<0,001
ГЗФДГ 2,56±0,19 0,44+0,004 Р<0,001
ЛДГ 41,73+4,07 46,43±4,19
МДГ 20,14±1,26 34,52±3,64 Р<0,001
НАДФМДГ 5,16±0,47 0,85±0,03 Р<0,001
НАДФГДГ 1,92±0,16 1,86+0,11
НАДГДГ 6,22+0,51 9,09±0,22 Р<0,001
НАДИЦДГ 1,25±0,10 18,29±0,34
НАДФИЦДГ 10,22±1,04 16.72+1,74 Р<0,002
Обр.ЛДГ 66,2+6,41 3,60±0,27 Р<0,001
Обр.МДГ 123,04±9,47 9,34+0,87 Р<0,001
ГР 12,37±1,23 1,71+0,15 Р<0,001
Обр.НАДГДГ 174,52±14,29 4,73±0,64 Р<0,001
Обр.НАДФГДГ 151,94+11,68 35,96+3,62 Р<0,001
Примечание: Р - достоверность различий со здоровыми детьми
< Таблица 2.
Активность НАД (Ф) - зависимых дегидрогеназ (мкЕ') в лимфоцитах крови у больных атопической бронхиальной астмой в возрасте 4-6 лет (М±т)
Показатели Средние величины изучаемых показателей
Здоровые («=35) Больные («-30) Р
Г6ФДГ 2,33±0,22 13,43±1,72 Р<0,001
ГЗФДГ 2,27+0,19 0,76+0,02 Р<0,001
ЛДГ 40,93±4,94 42,76±4,87
МДГ 20,30±1.96 61,83±5,22 Р<0,001
НАДФМДГ 4.80+0,45 3,96±0,32 0,05<Р<0,1
НАДФГДГ 2,52±0,20 5,37±0,13 Р<0,001
НАДГДГ 4,09±0,41 12,76+1,59 Р<0,001
НАДИЦДГ 1.56±0.15 1,44±0,20
НАДФИЦДГ 10,17+1,17 71,64±7,06 Р<0,001
Обр.ЛДГ 78,97±7,18 73,41±6,01
Обр. МДГ 114,60+10,95 155,74±14.87 Р<0,05
ГР 11.87±1.40 12,86±1,99
Обр. НАДГДГ 188.70+17,58 74,10±6,89 Р<0,001
Обр.НАДФГДГ 174,61±17,47 92,25±8,77 Р<0,001
Примечание: Р - достоверность различий со здоровыми детьми
ментативный препарат НАДФ*Н: ФМН-оксидоре-дуктазу-люцнферазу из Р1ю1оЬас1егшт1ео§па1Ы (получен в Институте биофизики СО РАН. г. Красноярск). Измерение уровня биолюминесценции проводили на биолюминометре БЛМ 8801 (Россия). Уровни ЛДГ, МДГ. НАДГДГ и НАДФГДГ определяли в реакциях восстановления и окисления (Обр. ЛДГ. Обр. МДГ, Обр. НАДГДГ, Обр. НАДФГДГ) [5]. Активность дегидрогеназ выражали в ферментативных единицах (1Е = 1 мкмоль/ мин [1] на К)" клеток).
Материалы исследования обработаны с использованием пакета прикладных программ "81а-ивСка 6.0".
Результаты и обсуждение
Результаты проведенного сравнительного анализа показали, что наиболее близки ио среднестатистическим уровням активности НАД- и НАДФ-завнснмых дегидрогеназ оказались показатели у детей в младшей и средней возрастных группах (табл. 1,2).
Характеризуя ферментный профиль лимфоцитов у детей данных возрастных групп необходимо, прежде всего, отметить выраженное увеличение активности Г6ФДГ - ключевого фермента иентозофосфатного цикла, продукты которого используются в реакциях макромолекулярного синтеза [7,13].
Анализ активности оксидоредуктаз, участвующих в реакциях энергетического обмена выявил повышенный уровень аэробных процессов в лимфоцитах, за счет увеличения активности МДГ, НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ в значительной степени, определяющих интенсивность субстратного потока ио циклу трикарбоновых кислот [11,14]. Однако высокий уровень субстратного потока но лимонному циклу не определяет увеличение оттока интермедиаторов через Обр. НАДГДГ и Обр. НАДФГДГ на реакции аминокислотного обмена, о чем свидетельствуют низкие уровни активности
данных дегидрогеназ. В то же время у больных в младшей и средней возрастных группах обнаружено резкое снижение уровня ГЗФДГ, а у детей раннего возраста еще и понижение активности анаэробной реакции ЛДГ. Это в свою очередь приводит к снижению концентрации глнколнтн-ческнх интермедиаторов и, соответственно, ингибированию анаэробного дыхания [6,10].
Следовательно, активация аэробного дыхания и реакций иентозофосфатного цикла в лимфоцитах у больных младшей и средней возрастных групп сопровождается понижением уровня гликолиза, ингибированием через НАДФМДГ анаболизма липидов и снижением оттока субстратов на реакции аминокислотного обмена, что отражает нестабильность метаболического статуса иммуно-комиетентных клеток.
Между тем, исследуя активность НАД(Ф) -зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных атонической бронхиальной астмой, мы обнаружили, что в средней возрастной группе (табл.2) но сравнению с детьми раннего возраста (табл.1) в биоэнергетических процессах лимфоцитов повышена доля вспомогательных и шунтирующих дегидрогеназных реакций как доноров водорода в митохондриях [1]. Однако компенсация за счет вспомогательных и шунтиру ющих дегидрогеназных реакций, во-первых, не может быть длительной, а во-вторых, может привести к повышенному оттоку интермедиаторов в митохондрии и резкому снижению метаболических процессов в цитоплазматическом комиартменте [1].
Метаболический статус лимфоцитов у больных старшего возраста (табл.З) значительно отличается от состояния внутриклеточных обменных процессов у детей раннего и среднего возрастов (табл. 1,2). Прежде всего, необходимо отметить в данной возрастной группе повышение активности анаэробной ЛДГ (в 8 раз) и Обр. МДГ (в 2,5 раза).
Таблица 3.
Активность НАД (Ф) - зависимых дегидрогеназ (мкЕ') в лимфоцитах крови у больных атопической бронхиальной астмой в возрасте 7-11 лет (М±т)
Показатели Средние величины изучаемых показателей
Здоровые («=25) Больные («=24) Р
Г6ФДГ 29,82+2,18 1,88+0,19 Р<0,001
ГЗФДГ 2,69+0,18 0.02+0,001 Р<0,001
лдг 49,88+4,73 32,92+2,79
МДГ 82,09+7,40 6,75+0,34 Р<0,001
НАДФМДГ 3,86+0,37 14,76+1,91 Р<0,001
НАДФГДГ 0,75+0,02 0,01+0,001 Р<0,001
НАДГДГ 12,32+1,04 1,13+0,12 Р<0,001
НАДИЦДГ 25,53+1,74 3,89+0,22 Р<0,001
НАДФИЦДГ 68,35+5,93 36.83+3,64 Р<0,001
Обр.ЛДГ 8.97+0,35 71.73+7,30 Р<0,001
Обр.МДГ 77.86+6,95 193,49+18,37 Р<0,001
ГР 14,74+1,08 6,94+0,59 РС0.001
Обр. НАДГДГ 48,96+4,35 141,16+13,72 Р<0,001
Обр. НАДФГДГ 137,26+12.43 133,39+12,33
Примечание:? - достоверность различий со здоровыми детьми
что отражает активацию анаэробного дыхания. В то же время снижение активности МДГ и НА-ДИЦДГ (двух ферментов цикла трикарбоновых кислот) определяет снижение субстратного потока ио лимонному циклу и, соответственно, ингибирование аэробных процессов. Причем, снижение субстратного потока ио циклу Кребса сопровождается понижением активности вспомогательных НАДФ - зависимых реакций (НАДФГДГ и НАДФИЦДГ), ингибированием притока интермедиаторов с реакцией аминокислотного обмена через НАДГДГ, но повышением активности шунтирующей реакции НАДФМДГ. Снижение исследуемых оксидоредуктаз цикла трикарбоновых кислот, тем не менее сочетается с активацией Обр. НАДГДГ и. соответственно, повышением интенсивности оттока энергетических интермедиатов на реакции аминокислотного обмена [9.15].
Однако активация гликолитических реакций не сопровождается повышением активности ключевой реакции иентозофосфатного цикла Г6ФДГ. С одной стороны можно предположить, что снижение активности Г6ФДГ является компенсаторной реакцией для повышения концентрации гликолитических субстратов, так как ключевой фермент иентозофосфатного цикла является основным конкурентом гликолизу за ГЛЮКОЗО-6-фосфат [1]. Тем более, что у детей с атонической бронхиальной астмой независимо от возраста в лимфоцитах крови обнаружено снижение уровня ГЗФДГ, стимулирующей гликолиз продуктами липидного катаболизма. Однако с другой стороны. снижение активности Г6ФДГ, несомненно, приводит к понижению наработки рибозо-5-фос-фата и НАДФН и, соответственно, к ингибированию всех синтетических процессов, зависящих от продуктов иентозофосфатного цикла.
Причем, необходимо подчеркнуть, что если активность НАДФМДГ (фермента, также располагающегося в цитоплазматическом комиартменте) увеличена в 3,8 раза, то снижение уровня ГбФДГ выявляется относительно показателей у здоровых детей в 15,9 раз.
Следовательно, метаболическое состояние лимфоцитов крови у больных старшей возрастной группы характеризуется снижением интенсивности реакций пластического профиля и преобладанием анаэробных процессов над аэробными, что является энергетически менее выгодным.
Таким образом, результаты проведенных исследований убедительно показали, что у детей с атонической бронхиальной астмой сохраняются закономерности становления цитофизиологиче-ских процессов в онтогенезе. Однако, с существенными колебаниями в зависимости от давности аллергического воспаления. При этом наиболее существенные изменения в уровнях активности исследуемых оксидоредуктаз установлены у больных в старшей возрастной группе. Подобное состояние метаболических процессов в лимфоцитах у детей старшего возраста, вероятно, обусловлено длительной антигенной стимуляцией. Так, в данной возрастной группе давность заболевания в 4,8 раза превышала аналогичный показатель в младшей возрастной группе и в 2,3 - у детей среднего возраста (4,19+0,21; 0,87+0,05 Р<0,001; 4,19+0,21; 1,83+0,18 Р<0,001 соответственно).
Между тем, известно, что в условиях длительной антигенной стимуляции резко снижаются, а порой и истощаются компенсаторные возможности им-мунокомиетентных клеток.
Наряду с этим установлено, что в период клинической ремиссии активность НАД(Ф) - зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных
атонической бронхиальной астмой не восстанавливается до уровня наблюдаемого у здоровых детей. Данное обстоятельство свидетельствует о целесообразности проведения метаболической иммунореабилитации, направленной на восстановление внутриклеточного метаболизма иммуно-комиетентных клеток у данной категории больных.
В то же время, учитывая выявленную зависимость метаболических изменений в иммуноком-иетентных клетках от возраста детей и длительности аллергического воспаления в дыхательных путях, метаболическая коррекция у больных атонической бронхиальной астмой должна быть строго дифференцированной.
AGE PECULIARITIES OF METABOLISM OF IMMUNOCOMPETENT CELLS IN CHILDREN WITH ATOPIC BRONCHIAL ASTHMA
U.V. Zadorova, L.M. Kurtasova (Krasnoyrsk State Medical Academy)
The level of the HAD/P - dependent dehydrogenase activity of the blood lymphocytes was studied by bio-luminescent method in 74 children aqed from one to eleven years with the bronchial asthma. It was established the dependence of the character and tendency of changes in the explored ferments from the children's age and remoteness of the disease. It was marked, that during the period of the clinic remission the indices of activity, of learned ferments do not restore to normal parameters. This circumstance shows the necessity of the conduction of differential metabolic immunoreabilitation in this category of the patients.
Литература
1.Березов T.T., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. - М.: Медицина, 1998. - 704 с.
2. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. - М.: Фармарус Принт, 1998.-252 с.
3. Национальная ирофамма Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика. - М.: Ар-тинфо Паблншннг, 1997. - 93 с.
4. Рагимов А.А., Байрамалибейли Н.Э. Розеткообразующая способность лимфоцитов периферической крови лиц с дефицитом глюкозо-6-фосфатде-гидро-геназы // Лаб. дело. - 1985. - №7. - С.405-408.
5. Савченко А.А., Сунцова Л.Н. Высокочувствительное определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови биолюминесцент-ным методом//Лаб. дело. - 1989. -№11,- С.23-25.
6. Bakker В.М., Westerhoff H.V., Opperdoes F.R., Michels P. A. Metabolic control analysis of glycolysis in trypanosomes as an approach to improve selectivity and effectiveness of drugs // Mol. Biochem. Parasi-tol. - 2000. - Vol. 106, N."1. - P. 1-10.
7. Biagiotti E, Bosch K.S., Ninfali P et al. Posttransla-tional regulation of glucose-6-phosphate dehydrogenase activity in tongue epithelium // J. Histochem. Cytochem. - 2000. - Vol.48, N.7. - P.971-978.
8. Boya P., de la Pena A., Belogui O. et al. Antioxidant status and glutathione metabolism in peripheral blood mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C//J. Hepatol. - 1999. - Vol.31, N.5. -P.808-814.
9. Brosnan J.T. Glutamate at the interface between amino acid carbohydrate metabolism // J. Nutr. -
2000. - Vol. 130 (Suppl.4S). - P.988S-990S.
10. Burcelin R„ del Carmen Munoz M„ Guillam M.T., Thorens B. Liver hyperplasia and paradoxical regulation of glycogen metabolism and glucosesensitive gene expression in GLUT2-null hepatocytes. Further evidence for the existence of a membrane - based glucose pathway // J. Biol. Chem.- 2000. - Vol.275, N.15. -P. 10930-10936.
11. Guidi G.M., Goldbeter A. Oscillations and distability predicted by a model for a cyclical bienzymatic system involving the regulated isocitrate dehydrogenase reaction // Biophys. Chem. - 2000. - Vol.83, N.2. - P. 153170.
12. Roth S., Droge W. Glutathione reverses the inhibition of T cell responses by superoptimal numbers of "Nonprofessional" antigen presenting cells // Cell. Immunol. - 1994. - VoL155, N.I. -PTl83-194.
13. Tuttle S., Stamato T„ Perez M.L., Biaglow J. Glu-cose-6-phosphate dehydrogenase and the oxidative pentose phosphate cycle protect cells against apoptosis induced by low doses of ionizing radiation // Radiat. Res. - 2000. - Vol. 153, N.6. - P/781-787.
14. Weiss C., Zeng Y„ Huang J. et al. Bovine NAD+ -dependent isocitrate dehydrogenase: alternative spicing and tissue-dependent expression of subunit 1 // Biochemistry. -2000. - Vol.39, N.7. - P. 1807-1816.
15. Zatta P., Lain E„ Cagnolini C. Effects of aluminum on activity of Krebs cycle enzymes and glutamate dehydrogenase in rat brain homogenate // Eur. J. Bio-chem.1”- 2000. - Vol.267, N.10.“- P.3049-3055.
