CC BY
16
ИЗВЕСТИЯ ВУЗОВ. ПРИКЛАДНАЯ ХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ Том 7 N 4 2017
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ И ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ / PHYSICAL-CHEMICAL AND GENERAL BIOLOGY Оригинальная статья / Original article УДК 579.2
DOI: 10.21285/2227-2925-2017-7-4-79-86
ВЛИЯНИЕ ВОДНЫХ ЭКСТРАКТОВ КАРТОФЕЛЯ IN VITRO НА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ И МОРФОЛОГИЮ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОЛЬЦЕВОЙ ГНИЛИ
© О.А. Ножкина, А.И. Перфильева, А.В. Сидоров, И.А. Граскова
Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН, Российская Федерация, 664033, г. Иркутск, ул. Лермонтова 132.
Исследовали влияние водного экстракта растений картофеля различных сортов на морфологическую структуру и жизнеспособность возбудителя кольцевой гнили - грам-положительной бактерии Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus (Cms). В исследовании использовались растения картофеля Solanum tuberosum L. in vitro шести сортов: Беллароза, Жуковский ранний, Луговской, Лукьяновский, Розара, Сарма, различающиеся по своей устойчивости к патогенам. Бактерии инкубировали в водном экстракте растений в течении 2 сут, далее анализировали количество клеток в поле зрения, процент умерших, ширину и длину бактериальных клеток. Полученные данные показали, что количество клеток в поле зрения микроскопа после инкубации в водном экстракте картофеля, а также процент живых клеток зависит от сорта картофеля. Также бактерия изменяла свои морфологические характеристики (ширину и длину клеток) в зависимости от сорта растений картофеля. Предлагается использовать представленную в статье методику для быстрой идентификации устойчивости картофеля к патогенным бактериям.
Ключевые слова: картофель, сорта, Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus, морфология, жизнеспособность, длина, ширина клеток.
Формат цитирования: Ножкина О.А., Перфильева А.И., Сидоров А.В., Граскова И.А. Влияние водных экстрактов картофеля in vitro на жизнеспособность и морфологию возбудителя кольцевой гнили // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. Т. 7, N 4. С. 79-86. DOI: 10.21285/2227-29252017-7-4-79-86. DOI: 10.21285/2227-2925-2017-7-4-79-86
IN VITRO STUDY OF THE EFFECT OF AQUEOUS POTATO EXTRACTS ON THE VITALITY AND MORPHOLOGY OF THE CAUSATIVE AGENT OF RING ROT
© O.A. Nozhkina, A.I. Perfileva, A.V. Sidorov, I.A. Graskova
Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry, Siberian Branch, Russian Academy of Sciences, 132, Lermontov st, Irkutsk, 664033, Russian Federation
The effect of an aqueous extract of different varieties of potato plants on the morphological structure and viability of the causative agent of the ring rot - globulin-positive bacterium Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus (Cms) was studied. Six varieties of Solanum tuberosum L. potato plants were studied in vitro: Bellarosa, Zhukovsky ranniy, Lugovskoy, Lukyanovsky, Rosara, Sarma. All varieties differed in their resistance to pathogens. Bacteria were incubated in an aqueous extract of plants for 2 days, then the number of cells in the field of vision, the mortality rate and the width and length of bacterial cells were analysed. The obtained data indicated that the number of cells in the field of vision of a microscope following incubation in an aqueous potato extract, as well as the percentage of living cells, depends on the type of potato. The morphological characteristics (width and length of cells) of the bacterium also changed depending on the type of potato plants. The technique presented in the article is proposed as a means for quickly identifying potato resistance to pathogenic bacteria.
Key words: potato, cultivars, Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus, morphology, viability, length, width of cells
For citation: Nozhkina O.A., Perfileva A.I., Sidorov A.V., Graskova I.A. In vitro study of the effect of aqueous potato extracts on the vitality and morphology of the causative agent of ring rot. Izvestiya Vuzov. Prikladnaya Khimiya i Biotekhnologiya [Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology]. 2017, vol. 7, no. 4, pp. 79-86. (in Russian). DOI: 10.21285/2227-2925-2017-7-4-79-86
ВВЕДЕНИЕ
Ткани растений содержат большое количество веществ, оказывающих бактерицидный эффект: алкалоиды, сапонины, лектины, кумарины, флавоноиды,
полисахариды и эфирные масла. В процессе экстракции такие вещества переводятся в более доступную форму для микроорганизмов, благодаря чему достигается высокая эффективность их влияния. Существует множество работ, посвященных изучению влияния экстрактов различных растений на патогенные микроорганизмы [1-4]. Показано, что водные экстракты горчицы, хрена и редьки ингибируют рост патогенов сои рода Fusarium. Под влиянием растительных экстрактов у грибов наблюдалось ухудшение роста, изменение морфологии гиф (вздутие и деформация), отсутствие пигмента [5]. Показано, что множество различных экстрактов растений ухудшают способность бактерий образовывать биопленки [6, 7]. Показано, что экстракты лиственницы сибирской Larix sibirica, ели сибирской Picea obovata, пихты сибирской Abies sibirica, можжевельника казацкого Juniperus sabina, можжевельника сибирского Juniperus sibirica и сосны сибирской Pinus sibirica ухудшают рост и биопленкообразование условно-патогенных микроорганизмов [8].
Бактерия Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus (Cms) является возбудителем заболевания кольцевая гниль картофеля. Для распространения этого возбудителя благоприятными являются климатические условия Северо-Восточной и Центральной Европы, а также Канады. Ежегодный ущерб от кольцевой гнили в Европе достигает более 15 млн евро [9]. Несмотря на то, что Cms не является карантинным организмом в России, ареал распространения возбудителя в стране расширяется. По оценкам Европейской и Средиземноморской организации защиты растений (European and Mediterranean Plant Protection Organization, EPPO) потери урожая картофеля в России от заболевания кольцевой гнилью могут достигать 47% [10]. Фактором, затрудняющим борьбу с заболеванием, является отсутствие эффективных экологически безопасных средств защиты. Для успешной регуляции численности Cms важно знать фундаментальные аспекты
взаимодействия этого патогена с картофелем. Поэтому целью настоящей работы являлось
исследование влияния водных экстрактов растений картофеля in vitro разных сортов на жизнеспособность и морфологию
бактериального патогена Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus, вызывающего заболевание картофеля.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Объектами исследования были растения картофеля Solanum tuberosum L. in vitro шести сортов: Беллароза, Жуковский ранний, Луговской, Лукьяновский, Розара и Сарма. Микроклональное размножение пробирочных растений осуществляли с помощью черенкования. Черенки высаживали на глубину междоузлия в агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга (МС) 4,2 г/л с добавлением сахарозы 30 г/л, пиридоксина 1 мл/л, тиамина 1 мл/л и ферруловой кислоты 1 мл/л, рН 5,8-6,0. Черенки культивировали в факторостатных условиях при температуре 2425 °С, освещенности 5-6 кЛк и продолжительности фотопериода 16 ч.
В работе использовали штамм Ас 14 05 грамположительной бактерии Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus (Cms). Бактериальная культура Cms получена из Всероссийской коллекции микроорганизмов (г. Пущино, Московской обл.). Бактериальную культуру выращивали на скошенной агаризованной среде, содержащей 10 г/л диализата дрожжевого экстракта, 15 г/л глюкозы, 10 г/л агар-агара, 5 г/л СаСО3, рН 7,0. Пересев на свежую питательную среду проводили через 7-10 дней. Бактерии культивировали в термостате, в темноте при температуре 25 °С. Через 5-7 пассажей бактерии для сохранения их вирулентных свойств высевали на картофельно-глюкозный отвар из 200 г картофеля, с добавлением глюкозы 20 г/л, агар-агара 17-20 г/л, рН 7,2. Для экспериментов использовали
бактериальную культуру в логарифмической фазе роста (2-суточная культура) в форме суспензии (титр 1-109 кл/мл). Единичную колонию Cms, выращенную в пробирках на скошенном агаре, переносили в колбу с 20 мл жидкой питательной среды и помещали на качалку (80 об/мин) при температуре 25 °С.
В ходе эксперимента стерильные растения картофеля in vitro каждого из исследуемых сортов растирали с добавлением 700 ^м воды до получения гомогенной массы, которую затем центрифугировали на
центрифуге MiniSpin 5 мин при 14500 об/мин для удаления остатков растительной ткани. Полученный после центрифугирования супернатант отделяли, в него помещали бактерии и инкубировали 2 сут в аэрируемых условиях. Далее осуществляли исследование бактерий на инвертированном
флуоресцентном микроскопе AxioObserver Z1 («Carl Zeiss», Германия). Микрофотографии получали камерой AxioCam MRm3 и обрабатывали с помощью программного обеспечения AxioVision Rel.4.8.2. Количество мертвых клеток определяли с применением красителя пропидий йодида (propidium iodide, PI) в конечной концентрации 7,5 мкМ («Biotium», США) [11]. PI проникает в мертвые и погибающие клетки, у которых нарушена проницаемость плазматической мембраны, соединяется с ДНК и образует 52 связи между основаниями (одна молекула красителя на 4-5 пар оснований). При этом способность PI флуоресцировать в красном канале, с использованием Filter set 15 (EX BP 546/12, BS FT 580, EM LP 590), увеличивается в несколько раз. Краситель также может взаимодействовать с молекулами РНК. Для количественного подсчета мертвых клеток (окрашенных PI в красный цвет или неокрашенных) в каждом эксперименте использовали не менее 3 микрофотографий случайно выбранных полей зрения. При исследовании анализировались следующие показатели: ширина и длина клеток бактерий; общее количество клеток в поле зрения; количество мертвых клеток (% от общего количества бактерий).
Результаты были статистически обработаны с использованием программы MS Excel.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
В настоящей работе исследования осуществлялись на модельной системе: возбудитель кольцевой гнили Clavibacter michiganensis ssp. sepedonicus - картофель in vitro различных сортов. После выращивания бактерий в течение 2 сут в растительном водном экстракте картофеля было подсчитано общее количество клеток в поле зрения, выявлено число мертвых клеток, исследовано изменение морфологии бактериальных клеток в зависимости от сорта картофеля.
Исследования показали, что количество клеток после инкубации в картофельном водный экстракте было ниже, чем после инкубации в питательной среде для бактерий (рис. 1, a). Причем, количество мертвых клеток среди общего количества бактерий также варьировало в зависимости от сорта
картофеля (рис. 1, b).
Согласно полученным результатам следует, что инкубация в водном экстракте картофеля сортов Беллароза, Розара и Сарма обладает бактериостатическим эффектом по отношению к патогенной бактерии Cms, т.к. в экстрактах этих растений наблюдалось значительное (в 2 раза) снижение количества клеток по сравнению с контролем (рис. 1, a).
Также отмечалось много мертвых клеток в образце сорта Розара, их количество достигало 40%, в Белларозе и Сарме - 20% (рис. 1, b). Инкубация Cms в водном экстракте картофеля сортов Луговской и Жуковский ранний несколько снижала количество клеток в поле зрения (рис. 1, a). Картофель сорта Луговской оказывал негативное влияние на жизнеспособность клеток бактерий, до 30% из них были погибшими (рис. 1, b). В свою очередь в экстракте картофеля сорта Жуковский ранний мертвых клеток было очень мало (рис. 1, b). При культивировании бактерий в картофельном соке растений сорта Лукьяновский количество клеток было сравнимо с контролем (рис. 1, a), причем практически все они были живыми (рис. 1, b).
Также нас интересовало изменение морфологии клеток бактерий под влиянием их инкубации в водном экстракте картофеля различных сортов. Было выявлено, что ширина клетки бактерий незначительно уменьшается под влиянием некоторых водных экстрактов картофеля (рис. 2, a), а их длина укорачивается (рис. 2, b).
Не отмечалось ярко выраженного эффекта инкубации бактерий в растительного соке картофеля на ширину их клеток. Следует отметить небольшое уменьшение ширины клеток Cms после их инкубации в водный экстракте картофеля сортов Жуковский ранний, Луговской и Лукьяновский (рис. 2, a). Максимальное укорочение клеток было выявлено при инкубации бактерий в водным экстракте картофеля сорта Лукьяновский и Жуковский ранний. Инкубация бактерий в водном экстракте картофеля сортов Сарма, Розара, Беллароза и Луговской приводила к удлинению клеток по сравнению с контролем (рис. 2, b). Вероятно, это связано с тем, что в тканях картофеля сортов Жуковский ранний и Лукьяновский имеются условия, благоприятные для интенсивного деления бактериального патогена и мы наблюдаем молодые клетки. Тогда как в вариантах Луговской, Беллароза, Розара и Сарма длина клеток была больше, чем в контроле, что, по-видимому, объясняется снижением жизнеспособности бактерий, отсутствием их деления, старением, многие из клеток являлись мертвыми (рис. 1, b).
80
з 70
I60
£ 50
о
0
I-
CD Ц
^
О со
1
ц
о
40 30 20 10 0
к б/роз жук
луг
лук роз сар
CD ^
X
.Q
СО I-
CL
CD
О CQ
k CD Т
S Ц
О
50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0
I
I
к б/роз жук
луг
лук роз сар
b
Рис. 1. Влияние инкубации бактерий в растительном водном экстракте разных сортов картофеля на количество клеток в поле зрения (a) и количество мертвых клеток (b): К - контроль; б\роз - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Беллароза; жук - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Жуковский ранний; луг - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Луговской; лук - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Лукьяновский; роз - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Розара; сар - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Сарма
a
Fig. 1. The effect of incubation of bacteria in plant water extract of different varieties of potatoes
on the number of cells in field of view (a) and the number of dead cells (b): To control; b\rose - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Bellarosa; beetle - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Zhukovsky early; meadow - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Lugovskoy; bow - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Lukyanovsky; rose - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Rosary; SAR - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Sarma
НИШ
к б\роз жук луг лук роз сар
a
lllllll
к б\роз жук луг лук роз сар
b
Рис. 2. Влияние инкубации бактерий в растительном водный экстракте разных сортов картофеля на ширину (а) и длину бактериальной клетки (b) (мкм): К - контроль; б\роз - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Беллароза; жук - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Жуковский ранний; луг - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Луговской; лук - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Лукьяновский; роз - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Розара; сар - инкубация бактерий Cms в водном экстракте картофеля сорта Сарма
Fig. 2. The effect of incubation of bacteria in plant water extract different varieties of potatoes to the width (a) and the length of the bacterial cell (b) (pm): To control; b\rose - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Bellarosa; beetle - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Zhukovsky early; meadow - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Lugovskoy; bow - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Lukyanovsky; rose - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Rosary; SAR - incubation of Cms bacteria in the water extract of potato varieties Sarma
CD
CO X
1
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
4,5 4 3,5 3
g 2,5
CD
CO X
s
2 1,5 1
0,5 0
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные результаты могут быть объяснены сортовой спецификой исследуемых растений картофеля. Известно, что сорт картофеля Луговской, Розара, Беллароза, Сарма - устойчивые к ряду патогенов; сорт Лукьяновский, Жуковский ранний -восприимчивые, в том числе к аачШа^ег т'юШдапеп&в ээр. веребоп'юив. Литературные
сведения подтверждают данные полученные в отношении общего количества бактерий, а также доли мертвых клеток.
Проведенные в настоящей работе исследования свидетельствуют о возможности применения описанной методики для быстрой идентификации устойчивости картофеля к патогенным бактериям.
В экспериментах использованы материалы и оборудование ЦКП «Биоаналитика» СИФИБР СО РАН. Работа частично поддержана грантом РФФИ (РФФИ мол_а № 16-34-00806).
1. Oosthuizen C., Arbach M., Meyer D., Hamilton C., Lall N. Polysulfides from Allium sativum as Immunomodulators, Hepatoprotectors, and Antimycobacterial Agents // Journal Med Food, 2017. V. 20 (7). P. 685-690. DOI: 10.1089/jmf.2016.0137.
2. Butkute B., Padarauskas A., Ceseviciene J., Pavilonis A., Taujenis L., Lemeziene N. Perennial legumes as a source of ingredients for healthy food: proximate, mineral and phytoestrogen composition and antibacterial activity // Journal Food Sci Technol, 2017. V. 54(9). P. 2661-2669. DOI: 10.1007/s13197-017-2703-8.
3. Ngezahayo J, Ribeiro S.O., Fontaine V., Hari L., Stevigny C., Duez P. In vitro Study of Five Herbs Used Against Microbial Infections in Burundi.// Phytother Res, 2017. V. 31(10). P. 1571-1578. DOI: 10.1002/ptr.5887.
4. Vu T.T., Kim H., Tran V.K., Vu H.D., Hoang T.X., Han J.W., Choi Y.H., Jang K.S., Choi G.J., Kim J.C. Antibacterial activity of tannins isolated from Sapium baccatum extract and use for control of tomato bacterial wilt. Journal. pone. 0181499. Collection, 2017. V. 25, 12(7). DOI: 10.1371.
5. Шемшура О.Н., Исмаилова Т.Э., Сейтбаталова А.И., Бакмаханова Н.Е. Влияние растительных экстрактов на морфологию различных патогенов сои // Austrian Journal of Technical and Natural Sciences. 2015. N 3-4. С.17-19
6. Живетьев М.А., Маркова Ю.А., Граскова И.А. Влияние экстрактов растений и отдельных метаболитов на образование биопленок (обзор) // Химия растительного сырья, 2017. № 2. С. 5-18. DOI: 10.14258/jcprm.2017021547.
7. Malafaia C.B., Jardelino A.C.S., Silva
The experiments used materials and equipment of NBI "Bioanalytica" SIFIBR SB RAS. This work was partially supported by RFBR (RFBR mol_a, No. 16-34-00806).
КИЙ СПИСОК
A.G., de Souza E.B., Macedo A.J., Correia MTDS, Silva M.V. Effects of Caatinga Plant Extracts in Planktonic Growth and Biofilm Formation in Ralstonia solanacearum // Microb Ecol, 2017. Sep 17. DOI: 10.1007/s00248-017-1073-0.
8. Уткина Т.М., Потехина Л.П., Карташова
0.Л., Ткачев А.В. Регуляция персистентных свойств микроорганизмов растительными экстрактами хвойных растений // Бюллетень Оренбургского научного центра УРО РАН. 2013. N 3. С. 1-9
9. Eichenlaub R., Gartemann K.H. The Clavibacter michiganensis subspecies: molecular investigation of gram-positive bacterial plant pathogens // Annu Rev Phytopathol. 2011. V. 49. P. 445-64.
10. Van der Wolf J. M., Elphinstone J. G., Stead D. E., Metzler M., Muller P., Hukkanen A., Karjalainen R. Epidemiology of Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus in relation to control of bacterial ring rot // Plant Research International B.V. Wageningen Report 95. February 2005.
11. Yamori W. Kogami H. Masuzawa T. Freezing tolerance in alpine plants as assessed by the FDA-staining method // Polar. Biosci. 2005. V. 18. P. 73-81.
12. РосЕвроплант Высококачественный семенной картофель сортов немецкой селекции выращивание и реалицация // Каталог 2013-2014, 19 с.
13. Каталог Сорта картофеля, возделываемые в России. // Ежегодной справочное издание. М.: Агроспас, 2013, 150 с.
14. Romanenko A.S., Riffel A.A., Graskova
1.A., Rachenko M.A. The role of extracellular pH-homeostasis in potato resistance to ring-rot pathogen. // Journal of Phytopathology. 1999. V. 147. P. 679-686.
1. Oosthuizen C, Arbach M, Meyer D, Hamilton C, Lall N. Polysulfides from Allium sativum as Immunomodulators, Hepatoprotectors, and Antimycobacterial Agents. Journal Med Food,
2017. vol. 20 (7). p. 685-690. DOI: 10.1089/jmf.2016.0137.
2. Butkute B, Padarauskas A, Ceseviciene J, Pavilonis A, Taujenis L, Lemeziene N. Perennial
legumes as a source of ingredients for healthy food: proximate, mineral and phytoestrogen composition and antibacterial activity. Journal Food Sci Technol, 2017. vol. 54 (9). p. 26612669. DOI: 10.1007/s13197-017-2703-8.
3. Ngezahayo J, Ribeiro SO, Fontaine V, Hari L, Stevigny C, Duez P. In vitro Study of Five Herbs Used Against Microbial Infections in Burundi.// Phytother Res, 2017. vol. 31(10). p. 1571-1578. DOI: 10.1002/ptr.5887.
4. Vu T.T., Kim H., Tran V.K., Vu H.D., Hoang T.X., Han J.W., Choi Y.H., Jang K.S., Choi G.J., Kim J.C. Antibacterial activity of tannins isolated from Sapium baccatum extract and use for control of tomato bacterial wilt. Journal. pone. 0181499. Collection, 2017. vol. 25, N12 (7). DOI: 10.1371.
5. Shemshura O.N., Ismailova T.E., Seitbatalova A.I.,Bakmahanova N.E. Vliynie rastitelnih ekstraktov na morphologiu razlichnih patogenov soi. Austrian Journal of Technical and Natural Sciences. 2015. no 3-4 P.17-19.
6. Jivetev M.A., Markova Y.A., Graskova I.A. Vliynie ecstraktov rasteniii otdelnih metabolitov na obrazovanie bioplenok (obzor). Himiy rastitelnogo siry, 2017. N 2. P. 5-18. DOI: 10.14258/jcprm.2017021547.
7. Malafaia CB, Jardelino ACS, Silva AG, de Souza EB, Macedo AJ, Correia MTDS, Silva MV. Effects of Caatinga Plant Extracts in Planktonic Growth and Biofilm Formation in Ralstonia solanacearum. Microb Ecol, 2017. Sep 17. DOI: 10.1007/s00248-017-1073-0.
Критерии авторства
Ножкина О.А., Перфильева А.И., Сидоров А.В., Граскова И.А. написали обзорную статью на основании собственных данных исследований и литературы. Ножкина О.А., Перфильева А.И., Сидоров А.В., Граскова И.А. имеют на статью авторские права и несут равную ответственность за плагиат.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ Принадлежность к организации
Ольга А. Ножкина
Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН Аспирант smallolga@mail.ru
Алла И. Перфильева
Сибирский институт физиологии
8. Utkina T.M., Potehina L.P., Kartashova
0.L., Tkachev A.V. Regulyciy percictentnih svoistv mikroorganizmov rastitelnimi ekstraktami hvoinih rastenii. Byliten orenburgskogo nauchnogo centra URO RAN. 2013. no 3. P. 1-9.
9. Eichenlaub R., Gartemann K.H. The Clavibacter michiganensis subspecies: molecular investigation of gram-positive bacterial plant pathogens. Annu Rev Phytopathol, 2011. vol. 49. P.445-64.
10. Van der Wolf J. M., Elphinstone J. G., Stead D. E., Metzler M., Muller P., Hukkanen A., Karjalainen R. Epidemiology of Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus in relation to control of bacterial ring rot.Plant Research International B.V. Wageningen Report 95. February 2005.
11. Yamori W. Kogami H. Masuzawa T. Freezing tolerance in alpine plants as assessed by the FDA-staining method. Polar. Biosci, 2005. vol. 18. P. 73-81.
12. Rosevroplant visokokachestvennii semennoi kartophel sortov nemeckoi selekcii virachivanie I realizaciy. Katalog 2013-2014, 19 p.
13. Katalog sorta kartophely, vozdelivaemie v Rossii. Ezzhigolnoe spravochnoe izdanie. 2013, Moskva, Agrospas, 150 p.
14. Romanenko A.S., Riffel A.A., Graskova
1.A., Rachenko M.A. The role of extracellular pH-homeostasis in potato resistance to ring-rot pathogen. Journal of Phytopathology. 1999. vol. 147. p. 679-686.
Contribution
Nozhkina O.A., Perfileva A.I., Sidorov A.V., Graskova I.A. wrote a review article based on their own research data and literature. Nozhkina O.A., Perfileva A.I., Sidorov A.V., Graskova I.A. have equal author's rights and bear equal responsibility for plagiarism.
Conflict of interests
The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.
AUTHORS'INDEX Affiliations
Olga A. Nozhkina
Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry of Siberian Branch of Russian Academy of Science, Irkutsk Postgraduate student smallolga@mail.ru
Alla I. Perfileva
Siberian Institute of Plant Physiology
и биохимии растений СО РАН Кандидат биологических наук, научный сотрудник alla.light@mail.ru
Александр В. Сидоров
Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН Инженер
a_v_sidorov@mail.ru
Ирина А. Граскова
Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН Д.б.н., г.н.с. graskova@sifibr.irk.ru
Поступила 18.10.2017
and Biochemistry of Siberian Branch of Russian Academy of Science Ph.D. (biology), Scientific researcher alla.light@mail.ru
Alexandr V. Sidorov
Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry of Siberian Branch of Russian Academy of Science Engineer
a_v_sidorov@mail.ru
Irina A. Graskova
Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry of Siberian Branch of Russian Academy of Science Doctor of Science (Biology), chief scientific researcher gras kova@s ifibr.irk.ru
Received 18.10.2017
