CC BY
28
И.В. Майбородин, В.В. Морозов, Я.В. Новикова,
В.А. Матвеева, Л.В. Артемьева, А.Л. Матвеев, А.М. Волков*
Восстановление тканевого кровотока у крыс после введения мезенхимальных стволовых клеток в тромбированную вену
Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, 630090, Новосибирск, просп. Лаврентьева, 8, * ФГБУ «ННИИПК им. акад. Е.Н. Мешалкина» Минздрава России, 630055, Новосибирск, ул. Речкуновская, 15, journal@meshalkin.ru
УДК 616-005.6:57.089.6 ВАК 14.00.15
Поступила в редакцию 28 августа 2012 г.
© И.В. Майбородин, В.В. Морозов, Я.В. Новикова, В.А. Матвеева, Л.В. Артемьева, А.Л. Матвеев, А.М. Волков, 2012
Методами люминесцентной микроскопии изучали результаты введения аутологичных мультипотен-тных мезенхимальных стволовых клеток костномозгового происхождения (АМСККП) с геном GFP в тромбированную вену задней конечности крыс. Было обнаружено, что естественный тромболи-зис, приводящий к восстановлению кровотока в тромбированной магистральной вене, препятствует встраиванию введенных АМСККП в стенку тромбированного сосуда. В мелких ветвях, отходящих от магистральной вены после моделирования тромбоза, также происходит тромбирование просвета с восстановлением кровотока через реканализацию тромба или за счет формирования новых сосудов на месте облитерированных. Обнаруженные АМСККП в мелких сосудах характеризуют участие их в этих процессах, что приводит к более быстрому восстановлению кровотока в тканевом микрорайоне пораженной вены с последующей репарацией собственных клеток организма-реципиента. Ключевые слова: мультипотентные мезенхимальные стволовые клетки; венозный тромбоз; реканализа-ция тромба; ангиогенез; восстановление кровотока.
Профилактика и лечение сосудистых тромбозов является одной из острейших и наиболее значимых проблем современной медицины во всем мире. Около 30% пациентов, перенесших тромбоз, погибают в ближайший месяц, а еще у 20% в течение 3 мес. развивается рецидив заболевания [5]. Реваскуляризация пораженных вследствие сосудистого тромбоза тканей проходит двумя основными путями: развитием коллатерального кровотока и реканализацией самого тромба. Оба этих процесса протекают в течение времени, очень часто, в случае поражения магистральных сосудов, достаточного для некротизирования заинтересованных тканей и даже органов и конечностей.
Было показано, что костномозговые клетки-предшественники (плюрипотентные и конкретные линии стволовых клеток) участвуют в естественном разрешении тромбоза [8, 9, 11-13, 15]. Реваскуляризация тромба, быстрая реканализация вены и восстановление кровообращения в ишемизирован-ных в результате тромбоза тканях были достигнуты в экспериментальных моделях с проангиогенными агентами [6, 9, 14, 15].
Литература содержит только косвенные данные о возможности примене-
ния стволовых клеток для реканализации тромба или ускоренного роста коллате-ралей в ишемизированных тканях [4], но отсутствуют результаты исследований, четко доказывающие рост сосудов в тканевом регионе тромбоза после введения мультипотентных стволовых клеток.
В связи с вышеизложенным исследовали возможность применения аутологичных мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток костномозгового происхождения (АМСККП) для восстановления нарушенного кровообращения в тканях в эксперименте на лабораторных животных.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В качестве модели были использованы самцы крыс линии Wag весом 180-200 г возрастом 6 мес. Все исследования выполняли с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных», все манипуляции осуществляли под общим ингаляционным эфирным наркозом.
Аутологичные мультипотентные мезенхимальные стволовые клетки костномозгового происхождения 2 пассажа, полученные от крысы указанной линии, трансфициро-вали ДНК плазмиды pEGFP-N1 (Clontech
Laboratories Inc., USA), содержащей ген зеленого флуоресцентного белка GFP под контролем промотора цитомега-ловируса и ген устойчивости к неомицину под контролем промотора вируса SV40, необходимого для последующей селекции с использованием дженетицина G418 (pEGFP-N 1; Clontech Laboratories Inc., USA). Трансфекцию проводили в присутствии реагента для трансфекции TurboFect (Fermentas life sciences, Inc, Canada), согласно рекомендациям производителя, применяли протокол для трансфекции суспензионных клеток. Трансфекцию проводили, используя 1 х 106 клеток в 1 мл суспензии, 4 мкг ДНК плаз-миды и 10 мкл реагента для трансфекции (TurboFect).
Через 4 ч после трансфекции клетки разводили нетранс-фицированными клетками в соотношении 1:2,5 и использовали для введения экспериментальным животным. Оставшиеся после трансплантации клетки поддерживали в культуре в течение 1 мес. для оценки эффективности трансфекции и стабильности экспрессии введенного гена.
Экспрессию введенного гена GFP АМСККП крысы оценивали визуально под флуоресцентным микроскопом, непосредственно просматривая культуру или используя камеру Горяева для подсчета транс-фицированных клеток через 48 ч после трансфекции. Эффективность трансфекции оценивали как процент светящихся клеток относительно всех клеток в камере Горяева. Процент трансфицированных клеток в разбавленной культуре составлял около 3%.
Как и в большинстве случаев при использовании технологии, основанной на введении плазмидной ДНК, наблюдали только временную экспрессию введенного гена зеленого флуоресцентного белка в АМСККП крысы. Культивирование клеток, трансфицированных плазмидой pEGFP-N1 без селекции (не использовали дженетицин (G418, Sigma, USA)), показало снижение количества клеток, синтезирующих зеленый флуоресцентный белок, вследствие их вытеснения нетрансфицированными клетками. Но даже спустя 1 нед. в культуре трансфицированных клеток 1 пассажа, высеянных из плотности 5 000 клеток на 1 см2, наблюдали клетки, синтезирующие зеленый флуоресцентный белок.
В доступной литературе содержится множество экспериментальных моделей венозного тромбоза. Однако самым простым, самым воспроизводимым и наименее травматичным является метод S. Wessler и соавт. [16]: сочетание венозного застоя, например лигирова-ние вены, и гиперкоагуляции за счет введения активированного фактора свертывания, например тромбина.
В асептических условиях скальпелем производили разрез кожи длиной до 3 см по внутренней стороне бедра от паховой складки. Тупым способом выделяли сосудистый пучок и накладывали лигатуру на v. femorales, как можно ближе к месту впадения в v. circumflexa ilium profunda. В нижнюю треть v. femorales вводили раствор тромбина (0,5 Ед/мл) до заполнения всего участка
от места инъекции до места лигирования (0,03-0,05 мл). Место инъекции пережимали на 3 мин (до формирования тромба) для исключения ретроградного распространения и элиминации введенного препарата через инъекционное отверстие. Через 1 сутки осуществляли повторный доступ к тромбированной вене и после удаления лигатуры 50 мкл суспензии АМСККП в культураль-ной среде (1 х 106 клеток в 1 мл) вводили непосредственно в тромбированную вену. В качестве контроля использовали интактных крыс, животных с венозным тромбозом без использования АМСККП и с внутривенным применением АМСККП без предварительного тромбирования вены. Животных выводили из эксперимента передозировкой эфирного наркоза через 4 суток, 1, 2, 3, 4 и 5 нед. после введения АМСККП. В каждой группе было 11-12 животных (общее количество 226).
V. femorales с окружающими тканями фиксировали в 4%-растворе параформальдегида на фосфатном буфере (рН 7,4) не менее 24 ч, обезвоживали в градиенте этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Неокрашенные срезы толщиной 5-7 мкм изучали на световом микроскопе Axioimager M1 при увеличении до 1 500 раз в режиме люминесценции с фильтром Alexa 488. Параллельно в режиме проходящего света видимого диапазона изучали срезы, окрашенные гематоксилином и эозином.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Исследование методом люминесцентной микроскопии у интактных животных показало, что при тромбозе без последующего введения АМСККП и после внутривенной инъекции АМСККП без предварительного моделирования тромбоза на все сроки наблюдения специфическое свечение отсутствовало в стенке магистральных сосудов и в паравазальной клетчатке, в тканях вдали от сосудистого пучка и в сосудах, проходящих в массиве мышц бедра.
Через 4 суток после введения АМСККП в тромбированную вену непосредственно в самой вене сохранялись только остатки тромба, большая часть просвета такого сосуда была свободна (рис. 1, а).
Специфического свечения не было найдено как в самом тромбе, так и в стенке этой вены и в непосредственной близости от сосуда. Вместе с этим крайне редко в послеоперационных грануляциях присутствовали небольшие группы сосудов капиллярного типа, стенки которых состояли из клеток со светящейся цитоплазмой и темным ядром (рис. 2, а).
Необходимо обратить внимание еще на один результат. Моделирование тромбоза осуществляли лигирова-нием сосуда на одни сутки и введением тромбина непосредственно после перевязки. Кроме тромбирования одного заинтересованного крупного сосуда, где, кстати, тромб уже почти был лизирован, произошло формиро-
вание тромбов в мелких ветвях этого сосуда (рис. 1, а, б), проходящих в толще мышц бедра. Проходимость таких мелких сосудов к моменту исследования еще не была восстановлена (рис. 2, б). В их просвете, в паравазаль-ной клетчатке и в тканях между сосудами были найдены единичные, небольшие, часто овальные специфически светящиеся объекты (рис. 2, б), возможно, сосуды, прорастающие через тромб в просвете сосуда (реканализация тромба), и сосуды, формирующиеся рядом с тромбиро-ванными для осуществления коллатерального кровотока.
На срок в 1 нед. после инъекции АМСККП в тромбирован-ную вену сосуды и их группы со специфическим свечением в непосредственной близости от тромбированной вены найдены не были. Также отсутствовали светящиеся структуры в стенке и внутри пораженного сосуда: следует отметить наличие фрагментов пристеночного тромба в вене, но специфического свечения в нем не было обнаружено. Так же, как и на срок в 4 суток, иногда было отмечено специфическое свечение стенок в мелких сосудах, проходящих между мышечными волокнами, однако признаков тромбоза в таких сосудах уже отмечено не было.
Необходимо обратить внимание, что в межфасцикуляр-ных пространствах поперечно-полосатой мышечной ткани, где проходят сосудисто-нервные пучки, присутствует множество кровеносных сосудов с облитерирован-ным просветом, причем облитерация часто была полной (рис. 1, в). Тип таким образом измененных сосудов определить было невозможно. Клетки в тканях на месте этих сосудов имели признаки деструктивных изменений (кари-опикноз и кариорексис) (рис. 1, в). Также в мышечной ткани были найдены варикозно измененные сосуды.
После введения АМСККП в вену с тромбозом через 2 нед. в большинстве наблюдений сосуды и их группы со специфическим свечением в непосредственной близости от тромбированной вены найдены не были. Также отсутствовали светящиеся структуры в стенке и внутри пораженного сосуда. Однако иногда, достаточно редко, в качестве единичных наблюдений в области сосудистого пучка или места хирургического вмешательства были найдены сосуды с очень яркими светящимися структурами (рис. 2, в). Эти сосуды были расположены поодиночке, по два или небольшими группами. Часто в таких светящихся объектах в сосудистой стенке было четко видно темное ядро и ярко светящаяся цитоплазма (рис. 2, в).
Аналогично предыдущему сроку в массиве мышц бедра были найдены сосуды венозного типа с ярким свечением в стенке. Следует отметить, что число таких сосудов со специфическим свечением значительно возросло, они встречались практически у каждого животного и неоднократно (рис. 2, г). Можно отметить цепочки из таких светящихся сосудов, по-видимому, обусловленные их варикозной извитостью (рис. 2, г). Иногда в таких мелких сосудах присутствовали остаточные явления тромбоза, и если в ряде случаев свечение в их стенке
было гомогенным, то при внимательном изучении были видны более темные клеточные ядра и ярко светящаяся цитоплазма клеток, причем не только в эндотелии, но и в других оболочках. Разумеется, не все сосуды были построены с участием светящихся клеток; во всех наблюдениях большинство сосудов, проходящих в мышцах бедра, свечения в структурах их стенок не имели.
Необходимо обратить внимание, что на этот срок в контроле (тромбоз без введения АМСККП) в мышечной ткани присутствовали тромбы в просвете мелких сосудов, стенка которых была склеротически изменена (рис. 1, г). В одном наблюдении на серийных срезах даже удалось проследить не только тромб в просвете сосуда, «хвост» тромба, но и его «голову», место, где тромб прикреплен к сосудистой стенке (место повреждения эндотелия) (рис. 1, г). Признаков лизиса или река-нализации тромбов в этой группе животных через 2 нед. после операции обнаружено не было (рис. 1, г).
На срок в 3 нед. после введения АМСККП в тромбирован-ный сосуд практически во всех наблюдениях у всех животных специфическое свечение отсутствовало, как в стенке пораженной вены и паравазальной клетчатке, так и в сосудах рубца на месте хирургического вмешательства.
Также отсутствовали сосуды со специфическим свечением в стенке, расположенные в мышечном массиве бедра, но эти сосуды имели признаки варикозных изменений: очень широкий растянутый просвет и на гистологическом срезе представлены в виде цепочки (поперечный срез через извитой сосуд). В этих сосудах остаточных признаков тромбоза уже найдено не было.
Однако, по-прежнему присутствовали сосуды с облите-рированным просветом в прослойках соединительной ткани, но вместе с такими сосудами были расположены и сосуды с имеющимся просветом, возможно, после река-нализации тромба или вновь образованные (рис. 1, д).
Спустя 4 и 5 нед. после введения АМСККП в тромбиро-ва н ную вену у всех жи вотн ых специфическое свечен ие отсутствовало, как в стенке пораженной вены и паравазальной клетчатке, так и в сосудах рубца на месте хирургического вмешательства. Расположенные в мышечной ткани бедра сосуды также не содержали в стенке светящихся объектов, но можно отметить утолщенную стенку и складчатость эндотелиальной выстилки некоторых артерий на 4-й неделе после операции (рис. 1, е).
ОБСУЖДЕНИЕ
Введение в поврежденные ткани недифференцированных стволовых клеток часто сопровождается ангиогенезом [4]. В эксперименте на крысах деминерализованный костный матрикс без клеток или с АМСККП вводили в дефект боковой части черепа. Применение клеточных технологий привело к усилению ангиогенеза в поврежденной зоне [1].
Рис. 1.
Восстановление кровотока в регионе тромбированнойвены после введения АМСККП:
а - через 4 суток после моделирования венозного тромбоза без последующего введения АМСККП вена практически пустая, присутствуют небольшие фрагменты тромба, на эндотелии много лейкоцитов; б - спустя 4 суток после введения АМСККП в тромбированную вену рядом с сосудистым пучком находятся обширные грануляции. В просвете магистральной вены - только небольшие фрагменты тромба; в - после введения АМСККП на фоне венозного тромбоза к исходу первой недели в толще мышечной ткани бедра расположен сосуд с полностью облитерированным просветом (стрелка). В плотной волокнистой соединительной ткани на месте этого сосуда - клетки с явлениями кариопикноза и кариорексиса. Выраженный периваскулярный отек; г - организованный тромб прикреплен к поврежденному эндотелию («голова» тромба) (стрелка) спустя 2 нед. после тромбирования вены без применения АМСККП; д - на 3-й неделе после введения АМСККП в тромбированную вену в мышечной ткани по ходу сосудистого пучка - значительные прослойки плотной волокнистой соединительной ткани с частично облитерированными сосудами (стрелки); е - утолщенная стенка и складчатость эндотелиальной выстилки артерий (стрелка), проходящих в мышечной ткани через 4 нед. после инъекции АМСККП в тромбированную вену. Окраска гематоксилином и эозином.
а
г
Методами световой микроскопии изучали результаты введения АМСККП в рубцовую ткань крыс и человека. Было найдено формирование групп кровеносных сосудов после использования АМСККП. Сделано заключение, что после введения в рубец АМСККП формируют кровеносные сосуды за счет дифференцировки в эндотелиоциты и перициты [2, 3]. Следует отметить, что, когда используют АМСККП, они не только сами участвуют в процессах репарации, но и экспрессируют множество релизов, влияющих на этот процесс (например, хемотаксические факторы для эндотелиоцитов). Таким образом, в месте применения АМСККП происходит индукция ангиогенеза [7, 10].
Отсутствие светящихся объектов в тканях контрольных крыс, которым без предварительного тромбоза внутривенно вводили АМСККП с геном GFP, по-видимому, связано с тем, что введенные клетки посредством кровотока распространяются по всему организму и постепенно элиминируются из него в результате иммунных процессов.
Настоящее исследование было предпринято в связи с данными, которые продемонстрировали возможность применения клеточных технологий для ускорения разрешения сосудистых тромбозов [8, 9, 11-13, 15]. В. Modarai и его сотрудники [12] обнаружили, что многие костномозговые производные, ^е2-экспрессирующие клетки, попавшие в тромбы во время организации, несут фенотип макрофагов и могут представлять собой восстанавливающие стволовые клетки, которые управляют процессами река-нализации тромба. Рекомбинантный человеческий гра-нулоцитарный колониестимулирующий фактор может мобилизовать костномозговые клетки моноцитарного ряда в периферическую кровь, что способствует разрешению венозных тромбозов и реканализации сосуда [6].
Эндотелиальные клетки-предшественники также участвуют в разрешении венозных тромбозов. Культура эндо-телиальных клеток-предшественников была получена из мононуклеарных клеток человеческой периферической крови. Эти клетки вводили внутривенно от 2 до 4 дней
Ф ' «а!
, р» '^ЁИК
Рис. 2.
Ангиогенез после введения АМСККП в тромбированную вену. Неокрашенные срезы в отраженном ультрафиолетовом свете с фильтром «А1еха 488»:
I 1 I
б
а
в
г
а - после введения АМСККП в тромбированную вену уже на 4-е сутки яркое специфическое свечение присутствует в стенке сосудов капиллярного типа, находящихся в грануляциях; б - в просвете тромбированного кровеносного сосуда, найденного через 4 суток после моделирования тромбоза с последующей инъекцией АМСККП в мышечную ткань бедра, содержатся ярко светящиеся круглые объекты (стрелки). Находящиеся рядом сосуды также тромбированы, но не имеют светящихся объектов в просвете и структурах стенки; в - на 2-й неделе после инъекции АМСККП в тромбированную вену в послеоперационном рубце содержатся группы ярко светящихся сосудов с тонкими стенками и широким просветом. Часто в сосудистой стенке четко видно более темное ядро на фоне ярко светящейся цитоплазмы (стрелки); г - сосуды и их цепочки с ярким специфическим свечением тонких стенок расположены в мышцах бедра ко 2-й неделе после введения АМСККП в вену при тромбозе.
после индукции инфраренального тромбоза нижней полой вены, что сопровождалось существенным увеличением кровотока внутри тромба. Реканализация нижней полой вены и организация тромба были оценены методом лазерной допплерометрии и иммуногистохимичес-ким выявлением новообразованных сосудов в тромбе [14].
Ранее в аналогичном эксперименте было изучено влияние эндотелиальных клеток-предшественников, выделенных из костного мозга молодых крыс, культивированных, а затем пересаженных в экспериментально индуцированный тромб нижней полой вены через бедренную вену [9]. Было показано существенное повышение уровней фактора роста эндотелия сосудов, ангио-поэтина-1, моноцитарного хемотаксического белка-1, мРНК, которые измерялись в режиме реального времени количественной полимеразной цепной реакции и методом вестерн-блоттинга иммуноблоттинга тромбов через 28 дней после трансплантации.
Однако, согласно нашим результатам, уже через 4 суток после тромбирования вены без и после введения АМСККП непосредственно в самой вене сохранялись только остатки тромба, большая часть просвета такого сосуда была свободна. В данном случае восстановле-
ние кровотока в тромбированной магистральной вене всегда идет за счет тромболизиса, приводящего уже к 4-м суткам к рассасыванию большей, значительной части тромба в магистральной вене. Тромболизис осуществляется за счет гуморальных факторов и не требует привлечения как собственных, так и введенных стволовых клеток. Признаки встраивания АМСККП в стенку тромбированного сосуда не найдены ни в одном случае на все сроки эксперимента. Признаки реканализации тромба и формирования коллатералей также не обнаружены.
На этот же срок в послеоперационных грануляциях присутствовали небольшие группы сосудов капиллярного типа, стенки которых состояли из клеток со светящейся цитоплазмой и темным ядром. Доказательством того, что указанные группы сосудов были сформированы именно в результате введения АМСККП и из них, является свечение клеточной цитоплазмы. Ген СРР, введенный в ДНК АМСККП, неизменным передается дочерним клеткам и клеткам следующих поколений. Эти клетки и структуры, сформированные из них, точно так же светятся в отраженном ультрафиолетовом свете.
Видимо, АМСККП после попадания в тромбированную вену могут распространяться и в более мелкие сосуды,
а также выходить в ткани через инъекционное отверстие вследствие высокого давления в такой вене, обусловленного самой инъекцией на фоне препятствия кровотоку. Попав в ткани, АМСККП принимают участие в формировании сосудов грануляций. Патогенез тромби-рования проходящих в мышечной ткани бедра мелких сосудов, выявленный через 4 суток после введения тромбина, скорее всего, точно такой же, как и крупных. После введения тромбина он присутствует не только в самом сосуде, но и распространяется ретроградно (вследствие перевязки магистрали и нарушения оттока) на его ветви, осуществляющие сбор крови от тканей. В результате этого происходит тромбирование не только магистральной вены, но и ее более мелких ветвей.
Далее в магистральной вене тромб лизируется, а в мелких сосудах фибрин организуется, постепенно поглощается фагоцитами, что часто приводит к облитерации просвета такого сосуда. Затем или рядом развиваются новые сосуды, или питание мышечной ткани осуществляется за счет уже имеющихся коллатера-лей. В пользу поражения мелких сосудов после введения тромбина в магистральную вену также свидетельствует наличие в мышечной ткани варикозно измененных сосудов. Подобный вид сосуды приобретают при повышении внутрисосудистого давления, например при нарушении оттока вследствие тромбоза.
Учитывая появление все большего числа сосудов венозного типа с ярким свечением в стенке в массиве бедренных мышц к сроку в 2 нед. после тромбоза и введения АМСККП, можно заключить, что восстановление кровотока в регионе тромбированной вены, в мелких ее ветвях, видимо, также тромбированных, максимально на данный срок. К 3-й неделе, по-видимому, ангиоге-нез в поврежденных тканях был практически закончен, и с этой точки наблюдения у всех животных количество объектов со специфическим свечением прогрессивно уменьшалось, как в паравазальной клетчатке, так и в сосудах рубца на месте хирургического вмешательства. Расположенные в мышечной ткани бедра сосуды имели широкий просвет, часто были варикозно извиты, но уже не содержали в стенке светящихся объектов.
Скорее всего, введенные АМСККП (клетки и структуры, сформированные из введенных АМСККП), взятые пусть и у генетически идентичной (линейные крысы), но все-таки другой особи, постепенно были вытеснены собственными клетками организма-реципиента [3], тем более что введенные АМСККП содержали в геноме чужеродную ДНК, кодирующую синтез СРР. Присутствие в мышечной ткани сосудов с растянутым просветом и тонкой стенкой, а также варикозно измененных сосудов через 3 нед. после операции может указывать как на блокаду выше места среза -в месте впадения этого сосуда в ранее тромбированную магистральную вену, так и на повышенный транспорт
крови, не исключено, для компенсации последствий тромбоза магистральной вены (коллатеральный кровоток).
О повышении давления в сосудах в прошлом, видимо, свидетельствует и складчатость эндотелиальной выстилки некоторых артерий, отмеченная через 4 нед. после хирургического вмешательства. Не исключено, что подобные изменения связаны с предшествующим венозным тромбозом. Когда венозная часть сосудистого русла непроходима, в артериях повышается давление и их просвет расширяется. При нормализации условий гемодинамики просвет артерий возвращается к исходным показателям, но, видимо, какое-то время еще сохраняются гипертрофия оболочек (повышенное давление в прошлом) и складчатость эндотелия (растянутые структуры при нарушении венозного оттока).
ВЫВОДЫ
1. Естественный тромболизис в крупной тромбированной вене, приводящий к восстановлению кровотока в ней, не дает возможности реализовать полипотентные возможности АМСККП на данном уровне сечения сосуда.
2. Введение мезенхимальных стволовых клеток в тромбированную магистральную вену обеспечивает их участие в реканализации тромбов в мелких сосудах и способствует формированию новых на месте облитерированных.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Кругляков П.В., Соколова И.Б., Зинькова Н.Н. и др. // Цитология. 2007. Т. 47, № 6. С. 466-477.
2. Майбородин И.В., Шевела А.И., Бабко А.Н. и др. // Российский журнал кожных и венерических болезней. 2010. № 1. С. 57-62.
3. Майбородин И.В., Якимова Н.В., Матвеева В.А. и др. // Бюл. эксперимент. биологии и медицины. 2010. Т. 150, № 12. С. 705-711.
4. Чернявский А.М., Ларионов П.М., Караськов А.М. Направленный ангиоваскулогенез при хирургическом лечении ишеми-ческой болезни сердца. Новосибирск, 2011.
5. Шевченко Ю.Л., Стойко Ю.М., Лыткина М.И. Основы клинической флебологии. М, 2005.
6. Chen Y.K. et al. // J. Vasc. Surg. 2008. V. 47, № 5. P. 1058-1065.
7. Goldschlager T., Jenkin G., Ghosh P. et al. // Curr. Stem Cell. Res. Ther. 2010. V. 5, № 4. P. 345-355.
8. Gu Y., Qi L., Zhang J. et al. // Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2009. V. 23, № 3. P. 341-344.
9. Li X.Q., Meng Q.Y., Wu H.R. // Chin. Med. J. (Engl). 2007. V. 120, № 24. P. 2245-2249.
10. Lucarelli E. // Eur. Cell. Mater. 2010. V. 20. P. 13-23.
11. Meng Q.Y. et al. // Chin. Med. J. 2010. V. 123, № 4. P. 471-477.
12. Modarai B., Burnand K.G., Sawyer B., Smith A. // Circulation. 2005. V. 111, № 20. P. 2645-2653.
13. Modarai B., Humphries J., Burnand K.G. et al. // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 2008. V. 28, № 10. P. 1753-1759.
14. Santo S.D., Tepper O.M., Ballmoos von M.W. et al. // Thromb. Haemost. 2009. V. 101, № 3. P. 460-464.
15. Tong Z., Gu Y., Zhang J. et al. // Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2008. V. 22, № 10. P. 1218-1221.
16. Wessler S., Reimer S.M., Sheps M.C. // J. Appl. Physiol. 1959. V. 14. P. 943-946.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках Федеральной целевой программы «Исследование генных и клеточных подходов в терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы или опорно-двигательного аппарата»(ГК16.512.11.2099 «Исследование
возможности использования генных и клеточных подходов в диагностике, профилактики и лечении тромбоэмболических осложнений сердечно-сосудистых заболеваний для снижения уровня смертности и ранней инвалидизации трудоспособного населения РФ»).
Игорь Валентинович Майбородин - доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории стволовой клетки Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Виталий Валерьевич Морозов - доктор медицинских наук, профессор, старший научный сотрудник лаборатории стволовой клетки Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Яна Владимировна Новикова - кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории инвазивных медицинских технологий Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Вера Александровна Матвеева - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории стволовой
клетки Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Людмила Владимировна Артемьева - ведущий инженер лаборатории стволовой клетки Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Андрей Леонидович Матвеев - аспирант лаборатории молекулярной микробиологии Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск).
Александр Михайлович Волков - доктор медицинских наук, заведующий лабораторией патоморфологии и электронной микроскопии ФГБУ «ННИИПК им. акад. Е.Н. Мешалкина» Минздрава России (Новосибирск).
