CC BY
70
hepatocytes compared to control, however, when compared with the groups of animals administered histamine, the number of hepatocytes with hydropathic dystrophy is lower.
Functional activity of cells under the influence of SH at a concentration of 20 mg/l and histamine in a dose of 8 |ig/kg increases, as evidenced by the increase in the number of multi-nucleus nuclei. Against the background of the growth of vacuolation of the cytoplasm, there is a decrease in the area and perimeter of the profile of hepatocytes and nuclei. The vacuoles formed in the cytoplasm are smaller in size on the 14th day of the effect of the investigated factors. By the 21st day the coefficient of the form of the profile of hepatocytes increases slightly (by 5%). Significant negative influence on qualitative and quantitative parameters of hepatocytes simultaneously effect SH (20 mg/l) and histamine at a dose of 1 |ig/kg at all stages of the study. We associate a significant negative effect of SC in a concentration of 20 mg/l and histamine in a dose of 1 |ig/kg, with the formation of a large number of harmful compounds in the liver of rats (for example, carbonyl compounds, chloramines). It is known that chloramines can cause denaturation of proteins. Possibly, histamine at a lower concentration stimulates the endogenous release of histamine by mast cells and basophils with which SH reacts. From the literature it is known that in low concentrations of histamine causes the release of the active forms of oxygen by neutrophils in the bloodstream, while its high concentrations inhibit this process. Probably histamine at a dose of 1 |ig/kg leads to an increase in the formation of active forms of oxygen. It is also known that SH reacts with biogenic amines, forming carbonyl compounds. Such compounds are formed during the enzymatic destruction of histamine by aminoxidases in the organism. The combination of these factors, probably, also causes such a negative effect on the structural features of hepatocytes with the combined action of SH (20 mg/l) and histamine in a dose of 1 mg/kg.
Keywords: liver, histamine, sodium hypochlorite, morphometry.
Рецензент - проф. Блаш С. М.
Стаття надшшла 08.11.2017 року
DOI 10.29254/2077-4214-2017-4-3-141-304-311 УДК 612.172 : 611.127-018 Загоруйко Г. Е., Загоруйко Ю. В.
ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ РАЗМЕРОВ И ЧИСЛА КАРДИОМИОЦИТОВ, ИХ ЯДЕР В ПРОЦЕССЕ ПРЕНАТАЛЬНОГО И РАННЕГО ПОСТНАТАЛЬНОГО
РАЗВИТИЯ СЕРДЦА КРЫС
Харьковский национальный медицинский университет (г. Харьков)
prof.zagoruykoGE@gmail.com
Исследование проведено в соответствии с тематикой НИР «Структурные перестройки компонентов сердечно-сосудистой системы в условиях нормального и аномального гистогенеза у человека и экспериментальных животных», № государственной регистрации 011111006621.
Вступление. Большинство экспериментов по возрастной морфологии, биохимии и физиологии проводится на лабораторных животных, в том числе на крысах Wistar стадного разведения. Продолжительность жизни этих животных не превышает 2,5-3 года [8]. Белых крыс используют при исследовании механизмов онтогенеза и поиска экспериментальных путей продления жизни [11,16,20,21]. На протяжении десятилетий, исследования по возрастной биохимии, физиологии и морфологии проводили на крысах в возрасте: 1, 3, 12 и 24 месяцев [16]. Иногда - на крысах в возрасте 4, 24 и 33 месяцев [17]. Однако, результаты работ выполненных на крысах в возрасте 1, 3, 12 и 24 месяцев, или 4, 24 и 33 месяцев, естественно не отражают всей полноты гармонии природного процесса постнатального онтогенеза сердца этих животных от рождения до глубокой старости и смерти. Необходимо увеличить число возрастных групп лабораторных животных и «заполнить» экспериментальными данными не иссле-
дованные временные интервалы последовательных стадий онтогенеза сердца млекопитающих, на примере белых крыс Wistar. Одним из развивающихся научных направлений общебиологической проблемы кардиомиогенеза, является исследование закономерностей возрастных изменений структурных компонентов паренхимы и стромы миокарда в процессе онтогенеза человека [1,3], некоторых позвоночных животных [14,18,19], белых крыс [2,6,7,10]. Известно [9,10,17,19], что паренхима миокарда желудочков сердца половозрелых млекопитающих и человека состоит из множества взаимосвязанных различными видами межклеточных контактов пост-митотических кардиомиоцитов (КМЦ), функционирование которых «сокращение ^ расслабление» начинается еще на ранних этапах эмбрионального развития сердца и заканчивается в момент смерти макроорганизма. На поздних стадиях постнаталь-ного онтогенеза млекопитающих, в сердечнососудистой системе развиваются характерные для процесса старения морфофункциональные изменения, которые коррелируют с биологическим возрастом и темпом старения организма [20,21]. Однако имеющаяся информация о динамике изменений структурно-функциональной организации миокарда желудочков сердца в процессе постнатального
онтогенеза крыс Wistar ограничена и относится к конкретным возрастным группам животных (например: 1, 3, 12 и 24 мес.). В этой связи перспективным и актуальным направлением возрастной кардиологии и геронтологии является исследование кинетики пре- и постнатального развития миокарда крыс Wistar. Генетическая информация о закономерностях пролиферации, дифференциации и функционирования КМЦ от начала эмбрионального кардиомиогенеза до формирования миокарда половозрелых млекопитающих, локализована в ядрах этих клеток. В процессе онтогенеза происходит реализация этой уникальной программы жизнедеятельности каждого КМЦ в составе миокарда желудочков. Возрастные изменения количества, размеров и метаболизма КМЦ непосредственно коррелируют с функциональным состоянием их ядер, размерами и числом ядер, содержанием в ядрах ДНК, белков, кариоплазмы.
Цель работы - исследовать закономерности роста КМЦ, увеличения числа и размеров их ядер в процессе пренатального и раннего постнатального развития сердца крыс линии Wistar.
Объект и методы исследования. В работе использованы крысы линии Wistar из вивария ХГУ им. В.Н. Каразина (г. Харьков). Возраст животных: 15-16 суток и 20-21 сутки эмбриогенеза, новорожденные, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45-ти суточные крысята. При определении возраста зародышей крыс нулевым днем беременности считали первые сутки после спаривания животных. Выбор данного интервала онтогенеза обусловлен тем, что в этот период в миокарде крыс происходят процессы дифференциации, пролиферации, созревания КМЦ [7,19]. В каждой возрастной группе было по 5 особей, в основном из одного помета. При работе с крысами руководствовались Европейской Конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург 18.03.86). Из кусочков стенки ЛЖ сердца крыс разного возраста, готовили полутонкие и ультратонкие срезы. В серии полутонких срезов миокарда ЛЖ определяли относительный объем паренхимы (^п) и среднее число сечений ядер КМЦ (Ы0я) на площади среза паренхимы миокарда (Эо0п = 104 мкм2). Для определения У^п (в %) использовали микроскоп, точечную тест-систему (1Чо = 225), которая была вмонтирована в окуляр (8х) и объектив (100х). Ультратонкие срезы миокарда ЛЖ исследовали и фотографировали при увеличении электронного микроскопа 2000х. Для каждой возрастной группы животных фотографировали 45-50 изображений миокарда ЛЖ на фотопленку размером (6 х 9) см. Для определения относительного объема ядер КМЦ (^я в %), был использован прозрачный тест-шаблон размером (6 х 9) см, который содержал систему точек (Ыо = 600). Шаблон совмещали с каждым анализируемым негативом. Морфометрический анализ серии негативных изображений миокарда крыс проводили с помощью оптико-механической установки «УМА -1» при объективе (1х) и окуляре (8х) [5]. Общее увеличение изображений структур миокарда составило 16000х. Строили графики результатов
морфометрии и определяли стабилизированные значения морфометрических показателей КМЦ и их ядер. Результаты измерений числа сечений ядер КМЦ (Ы0я) и площадей сечений ядер (Б0я) в срезах паренхимы миокарда, подставляли в разработанную систему математических уравнений. Решение полученных уравнений позволило определять: средний объем 1- и 2-ядерных КМЦ (Укмц, мкм3); объемы ядер КМЦ (Уя мкм3); количество (в %) 1- и 2-ядерных КМЦ в миокарде ЛЖ. Для определения ядерно-цитоплазменного отношения (Я : Ц), ^я ядер КМЦ (в %), среднего числа ядер КМЦ (1Чая) в объеме паренхимы миокарда (Уоп = 106 мкм3), использовали формулы [1,9,17,21,24]. Погрешность результатов морфометрических показателей определяли с помощью методов вариационной статистики [12].
Результаты исследований и их обсуждение.
Довольно подробная информация о возрастной динамике ультраструктуры КМЦ миокарда ЛЖ в процессе эмбрио - и раннего постэмбриогенеза крыс, представлена в работах [2,6,10,11,15,19]. Нами установлено, что в сердце 15-ти суточных эмбрионов, паренхима губчатого и компактного миокарда состоит из многочисленных светлых (с) и оптически темных (т) умеренно обезвоженных КМЦ. Эмбриональные КМЦ содержат одно ядро. Количество т-КМЦ составило 17,5%. В саркоплазме этих кар-диомиоцитов выявляются мелкие митохондрии (Мх) содержащие единичные кристы, умеренно сокращенные пучки миофибрилл (Мф) и многочисленные гранулы гликогена. Ядра т-КМЦ сложной формы, содержат крупные глыбки гетерохроматина, кариоплазма умеренно дегидратирована. Средний объем ядер т-КМЦ равен (90 ± 5,0) мкм3. Ядерная оболочка образует многочисленные складки и глубокие инвагинации. Умеренно выраженная дегидратация саркоплазмы и кариоплазмы, значительная конденсация и уплотнение гетерохроматина, свидетельствуют о том, что т-КМЦ не функционируют и находятся в состоянии физиологического покоя. В интервале (15 - 21) сутки эмбриогенеза, в миокарде происходит увеличение содержания т-КМЦ до 29,5 %. С-КМЦ умеренно набухшие и менее «насыщены» органеллами и гранулами гликогена, содержат одно крупное ядро объемом (151 ± 7,0) мкм3. Множество мелкодисперсных глыбок эухроматина равномерно заполняют кариоплазму. В периоде G1 интерфазы клеточного цикла, с-КМЦ способны к периодическим ритмичным сокращениям [19]. Это проявляется в набухании саркоплазмы, Мх, появлении локальных фокусов контрактуры и релаксации Мф, уменьшении содержания гранул гликогена. В отличие от КМЦ взрослых крыс, в с-КМЦ эмбрионов значительно развит синтетический аппарат. В саркоплазме содержатся многочисленные элементы цитоплазматической сети, комплекса Гольджи, рибосомы. В КМЦ эмбрионального миокарда происходит активный синтез Мф и Мх белков [10,11,15,19]. К концу эмбриогенеза (21-е сутки), количество с-КМЦ составляет 70,5 %. В эмбриональном миокарде ЛЖ присутствует небольшое число с-КМЦ, с объемом ядра (181 ± 10,0) мкм3. Эти КМЦ находятся в S пе-
риоде интерфазы клеточного цикла. В саркоплазме таких КМЦ происходят активные процессы синтеза ядерных белков и ДНК (2с ^ 4с). В процессе митоза, КМЦ с объемом ядра 181 мкм3, делятся на два т-КМЦ с объемом ядра (90 ± 5,0) мкм3. В течение определенного времени т-КМЦ находятся в состоянии физиологического покоя, накапливаются и составляют резерв миоцитов паренхимы миокарда ЛЖ. Эмбриональные КМЦ, которые содержат ядро объемом 90 мкм3 или 181 мкм3, не участвуют в процессах ритмичного сокращения сердечной мышцы.
В течение первых суток после рождения крысят общее число КМЦ в паренхиме миокарда ЛЖ стабилизируется и остается неизменным [12]. У новорожденных крысят количество т-КМЦ « 41%. Объем ядра в т-КМЦ равен (90 ± 5,0) мкм3. Кроме т
- и с - КМЦ, в миокарде новорожденных выявляются переходные формы миоцитов (т ^ с), в которых происходит набухание саркоплазмы, Мх и кариоплазмы. В течение 5 суток после рождения крысят, в миокарде ЛЖ значительно уменьшается количество т-КМЦ. Эти миоциты переходят от состояния физиологического покоя к активным ритмичным сокращениям. Активация «резервных» т-КМЦ обусловлена увеличением функциональной нагрузки на миокард ЛЖ новорожденных в результате роста периферического сопротивления движению крови по сосудам большого круга кровообращения [19]. У 5-ти суточных крысят т-КМЦ в миокарде ЛЖ выявляются крайне редко. В отличие от эмбрионов и новорожденных, в миокарде 5-ти суточных крысят определяются 2-ядерные КМЦ, количество которых составляет 59 %. Особенностью морфологии бинуклеарных КМЦ является наличие ядер разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3). 1-ядерные с-КМЦ содержат умеренно набухшие Мх, неравномерно сокращенные Мф и ядро объемом (151 ± 7,0) мкм3. Вероятно, 1-ядерные с-КМЦ образовались в результате активации сократительной функции покоящихся т-КМЦ новорожденных. Увеличение объема ядра от 90 мкм3 до 151 мкм3, происходит в результате разрыхления гетерохроматина, увеличения содержания эухроматина и набухания кариоплазмы. К 10 суткам после рождения крысят, в паренхиме миокарда возрастет количество бинуклеарных КМЦ до 87,4 %. Большинство 2-ядерных КМЦ содержат ядра разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3). В миокарде выявляется « 12 % 1-ядерных КМЦ с объемом ядра (151 ± 7,0) мкм3 и « 1 % 1-ядерных КМЦ, с объемом ядра (181 ± 10,0) мкм3. В миокарде 15-ти суточных крысят количество 2-ядерных КМЦ увеличивается до 100 %. Согласно данным [18], в миокарде ЛЖ молодых крыс количество бинуклеарных КМЦ составляет 90 - 95 %. Из 100 % бинуклеарных КМЦ ЛЖ, 87,4 % содержат два ядра одинакового объема (126 мкм3 и 126 мкм3) и 12 %
- два ядра разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3). Вероятно, 2-ядерные КМЦ содержащие два ядра разного объема, образовались из 12 % 1-ядерных КМЦ с объемом ядра (151 ± 7,0) мкм3. Эти 1-ядерных КМЦ через определенный промежуток времени вступают в Б период интерфазы клеточного цикла. В КМЦ происходит синтез ядерных белков и ДНК
(2с ^ 4с), увеличивается объем ядра от 151 мкм3 до 181 мкм3. В результате последующего эндомито-за, из 1-ядерных КМЦ образуются 2-ядерные КМЦ с одинаковым объемом ядер (90 и 90) мкм3. За короткий промежуток времени в этих КМЦ происходит увеличение объема одного ядра в 1,4 раза от 90 мкм3 до 126 мкм3. После завершения эндомитоза, 2-ядерные КМЦ содержат ядра разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3). У 20-суточных крысят в 2-ядерных КМЦ увеличивается суммарный объем ядер. 87,4 % бинуклеарных КМЦ содержат ядра разного объема (151 мкм3 и 126 мкм3) и 12 % КМЦ содержат два ядра одинакового объема (126 и 126) мкм3. Увеличение в 2-ядерных КМЦ объема одного ядра в (1,2 - 1,4) раза, способствует повышению метаболических активности, росту размеров КМЦ и увеличению сократительной способности сердечной мышечной ткани. В процессе дальнейшего развития крысят, в 2-ядерных КМЦ миокарда ЛЖ продолжается процесс увеличения суммарного объема ядер. На 30-е сутки в паренхиме миокарда выявляется две популяции 2-ядерных КМЦ. 50 % КМЦ содержат два ядра одинакового объема (151 мкм3 и 151 мкм3) и 50 % КМЦ содержат ядра разного объема (151 мкм3 и 126 мкм3). К 35 суткам 75 % 2-ядерных КМЦ содержат ядра одинакового объема (151 мкм3 и 151 мкм3) и 25 % КМЦ - ядра разного объема (151 и 126) мкм3. В течение последующих 40-45 суток, суммарный объем ядер в бинуклеарных КМЦ постепенно увеличивается и к моменту завершения постнатального созревания КМЦ (45 суток) стабилизируется и составляет (151 мкм3 х 2 = 302 мкм3). Следовательно, в паренхиме миокарда ЛЖ эмбрионов и крысят определяются четыре вида КМЦ, которые содержат
Т т
- 1
150 I |
мкг 3 I -
100- 1
1 _ 1 j
|
|
10 20 0 10 20 30 40
Рис. 1. Кинетика изменения среднего объема ядер КМЦ ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс. По оси абсцисс - сроки развития (сутки); по оси ординат - средний объем ядер КМЦ, мкм3. Вертикальная штриховая линия - время рождения крысят.
ядра разного объема: 90 мкм3, 126 мкм3, 151 мкм3 и 181 мкм3. Ядра минимального объема 90 мкм3 (2с) содержатся в т-КМЦ, которые находятся в состоянии функционального покоя. В этих ядрах тотально конденсированный плотно упакованный гетерохро-матин принадлежит хромосомам, не вовлеченным в процессы транскрипции (метаболической активности). Ядра максимального объема 181 мкм3 (4с) выявляются в эмбриональных с-КМЦ, которые находятся в Б периоде интерфазы клеточного цикла. Такие КМЦ не способны к сократительной функции,
находятся в состоянии релаксации и подготавливаются к митотическому делению. Постмитотические активно функционирующие с-КМЦ содержат ядра объемом 126 мкм3 (2с) и 151 мкм3 (2с). Укрупнение ядер в 1,4 раза (90 мкм3^126 мкм3) и 1,2 раза (126 мкм3^151 мкм3) происходит в результате функционального набухания ядер, разрыхления глыбок гетерохроматина, деспирализации определенных участков хромосом. Эти изменения структурно-функциональной организации ядер, способствуют активации метаболической и сократительной функции КМЦ. В хроматине ядра интерфазной клетки соотношение «ДНК : белок» составляет, примерно (1:1) [23]. Можно предположить, что ядро КМЦ объемом: 90 мкм3 (2с) содержит 45 мкм3 ДНК и 45 мкм3 белка; 181 мкм3 (4с) содержит ® 90 мкм3 ДНК и 90 мкм3 белка; 126 мкм3 (2с) содержит 63 мкм3 ДНК и 63 мкм3 белка и ядро объемом 151 мкм3 (2с) содержит ® 75 мкм3 ДНК и 75 мкм3 белка. Рост объемов ядер КМЦ происходит либо в результате увеличения содержания в них количества ядерных белков и ДНК (2с ^ 4с), либо в результате функционального набухания ядер (2с), которое сопровождается деспира-лизацией гетерохроматина и умеренно выраженной гидратацией кариоплазмы. Результаты проведен-
I
ь N0 0 70 \ 1
я - \
60 \
50 ш 4 4
4U 1 4N x \
1
30 1
zu 1 iL 1 1 2
1U n 1
i'o 20 0 lo J0 30 40
Рис. 2. Кинетика убыли ^я КМЦ в пренатальном (1) и постнатальном (2) онтогенезе крыс. Ось абсцисс - сутки развития; ось ординат - значения ^я КМЦ, в %. Вертикальная штриховая линия - время рождения крысят.
ного исследования свидетельствуют о довольно сложных вариантах сочетания ядер разного объема в 1-ядерных и 2-ядерных КМЦ в процессе пре- и постнатального кардиомиогенеза.
Стереометрический показатель Уя (мкм3) КМЦ, характеризует средний объем ядерного компонента в паренхиме миокарда. Цифровые значения Уя зависят от трех переменных величин: числа ядер, объема ядер и сочетания ядер разного размера в составе КМЦ. График кинетики изменения среднего объема ядер КМЦ в миокарде ЛЖ сердца эмбрионов и крыс,приведен на рис. 1.
В интервале (15 - 21) сутки эмбриогенеза животных, в паренхиме миокарда наблюдается монотонное уменьшение цифровых значений Уя от (140,3 ± 5) мкм3 до (133,0 ± 5) мкм3. Убыль значений Уя происходит в результате активной пролиферации КМЦ и накопления в паренхиме миокарда т-КМЦ содержащих ядра минимального объема, равного 90,0мкм3. Постнатальный кардиомиогенез характеризуется существенным уменьшением значений
Рис. 3. Кинетика убыли числа сечений ядер КМЦ
в срезах паренхимы миокарда ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) развития крыс. По оси абсцисс - сроки развития (сутки); по оси ординат - число сечений ядер ЫШя КМЦ на площади среза паренхимы миокарда ^оп = 104мкм2). Вертикальная штриховая линия - время рождения крысят.
Уя. В интервале 1 - 10 суток, цифровые значения Уя убывают от (126,0 ± 5) мкм3 до минимального, равного (108 ± 5) мкм3. Уменьшение Уя объясняется наличием в большинстве 2-ядерных КМЦ одного ядра минимального объема - 90,0 мкм3. При t > 10 суток, цифровые значения Уя возрастают до (138,5 ± 5,0) мкм3 к 25 суткам. В интервале 25 - 45 суток, участок графика Уя = монотонно возрастает и асимптотически приближается к горизонтальной штриховой линии, с ординатой равной 151 мкм3. Рост значений Уя в этот период, происходит в результате одновременного увеличения объема обеих ядер в КМЦ. Увеличение значений Уя прекращается при достижении каждым ядром объема 151 мкм3. Следовательно, в процессе постнатального созревания КМЦ (1- 45) суток, суммарный объем ядер в бинуклеарных КМЦ возрастает от 216 мкм3 (5-е сутки) до 302 мкм3 (45-е сутки).
Морфометрический показатель КМЦ, используют для оценки изменений объемов 1 - и 2-ядерных КМЦ. За 100% принят объем КМЦ. Чем меньше значение Ууя, тем больший объем КМЦ и, наоборот. Показатель применяют для определения в исследуемых клетках разных тканей ядер-но-цитоплазменного отношения (Я : Ц) [1,4,10,24]. График кинетики убыли значений КМЦ приведен на рис. 2.
В процессе эмбрионального и постнатального развития миокарда ЛЖ, значения непрерывно убывают от 16,0 % в 1-ядерных КМЦ 15-ти суточных эмбрионов до 10,2 % в 1-ядерных КМЦ новорожденных. В миокарде 5-ти суточных крысят = 9,0 %. Это значение расположено выше эмпирического графика, объясняется активной пролиферацией ядер и образованием 2-ядерных КМЦ. В миокарде 45-ти суточных крысят, значения в 2-ядерных КМЦ уменьшаются до 2,15 %. Проведенные вычисления показывают, что в 1-ядерных КМЦ 15-ти суточных эмбрионов (Я : Ц) равно (1 : 5,2), новорожденных - (1 : 8,8), в бинуклеарных КМЦ 5-ти суточных крысят - (1 : 10), 15-ти суточных крысят - (1 : 17) и в 45-ти суточных крыс - (1 : 45,5).
График кинетики убыли Ы0я КМЦ на площади
104 мкм2
пред-
среза паренхимы миокарда Боп ставлен на рис. 3.
В ходе кардиомиогенеза значения Ы0я убывают от 76 (15-ти суточные эмбрионы) до 9,7 в срезах паренхимы миокарда 45 суточных крысят. Уменьшение значений Ы0я происходит в результате непрерывного роста объема КМЦ (физиологическая гипертрофия миоцитов). В интервале (15суток эмбриогенеза - новорожденные) значения Ы0я убыва-
15
-J —
1
v 1 О 1
0 1
1
1 Г
_ 1
1 в -1
2 ] - 1 | 1
- &
1 О 2 О 30 40
Рис. 4. Кинетика роста среднего объема 1-ядерных КМЦ (графики а и б) и 2-ядерных КМЦ (график в) в миокарде ЛЖ в процессе пренатального (1) и постнатального (2) онтогенеза крыс. По оси абсцисс — сроки развития (сутки); по оси ординат — средний объем 1- и 2-ядерных КМЦ, мкм3. Вертикальная штриховая линия — время рождения крысят.
ют от 76 до 54. Штриховая линия соединяет цифровые значения Ы0я новорожденных (Ы0я =56) и 15-ти суточных крысят (Ы0я =30). Именно вдоль этой теоретической штриховой линии, в интервале времени 1е(1 - 15 суток), происходило бы уменьшение значений ЫШя в срезах паренхимы миокарда, состоящей исключительно из 1-ядерных постмитотических КМЦ. Однако реальный график кинетики Ы0я = ф), в интервале времени (1-15 суток), расположен значительно выше теоретической штриховой линии. В течение 5 суток после рождения крысят, цифровые значения Ы0я резко возрастают от 54 до 63. По данным [1,22,24], число ядер (Ыая) в единице объема паренхимы миокарда, пропорционально числу сечений ядер (ЫШя) на единице площади среза паренхимы. Следовательно, площадь графика, ограниченная штриховой и экспериментальной кривой линией, пропорциональна тому дополнительному количеству ядер, которое образовалось в результате их эндомитоза в постмитотических КМЦ. При 1 > 15 суток, экспериментальный график Ы0я = ф) сливается со штриховой линией и плавно убывает. Приведенные экспериментальные данные и теоретические рассуждения, позволяют предположить, что после 15 суток, в КМЦ миокарда ЛЖ не происходят процессы синтеза ядерной ДНК и эндомитоз ядер. Эти рассуждения подтверждаются данными [21] согласно которым, после 11 суток в КМЦ крысят прекращается синтез ДНК. Следовательно, абсолютное число ядер в паренхиме миокарда возрастает в течение первых 15 суток постнатальной жизни крысят и стабилизируется, когда все КМЦ стано-
вятся 2-ядерными. В процессе постнатального онтогенеза в паренхиме миокарда ЛЖ определяются два последовательных периода развития ядерного компонента КМЦ. Период пролиферации ядер КМЦ, который происходит в интервале времени 1е(1-15) суток и период активного роста суммарного объема ядер КМЦ, который начинается с 15 суток и заканчивается к 45 суткам. Рост объемов ядер в бинукле-арных КМЦ стабилизируется при достижении значения (151 мкм3 + 151 мкм3). Координата времени (1 =15 суток), является естественной границей между периодами пролиферации ядер КМЦ и прогрессивным ростом объема ядерного компонента в паренхиме миокарда ЛЖ.
График кинетики роста средних размеров 1- и 2-ядерных КМЦ в миокарде ЛЖ сердца эмбрионов и крысят представлен на рис. 4.
В процессе позднего эмбриогенеза (15 -21) сутки, средний объем 1-ядерных т-КМЦ ^я = 90 мкм3) медленно увеличивается от (560 ± 50) мкм3 до (750 ± 50) мкм3 (график а). За этот период объем
1-ядерных с-КМЦ (Уя =151 мкм3) возрастает от (940 ± 50) мкм3 до (1260± 50) мкм3 (график б). Прирост объемов т - и с-КМЦ составляет « 33 %. После рождения крысят наблюдается существенное увеличение скорости роста размеров КМЦ. В интервале (1 - 10) суток, объем 1-ядерных КМЦ увеличивается от (880 ± 50) мкм3 до (2160 ± 100) мкм3 (график а). Средний объем 2-ядерных КМЦ (образовались из 1-ядерных КМЦ с объемом ядра 151 мкм3) возрастает от (2500 ± 100) мкм3 на 5-е сутки до (3090 ± 100) мкм3 к 10-м суткам (график в). Прирост объемов 1- и 2-ядерных КМЦ составил более 100 %. Размеры КМЦ существенно увеличиваются после завершения их полиплоидизации к 15-ти суткам. В интервале (15 - 25) суток графики роста объемов
2-ядерных КМЦ сходятся в точке с координатами (25 суток, 6900 мкм3). После 25 суток развития крысят, в паренхиме миокарда ЛЖ происходит синхронизация роста объемов бинуклеарных КМЦ. На графике точка перегиба «А» имеет временную координату, равную 30 суток. С этого времени происходит уменьшение скорости роста объемов 2-ядер-ных КМЦ в миокарде ЛЖ. К 45 суткам жизни крыс средний объем бинуклеарных КМЦ постепенно увеличивается до (14050 ± 200) мкм3. Следовательно, от момента рождения крысят до окончания фазы постнатального созревания КМЦ (45 суток), средний объем КМЦ в миокарде увеличивается в 14 раз.
Выводы
1. В процессе пренатального и постнатального развития сердца крыс, в паренхиме миокарда определяются четыре группы КМЦ, которые находятся в различном морфофункциональном состоянии и содержат ядра разного объема. Темные (т) - умеренно обезвоженные КМЦ, содержат одно ядро минимального объема - 90 мкм3. Это резервные т-КМЦ, которые в эмбриональном миокарде в течение определенного времени, находятся в состоянии физиологического покоя. Светлые - с-КМЦ, содержат ядро максимального объема (181 мкм3) и находятся в Б периоде интерфазы клеточного цикла. С-КМЦ делятся митозом и способствуют
увеличению количества миоцитов в эмбриональном миокарде ЛЖ. Большая часть популяции с-КМЦ содержит ядро объемом 151 мкм3. Эти КМЦ участвуют в процессах ритмичного сокращения эмбриональной сердечной мышечной ткани. В процессе эмбрионального кардиомиогенеза количество т-КМЦ в миокарде ЛЖ увеличивается от 17,5 % до 41 % (новорожденные).
2. После рождения крысят, происходит активация сократительной функции ранее находившихся в состоянии физиологического покоя «резервных» т-КМЦ и увеличение содержания 2-ядерных КМЦ от 58 % (5-е сутки) до 87,4 % (10-е сутки). Особенностью морфологии бинуклеарных КМЦ, является наличие ядер разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3).
3. В миокарде ЛЖ 15-ти суточных крысят практически все КМЦ являются бинуклеарными. 87 % 2-ядерных КМЦ содержат ядра равного объема (126 мкм3 и 126 мкм3) и 12 % содержат ядра разного объема (126 мкм3 и 90 мкм3) В миокарде 30-ти суточных крысят 50 % бинуклеарных КМЦ содержат ядра объемом (151 мкм3 и 151 мкм3). К 35 суткам 75 % бинуклеарных КМЦ содержат ядра объемом (151 мкм3 и 151 мкм3). К 45 суткам все 2-ядерные КМЦ содержат ядра объемом (151 мкм3 и 151 мкм3).
4. В процессе онтогенеза в 1-ядерных КМЦ определяются ядра разного объема, в 2-ядерных КМЦ -сложные варианты сочетания ядер разного объема. Укрупнение ядер в 1,4 раза (90 мкм3 —^126 мкм3) и 1,2 раза (126 мкм3 —151 мкм3), происходит в результате функционального набухания ядер, разрыхления хроматина, деспирализации определенных участков хромосом. Изменения структурно-функциональной организации ядер, способствуют активации метаболической и сократительной функции КМЦ. Увеличение ядер в 1,2 раза (151 мкм3 —181 мкм3) происходит в Б периоде интерфазы клеточного цикла в результате синтеза ядерных белков и ДНК (2с — 4с).
5. На протяжении 45 суток средний объем КМЦ ЛЖ увеличивается в 14 раз, от (880 ± 50) мкм3 до (14050 ± 200) мкм3. В результате возрастной физиологической гипертрофии миокарда, отношение (Я : Ц) в КМЦ убывает от (1 : 8,8) у новорожденных до (1 : 45,5) у 45-ти суточных крыс.
Перспективы дальнейших исследований. Дальнейшие исследования будут посвящены поиску корреляции между возрастной физиологической гипертрофией кардиомиоцитов и размерами их ядер в постнатальном онтогенезе лабораторных животных.
Литература
1. Avtandilov G.G. Osnovy kolichestvennoy patologicheskoy anatomii / G.G. Avtandilov. - M.: Meditsina, 2002. - 240 s.
2. Gorbunov A.A. Kolichestvennaya ontogeneticheskaya dinamika soyedinitel'notkannykh kletok v zheludochkovom miokarde krys / A.A. Gorbunov, I.V. Tverdokhleb // MorfologHya. - 2008. - T. 2, № 1. - S. 45-50.
3. Gorlova N.H. Kharakteristika gHstogenetichnikh protsesHv u sertsH lyudini na rannHkh yetapakh kardHogenezu / N.H. Gorlova // MorfologHya. - 2007. - T. 1, № 1. - S. 59-62.
4. Gnatyuk M.S. VHkovH osoblivostH zmHn yaderno-tsitoplazmatichnikh vHdnoshen' v kardHomHotsitakh chastin sertsya doslHdnikh tvarin / M.S. Gnatyuk, L.V. Tatarchuk, A.M. Prishlyak [ta Hn.] // Tavricheskiy mediko-biologichnyy vestnik. - 2010. - T. 13, № 4. -S. 29-32.
5. Zagoruyko G.Ye. Mekhanicheskoye ustroystvo dlya morfometricheskogo i oriyentatsionnogo analiza biologicheskikh struktur / G.Ye. Zagoruyko, V.N. Ofitserov // Byull. eksperim. biol. i med. - 1979. - № 11. - S. 625-626.
6. Zagoruyko G.Ye. Ranneye postnatal'noye razvitiye stromy miokarda krys / G.Ye. Zagoruyko // Arkhiv anatomii, gistologii i embri-ologii. - 1989. - T. 97, № 11. - S. 5-8.
7. Zagoruyko G.Ye. Morfometricheskiy analiz prenatal'nogo i postnatal'nogo sozrevaniya kardiomiotsitov krys / G.Ye. Zagoruyko, Yu.V. Zagoruyko // VHsnik probl. bHol. h med. - 2017. - Vip. 2 (136). - S. 290-293.
8. Zapadnyuk I.P. Laboratornyye zhivotnyye. Razvedeniye, soderzhaniye, ispol'zovaniye v eksperimente / I.P. Zapadnyuk, V.I. Zapad-nyuk, Ye.A. Zakhariya. - K.: Vishcha shkola, 1974. - 304 s.
9. Kir'yakulov G.S. Morfometriya serdtsa v norme / G.S. Kir'yakulov, N.I. Yabluchanskiy, V.Ye. Shlyakhover, T.V. Ryabtseva. - K.: Vishcha shkola, 1990. - 152 s.
10. Kozlov V.A. Morfologiya razvivayushchegosya serdtsa. Struktura, ul'trastruktura, metabolizm / V.A. Kozlov, I.V. Tverdokhleb, I.S. Shpon'ka, V.D. Mishalov. - Dnepropetrovsk, 1995. - 220 s.
11. Kozlov S.V. Izmeneniya mitokhondrioma sokratitel'nykh kardiomiotsitov krys na etapakh postnatal'nogo ontogeneza / S.V. Kozlov, A.Ye. Mayevskiy, V.D. Mishalov // MorfologHya. - 2014. - T. 8, № 4. - S. 37-42.
12. Kolemayev V.A. Teoriya veroyatnostey i matematicheskaya statistika / V.A. Kolemayev, V.N. Kalinina. - M.: KNORUS, 2009. - 384 s.
13. Lebedinets A.N. Dinamika strukturnykh komponentov serdtsa krys v postnatal'nom periode posle vnutriutrobnogo vozdeystviya antigenov razlichnoy prirody / A.N. Lebedinets, N.A. Voloshin, S.V. Chugin // PatologHya. - 2011. - T. 8, № 2. - S. 43-45.
14. Lipina T.V. Vozrastnyye izmeneniya miokarda yaponskogo perepela Coturnix Japonica kak modeli uskorennogo stareniya serdtsa / T.V. Lipina, M.S. Dukhinova, N.B. Serezhnikova [i dr.] // Doklady akademii nauk. - 2014. - T. 458, № 3. - S. 363-365.
15. Marchenko D.G. OntogenetichnH mekhanHzmi formuvannya skorotlivogo aparata kardHomHotsitHv / D.G. Marchenko // MorfologHya. - 2012. - T. 6, № 4. - S. 5-11.
16. Mekhanizmy ontogeneza i ikh regulyatsiya. Sb. nauchnykh trudov. - K.: Naukova dumka, 1987. - 254 s.
17. Nepomnyashchikh L.M. Morfometriya i stereologiya gipertrofii serdtsa / L.M. Nepomnyashchikh, Ye.L. Lushnikova, G.I. Nepom-nyashchikh. - Novosibirsk: Nauka, 1986. - 304 s.
18. Rudenko Ye.Yu. Morfofunktsional'naya kharakteristika tkaney serdtsa v normal'nom i eksperimental'no izmenennom embriogene-ze ozernoy lyagushki: avtoref. dis. kand. biol. nauk / Ye.Yu. Rudenko. - Samara, 1999. - 24 s.
19. Rumyantsev P.P. Kardiomiotsity v protsessakh reproduktsii, differentsirovki i regeneratsii / P.P. Rumyantsev. - L.: Nauka, 1982. -288 s.
20. Frol'kis V.V. Eksperimental'nyye puti prodleniya zhizni / V.V. Frol'kis, Kh.K. Muradyan. - L.: Nauka, 1988. - 248 s.
21. Frol'kis V.V. Stareniye serdtsa / V.V. Frol'kis // Kardiologiya. - 1991. - № 1. - S. 8-10.
22. Khesin Ya.R. Razmery yader i funktsional'noye sostoyaniye kletok / Ya.R. Khesin. - M.: Meditsina, 1987. - 424 s.
23. Erenpreysa Ye.A. Organizatsiya khromatina v yadre interfaznoy kletki / Ye.A. Erenpreysa. - Riga: Zinatne, 1990. - 117 s.
24. Yabluchanskiy N.I. Morfometriya serdtsa krysy / N.I. Yabluchanskiy, V.I. Shevchenko, V.G.Gubenko. - Donetsk: DMI, 1980. - 109 s.
УДК 612.172 : 611.127-018
В1КОВ1 ЗМ1НИ РОЗМ1Р1В I К1ЛЬКОСТ1 КАРДЮМЮЦИТ1В, IX ЯДЕР В ПРОЦЕС1 ПРЕНАТАЛЬНОГО ТА РАННЬОГО ПОСТНАТАЛЬНОГО РОЗВИТКУ СЕРЦЯ ЩУР1В
Загоруйко Г. 6., Загоруйко Ю. В.
Резюме. Проведено морфометричне до^дження свгглооптичних i електронно-мiкроскопiчних зобра-жень кардюмюци^в (КМЦ) лiвого шлуночка (ЛШ) щурiв лiнiI Wistar в iнтервалi часу 15 дiб пренатального -45 дiб постнатального розвитку тварин. В ембрюнальному мiокардi ЛШ виявлено три групи КМЦ. 1. Темы (т)- помiрно зневодненi т-КМЦ, ядро яких мае об'ем, рiвний (90 ± 5,0) мкм3. Кiлькiсть т-КМЦ збтышуеться в процесi пренатального розвитку ембрюыв i у новонароджених становить 41%. 2. Св^ (с) - активно функ-цiонуючi с-КМЦ мiстять ядро об'емом (151 ± 7,0) мкм3. 3. Невелика ктькють КМЦ (« 1%), якi знаходяться в S перiодi iнтерфази i мiстять ядро об'емом (181 ± 10,0) «мкм3. На протязi 15 дiб постнатального розвитку з 1-ядерних КМЦ в процес ендомiтозу утворюються 2-ядернi КМЦ, ктькють яких збтышуеться до 100%. БЫу-клеарн КМЦ мiстять ядра рiзного об'ему. В процесi кардюмюгенеза в iнтервалi часу 5 - 45 дiб в 2-ядерних КМЦ спостертаються такi варiанти послiдовного поеднання ядер рiзного об'ему: (126 мкм3 + 90 мкм3) ^ (126 мкм3 + 126 мкм3) ^ (151 мкм3 + 126 мкм3) ^ (151 мкм3 + 151 мкм3) у 45 добових щурiв. Вщ моменту наро-дження щурят до заюнчення фази дозрiвання КМЦ (45 дiб) середнiй об'ем КМЦ в мiокардi ЛШ збiльшуеться в 14 разiв, вiд (880 ± 50) мкм3 до (14050 ± 200) мкм3. У процесi вково! гiпертрофiI мiокарда спiввiдношення (Я: Ц) у КМЦ зменшуеться вiд (1: 8,8) у новонароджених до (1: 45,5) у 45-ти добових щурiв.
Ключовi слова: кардiомiогенез, кардiомiоцити (КМЦ), об'ем КМЦ, об'ем ядер КМЦ, ктькють бЫуклеар-них КМЦ, ядерно - цитоплазматичне стввщношення у КМЦ.
УДК 612.172 : 611.127-018
ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ РАЗМЕРОВ И ЧИСЛА КАРДИОМИОЦИТОВ, ИХ ЯДЕР В ПРОЦЕССЕ ПРЕНАТАЛЬНОГО И РАННЕГО ПОСТНАТАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ СЕРДЦА КРЫС
Загоруйко Г. Е., Загоруйко Ю. В.
Резюме. Проведено морфометрическое исследование светооптическихи электронно- микроскопических изображений кардиомиоцитов (КМЦ) левого желудочка (ЛЖ) крыс линии Wistar в интервале времени 15 суток пренатального - 45 суток постнатального развития. В эмбриональном миокарде ЛЖ выявлены три группы КМЦ. 1. Темные (т) - умеренно обезвоженные т-КМЦ, ядро которых имеет объем, равный (90 ± 5,0) мкм3. Количество т-КМЦ увеличивается в процессе развития эмбрионов и у новорожденных составляет 41 %. 2. Светлые (с)- функционирующие с-КМЦ содержат ядро объемом (151 ± 7,0) мкм3. 3. Небольшое количество КМЦ (« 1%), которые находятся в S периоде интерфазы клеточного цикла и содержат ядро объемом (181 ± 10,0) мкм3. В течение 15 суток постнатального развития, из 1-ядерных КМЦ в процессе эндомитоза образуются 2-ядерные КМЦ, количество которых увеличивается до 100 %. Бинуклеарные КМЦ содержат ядра разного объема. В процессе кардиомиогенеза, в 2-ядерных КМЦ наблюдаются следующие варианты последовательного сочетания ядер разного объема: 5-ти суточные крысята - (126 мкм3 + 90 мкм3) ^ (126 мкм3 + 126 мкм3) ^ (151 мкм3 + 126 мкм3) ^ 45-ти суточные крысы - (151 мкм3 + 151 мкм3). В интервале времени (1 - 45 суток), средний объем КМЦ в миокарде ЛЖ увеличивается в 14 раз, от (880 ± 50) мкм3 до (14050 ± 200) мкм3, ядерно - цитоплазменное отношение (Я : Ц) в КМЦ уменьшается от (1 : 8,8) у новорожденных до (1 : 45,5) у 45-ти суточных крыс.
Ключевые слова: кардиомиогенез, кардиомиоциты (КМЦ), объем КМЦ, объем ядер КМЦ, количество бинуклеарных КМЦ, ядерно - цитоплазменное отношение в КМЦ.
UDC 612.172 : 611.127-018
AGE CHANGES OF SIZES AND NUMBERS OF CARDIOMYOCYTES, THEIR NECLEI IN THE PROCESS OF PRENATAL AND EARLY POSTNATAL DEVELOPMENT OF RATS HEART
Zagorujko G. E., Zagorujko Yu. V.
Abstract. Most experiments on age morphology, biochemistry and physiology are carried out on laboratory animals, including Wistar rats of herd breeding. The life span of these animals does not exceed 2.5-3 years. White rats are used to study the mechanisms of ontogenesis and to search for experimental ways of prolonging life. In the work, were used rats of the Wistar line from the vivarium of the VN. Karazin Kharkiv National University. Age of animals: 15-16 days and 20-21 days of embryogenesis, newborns, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45-day-old rats. When determining the age of embryos of rats, a zero day of pregnancy was considered the first day after mating the animals. The choice of this interval of ontogenesis is due to the fact that during this period the processes of differentiation, proliferation, maturation of CMC take place in the myocardium of rats. In each age group there were 5 individuals, mostly from the same group. When working with rats, we were guided by the European Convention for the Protection of Vertebrates used for experiments or for other scientific purposes (Strasbourg, 18.03.86). Ultrathin sections of the myocardium of the LV were examined and photographed with an increase in the electron microscope 2000х. For each age group of animals, 45-50 images of LV myocardium were photographed on a 6 x 9 cm film.
To determine the relative volume of CMC nuclei (Vv% in%), a transparent test template measuring 6 x 9 cm was used, which contained system of points (No = 600). The template was combined with each analyzed negative. Morphometric analysis of a series of negative images of the myocardium of rats was carried out with the help of an optical mechanical installation "UMA-1". Morphometric investigation of light-optical and electronic-microscopic images of cardiomyocytes (CMC) of left ventricle (LV) of Wistar line rats in the time interval of 15 days of prenatal -45 days of postnatal development of animals was performed. In the embryonic myocardium of the LV three groups of CMCs were identified. 1. Dark (d) moderately dehydrated t-CMC, the core of which has a volume equal to (90 ± 5.0) |m3. The number of d-CMC increases during the prenatal development of embryos and in newborns is 41%. 2. Light (l) actively functioning with l-CMCs contains a core with a volume of (151 ± 7.0) |im3. 3. A small amount of CMC (« 1%), which are in the S interphase period and contain a core with a volume of (181 ± 10.0) |im3. Within 15 days of postnatal development, 2-nuclear CMCs are formed from 1-nuclear CMC in the process of endomitosis, the number of which increases to 100%. Binuclear CMCs contain nuclei of different volumes. In the process of cardiomyogenesis, in the time interval of 5 to 45 days, the following variants of a consecutive combination of nuclei of different volumes are observed in 2-nuclear CMCs: (126 |im3 + 90 |im3) ^ (126 |im3 + 126 |im3) ^ (151 |im3 + 126 |im3) ^ (151 |m3 + 151 |m3) in 45 diurnal rats. From the moment of birth of the rats until the end of the maturation phase of CMC (45 days), the average CMC volume in the myocardium of the LV increases 14 times, from (880 ± 50) |m3 to (14050 ± 200) |m3. In the process of age-related hypertrophy of the myocardium of the LV, the nuclear-cytoplasmic ratio (N: C) in CMC decreases from (1: 8.8) in newborns to (1: 45.5) in 45 diurnal rats.
Keywords: cardiomyogenesis, cardiomyocytes (CMC), CMC volume, CMC nucleus volume, number of binucleare CMCs, nuclear - cytoplasmic ratio in CMC.
Рецензент - проф. Костиленко Ю. П.
Стаття надшшла 25.10.2017 року
DOI 10.29254/2077-4214-2017-4-3-141-311-314 УДК 616.379-008.64-003.93-084 Лоза е. О., Марущак М. I.
ОСОБЛИВОСТ1 РАННЬОГО ЕТАПУ МОРФОГЕНЕЗУ ЗАГО6ННЯ РАН ЗА УМОВ ЦУКРОВОГО Д1АБЕТУ У ЗАЛЕЖНОСТ1 В1Д СПОСОБУ
Ф1КСАЦП КРАВ РАНИ
ДВНЗ «Тернопшьський державний медичний ушверситет iMeHi 1.Я. Горбачевського МОЗ Укра'Гни» (м. Тернопшь)
doctorloza@gmail.com
Робота е фрагментом НДР кафедри функцю-нально! i лабораторно! дiагностики ДВНЗ «Терноптьський державний медичний уыверситет iменi 1.Я. Горбачевського МОЗ Укра!ни» на тему «Пато-генетичн закономiрностi та Ыформацмы моделi розвитку патолопчних процеЫв за умов дм надзви-чайних факторiв на оргаызм та !х корек^я» (№ державно! реестраци 0113Ш01239).
Вступ. Цукровий дiабет був та залишаеться великою проблемою на сьогодншнм день, яка при-зводить до швалщизацп, втрати працездатност^ смерть Будь-яка травма чи оперативне втручання супроводжуються розвитком рубцево! тканини. Ре-гуля^я даного процесу залежить вщ багатьох фак-торiв, i цукровий дiабет не е запорукою швидкого загоення пошкоджено! дтянки шюри, i тим паче не е перешкодою для патолопчно! регенерацп шюри. Досить часто, поява на тл грубого неестетичного рубця викликае серйозн функцюнальы порушен-ня, призводить до розвитку нервово-психiчних роз-ладiв. Тому вкрай важливо попередити утворення рубця [1].
Доведено, що характер i вид рубця залежить вщ процесiв, якi вiдбуваються в ран на ранньому пюля-операцiйному перюд^ на якi, в свою чергу, значною
мнрою, впливае вид використаного шовного матерь алу [6].
Мета роботи: вивчити морфолопчы особли-вост раннього пepiоду загоення ран шюри за умов цукрового дiaбeту у залежност вiд використаного шовного мaтepiaлу.
Об'ект i методи дослiдження. В експеримент використовувалися 20 стaтeвозpiлих щуpiв-сaмцiв масою 240-280 г, яким попередньо змодельовано цукровий дiaбeт стрептозотоцином («Sigma», США) (внутpiшньочepeвно - 65 мг/кг) з попередым (за 15 хв.) введенням нкотинамщу (iнтpaпepiтонiaльно -230 мг/кг). На тл ожиpiння, яке викликали шляхом 4-тижневого утримання тварин на висококалормнм дiетi. Розвиток ЦД 2 пiдтвepджувaли шляхом визна-чення концентраци глюкози в кpовi з використан-ням глюкометра Contour Next (США). УЫм тваринам пiд тюпенталовим наркозом (40 мг/кг маси щура) проводили повношapовi пpямолiнiйнi pозpiзи до-вжиною 2 см у передньо^чнм дiлянцi живота. Для закриття пюляоперацмно! рани тваринам 1-1 екс-периментально! групи (10 щуpiв) застосовували xi-pуpгiчнi нитки «Вiкpил 5/0». Тваринам 2-1 експери-ментально! групи (10 щуpiв) був нанесений шкipний клей «Dermabond» (ETHICON, Inc. a Johnson& Johnson company (USA). Тварин виводили з експе-
